导读:本文包含了寡核苷酸适配体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:适配体,筛选,农兽药残留,检测
寡核苷酸适配体论文文献综述
邹雪梅,周佳伟,宋尚红,陈冠华[1]（2019）在《寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用》一文中研究指出适配体是一类从随机寡核苷酸文库中筛选出来的可对特定靶分子具有高亲和性和特异识别性的单链短脱氧核糖核酸或核糖核酸序列。自从指数富集配体系统进化(SELEX)的筛选方法问世以来,相继出现了各种基于SELEX的改进筛选方法,以及基于毛细管电泳分离手段的SELEX或非SELEX筛选方法。作为类似于抗体作用的分子识别元件,适配体在与食品和环境安全相关的农兽药残留检测领域中已得到一定的应用。在这些应用中,适配体通常与其它可以产生信号的材料如纳米金、量子点等构成复合探针,或与电化学电极等构成传感器。本文对适配体的筛选方法以及适配体在农兽药残留检测中的应用进行了概括和总结,以期为该研究提供有益的参考。(本文来源于《分析化学》期刊2019年04期）
庄乃保,吴凡,徐华,周华友,张印则[2]（2015）在《起始模板浓度对单链核苷酸适配体次级文库制备的影响》一文中研究指出目的制备高纯度高浓度的单链核苷酸(ss DNA)适配体次级文库。方法使用生物素标记的上、下游引物做PCR扩增制备双链DNA(ds DNA);以ds DNA为模板,使用大量无生素标记的上游引物及少量生物素标记的下游引物行不对称PCR扩增制备ss DNA;使用链霉亲和素磁珠去除ss DNA扩增产物中的ds DNA及其他副产物。结果起始模板浓度在1.13×(105-107)拷贝时,链霉亲和素磁珠去除ss DNA扩增产物中的ds DNA及其他副产品的效果较好;起始模板浓度≥1.13×108拷贝,则仍有较多副产品残留在纯化后的ss DNA产物中。结论起始模板浓度控制在1.13×105-1.13×107拷贝,应用本方法可获得纯度、产量均较高的ss DNA次级文库。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2015年07期）
王文凤[3]（2012）在《真菌毒素寡核苷酸适配体的筛选与应用》一文中研究指出SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment in virto)即体外指数富集配体的系统进化技术，是在90年代初发展起来的一种新的组合化学技术。适配子即aptamer，是对筛选得到的寡核苷酸序列的定义，因其可以与目标物质以配体-配基的形式结合，采用拉丁语aptus适合之意而得名。目前，已报道的真菌毒素的检测方法多种多样，但各有其优缺点。本文结合应用磁珠负筛SELXE技术和反筛SELEX技术筛选得到了黄曲霉真菌毒素B_1和B_2的单链DNA适配子并与荧光特性相结合建立了黄曲霉B_1和B_2的检测新方法。另外基于核酸适配子高特异性识别原理以及新兴纳米变色技术建立了对食品中真菌毒素FB_1可视化检测新方法。首先,制备载体氨基化的磁珠，把靶物质黄曲霉毒素B_1连接在载体上，以两端固定中间有40个随机序列在体外合成的一个全长80bp的寡核苷酸序列作为ssDNA文库。前两轮做磁珠的负筛，最后两轮做结构相似的物质黄曲霉毒素B_2的反筛，运用FluMag-SELEX技术经过十轮反复筛选，将筛选得到的序列进行克隆测序。运用DNAMAN软件和RNAstructure软件对合成的AFB_1适配子进行一级结构和二级结构分析。挑出不同源的几条具有代表性的适配子进行合成并标记生物素。制备亲和素包被的磁珠进行亲和性和特异性实验以及建立对黄曲霉毒素B_1的检测方法。在优化条件下，目标物质浓度在50ng/L-1500ng/L范围内与荧光强度呈良好的线性关系，检出限35ng/L，在花生油中的加标回收率为94.2%到101.2%，回收率良好。其次，以真菌毒素黄曲霉毒素B_2作为靶标，用同样的固定方法和文库，前两轮做磁珠的负筛，最后两轮做结构相似的物质黄曲霉毒素B_1的反筛，运用Fulg-SELEX技术经过十轮反复筛选后进行克隆测序。结构分析，挑选不同源的AFB_2适配子进行合成并用生物素标记，亲和性和特异性的分析以及检测方法的建立。在优化条件下，目标物质浓度在90ng/L-1800ng/L范围内与荧光强度呈良好的线性关系，检出限为55ng/L。在花生油中的加标回收率为93.1%到97.3%，回收率良好。