导读:本文包含了胎盘间充质干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人胎盘,间充质干细胞,肿瘤坏死因子-α,自噬
胎盘间充质干细胞论文文献综述
朱永朝,陶金,任萌萌,熊燃,何亚琴[1]（2019）在《自噬抑制肿瘤坏死因子α诱导人胎盘胎儿来源间充质干细胞发生凋亡》一文中研究指出目的:探讨TNF-α诱导人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hfPMSCs)发生凋亡和自噬的作用,以及自噬对细胞凋亡的调控作用。方法:利用流式细胞术检测无血清培养hfPMSCs中CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45的表达;用终浓度20μg/L的TNF-α处理hfPMSCs 24h,以未处理细胞作为对照组。Annexin V/PI双染色检测TNF-α对hfPMSCs凋亡程度的影响;分别提取各组总蛋白,Western blot检测自噬标志基因LC3Ⅰ/Ⅱ的表达;利用mRFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞,观察胞内点状聚集形成的情况;利用Atg5干扰慢病毒(si-Atg5)及阴性对照慢病毒(si-NC)感染hfPMSCs,Annexin V/PI双染色检测TNF-α对慢病毒感染后hfPMSCs凋亡程度的影响。结果:所培养细胞具有典型的MSCs形态,呈CD73~+CD90~+CD105~+/CD14~-CD34~-CD45~-细胞; Annexin V/PI染色结果显示,TNF-α作用24 h后,hfPMSCs凋亡数和凋亡率均高于对照组(P <0. 05);Western blot检测自噬标志蛋白表达结果表明,TNF-α可增加LC3Ⅱ的表达(P <0. 05);荧光共聚焦显微境观察到TNF-α可显著提高细胞中的点状聚集。利用si-Atg5感染细胞,抑制hfPMSCs自噬的发生,与对照慢病毒si-NC感染细胞比较,可显着促进TNF-α诱导hfPMSCs凋亡的发生(P <0. 05)。结论:TNF-α诱导的自噬抑制人胎盘胎儿来源MSCs凋亡的发生,具有一定的保护性作用。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年09期）
马晨,李晓国,徐明均,马晓娜,马晓薇[2]（2019）在《人胎盘间充质干细胞的扩增与鉴定》一文中研究指出背景:作为组织工程的种子细胞,胎盘间充质干细胞因具有多向分化、低免疫原性、免疫调节等作用,被广泛用于临床疾病的治疗及临床科研中。目的:根据间充质干细胞的定义来鉴定从宁夏医科大学总医院干细胞研究所获得的人胎盘间充质干细胞,为后续的实验提供可靠的保障。方法:培养从宁夏医科大学总医院干细胞研究所获得的人胎盘间充质干细胞,观察其在塑料培养皿或培养瓶内的贴壁情况,并间断观察细胞形态发生的变化。将培养的第3代人胎盘间充质干细胞通过流式细胞技术检测细胞表面特异性抗原,并且用成脂、成骨、成软骨诱导培养基分别诱导21 d后,采用油红O、茜素红、甲苯胺蓝进行细胞染色观察人胎盘间充质干细胞向脂肪、骨,软骨细胞的分化能力。实验方案得到宁夏医科大学总医院医学科研伦理审查委员会批准(编号:2018-047)。结果与结论:(1)经过体外培养的第3代人胎盘间充质干细胞呈漩涡状贴壁生长,单个细胞呈梭状,形似纤维细胞;(2)人胎盘间充质干细胞具有特殊的细胞免疫学表型:流式细胞术检测CD105、CD90、CD73呈强阳性表达;造血标记物CD34、CD45、CD14以及HLA-DR呈阴性表达;(3)人胎盘间充质干细胞在成脂、成骨、成软骨诱导培养21 d后,油红O染色、茜素红染色及甲苯胺蓝染色均呈阳性。提示:根据间充质干细胞的定义,来自宁夏医科大学总医院干细胞研究所的人胎盘间充质干细胞符合间充质干细胞的特性,为后续实验提供良好保证。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年33期）
