导读:本文包含了羊膜间充质细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人羊膜间充质细胞,针刺,移植,去卵巢
羊膜间充质细胞论文文献综述
陈玉敏,陈涛平,韩翠玉,史同焕,董淑香[1]（2016）在《针刺对人羊膜间充质细胞移植治疗去卵巢大鼠骨质疏松的协同效应》一文中研究指出目的探讨针刺联合人羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cells,HAMCs)移植对去卵巢骨质疏松协同效应研究。方法选择雌性未孕的Wistar大鼠45只,完全随机分组分为假手术组、模型组及实验组(针刺+人羊膜间充质细胞移植),每组各15只。各组手术伤口恢复后,第7天开行针刺+尾静脉注射HAMCs液(假手术组除外)连续干预12周,于末次干预后24 h,处死大鼠并采集标本。从开始干预至处死,每周测定1次各组大鼠的体质量,双能X线吸收骨密度仪分别测定左侧股骨中点、远端和近端骨密度,用原子吸收法测定其骨钙含量;干预12周后采用ELISA法检测血清25-羟基维生素D(25-HVD)、I型胶原C端肽(CTX-I)、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)的表达变化;干预12周后检测各组大鼠生物力学性能的变化。干预12周后RT-PCR技术检测椎骨中转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达情况。结果假手术组大鼠体重逐渐增加,符合动物自然生长规律,模型组于造模后两个月开始,体重却明显高于假手术组,实验组体重渐增,与假手术组相近。模型组比较假手术组的骨密度和骨钙含量均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与模型组较,实验组的骨密度和骨钙含量含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。ELISA法显示,血清25-HVD、CTX-I、BAP、TRAP5b的表达,与假手术组比较,模型组显着降低,与模型组比较,实验组显着升高,(P<0.05)。生物法力学检测显示,假手术组的极限载荷、极限应力和弹性模量比模型组有显着增高(P<0.05),实验组的极限载荷和弹性模量比假手术组有显着增高(P<0.05)。RT-PCR检测显示TGF-β1的m-RNA的表达,与假手术组、模型组比较,实验组明显上调(P<0.05)。结论针刺联合人羊膜间充质细胞(HAMCs)移植具有较好的对去卵巢骨质疏松协同效应,可改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2016年10期）
丁淑芹,樱川宣男[2]（2015）在《人羊膜间充质细胞的分离培养及其生物学特性探讨》一文中研究指出目的:对人羊膜间充质细胞(hAMC)的分离培养及其生物学特性进行探讨。方法:取38~40周孕妇剖腹产术后羊膜,用多种酶消化分离提纯hAMC,观察其体外生长的特征和形态学;用免疫细胞化学方法检测hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达;同时探讨其致瘤性。结果:从羊膜中分离出高纯度hAMC,并摸索出其最适合的培养条件;细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1~3个核仁,易贴壁,生长繁殖快,在体外可连续培养10代以上。免疫细胞化学结果显示:神经发生相关蛋白(Musashi-1、Nestin、Vimentin)阳性以及肝脏发生相关蛋白[Flt-1、Integrinβ1、HNF(3β、4α、1α)、C/EBPα、Albumin、AAT]等阳性;主要组织相容性复合体Ⅱ(Human MHC ClassⅡ)阴性,主要组织相容性复合体Ⅰ(Human MHC ClassⅠ)弱阳性;癌化实验显示hAMC无致瘤性。结论:羊膜中分离提纯的hAMC为一种具备多分化潜能的干细胞,至少可分化为神经及肝脏细胞。hAMC具有低免疫源性、无致瘤性等特点,为再生医学研究提供新的细胞来源。(本文来源于《医学理论与实践》期刊2015年14期）
