翟宏鹏1马凯2张春阳1宦大为3李金晖1
(1沈阳医学院附属中心医院普外三科110024)
(2中国医科大学附属盛京医院110003)
(3沈阳医学院附属中心医院病理科110024)
【摘要】目的研究patched(Ptch)、β-联蛋白(β-catenin)在胰腺癌组织表达的意义,及其与临床病理参数的关系。方法选取胰腺癌标本34例、正常胰腺标本16例,应用免疫组化法检测Ptch和β-catenin的表达情况。结果Ptch在胰腺癌的高表达与病理分级(P=0.009)密切相关。β-catenin在胰腺癌中的异常高表达与淋巴结转移(P=0.030)、TNM分期(P=0.039)密切相关。β-catenin蛋白异常表达与Ptch蛋白阳性表达相关(r=0.443,P<0.05)。结论Ptch在胰腺癌分化中有重要作用。β-catenin在胰腺癌发生和进展中有重要作用,促进癌细胞转移和浸润。
【关键词】胰腺癌免疫组织化学
【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2014)27-0165-01
胰腺癌死亡率逐年上升,已居恶性肿瘤死亡率的第四位[1]。胰腺癌预后极差,5年生存率不超过6%[2]。本研究通过免疫组织化学方法检测Ptch、β-catenin蛋白在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达情况,并探讨其差异与临床病理参数的关系及两者的相关性旨在为胰腺癌的临床诊断、治疗及预后提供依据。
1资料与方法
1.1一般资料收集我院2008年2月—2010年9月胰十二指肠切除及胰腺体尾部切除手术标本50例:其中胰腺癌34例,男20例,女14例;手术后经病理证实的正常胰腺组织16例,男10例,女6例。患者年龄38~73岁,平均年龄(58.2±6.7)岁。所有患者术前均未进行化疗或放疗。按组织学进行分级,高分化胰腺癌12例,中、低分化胰腺癌22例。按国际抗癌联盟(UICC)胰腺癌(2002年)TNM分期标准进行分期,Ⅰ、Ⅱ期19例,Ⅲ、Ⅳ期15例。按有无淋巴结转移分类,无淋巴结转移18例,有淋巴结转移16例。所有肿瘤标本均经病理诊断证实。
1.2试剂与方法山羊抗人Ptch多克隆抗体购自美国SantaCruz公司;小鼠抗人β-catenin单克隆抗体、S-P免疫组化试剂盒、抗原修复液和DAB显色试剂盒均购自中国福州迈新生物技术开发有限公司。免疫组织化学检测采用S-P染色方法,具体操作步骤按产品试剂盒说明书经行。一抗山羊抗人Ptch多克隆抗体工作浓度为1:5,一抗小鼠抗人β-catenin单克隆抗体工作浓度为1:1。用已知的乳腺癌阳性切片作为阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照。在细胞质、细胞膜呈现黄色至棕黄色颗粒的为阳性细胞标志,
1.3结果判定及计数DAB显色后,光镜下每张切片随机选择5个高倍镜视野(×400),每个视野随机计数500个胰腺癌细胞。Ptch蛋白阳性结果判定在细胞质、细胞膜呈现黄色至棕黄色颗粒的为阳性计数标本。将阳性细胞按其数量及显色强度分为3级:阴性(-),阳性细胞数<10%,显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色;阳性(+),阳性细胞数为10%~50%,阳性细胞数及显色强度介于阴性与强阳性之间;强阳性(++),阳性细胞数>50%,多数细胞呈黄至棕黄色染色。β-catenin蛋白阳性结果判断标准细胞膜上有棕黄色颗粒为阳性计数标本,异常表达,细胞膜基本消失,细胞浆或核异质性表达;正常表达,保留细胞膜。
1.4统计学方法采用SPSS13.0软件处理,计数资料比较用χ2检验或Fisher确切概率法,Spearman等级相关分析Ptch和β-catenin之间的关联程度,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1胰腺癌和正常胰腺组织Ptch和β-catenin表达情况比较胰腺癌组Ptch主要表现为细胞质中强阳性表达,细胞膜上也有表达,呈棕黄色或棕褐色,阳性表达率为58.8%(20/34),β-catenin在胰腺癌中异常表达,主要表现为细胞膜表达消失而呈在胞浆内聚集表达,阳性表达率为67.6%(23/34)。正常胰腺组织中Ptch和β-catenin阳性表达率分别为12.5%(2/16)和18.8%(3/16)。2组Ptch和β-catenin表达比较差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.2胰腺癌Ptch和β-catenin表达与临床特征关系不同病理分级胰腺癌患者中Ptch的阳性表达率差异有统计学意义,淋巴结是否转移、TNM临床分期胰腺癌患者的β-catenin阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。
2.3Ptch及β-catenin表达的相关性胰腺癌中Ptch蛋白与β-catenin的表达有相关性(rs=0.443,P<0.01)。
3讨论
近年来研究显示,Hedgehog信号转导通路其作用机制可能包括,Smo突变和Ptch功能缺失性突变;增强KRas介导的肿瘤发生,抑制胰腺导管上皮细胞凋亡,肿瘤干细胞中信号网络的中断等[3]。因此,其与胰腺癌发生发展密切相关。
因此,Hedgehog信号转导通路和Wnt信号转导通路都在胚胎发育的过程中发挥着重要的作用[4],在生长和组织形成过程中都可调控细胞增殖,与肿瘤的发生发展相关。本研究通过分析Hedgehog信号通路中重要分子Ptch及Wnt信号途径的关键成分是β-catenin在胰腺癌组织中表达两条通道的相关性,以期为胰腺癌的诊断和治疗提供更好的靶向性。
参考文献
[1]SilvestrisN,GnoniA,BrunettiAE,etal.Targettherapiesinpancreaticcarcinoma[J].CurrMedChem,2013Aug23.[Epubaheadofprint]
[2]谢学海,郝昆,杨尹默.Hedgehog信号通路与胰腺癌[J].临床肝胆病杂志,2010,26(5):48-471.
[3]王铮,马清涌,李军辉,等.CXCR4和B-catenin在胰腺癌组织中的表达及其临床意义[J].中国普外基础与临床杂志,2010,17(10):1071-1076.
[4]LuoY,SunZ,LiY,etal.CaudatininhibitshumanhepatomacellgrowthandmetastasisthroughmodulationoftheWnt/β-cateninpathway[J].OncolRep,2013,30(6):2923-2928.