吴珊慧,江锴晟,顾怀宇[3]（2019）在《胎盘间充质干细胞来源人工外泌体的一种制备方法》一文中研究指出目的探讨一种利用小鼠胎盘间充质干细胞(mPMSCs)制备人工外泌体的方法。方法采用胶原酶消化法从小鼠胎盘组织中分离培养mPMSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,鉴定其多向分化潜能;利用机械挤压法使mPMSCs依次通过孔径为10、5、1μm的径迹蚀刻膜,经离心纯化后得到人工外泌体;采用超速离心法分离mPMSCs来源的外泌体,并采用透射电镜对比观察形态结构、纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测粒径和浓度、蛋白免疫印迹法检测表面标志物。结果通过胶原酶消化法分离培养的小鼠mPMSCs,形态呈长梭型,较为均一,细胞表面高表达CD29、CD44、CD105,不表达CD45、CD34,具有成骨、成脂细胞诱导分化潜能;通过机械挤压法制备得到的人工外泌体在电镜下形态呈圆球形囊泡状,与mPMSCs来源外泌体形态类似;人工外泌体平均粒径为(130.7±5.7)nm,浓度为(5.01±1.08)×10~(11) particles/mL,mPMSCs来源外泌体粒径为(146.7±4.9)nm,浓度为(4.34±0.97)×10~9 particles/mL;蛋白免疫印迹法检测得到人工外泌体和mPMSCs来源外泌体表面均表达抗原CD63、CD81和Tsg101。结论通过机械挤压法可较高效获得人工外泌体,该人工外泌体与通过超速离心法提取得到的mPMSCs来源外泌体具有相似的生物学特性,这为后期将其作为药物载体奠定了一定的研究基础。(本文来源于《解剖学研究》期刊2019年03期）
周平,刘程,王秋石,朱志清,曹广明[4]（2019）在《人胎盘间充质干细胞治疗小鼠流产的效果研究》一文中研究指出目的探索人胎盘间充质干细胞对复发性流产小鼠的治疗作用。方法建立CBA/J雌性×DBA/2J雄性复发性流产小鼠模型,分为注射人胎盘间充质干细胞(placenta-derived mesenchymal stem cells,PMSC)的实验组和注射磷酸盐缓冲液(PBS)的对照组,每组6只小鼠。比较两组的胚胎吸收率、胎鼠和胎盘质量。采用免疫组织化学的方法检测胎盘Laminin和Cytokeratin 8蛋白的表达情况。结果两组小鼠无过敏、排异或死亡等异常反应。实验组小鼠的胚胎吸收率为8. 33%(5/60),对照组小鼠的胚胎吸收率为28. 33%(17/60),两组比较,差异有统计学意义(χ~2=8. 01,P=0. 005)。实验组胎鼠质量为(1 127. 59±87. 92) g,胎盘质量为(674. 35±66. 29) g;对照组胎鼠质量为(981. 57±118. 25) g,胎盘质量为(572. 24±89. 25) g,两组比较,差异有统计学意义(P=0. 036,P=0. 047)。实验组Laminin蛋白表达高于实验组,胎儿血管分支明显增多,胎儿血管总面积以及母体血窦总面积均显着升高。实验组侵润到蜕膜组织的Cytokeratin 8 (CK8)阳性滋养层细胞的数量明显高于对照组,滋养层细胞向蜕膜迁移的距离显着远于对照组。结论 PMSC对流产小鼠具有安全性,且大大降低了小鼠的胚胎吸收率,为复发性流产的治疗提供新思路。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2019年03期）