吕晓逵[3]（2014）在《人羊膜间充质细胞结合静电纺丝支架修复兔尿道缺损的研究》一文中研究指出目的通过建立新西兰大白兔尿道缺损模型，探讨以人羊膜间充质细胞（hAMCs）为种子细胞结合可降解聚乳酸/聚乙二醇（PLLA/PEG）静电纺丝纤维支架修复兔尿道缺损的可行性。方法采用胰蛋白酶-胶原酶联合法从足月健康产妇剖宫产后的新鲜人羊膜组织中分离培养人羊膜间充质细胞。将聚合物聚乳酸/聚乙二醇混合物采用静电纺丝技术制成纳米纤维支架。27只雄性新西兰大白兔距尿道外口0.5cm处腹侧尿道后壁向近端切除尿道2.0cm*1.5cm，制作尿道缺损模型。随后随机分成叁组：A组（实验组,n=9）应用负载人羊膜间充质细胞的静电纺丝纳米纤维支架修复兔尿道缺损区；B组（对照组I,n=9）用静电纺丝纤维支架直接修复兔尿道缺损区；C组（对照组II,n=9）将兔尿道缺损区直接行端端吻合。分别在手术后第4、8、12周切取含兔尿道修复区标本，H&E染色和免疫组化检查判断修复段尿道组织再生情况；第12周行尿道造影，观察尿道畅通情况，同时比较各组间尿道外形以及结石形成率、尿瘘和尿道狭窄等并发症有无差异。结果分离培养的人羊膜间充质细胞呈不规则长梭形和多角形，成放射状或漩涡状分布，在特定诱导培养基下能向成脂、成骨和成软骨细胞分化；免疫荧光法表型鉴定干细胞表面标记物Oct-4和NS在人羊膜间充质细胞中广泛的表达；流式细胞术鉴定，人羊膜间充质细胞高表达造血干细胞标志CD29，CD90和CD105，不表达CD45。静电纺丝技术制备的聚乳酸/聚乙二醇纳米纤维支架通过细胞毒性测定证明对细胞无毒性。兔尿道缺损修复模型形态学观察，A组尿道壁完整光滑，尿道缺损区与正常组织融合；组织学上A组随着修复时间的延长，修复段尿道粘膜由单一的尿路上皮演变成多层尿路上皮结构，基本符合正常尿道组织的结构。B组修复段尿道无连续尿道上皮覆盖，C组尿道管腔结构完整，但组织结构紊乱。尿道造影结果显示：A组尿道通畅，和术前造影结果对比无明显差异，B组和C组均有不同程度的尿道狭窄。并发症方面，B组和C组尿道狭窄、尿瘘和结石生成率均明显高于A组，术后A组尿道狭窄(0/9)、尿瘘(0/9)和结石生成（1/9）,合并症发生率为3.70%（1/27）；B组尿道狭窄(3/9)、尿瘘(1/9)和结石生成（8/9），合并症发生率为44.44％(12/27)；C组尿道狭窄(9/9)、尿瘘(4/9)和结石生成（9/9），合并症发生率为81.48％(22/27)，(P <0.05)。结论1.人羊膜间充质细胞具有向多种细胞类型分化的潜能，是组织工程尿道种子细胞的一种理想选择；2.通过静电纺丝技术制备的纤维聚乳酸/聚乙二醇支架组织相容性良好，是可行的组织工程支架。3.静电纺丝纤维聚乳酸/聚乙二醇支架结合人羊膜间充质细胞可以修复一定长度的新西兰大白兔尿道缺损。(本文来源于《苏州大学》期刊2014-05-01）
韩雪飞[4]（2014）在《羊膜间充质细胞在Aβ激活的小胶质细胞诱导神经元凋亡中的免疫调控作用》一文中研究指出研究背景阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)俗称老年性痴呆(senile dementia)，是老年人中常见的一种中枢神经系统(central nervous system，CNS)退行性疾病。其病因复杂，多数研究表明β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein，Aβ)在阿尔茨海默病(AD)中起着重要作用，Aβ作为慢性刺激物质在脑内逐渐沉积形成神经炎斑。它可以介导小胶质细胞(microglia，MI)的非特异性局灶性炎性反应，并以此导致神经元损伤或死亡。可见，Aβ沉积介导的小胶质细胞的激活是导致AD脑内神经元丢失的重要原因。由于AD发病机制复杂，使其在治疗方面存在极大的困难，很多治疗AD的化学药物仅仅能改变疾病的症状，却不能抑制疾病的进展。随着高新技术的发展和应用，尤其是干细胞移植技术的不断完善，给治疗AD提供了新的策略和契机。研究发现来源于胎膜的羊膜间充质细胞(Amniotic mesenchyme (stem) cells，AMSCs)不仅具有干细胞特性、免疫原性较弱，本身还具有免疫调节特性，能够抑制免疫细胞的增殖而不引起其免疫反应。