孙姗姗:超高效液相色谱-串联质谱法测定牛源性酪蛋白方法中酶解条件的优化及酶解性能的评价论文

孙姗姗:超高效液相色谱-串联质谱法测定牛源性酪蛋白方法中酶解条件的优化及酶解性能的评价论文

本文主要研究内容

作者孙姗姗,李婷婷,陈启,罗娇依,李刚,曹进(2019)在《超高效液相色谱-串联质谱法测定牛源性酪蛋白方法中酶解条件的优化及酶解性能的评价》一文中研究指出:为提高质谱法测定蛋白质的准确性,对酶解条件的优化和选择并建立最佳条件,以期提高回收率。设计了7种酶解方法进行了比较,并引入豆浆作为阴性基质。其中直接酶解法被选为最佳方法,其操作操作过程如下:取1g豆浆粉溶于10mL的50mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中制成豆浆提取液,取200nmol·L-1β-酪蛋白溶液200μL,加入豆浆提取液300μL,再加10μg质谱级胰蛋白酶,混匀后于37℃恒温酶解16h,加入10%(体积分数)甲酸溶液10μL,终止反应,加水定容至1.0mL,高速离心10min,取上清液进样,按仪器工作条件测定VLPVPQK特征肽段的峰面积。此方法的平均酶解效率为106%,相对标准偏差(n=5)为5.1%。方法中选择酶的加入量w酶与β-酪蛋白量wβ-酪蛋白量之比为1∶20。在方法的优化过程中不建议进行还原和烷基化步骤。

Abstract

wei di gao zhi pu fa ce ding dan bai zhi de zhun que xing ,dui mei jie tiao jian de you hua he shua ze bing jian li zui jia tiao jian ,yi ji di gao hui shou lv 。she ji le 7chong mei jie fang fa jin hang le bi jiao ,bing yin ru dou jiang zuo wei yin xing ji zhi 。ji zhong zhi jie mei jie fa bei shua wei zui jia fang fa ,ji cao zuo cao zuo guo cheng ru xia :qu 1gdou jiang fen rong yu 10mLde 50mmol·L-1san qiang jia ji an ji jia wan -yan suan huan chong rong ye zhong zhi cheng dou jiang di qu ye ,qu 200nmol·L-1β-lao dan bai rong ye 200μL,jia ru dou jiang di qu ye 300μL,zai jia 10μgzhi pu ji yi dan bai mei ,hun yun hou yu 37℃heng wen mei jie 16h,jia ru 10%(ti ji fen shu )jia suan rong ye 10μL,zhong zhi fan ying ,jia shui ding rong zhi 1.0mL,gao su li xin 10min,qu shang qing ye jin yang ,an yi qi gong zuo tiao jian ce ding VLPVPQKte zheng tai duan de feng mian ji 。ci fang fa de ping jun mei jie xiao lv wei 106%,xiang dui biao zhun pian cha (n=5)wei 5.1%。fang fa zhong shua ze mei de jia ru liang wmei yu β-lao dan bai liang wβ-lao dan bai liang zhi bi wei 1∶20。zai fang fa de you hua guo cheng zhong bu jian yi jin hang hai yuan he wan ji hua bu zhou 。

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  • 论文详细介绍

    论文作者分别是来自理化检验(化学分册)的孙姗姗,李婷婷,陈启,罗娇依,李刚,曹进,发表于刊物理化检验(化学分册)2019年10期论文,是一篇关于超高效液相色谱串联质谱法论文,酪蛋白论文,特征肽段论文,胰蛋白酶论文,酶解效率论文,理化检验(化学分册)2019年10期论文的文章。本文可供学术参考使用,各位学者可以免费参考阅读下载,文章观点不代表本站观点,资料来自理化检验(化学分册)2019年10期论文网站,若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权,请联系我们删除。

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