张国虎,李友军,夏金明,吕世进,王锦权[5]（2019）在《NO诱导富含miR-126的胎盘间充质干细胞外泌体治疗大鼠脓毒症》一文中研究指出目的探索NO诱导的胎盘间充质干细胞(PMSCs)外泌体对脓毒症大鼠的治疗效果及药理机制。方法分别利用NO、miR-126抑制剂、无效对照抑制剂对PMSCs进行诱导培养,超速离心获取3种外泌体(N-Exo、I-Exo和Exo)。利用透射电镜观察外泌体形态,qPCR检测miR-126含量。取清洁级SD大鼠160只,等分成4组。对照组(假手术+PBS)、脓毒症组(CLP+PBS)、N-Exo组(CLP+N-Exo)、I-Exo组(CLP+I-Exo)。利用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建大鼠脓毒症模型。检测各组大鼠术后48 h血生化指标(血清ALT、AST、BUN、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-1β含量);取肺和肾,HE染色进行病理评分、测量血管微渗漏指数和干/湿重之比;Western blot检测肾脏内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、Toll样受体2(TRL-2)、TRL-4、p-p65蛋白含量、qPCR测量miR-126-3p和miR-126-5p的含量;最终观察各组大鼠7 d存活率。结果①miR-126含量:N-Exo>Exo>I-Exo(P<0.05);②7 d存活率:脓毒症组和I-Exo组显着低于N-Exo组和对照组(P<0.05);③肝肾功能及炎症因子含量、肺和肾病理评分、血管微渗漏及干/湿重之比:脓毒症组和I-Exo组显着高于N-Exo组和对照组(P<0.05);④肾脏内miR-126-3p、miR-126-5p及HMGB1、RAGE、TRL-2、TRL-4、p-p65蛋白含量:脓毒症组和I-Exo组显着低于N-Exo组和对照组(P<0.05)。结论 N-Exo可能是通过miR-126-HMGB1-NF-κB来抑制炎症反应,保护血管内皮细胞,最终提高脓毒症大鼠的生存率。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年06期）
杨作峰[6]（2019）在《人胎盘间充质干细胞对妊娠期糖尿病大鼠血糖及胰岛细胞形态学影响的研究》一文中研究指出目的目前妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是影响妊娠结局的重要疾病之一,妊娠期血糖增高会产生一系列不良妊娠结局:巨大儿、新生儿低血糖、剖宫产增加等。目前对于妊娠期糖尿病的治疗主要依靠胰岛素干预,但其无法从发病机制上治疗妊娠期糖尿病。近年来,关于疾病的生物学治疗越来越引起人们的重视,尤其是间充质干细胞的相关研究。因此,为了间充质干细胞能够早日用于妊娠期糖尿病的治疗,相关基础研究尤为迫。因此我们利用妊娠期糖尿病鼠模型,来研究人胎盘来源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPDMSCs)能否改善血糖水平,以及干预后胰岛细胞形态学改变。方法本实验所有胎盘均来自于正常足月剖宫产分娩的人胎盘组织。从胎盘中提取出间充质干细胞,进行分离、培养及鉴定。倒置显微镜下观察人胎盘来源间充质干细胞形态学特征妊娠期糖尿病模型的制备采用“高脂高糖饮食+低剂量STZ腹腔注射”的方法。所有成模的鼠模型随机分组。其中正常孕鼠组(A组)10只、GDM鼠未经干预组(B组)10只、GDM鼠生理盐水干预组(C组)10只、GDM鼠人胎盘来源干细胞干预组(D组)10只,然后实验组给予人胎盘来源间充质干细胞干预,对照组给予等量的生理盐水干预。所有大鼠于妊娠第6天、12天、18天检测空腹血糖,并于妊娠第18天解剖取出各组大鼠胰腺组织做石蜡切片,于显微镜下观察各组胰岛细胞形态学变化。结果1、分离获得人胎盘来源间充质干细胞呈梭形贴壁生长,生长状态良好。通过流式细胞仪检测其表面抗原表达情况,阳性表达CD44、CD105、CD1172、GDM各组与正常孕鼠组(A组)血糖比较:GDM各组血糖在妊娠第6天、12天、18天均高于正常孕鼠组,差异有统计学意义(P<0.05);GDM各组间比较:未干预组(B组)与生理盐水干预组(C组)之间血糖水平相比较,差异无统计学意义(P<0.05);与B、C组相比,hPDMSCs干预组(D组)血糖水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);3、各组不同时间点空腹血糖变化:自妊娠第4天起GDM各组血糖趋于稳定;给予人胎盘来源间充质干细胞干预组空腹血糖自妊娠第6天起呈下降趋势。