基于MI在AD中的作用，我们设想羊膜间充质细胞也可抑制中枢神经系统免疫细胞-MI的过度活化，进而调控由其触发的一系列炎症级联反应的发生，从而起到保护神经元细胞的作用。目的本实验旨在研究羊膜间充质细胞的干细胞特性及其对Aβ激活的小胶质细胞的免疫抑制作用，并进一步探讨Aβ激活的小胶质细胞经羊膜间充质细胞免疫调控后对体外培养的神经元细胞凋亡的影响。方法1．3种细胞的原代培养及鉴定：采用原代细胞培养技术，进行羊膜间充质细胞、小胶质细胞和神经元细胞的分离及培养；然后用免疫荧光标记、流式细胞仪检测分析其表型和神经生物学特性。2．AMSCs与MI共培养体系的建立：羊膜间充质细胞与小胶质细胞均调整浓度为1.0×106/ml，实验中处理组加入10μMAβ1-42。具体分组：(1)空白组：仅接种MI；(2)Aβ激活组：接种MI+Aβ1-42；(3)共培养组：接种AMSCs+MI+Aβ1-42。96h后观察细胞的形态，并用ELISA检测各组炎性因子TNF-α、IL-6和NO的含量变化。3．Transwell分层共培养体系的建立：上室Transwell小室接种小胶质细胞，下室6孔塑料培养板培养神经元细胞，实验中处理组加入10μMAβ1-42。实验分组如下：(1)空白对照组(control组)：神经元细胞正常培养于下室，上室加培养基;(2)Aβ刺激组(神经元细胞+Aβ1-42)：神经元细胞培养于下室，上室加入终浓度为10μMAβ1-42的培养基;(3) MI刺激组(神经元细胞+MI)：神经元细胞与小胶质细胞以1:1的浓度比依次接种于下室和上室;(4)Aβ与MI共刺激组(神经元细胞+Aβ1-42+MI)：神经元细胞与小胶质细胞以1:1的浓度比依次接种于下室和上室，上层小胶质细胞贴壁后加入终浓度为10μM Aβ1-42的培养基。(5)AMSCs干预共培养组(神经元细胞+Aβ1-42+MI+AMSCs)：神经元细胞与小胶质细胞以1:1的浓度比依次接种于下室和上室，同时小胶质细胞层加入同等数量的羊膜间充质细胞，两种细胞贴壁后再加入终浓度为10μMAβ1-42的培养基。4．各组细胞经处理96h之后（4、5组从加入Aβ后计时），免疫荧光显微镜检测神经元的凋亡率：1、用Hoechst33342标记法于免疫荧光显微镜下观察各组神经元的凋亡情况；2、AnnexinV-FITC/PI法检测：在高倍荧光显微镜下随机选取10个视野，计数凋亡阳性细胞的个数，计算凋亡率=凋亡阳性细胞个数/总细胞个数。5．统计学处理：所有统计分析均用SPSS16.0统计软件分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。结果1.原代培养的AMSCs接种后贴壁生长，流式细胞仪鉴定为高表达CD90、CD105，低表达CD45、HLA-DR，免疫荧光染色示CD200表达阳性；经诱导后的AMSCs表达神经细胞特异性标记物MAP-2、GFAP；2．分离培养的MI纯化后胞体扁平或卵圆形，突起细长。经CD68免疫荧光检测，阳性率在92%以上；3．原代培养的神经元细胞胞体丰满，突起清晰，神经细胞特异性标记物MAP-2免疫荧光鉴定可见阳性细胞胞浆及突起均着色，纯度可达到90%；4．ELISA检测各组炎性因子TNF-α、IL-6和NO的含量变化：(1)在Aβ的刺激下，MI分泌炎性分子TNF-α、IL-6和NO的量上升（P<0.05）；(2)AMSCs共培养组中炎性分子的量与Aβ激活组比较下降（P<0.05），但与空白组比较，即使与AMSCs共培养，Aβ仍使TNF-α、IL-6和NO的分泌量升高(P<0.05)。5．AnnexinV-FITC/PI法检测神经元细胞凋亡数据显示：(1)空白对照组中神经元细胞凋亡率为12.08，单纯小胶质细胞与神经元细胞共培养时凋亡率为13.25，差异不明显（P>0.05）;(2)单纯Aβ与神经元细胞共培养时凋亡率为19.75，与空白对照组比较，差异有显着统计学意义（P<0.01）；(3)Aβ与MI共刺激组与Aβ刺激组比较，可见凋亡率升高至31.46，具有统计学意义（P<0.01）;(4)加入AMSCs共培养后可使神经元细胞凋亡率降至20.79，虽仍高于空白对照组（P<0.01），但与Aβ与MI共刺激组比较凋亡率下降（P<0.01）。结论1．AMSCs来源丰富、扩增能力强、免疫源性低，具有干细胞特性，可诱导分化成神经元样细胞；2．Aβ1-42可激活MI，促使其炎性因子分泌增多，体外培养的羊膜间充质细胞与小胶质细胞共培养后可使后者致炎因子分泌下调；3．Aβ1-42介导MI的活化对神经元产生凋亡作用，AMSCs可通过负性调节MI的活化发挥神经元保护作用。(本文来源于《苏州大学》期刊2014-05-01）
