导读:本文包含了微型复制子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人呼吸道合胞病毒,微型复制子,增强型绿色荧光蛋白
微型复制子论文文献综述
唐倩,虞结梅,何金生,张梅,魏薇[1]（2009）在《人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建》一文中研究指出【目的】构建RSV微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。【方法】构建含RSV病毒前导序列(Leader,genomic promoter,Le)、转录起始信号(gene start,GS)、多克隆酶切位点、转录终止信号(gene end,GE)和尾随序列(Trailer,antigenomic promoter,Tr)的基因片段GSGE,通过引入T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase,T7RNP)启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)等多步操作,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。同时构建可表达大蛋白(large protein,L)的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子(M2ORF1protein,M2-1)的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7RNP的BSRT7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。【结果】成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达。【结论】构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,将有助于进一步开展以RSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研发及药物筛选。(本文来源于《微生物学报》期刊2009年08期）
唐倩[2]（2009）在《人呼吸道合胞病毒微型复制子功能的初步研究》一文中研究指出目的:人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染最重要的病毒病原,目前尚无有效的治疗方法。利用RNA病毒反向遗传学操作获得的减毒RSV活病毒,具有稳定的安全性和良好的免疫原性。为开展RSV反向遗传学研究奠定基础,拟先尝试开展RSV微型复制子(minireplicon)构建及功能的初步研究。RSV微型复制子一般包括RSV病毒前导序列(Leader, genomic promoter, Le)、转录起始信号(gene start, GS)、可插入外源基因的多克隆酶切位点(mutiple cloning site, MCS)、转录终止信号(gene end, GE)和尾随序列(Trailer, antigenomic promoter, Tr)。通过引入T7 RNA多聚酶(T7 RNA polymerase, T7 RNP)启动子、克隆入载体px8δT等多步操作,可获得RSV微型复制子质粒,经转染可提供T7 RNP及RSV复制所必须的全部蛋白的细胞,可了解RSV微型复制子能否实现RSV基因组的复制和转录功能。本研究在于构建和表达RSV复制必须的两种重要功能蛋白大蛋白( Large protein,L )和转录延长/转录终止抑制因子(transcription elongation/antitermination factor,M2 ORF 1 protein,M2-1),结合先前构建的RSV微型复制子质粒等,完成RSV微型复制子质粒功能的初步研究。方法:此前我们人工合成了含RSV Le、GS、MCS、GE和Tr的GSGE基因片段,PCR方法分别在GSGE片段的5′和3′端引入T7RNA多聚酶启动子获得GSGE1及GSGE2片段,并分别克隆入载体px8δT,获得RSV微型复制子质粒px8δT/GSGE1和px8δT/GSGE2,进一步将增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)开放读码框(Open Reading Frame, ORF)分别克隆入px8δT/GSGE1和px8δT/GSGE2 ,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。本研究中我们构建了可表达两种核壳体蛋白或聚合酶蛋白的真核表达质粒,包括表达L蛋白的质粒pcDNA3.1/L及表达M2-1蛋白的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子重组质粒及核壳体蛋白质粒(包括先期构建的可表达RSV核蛋白(nucleoprotein, N)及磷蛋白(phosphoprotein, P)的质粒, pcDNA3.1/N和pcDNA3.1/P)至可表达T7 RNA多聚酶(T7 RNA polymerase, T7 RNP)的BSR T7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。结果:经限制性内切酶分析及核酸序列分析,证明成功构建了pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,经RT-PCR及western blot分析证实L及M2-1蛋白有表达,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光。结论:成功克隆A亚型RSV Long株L和M2-1基因,并在真核细胞中获得表达。构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,为进一步的RSV反向遗传操作奠定了基础。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2009-05-01）
微型复制子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染最重要的病毒病原,目前尚无有效的治疗方法。利用RNA病毒反向遗传学操作获得的减毒RSV活病毒,具有稳定的安全性和良好的免疫原性。为开展RSV反向遗传学研究奠定基础,拟先尝试开展RSV微型复制子(minireplicon)构建及功能的初步研究。RSV微型复制子一般包括RSV病毒前导序列(Leader, genomic promoter, Le)、转录起始信号(gene start, GS)、可插入外源基因的多克隆酶切位点(mutiple cloning site, MCS)、转录终止信号(gene end, GE)和尾随序列(Trailer, antigenomic promoter, Tr)。通过引入T7 RNA多聚酶(T7 RNA polymerase, T7 RNP)启动子、克隆入载体px8δT等多步操作,可获得RSV微型复制子质粒,经转染可提供T7 RNP及RSV复制所必须的全部蛋白的细胞,可了解RSV微型复制子能否实现RSV基因组的复制和转录功能。本研究在于构建和表达RSV复制必须的两种重要功能蛋白大蛋白( Large protein,L )和转录延长/转录终止抑制因子(transcription elongation/antitermination factor,M2 ORF 1 protein,M2-1),结合先前构建的RSV微型复制子质粒等,完成RSV微型复制子质粒功能的初步研究。方法:此前我们人工合成了含RSV Le、GS、MCS、GE和Tr的GSGE基因片段,PCR方法分别在GSGE片段的5′和3′端引入T7RNA多聚酶启动子获得GSGE1及GSGE2片段,并分别克隆入载体px8δT,获得RSV微型复制子质粒px8δT/GSGE1和px8δT/GSGE2,进一步将增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)开放读码框(Open Reading Frame, ORF)分别克隆入px8δT/GSGE1和px8δT/GSGE2 ,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。本研究中我们构建了可表达两种核壳体蛋白或聚合酶蛋白的真核表达质粒,包括表达L蛋白的质粒pcDNA3.1/L及表达M2-1蛋白的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子重组质粒及核壳体蛋白质粒(包括先期构建的可表达RSV核蛋白(nucleoprotein, N)及磷蛋白(phosphoprotein, P)的质粒, pcDNA3.1/N和pcDNA3.1/P)至可表达T7 RNA多聚酶(T7 RNA polymerase, T7 RNP)的BSR T7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。结果:经限制性内切酶分析及核酸序列分析,证明成功构建了pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,经RT-PCR及western blot分析证实L及M2-1蛋白有表达,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光。结论:成功克隆A亚型RSV Long株L和M2-1基因,并在真核细胞中获得表达。构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,为进一步的RSV反向遗传操作奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
微型复制子论文参考文献
[1].唐倩,虞结梅,何金生,张梅,魏薇.人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建[J].微生物学报.2009
[2].唐倩.人呼吸道合胞病毒微型复制子功能的初步研究[D].安徽医科大学.2009