4、各组GDM大鼠胰岛组织有不同程度细胞坏死,胰岛严重破坏,胰岛细胞镜下数量明显减少;但人胎盘来源间充质干细胞移植组的胰岛细胞炎性反应可见明显减轻,炎性细胞浸润明显减少。结论尾静脉途径将人胎盘来源间充质干细胞植入GDM鼠体内,能够改善其血糖水平,病理结果提示可能通过修复受损的胰岛细胞发挥作用。(本文来源于《沈阳医学院》期刊2019-05-01）
徐明均[7]（2019）在《人胎盘间充质干细胞肝细胞生长因子下调对急性肺损伤肺血管内皮修复的影响》一文中研究指出目的:通过分离、培养人胎盘间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC),构建肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)低表达的人胎盘MSC细胞株,作用于急性肺损伤(acute lung injury,ALI)肺血管内皮细胞及动物模型,探究人胎盘间充质干细胞HGF下调对急性肺损伤肺血管内皮修复的影响。方法:(1)(1)采用酶消化法分离人胎盘MSC。(2)光镜下观察细胞形态及生长状况,特定培养条件下诱导其向脂肪、骨、软骨细胞分化,流式细胞仪检测细胞抗原表型,鉴定分离的细胞具备MSC的一般特性。(3)比较人胎盘、骨髓、脂肪来源的间充质干细胞HGF分泌水平。(2)(1)检测人胎盘MSC对LPS诱导的肺血管内皮细胞通透性的影响及HGF分泌水平:构建人胎盘MSC与人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMVEC)Transwell共培养体系,设置正常对照组(Control组)、ALI模型组(LPS组)、人胎盘MSC组(LPS+MSC组),Transwell共培养体系共有上、下两个培养小室,分别于各组Transwell上室培养HPMVEC,LPS组和LPS+MSC组培养的HPMVEC用200 ng/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理6 h,LPS+MSC组于下室种植人胎盘MSC。渗透性实验测定HPMVEC的通透性,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked-immunosorbent assay,ELISA)测定培养液中HGF的含量。(2)HGF低表达的人胎盘MSC构建与鉴定:分别用干扰HGF序列的(small interfering HGF,SiHGF)慢病毒和干扰对照序列的(small interfering normal control,SiNC)慢病毒转染人胎盘MSC,构建HGF低表达的人胎盘MSC细胞株(MSC-SiHGF)和干扰对照序列的人胎盘MSC细胞株(MSC-SiNC),荧光显微镜下观测SiHGF慢病毒和SiNC慢病毒的转染效率。蛋白免疫印迹(Western blot,WB)和ELISA检测MSC-SiNC、MSC-SiHGF两种细胞株HGF表达及分泌水平,验证人胎盘MSC的HGF基因干扰效果。(3)检测人胎盘间充质干细胞HGF下调对LPS诱导的肺血管内皮细胞通透性的影响:设置ALI模型组(LPS组)、人胎盘MSC组(LPS+MSC组)、转染对照慢病毒的人胎盘MSC组(LPS+MSC-SiNC组)、转染HGF干扰慢病毒的人胎盘MSC组(LPS+MSC-SiHGF组),分别在各组Transwell上室培养LPS处理6 h的HPMVEC,LPS+MSC组、LPS+MSC-SiNC组、LPS+MSC-SiHGF组下室分别培养MSC、MSC-SiNC、MSC-SiHGF叁种细胞,渗透性实验测定人胎盘间充质干细胞HGF下调后的肺血管内皮细胞通透性的改变。