舒峻,李鸿,黄小杰,蔡哲[5]（2012）在《人羊膜间充质细胞抑制巨噬细胞炎性分泌功能的研究》一文中研究指出目的:研究人羊膜间充质细胞(human amnion mesenchymal cells,h AMCs)对脂多糖(LPS)诱导的人巨噬细胞系(THP-1)分泌炎性细胞因子的抑制作用。方法:体外培养并扩增人单核巨噬细胞系THP-1细胞,经佛波酯(Phorbolmyristateacetate,PMA)体外诱导成熟,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激成熟细胞THP-1促进其分泌炎性细胞因子,同时用Transwell与人羊膜间充质细胞共培养。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定THP-1细胞培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β)的含量;采用Griess试剂检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量。结果:与对照组相比,LPS作用于经PMA诱导成熟的THP-1细胞后,细胞上清液中TNF-α、IL-1β及NO的含量明显增加(P<0.01)。与人羊膜间充质细胞共培养后,THP-1细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β及NO的含量明显下降,与对照组比较有显着性差异(P<0.05)。结论:人羊膜间充质细胞能有效抑制LPS诱导的巨噬细胞产生和分泌TNF-α,IL-1β及NO。(本文来源于《第八届全国免疫学学术大会论文集》期刊2012-10-18）
王佳萍,欧阳桂芳[6]（2012）在《HLA-G参与羊膜间充质细胞抑制淋巴细胞增殖的机制研究》一文中研究指出目的探讨羊膜间充质细胞(HAMC)抑制淋巴细胞增殖的作用机制,证明HLA-G参与了HAMC的免疫抑制功能。方法从胎膜上分离、培养和扩增HAMC,用流式细胞技术对其进行表型鉴定,同时检测膜表面和胞浆中HLA-G的含量。用ELISA法检测培养上清中HLA-G5的含量,MTT法检测混合培养后HAMC对淋巴细胞增殖的影响。结果 HAMC膜表面和胞浆中均表达HLA-G,流式细胞术分析膜表面和胞浆中HLA-G的含量分别是16.75%±3.871%和39.14%±4.274%,ELISA检测细胞培养上清中的含量是5.2ng/ml。HAMC及其上清加入淋巴细胞混合培养后,均使得淋巴细胞抑制率增高,当HLA-G特异性抗体加入后这种抑制效应就减低。结论 HAMC表面和胞浆中都表达HLA-G,同时也分泌HLA-G到上清液中。HLA-G是HAMC的免疫抑制功能的关键因素之一,为HAMC在移植后抑制排斥反应的临床应用提供了理论依据。(本文来源于《2012年浙江省血液病学年会论文集》期刊2012-06-08）
王佳萍,欧阳桂芳[7]（2011）在《HLA-G对人羊膜间充质细胞免疫调节功能的影响》一文中研究指出人类白细胞抗原G(HLA-G)是一种非经典的HLAⅠ类抗原,具有抑制炎症反应,协助肿瘤细胞逃逸,促使移植物免疫耐受的作用。人羊膜间充质细胞(HAMC)表达和分泌HLA-G,它能参与HAMC的免疫调节功能,抑制NK、T、B细胞的功能,影响树突状细胞(DC)的活性,为阐述HAMC的免疫抑制机制提供了理论依据。本文主要综述HLA-G的基因及分子结构,HLA-G在HAMC免疫抑制功能中的可能机制及HLA-G与HAMC、NK、DC、T细胞和B细胞的关系。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2011年05期）
