本文主要研究内容
作者唐仕伟,李辉,崔时媛,张正坦,谢志平（2019）在《新型酵母蛋白表位标记和基因敲除质粒系统的构建及可行性验证》一文中研究指出：【目的】构建一套用于酿酒酵母基因功能研究的质粒。该套质粒结合pUG系列和pFA6a系列的优点,同时采用同尾酶实现蛋白表位标签的串联插入。【方法】利用PCR技术分别克隆pUG系列质粒的lox P位点、pFA6a质粒多酶切位点和ADH1终止子模块;通过重组连接各片段,构建pCLHN-TRP和pCLHN-URA质粒。在此基础上利用同尾酶实现多种蛋白表位标签的单个或串联重复插入,获得一系列蛋白表位标记质粒。最后,以ATG1、COX4和NHX1为例验证本质粒系列的性能。【结果】在本项工作中,我们共构建2种基因敲除用质粒和17种表位标记用质粒(涵盖1-8 FLAG、1-12 V5、3-9 HA、2-8MYC、GFP和m Cherry)。在几个靶基因上的应用证实了本套质粒的实用性。尤其值得指出的是,通过组合采用不同重复度的串联表位标签,在同一张膜上同时检测表达差异极大的不同蛋白而不使高表达蛋白信号饱和成为可能。【结论】本文所构建的pCLHN质粒系列是对现有酵母质粒工具的有益补充。
Abstract
【mu de 】gou jian yi tao yong yu niang jiu jiao mu ji yin gong neng yan jiu de zhi li 。gai tao zhi li jie ge pUGji lie he pFA6aji lie de you dian ,tong shi cai yong tong wei mei shi xian dan bai biao wei biao qian de chuan lian cha ru 。【fang fa 】li yong PCRji shu fen bie ke long pUGji lie zhi li de lox Pwei dian 、pFA6azhi li duo mei qie wei dian he ADH1zhong zhi zi mo kuai ;tong guo chong zu lian jie ge pian duan ,gou jian pCLHN-TRPhe pCLHN-URAzhi li 。zai ci ji chu shang li yong tong wei mei shi xian duo chong dan bai biao wei biao qian de chan ge huo chuan lian chong fu cha ru ,huo de yi ji lie dan bai biao wei biao ji zhi li 。zui hou ,yi ATG1、COX4he NHX1wei li yan zheng ben zhi li ji lie de xing neng 。【jie guo 】zai ben xiang gong zuo zhong ,wo men gong gou jian 2chong ji yin qiao chu yong zhi li he 17chong biao wei biao ji yong zhi li (han gai 1-8 FLAG、1-12 V5、3-9 HA、2-8MYC、GFPhe m Cherry)。zai ji ge ba ji yin shang de ying yong zheng shi le ben tao zhi li de shi yong xing 。you ji zhi de zhi chu de shi ,tong guo zu ge cai yong bu tong chong fu du de chuan lian biao wei biao qian ,zai tong yi zhang mo shang tong shi jian ce biao da cha yi ji da de bu tong dan bai er bu shi gao biao da dan bai xin hao bao he cheng wei ke neng 。【jie lun 】ben wen suo gou jian de pCLHNzhi li ji lie shi dui xian you jiao mu zhi li gong ju de you yi bu chong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自微生物学报的唐仕伟,李辉,崔时媛,张正坦,谢志平，发表于刊物微生物学报2019年05期论文，是一篇关于酵母细胞论文,基因敲除论文,蛋白标签论文,同尾酶论文,表达量论文,微生物学报2019年05期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自微生物学报2019年05期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。