(3)(1)造模与分组:36只6~8周龄健康雄性C57bl/6小鼠,随机划分为4组(n=9),即:正常对照组(NC组)、ALI模型组(LPS组)、转染对照慢病毒的人胎盘MSC治疗组(MSC-SiNC组)、转染HGF干扰慢病毒的人胎盘MSC治疗组(MSC-SiHGF组)。NC组经气管滴注0.1 mL生理盐水,ALI模型组、MSC-SiNC组、MSC-SiHGF组分别经气道滴注含2.5 mg/kg LPS的生理盐水0.1 mL,建立ALI小鼠模型。造模12 h后,NC组和ALI模型组尾静脉注射基础培养基(dulbecco's minimum essential medium,DMEM)0.3 ml,MSC-SiNC组和MSC-SiHGF组尾静脉注射含1×10^6个细胞数量的DMEM 0.3 mL。(2)标本采集:尾静脉注射细胞24 h后,处死各组小鼠,收集小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。(3)指标测定:计算肺组织湿/干质量比(wet/dry mass ratio,W/D),伊文思蓝尾渗漏实验检测肺血管内皮通透性,ELISA法测定BALF中促炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素1(interleukin-1,IL-1)、IL-6及抗炎因子IL-10的含量,Western blot实验测定肺组织血管内皮钙粘蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)蛋白表达量,苏木素伊红(hematoxylin eosin,HE)染色检测肺组织病理改变。结果:(1)酶消化法分离的人胎盘组织细胞呈长梭形、旋涡状生长,增殖能力强,能够向脂肪、骨、软骨细胞分化,CD73、CD90和CD105高表达,CD14、CD34、CD45不表达,符合典型MSC的抗原表型特征,并且具备组织来源特异性,能够以较高水平旁分泌HGF,其分泌量明显高于人骨髓和脂肪来源MSC(P<0.05)。(2)与Control组相比,LPS组培养基荧光强度显着增高(P<0.05),HGF分泌水平无明显差异(P>0.05);与LPS组相比,LPS+MSC组培养基荧光强度明显降低(P<0.05),HGF分泌水平显着增高(P<0.05)。SiNC慢病毒与SiHGF慢病毒对人胎盘MSC的转染效率分别为96.75%和95.48%。与LPS组相比,LPS+MSC组培养基荧光强度明显低于LPS组(P<0.05);LPS+MSC组与LPS+MSC-SiNC组比较,两组培养基荧光强度无明显差异(P>0.05);而与LPS+MSC-SiNC组相比,LPS+MSC-SiHGF组荧光强度明显增高(P<0.05)。(3)与NC组相比,LPS组小鼠肺组织W/D、伊文思蓝渗漏量、促炎因子TNF-α、IL-1、IL-6的水平显着升高(P<0.05),抗炎因子IL-10的水平、肺组织VE-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05),肺组织病理损伤严重。与LPS组相比,MSC-SiNC组小鼠肺组织W/D、伊文思蓝渗漏量、促炎因子TNF-α、IL-1、IL-6的水平显着降低(P<0.05),抗炎因子IL-10的水平、肺组织VE-cadherin蛋白表达增高(P<0.05),肺组织病理损伤明显缓解。与MSC-SiNC组相比,MSC-SiHGF组小鼠肺组织W/D、伊文思蓝渗漏量、促炎因子TNF-α、IL-1、IL-6的水平显着升高(P<0.05),抗炎因子IL-10的水平、肺组织VE-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),肺组织病理损伤较重。结论:人胎盘间充质干细胞旁分泌肝细胞生长因子的水平下调,其对急性肺损伤肺血管内皮的损伤修复作用减弱。(本文来源于《宁夏医科大学》期刊2019-04-01）