舒峻,张可华,张岚,蔡哲[8]（2011）在《人羊膜间充质细胞对异体外周血淋巴细胞增殖及分泌TNF-α的影响》一文中研究指出人羊膜间充质细胞(hAMCs)来源于母体胎盘羊膜组织,具有干细胞特性及低免疫原性。目前对其的研究主要集中在利用其分化特征进行组织工程研究,然而对于其免疫调节方面的作用却知之甚少。本研究的目的在于探讨人羊膜间充质细胞对异体外周血淋巴细胞的免疫调节作用。从新鲜足月剖宫产废弃的羊膜组织分离出hAMCs并进行鉴定。采用密度梯度离心从健康自愿者外周血中分离山单个核淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)刺激下,用不同比例hAMCs处理,MTS法检测淋巴细胞的增殖,ELISA法检测细胞因子TNF-α的表达。结果发现:hAMCs能明显抑制异体外周血淋巴细胞的增殖,抑制TNF-α的表达(P<0.05),并且在一定范围内随着hAMCs数量的增加抑制作用更加明显。以上结果提示,hAMCs对外周血淋巴细胞具有免疫负调节作用。(本文来源于《“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集》期刊2011-07-16）
李海建[9]（2011）在《利用羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞构建组织工程皮肤并修复裸鼠创面缺损》一文中研究指出近年来,组织工程皮肤的发展取得了很大的进展,有不少组织工程皮肤替代物已经应用于临床并取得了一定的修复创面的效果。许多学者认为干细胞在组织工程皮肤修复创面的过程中取到了很重要的作用,目前已有学者采用出成体干细胞如脂肪间充质干细胞(ADSCs),骨髓间充质干细胞(BMMCs),表皮干细胞(ESCs)作为组织工程种子细胞,构建组织工程皮肤并用于修复创面缺损,取得了比普通的皮肤细胞更好的修复效果。但是构建组织工程皮肤需要大量的种子细胞,上述细胞的来源和数量是制约含干细胞的组织工程皮肤产品实现产业化临床应用的主要障碍之一。近年来研究发现羊膜细胞具有干细胞特性,理论上可以分化成各种组织细胞,它的这些特点使其作为其他干细胞的替代物而引起广泛的关注。从羊膜分离培养的细胞包括羊膜间充质细胞( Human amniotic mesenchymal cells,HAMCs)和羊膜上皮细胞(Human amniotic epithelial cells,HAECs),研究证明从羊膜来源的细胞表达干细胞表面标志物并且具有分化成叁个胚层细胞的能力。羊膜上皮细胞的表面标志物如CD29、CD105、CD73、胚胎表面抗原(SSEA)3和4、肿瘤抑制抗原1-60、1-81(TRA 1-60、TRA 1-81)阳性表达,而SSEA-1、CD34和CD133等是阴性表达,除了细胞表面抗原,羊膜上皮细胞还表达多能干细胞的分子标志物,比如转录结合蛋白4(OCT-4)和Nanog。羊膜间充质细胞的免疫表型则与骨髓来源间质干细胞相似CD90、CD105、CD166、CD49e和人类白细胞抗原(HLA)ABC阳性而CD31、CD34、CD45、CD49d、CD123和HLA-DR阴性,且其比骨髓来源的间质干细胞具有更强的扩增能力[1]。羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞都可以抑制人外周血单个核细胞增殖,而且呈剂量依赖关系[2]。羊膜是产后废弃物,容易取材,羊膜细胞可以在体外大量分离培养,它们的应用不引起伦理学争议。所有以上特点表明羊膜细胞在移植和再生医学应用中有望成为组织工程种子细胞的新的理想来源。目的:本实验研究人羊膜间充质细胞和羊膜上皮细胞的分离、培养及其干细胞特性,并利用羊膜间充质细胞和羊膜上皮细胞构建组织工程皮肤修复裸鼠创面缺损,为羊膜间充质细胞和羊膜上皮细胞在再生医学的潜在应用奠定实验基础。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,经胰酶胶原酶序贯消化,DMEM培养,倒置显微镜下观察其形态,免疫荧光的方法对两种细胞进行鉴定,流式细胞仪(FCM)检测表面分子,定向诱导方法检测细胞的多向分化潜能;利用羊膜间充质细胞复合胶原构建组织工程真皮组织,再在其上种植羊膜上皮细胞,形成双层组织工程皮肤,含细胞的胶原基质先在液下培养3天,然后移到气液面培养2周,构建好的组织工程皮肤最后用于修复裸鼠创面。