再次，本研究基于核酸适配体识别和纳米金变色效应构建了伏马菌素B_1（FB_1）的可视化检测新方法。实验以纳米金为载体，首先在纳米金表面组装巯基化的适配体互补短链DNA1-FB_1-适配体复合物；当加入目标物时，适配体链与目标物结合，与互补短链DNA1发生解离；此时再加入纳米金标记的与适配体互补短链1互补的短链DNA2，二者杂交可导致纳米金粒子的聚集而使溶液颜色发生变化，进而实现目标物的可视化检测。通过条件优化，有效避免了由于盐浓度过大使纳米金发生聚集所产生的误差。同时在纳米金与短链DNA孵化时加入表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS），使NaCl浓度达到了500mmol/L而纳米金颜色仍不发生改变，打破了以往熟化NaCl浓度100mmol/L就使纳米金颜色发生变化的界限，使附着在纳米金上的DNA量扩大了3倍。方法检测线性范围为125ng/L—1500ng/L，检测限为125ng/L。该方法已成功应用于啤酒中FB_1的检测。(本文来源于《江南大学》期刊2012-06-01）
郭磊[4]（2010）在《SELEX技术及寡核苷酸适配体的近期研究进展》一文中研究指出指数富集的配体系统进化(SELEX)技术是一类具备蓬勃发展前景的体外筛选技术,在生物学、药学及化学领域已引起广泛关注。本文即针对2004年以来SELEX技术的发展特点,主要介绍两类新型SELEX策略,即毛细管电泳-SELEX和针对复杂靶标的SELEX方法,并简要总结了寡核苷酸适配体在生物医学和药学相关方面的最新应用进展。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2010年04期）
孙洁芳,郭磊,唐吉军,谢剑炜[5]（2010）在《CdTe量子点偶联寡核苷酸适配体的方法研究及其传感应用》一文中研究指出本文提出了一种新颖的CdTe量子点与单链寡核苷酸偶联方法,即可提高复合物的稳定性和发光强度,又避免了使用EDC作为偶联剂所导致荧光猝灭、纳米颗粒团聚等现象(结果如图1所示)。首先将变(本文来源于《中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集》期刊2010-06-20）
张朝阳[6]（2009）在《rHuEPO的特异性寡核苷酸适配体的筛选、评价及其应用》一文中研究指出促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是一类重要的造血生长因子,主要由肾脏分泌产生。具有促进红细胞增殖和分化,提高红细胞运输氧的功能。近年随着基因工程等生物技术的迅速发展,人们可以在哺乳动物细胞株中实现EPO基因的转染,由此可获得大量具有生物活性的重组人促红细胞生成素(rHuEPO)。rHuEPO类制剂中的rHuEPO-α和rHuEPO-β在临床上广泛用于治疗肾性贫血和癌症化疗引起的贫血症状。基于rHuEPO具有提高红细胞运输氧的药理功能,在耐力比赛中,存在运动员滥用此类药物以提高比赛成绩的可能性,因此世界反兴奋剂组织(WADA)的违禁药物清单中已明确将其列为肽类激素兴奋剂。目前开展的针对rHuEPO的检测方法,主要基于抗体作为传感或富集元件,以免疫分析或质谱分析为手段实现rHuEPO的检测。但抗体自身具有批间差异性、免疫原性和热不稳定性的局限性,将会阻碍目前基于抗体的免疫分析方法的特异性和灵敏度的提高。因此,针对抗体外新识别元件的研制,将对rHuEPO的分析检测提供更加有效的新思路和新途径。适配体是一类可折迭形成一定叁维结构用于特异性识别靶分子的单链DNA,RNA或修饰后的核酸分子,与抗体有类似的识别特性,但较抗体相比特异性更强,并具有无免疫原性、易从体外化学途径制备、及热稳定性更强的优点,这就为开发rHuEPO-α的高亲和力、高特异性适配体提供了新思路。因此实验设计采用凝集素导向的指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,从全长80个碱基的单链脱氧寡核苷酸文库中,经8轮反复富集,成功筛选获得特异性识别rHuEPO-α的寡核苷酸适配体。并对筛选得到的部分高亲和力、高特异性的适配体进行结构分析。最终,基于具有天然茎环式二级结构的适配体807-39 nt,建立了一种新型的适配体型分子信标检测策略,实现rHuEPO-α的高灵敏度高特异性的检测。本论文共分为四章。