郝文革,孙逊沙,吴洁莹,陈劲松,喻秋霞[8]（2019）在《低氧预处理人胎盘绒毛膜间充质干细胞环状RNAs的生物信息学分析》一文中研究指出目的采用生物信息学方法预测低氧预处理人胎盘绒毛膜间充质干细胞环状RNAs相对应的miRNA及其靶基因,并分析靶基因所参与的生物学过程和信号通路。方法用Arraystar公司的商业软件为环状RNAs预测其相对应的miRNAs,分别用targetScan7.1和mirdbV5数据库预测miRNAs的靶基因,并取两个预测结果的合集,应用在线网站http://www.geneontology.org和http://www.genome.ad.jp/kegg对靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果功能富集分析表明,circRNAs的靶基因主要涉及到细胞发育、细胞分化和细胞发育调控。东京基因和基因组百科全书信号通路富集分析表明肿瘤中转录失控和有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路最有意义,而且分析发现MAPK信号通路为核心通路。本研究表明,低氧预处理使得间充质干细胞中部分circRNAs的表达量发生差异性变化。结论低氧预处理人胎盘绒毛膜间充质干细胞环状RNAs同低氧预处理间充质干细胞的生物学特性变化密切有关,为了解低氧预处理影响间充质干细胞特性发生变化的分子机制提供新思路。(本文来源于《广州医药》期刊2019年02期）
崔桂玉,白剑,苗兰英,林大勇,刘鸿[9]（2018）在《HLA-G阳性的胎盘间充质干细胞体外诱导Treg的实验研究》一文中研究指出目的:研究HLA-G阳性的胎盘间充质干细在体外诱导Treg的产生。方法:从新生儿胎盘中分离胎盘间充质干细胞的,采用脂质体转染的方式将PEGFP-N1-HLA-G质粒转染到胎盘间充质干细胞中,将细胞分为空白对照组、PEGFP-N1组和PEGFP-N1-HLA-G组,每组设置5个复孔,并通过蛋白质免疫印迹检测HLA-G的表达,将鉴定后的细胞与健康人外周血中CD4~+的T淋巴细胞混合培养24 h和48 h,并检测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占T淋巴细胞的比例。结果:PEGFP-N1-HLA-G转染后胎盘间充质干细胞可以表达HLA-G蛋白,与空白对照组和PEGFPN1组相比有显着性差异(P<0.01); HLA-G阳性的胎盘间充质干细胞在与CD4+的T淋巴细胞混合淋巴细胞培养24 h后,Treg细胞占全部T淋巴细胞的比例为(16.41±0.94)%,在培养48 h后,Treg细胞的占全部T淋巴细胞的比例为(16.46±0.59)%,与空白对照组和PEGFP-N1组相比有显着性差异(P<0.01)。结论:HLA-G基因修饰后胎盘间充质干细胞能够有效的在体外诱导CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg产生。(本文来源于《中国应用生理学杂志》期刊2018年05期）
田鑫[10]（2019）在《人胎盘间充质干细胞的分离鉴定及诱导其向神经干细胞的分化》一文中研究指出背景:神经退行性疾病是一种大脑和脊髓细胞神经元结构和功能丧失的疾病状态,影响人的记忆功能和运动功能,其病因和发病机制尚不明确。神经元不可再生,一旦损害不可恢复~([1])。目前临床上对神经退行性疾病的治疗仅是通过少数几种药物延缓其发病的病程,治疗其缓解症状~([2])。神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)可自我更新且具有分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力~([3])。鉴于神经退行性疾病由于神经元不可逆的损害,神经干细胞治疗成为该疾病近几年来备受关注的治疗手段,但临床上获得大量的神经干细胞是比较困难的。