结果:来源于羊膜的上皮细胞和间充质细胞,细胞免疫荧光显示SSEA-4、OCT-4阳性,具有很强的增殖能力,流式细胞仪检测细胞表面抗原如CD29、90、105不同程度的阳性表达。两种细胞都具有一定的多向分化能力,在特定条件下可分化为脂肪细胞和成骨细胞。构建的组织工程皮肤具有复层表皮,移植裸鼠创面后能够促进创面愈合。结论:羊膜间充质细胞和羊膜上皮细胞能够在体外分离、培养、扩增,并且具有干细胞特性。利用上述两种细胞构建的组织工程皮肤移植裸鼠创面后取得一定的修复效果,羊膜细胞构建的组织工程皮肤在再生医学和组织工程有很好的应用前景。(本文来源于《第四军医大学》期刊2011-04-01）
杨凌[10]（2011）在《人羊膜间充质细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响及其机理探讨》一文中研究指出第一部分体外培养人羊膜间充质细胞的神经生物学特征研究目的：探讨体外培养的人羊膜间充质细胞(human amnion mesenchymal cells, hAMCs)的神经生物学特征、神经营养作用,以及hAMCs与新生鼠脑组织液共培养后向神经细胞分化的潜能。方法：1.应用免疫细胞化学法检测hAMCs的间充质细胞标记蛋白STRO-1、vimentin,神经干细胞标记蛋白nestin、PSA-NCAM,神经细胞标记蛋白β-tubulin-Ⅲ、TH,以及与神经发生相关蛋白Math-1、Mash-1的表达。应用PCNA形态学检测、BrdU掺入法和MTS法确认hAMCs的增殖活性。2ELISA检测培养7d后的hAMCs内及细胞培养上清液中的神经营养因子NT3、β-NGF和BDNF的合成分泌状态。3.将10日龄新生SD大鼠脑组织匀浆上清液与hAMCs共培养10d后,应用免疫蛋白印记法比较共培养前后vimentin、NSE、NF表达的变化。结果：1.体外培养的hAMCs不仅表达间充质干细胞标记蛋白STRO-1和vimentin,还可见神经干细胞标记蛋白nestin和PSA-NCAM的表达；2.体外培养的hAMCs表达神经元标记蛋白β-tubulin-Ⅲ、TH,同时还表达神经发生相关蛋白Math-1、Mash-1; 3. hAMCs表现为PCNA和BrdU免疫荧光染色阳性；4.MTS分析法显示hAMCs在接种后第6～8d增殖速度最快,第8～24d活细胞数基本保持稳定。5.部分hAMCs表现为TH/BrdU和β-tubulin-Ⅲ/BrdU双阳性。6hAMCs内及细胞上清中均检测到不同水平的NT3、β-NGF和BDNF神经营养因子的合成分泌。7.与新生大鼠脑组织上清液共培养后,hAMCs的vimentin、神经元特异性标记蛋白NSE、NF的表达数量显着增加。结论：体外培养的hAMCs表达神经干细胞和神经元的特异性标记蛋白,并且具有增殖活性和神经细胞分化潜能。体外培养hAMCs能够分化为神经细胞,这可能与神经元分化相关基因Math-1、Mash-1的表达有关。此外,hAMCs可以合成和分泌多种具有神经保护和修复作用的神经营养因子。新生鼠脑中存在的神经营养因子,能够促使hAMCs向神经元方向分化,提示脑内具有有利于hAMCs向神经细胞分化的微环境。第二部分体外培养人羊膜间充质细胞向血管内皮细胞诱导分化的研究目的：探讨hAMCs在体外诱导分化为血管内皮样细胞的潜能,以期作为细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, H1B1)的种子细胞。方法：1.从健康产妇足月剖宫产后废弃的人羊膜组织分离培养hAMCs,利用细胞培养技术完善体外扩增培养方法,并对其相关生物学特性进行鉴定。2.使用添加血管内皮细胞生长因子(VEGF).碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的血管内皮细胞诱导培养基培养hAMCs,观察细胞形态特征,用免疫荧光染色和Western-Blot的方法检测血管内皮细胞特异性标记蛋白CD31、vWF和VEGFR-2的表达。结果：1.原代培养的hAMCs形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长,传代后细胞体积略变大,约5～7d传代1次。