第一章为文献综述,从促红细胞生成素的功能／用途及研究概况、SELEX筛选技术的发展、分子信标的原理及设计策略叁方面进行概括,引用文献115篇。第二章详细介绍了rHuEPO-α的特异性寡核苷酸适配体的筛选过程。实验中采用凝集素导向的亲和树脂SELEX技术,将rHuEPO-α的唾液酸糖基部分固定后,实现针对其氨基酸序列的筛选,经N-乙酰葡萄糖胺特异性洗脱寡核苷酸与蛋白的复合物,经过8轮筛选后各轮(收敛)寡核苷酸文库的富集效率由13.8%提高到64.0%,同时各轮文库对于rHuEPO-α的选择性也由1.4增加到10.6。随后,对于第8轮富集文库的单克隆序列进行了序列比对分析,主要可以分为四个家族。Mfold模拟所得序列的二级结构主要呈现叁大特征：紧密的茎环结构、多分支的茎环结构、少或无茎环结构。其中部分单克隆适配体的解离常数在几十nM到几百nM之间,亲和力最高的为适配体807(Kd=82±32 nM)。第叁章为rHuEPO-α的特异性寡核苷酸适配体的截短序列研究。对于具有相对较低的吉布斯自由能和较低解离常数的适配体807和813,进行了进一步序列截短分析研究,以优化和寻求最短的有效结合序列长度。在第8轮文库中所占比例最高的序列807,其完全随机区807-39nt具有紧密的茎环结构,解离常数低于全长序列807,说明807-39nt的茎环结构对于复合物的形成有着重要作用。序列813的最短有效截短长度为813-42nt,其3’引物端的部分序列参与了随机区的茎部配对,并有利于复合物的形成。适配体807-39nt具有发卡式二级结构,主要由一富含G碱基的环部和长度为5对碱基的茎部组成。对于其茎部／环部的系列长度改变／碱基突变等研究表明,其环部为与靶分子rHuEPO-α相互作用的主要结合位点,而茎部的主要作用为稳定复合物的形成。并进一步针对靶蛋白的结合位点进行研究,去糖基化实验结果表明,当糖蛋白rHuEPO-α去除N连接的末端糖基后,仍可以与适配体807-39nt发生特异性的相互作用。因此,可初步推测,对于适配体807-39nt,蛋白rHuEPO-α与其作用的主要结合部位为其氨基酸序列。适配体807-39nt可以识别商品化注射液(益比奥和罗可曼)中不同类型的rHuEPO,亦从另一方面说明了rHuEPO的氨基酸序列为适配体807-39nt的主要作用区域。同时膀胱正常上皮组织的免疫组化实验证实适配体807-39nt特异性优于rHuEPO-α的单克隆抗体AE7A5,并发现适配体807-39nt与膀胱癌上皮组织间具有特异性相互作用。适配体807-39nt具有天然的茎环结构,在第四章中,基于此点我们建立了特异性识别rHuEPO-α的适配体型分子信标检测策略。分别构建"Signal-on"和"Signal-off"两种分子信标模式,依据适配体荧光信号的变化判断其结合靶分子rHuEPO-α前后分子构象的改变。对于"Signal-on"体系,淬灭DNA序列的长度、稳定DNA的杂交位置和金属离子Mg2+的浓度是其获得高灵敏度的关键因素,在优化后的条件下,未经任何富集手段可实现1 nM rHuEPO-α的直接快速灵敏检测,其LOD为0.4 nM。综上所述,本论文成功建立了凝集素导向的亲和SELEX技术,用于筛选rHuEPO-α的高亲和力、高特异性的ssDNA适配体。对筛选得到的适配体807和813进行了结构功能研究,并初步判定了其和rHuEPO-α的主要作用位点。其中亲和力和特异性最佳的适配体807-39nt(Kd=39±27 nM)有望成为新的传感元件,可为拓宽现有的rHuEPO-α检测方法,开发有效的针对rHuEPO-α诊断试剂提供了除抗体之外的新途径。(本文来源于《沈阳药科大学》期刊2009-09-01）
张月侠[7]（2009）在《蛋白质寡核苷酸适配体的筛选与应用研究》一文中研究指出适配体(aptamer),又称适配分子或适配子,来源于拉丁语aptus(匹配的意思)和希腊语‘‘meros’’(即小的颗粒)。寡核苷酸适配体是通过指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment , SELEX)技术从体外筛选得到的能与相应配体专一性紧密结合的一类单链寡核苷酸序列。这段序列可以是RNA、修饰RNA、ssDNA或dsDNA。适配体的配体广泛并且性质各异,除了蛋白质等大分子外,还有染料、金属离子、药物(咖啡因和茶碱等)、辅因子、生长因子、类固醇、糖类、氨基酸等小分子,甚至是完整的细胞、病毒、孢子等超分子,难用做半抗原的毒素和阮病毒也可以作为靶分子。适配体与各种配体的结合是基于单链核酸结构和空间构象的多样性。