本文主要研究内容
作者王立霞,孟庆玲,乔军,蔡扩军,王登峰,伍晔晖,郭晶,才学鹏（2019）在《单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响》一文中研究指出：为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响。结构域分析结果显示,LM-Rnase Ⅲ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应。体外酶活实验表明,Rnase Ⅲ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS的降解活性有所降低(P<0.001);第122位谷氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS降解活性极显著下降(P<0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM Rnase Ⅲ RncS酶活性的关键位点。
Abstract
wei yan jiu chan zeng li si te jun (LM)he tang he suan mei Rnase Ⅲ RncSan ji suan tu bian dui RNAjiang jie huo xing de ying xiang 。li yong sheng wu xin xi xue ruan jian fen xi chan he xi bao zeng sheng li si te jun (LM)ye du zhu SB5zhong rncSji yin bian ma de Rnase Ⅲde jie gou yu ,bing shua ze guan jian an ji suan li yong ji yin chong die yan shen PCR(SOE-PCR)ji shu dui ji jin hang le ji yin tu bian ;ran hou jiang rncStu bian ji yin pian duan D50A、E122Ake long zhi biao da zai ti pET-32a(+),zai da chang gan jun zhong li yong IPTGjin hang you dao biao da ;ying yong SDS-PAGEhe Western Blotjian ding chong zu dan bai de biao da qing kuang ji ji kang yuan te yi xing ;tong guo ti wai mei huo shi yan yan jiu ji dui RNAjiang jie huo xing de ying xiang 。jie gou yu fen xi jie guo xian shi ,LM-Rnase Ⅲan ji suan xu lie han you 1ge shuang lian RNAjie ge jie gou yu (DSRM)he 1ge he suan mei jie gou yu (RIBOc),ji zhong jie gou yu RIBOchan you 5ge huo xing wei dian 。SDS-PAGEjian ce jie guo xian shi ,biao da de chong zu tu bian xing Rnase Ⅲ -D50Ahe Rnase Ⅲ -E122 Adan bai xiang dui fen zi zhi liang jun wei 42.5 kD,yu li lun zhi xiang fu ;Western blotfen xi biao ming chong zu tu bian xing Rnase Ⅲ -D50Ahe Rnase Ⅲ -E122Adan bai ke yu LMyang xing xie qing fa sheng mian yi xue fan ying 。ti wai mei huo shi yan biao ming ,Rnase Ⅲfa hui jiang jie huo xing yi lai yu Mn2+huo Mg2+,jiang ji di 50wei tian dong an suan tu bian hou ,Rnase Ⅲ RncSde jiang jie huo xing you suo jiang di (P<0.001);di 122wei gu an suan tu bian hou ,Rnase Ⅲ RncSjiang jie huo xing ji xian zhe xia jiang (P<0.0001),di shi di 122wei gu an suan shi wei chi LM Rnase Ⅲ RncSmei huo xing de guan jian wei dian 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生物技术通报的王立霞,孟庆玲,乔军,蔡扩军,王登峰,伍晔晖,郭晶,才学鹏，发表于刊物生物技术通报2019年03期论文，是一篇关于单核细胞增生李斯特菌论文,核糖核酸酶论文,基因论文,降解活性论文,生物技术通报2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生物技术通报2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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