2.体外培养的hAMCs表达间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)特异性标记物STRO-1和vimentin。经成血管内皮细胞诱导培养基培养12d后,hAMCs中有CD31、vWF和VEGFR-2表达阳性的细胞。结论：hAMCs易于体外分离培养及扩增,体外定向诱导的hAMCs具有向血管内皮细胞分化的潜能,可能成为治疗HIBI的供体细胞。第叁部分人羊膜间充质细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响目的：观察hAMCs移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischaemic brain injury, HIBI)的影响。方法：从健康产妇是月剖宫产后废弃的人羊膜组织分离培养hAMCs。采用新生7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠结扎左颈总动脉后低氧暴露4h制作HIBI模型。建模72h后,移植组(n=33)经损伤侧脑内直接注射hAMCs 2×104细胞/4μl基础培养基,移植对照组(n=23)则注入等量的基础培养基。观察HIBI后大鼠体重增长情况,行为能力以及脑组织病理形态学改变；观察hAMCs移植对新生大鼠存活率、体重增长的影响；移植后7d应用HNA和HMA免疫组织化学染色检测hAMCS在脑内的存活情况；移植后11d用ELISA法检测移植后对脑内NT3、β-NGF和BDNF水平的影响。结果：1HIBI模型组体重增长明显落后于空白对照组和假手术组；HIBI制模后大鼠出现不同程度的神经功能受损表现；HE染色可见左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生。2.移植组和移植对照组的死亡率无差异；d7后移植组的体重增长率较移植对照组逐渐增高。3.在移植大鼠的皮层下部分区域均发现了人源性细胞特异性标记蛋白HNA和HMA阳性细胞的表达。4.移植后大鼠脑组织中NT3和BDNF较移植对照组增加,有统计学差异；而β-NGF含量无明显变化。结论：本研究中新生大鼠HIBI模型是可靠的。hAMCs脑内移植可以在新生HIBI大鼠脑内存活,并通过促进脑内神经营养因子的合成和分泌,发挥其神经保护和修复作用。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2011-03-01）
羊膜间充质细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:对人羊膜间充质细胞(hAMC)的分离培养及其生物学特性进行探讨。方法:取38~40周孕妇剖腹产术后羊膜,用多种酶消化分离提纯hAMC,观察其体外生长的特征和形态学;用免疫细胞化学方法检测hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达;同时探讨其致瘤性。结果:从羊膜中分离出高纯度hAMC,并摸索出其最适合的培养条件;细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1~3个核仁,易贴壁,生长繁殖快,在体外可连续培养10代以上。免疫细胞化学结果显示:神经发生相关蛋白(Musashi-1、Nestin、Vimentin)阳性以及肝脏发生相关蛋白[Flt-1、Integrinβ1、HNF(3β、4α、1α)、C/EBPα、Albumin、AAT]等阳性;主要组织相容性复合体Ⅱ(Human MHC ClassⅡ)阴性,主要组织相容性复合体Ⅰ(Human MHC ClassⅠ)弱阳性;癌化实验显示hAMC无致瘤性。结论:羊膜中分离提纯的hAMC为一种具备多分化潜能的干细胞,至少可分化为神经及肝脏细胞。hAMC具有低免疫源性、无致瘤性等特点,为再生医学研究提供新的细胞来源。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
羊膜间充质细胞论文参考文献
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