在靶分子存在的条件下,它可通过链内某些互补碱基间的配对以及静电作用、氢键作用等自身发生适应性折迭形成发卡(hairpin)、假结(pseudoknot)、凸环(stem loop)、G2四分体(G2quartet)等稳定的叁维空间结构。核苷酸与配体间有较大的接触面积,能形成许多潜在的结合位点,这一优势使适体能识别配体间一个基团的细微差别。经过SELEX技术反复筛选的适配体能与靶分子以极高的亲和力和特异性相结。核酸适体与靶物质亲和力极高,kd值多在pmol/L~nmol/L之间。SELEX技术筛选一般需要5-18个筛选循环,约2-3个月时间。目前人们筛选过程逐步实现自动化,节省了人力物力,筛选时间也大大缩短。作为寡核苷酸的适配体分子变性后,在适当条件下可以发生复性,另外,适体分子经过适当的化学修饰,能抵抗核酶的降解,延长半衰期,大大提高其稳定性,并可以长期保存并在常温下运输,这对实验诊断试剂或是临床治疗等方面都非常有利。因此,基于以上有利条件,适配体已经被广泛应用于分析化学、基因调控、蛋白质组学和新药研发等领域。在适配体筛选研究中,我们将卵黄蛋白原等五种蛋白为靶蛋白,包被于96孔板上。体外合成一个全长80bp,中间包含40个任意碱基的ssDNA文库,以结合固定于板空上的靶蛋白,运用RT-PCR技术检测每轮ssDNA文库与靶蛋白的亲和力。本试验以ELISA技术进行适配体筛选技术方法平台搭建,为建立适配体筛选实验室方法奠定基础。在适配体应用研究中,我们以一种高亲和力适配体作为亲和荧光探针,采用自建的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测装置,建立了一种高灵敏、快速测定人凝血酶的方法。荧光标记的凝血酶适配体特异性地与凝血酶结合并形成稳定的凝血酶-适配体复合物,采用CE-LIF对复合物进行分离检测从而测定凝血酶浓度。本工作探讨了盐离子种类及浓度对适配体与凝血酶结合的影响,并在选定的电泳条件下对凝血酶检测的线性范围、检出限和重现性进行了测定。结果表明,盐离子存在的条件下适配体与凝血酶的亲和力降低,不利于两者的结合;人血清溶液中,凝血酶浓度在0.25-10 nmol/L范围内与复合物峰面积具有良好的线性相关性(Y = 1.2×105x+5.33×104,r2 = 0.991),最低检出限为55.6 pmol/L;精密度试验和回收率试验结果均满足分析要求。(本文来源于《山东师范大学》期刊2009-06-08）
寡核苷酸适配体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的制备高纯度高浓度的单链核苷酸(ss DNA)适配体次级文库。方法使用生物素标记的上、下游引物做PCR扩增制备双链DNA(ds DNA);以ds DNA为模板,使用大量无生素标记的上游引物及少量生物素标记的下游引物行不对称PCR扩增制备ss DNA;使用链霉亲和素磁珠去除ss DNA扩增产物中的ds DNA及其他副产物。结果起始模板浓度在1.13×(105-107)拷贝时,链霉亲和素磁珠去除ss DNA扩增产物中的ds DNA及其他副产品的效果较好;起始模板浓度≥1.13×108拷贝,则仍有较多副产品残留在纯化后的ss DNA产物中。结论起始模板浓度控制在1.13×105-1.13×107拷贝,应用本方法可获得纯度、产量均较高的ss DNA次级文库。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
寡核苷酸适配体论文参考文献
[1].邹雪梅,周佳伟,宋尚红,陈冠华.寡核苷酸适配体的筛选及在农兽药残留检测中的应用[J].分析化学.2019
[2].庄乃保,吴凡,徐华,周华友,张印则.起始模板浓度对单链核苷酸适配体次级文库制备的影响[J].中国输血杂志.2015
[3].王文凤.真菌毒素寡核苷酸适配体的筛选与应用[D].江南大学.2012
[4].郭磊.SELEX技术及寡核苷酸适配体的近期研究进展[J].国际药学研究杂志.2010
[5].孙洁芳,郭磊,唐吉军,谢剑炜.CdTe量子点偶联寡核苷酸适配体的方法研究及其传感应用[C].中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集.2010
[6].张朝阳.rHuEPO的特异性寡核苷酸适配体的筛选、评价及其应用[D].沈阳药科大学.2009
[7].张月侠.蛋白质寡核苷酸适配体的筛选与应用研究[D].山东师范大学.2009