间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)作为种子细胞的来源已成为国内外学者探讨的热点,胎盘间充质干细胞(Human Placenta Derived Mesenchymal Stem Cells,hPDMSCs)来源丰富,采集方便,免疫原性极低,且具备多种分化潜能,有资料显示,胎盘间充质干细胞有神经分化的能力,但其分化成的神经细胞具有有限的再生能力,对其是否可以诱导分化为神经干细胞尚不清楚。目的:通过对人胎盘间充质干细胞的分离、培养、鉴定,研究其向神经干细胞的分化情况,为临床干细胞治疗神经退行性疾病提供理论依据。方法:从北京市海淀区妇幼保健院选择足月剖宫产孕妇的胎盘,通过对胎盘机械分离及酶消化的方法分离得到胎盘间充质干细胞,用含10%FBS的培养基进行细胞贴壁培养、传代及冻存,应用流式细胞技术检测胎盘间充质干细胞表面特异标志物的表达,经过成骨、成软骨及成脂诱导培养基的诱导培养21天后,用茜素红、甲苯胺蓝、油红O进行细胞染色,观察胎盘间充质干细胞的分化潜能。将用神经营养因子bFGF、EGF添加N2和B27分叁步将胎盘间充质干细胞分化为神经干细胞,待细胞长满后用0.0125%的胰蛋白酶进行消化,并对分化得到的神经干细胞进行免疫荧光检测,检测神经干细胞表面标志物的表达情况。结果:体外分离培养人胎盘间充质干细胞形态类似成纤维细胞,呈梭形贴壁漩涡状生长,流式细胞术检测发现细胞高表达CD90、CD73C、CD105以及CD146,而CD34、CD31、CD45RA以及HLA-DR表达均为阴性。胎盘间充质干细胞诱导21天后,经过茜素红染色后细胞出现着色为红色的钙结节,经甲苯胺蓝染色后细胞染成蓝色,经油红O染色后细胞出现红色的圆形脂滴。经神经诱导后,细胞胞体缩小,折光性变强。由成纤维状细胞变为大小不等的球形细胞生长,经免疫荧光检测,由胎盘间充质干细胞不表达SOX1、PAX6和Nestin,而分化成的神经细胞干细胞高度表达SOX1,PAX6和Nestin。结论:本实验通过机械法和酶消化的方法成功的分离出了胎盘间充质干细胞,胎盘间充质干细胞的生物学特性与其他来源的间充质干细胞的相似,并具有向成骨、成软骨及成脂细胞的分化潜能;经神经营养因子诱导后可成功得到神经干细胞,为临床上得到大量的神经干细胞治疗神经退行性疾病提供了理论基础。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-03-01）
胎盘间充质干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:作为组织工程的种子细胞,胎盘间充质干细胞因具有多向分化、低免疫原性、免疫调节等作用,被广泛用于临床疾病的治疗及临床科研中。目的:根据间充质干细胞的定义来鉴定从宁夏医科大学总医院干细胞研究所获得的人胎盘间充质干细胞,为后续的实验提供可靠的保障。方法:培养从宁夏医科大学总医院干细胞研究所获得的人胎盘间充质干细胞,观察其在塑料培养皿或培养瓶内的贴壁情况,并间断观察细胞形态发生的变化。将培养的第3代人胎盘间充质干细胞通过流式细胞技术检测细胞表面特异性抗原,并且用成脂、成骨、成软骨诱导培养基分别诱导21 d后,采用油红O、茜素红、甲苯胺蓝进行细胞染色观察人胎盘间充质干细胞向脂肪、骨,软骨细胞的分化能力。实验方案得到宁夏医科大学总医院医学科研伦理审查委员会批准(编号:2018-047)。结果与结论:(1)经过体外培养的第3代人胎盘间充质干细胞呈漩涡状贴壁生长,单个细胞呈梭状,形似纤维细胞;(2)人胎盘间充质干细胞具有特殊的细胞免疫学表型:流式细胞术检测CD105、CD90、CD73呈强阳性表达;造血标记物CD34、CD45、CD14以及HLA-DR呈阴性表达;(3)人胎盘间充质干细胞在成脂、成骨、成软骨诱导培养21 d后,油红O染色、茜素红染色及甲苯胺蓝染色均呈阳性。提示:根据间充质干细胞的定义,来自宁夏医科大学总医院干细胞研究所的人胎盘间充质干细胞符合间充质干细胞的特性,为后续实验提供良好保证。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胎盘间充质干细胞论文参考文献
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