梁德仁1肖明明2（通讯作者）
（1清原满族自治县人民医院辽宁抚顺113300；2辽宁省人民医院辽宁沈阳110016）
【中图分类号】R734.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）51-0094-02
【摘要】目的探讨多药耐药因子在肺癌中表达与共表达的水平、相关性及临床意义。方法采用免疫组化SP技术检测60例肺癌患者组织芯片中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),多药耐药相关蛋白(multdrugresistance-associatedprotein.MRP)、肺耐药蛋白(lungresistanceprotein.LRP),谷胱苷肽-S转移酶-π(GlutathioneS-transferase.GST-π)等多药耐药因子的表达水平。结果○1P-gp,MRP,LRP,GST-π阳性表达率分别为53.3%;(32/60),63.3%(38/60),70.0%(42/60),80.0%(48/60),②耐药因子在不同病理类型中表达有显著性差异〔P<0.05〕，在NSCLC中表达高于SCLC;在不同TNM分期、不同分化程度间表达无显著性差异(P>0.05)。结论肺癌的多药耐药现象是由多个耐药因子共同参与作用的结果，肺癌多药耐药的发生在肿瘤细胞的病理分型间有差异性，在不同分化程度、不同TNM分期间无差异性。
【关键词】肺肿瘤多药耐药因子免疫组化组织芯片
联合化疗对延长恶性肿瘤病人的生存期有积极的临床意义，但肿瘤细胞产生的耐药性是肿瘤化疗失败的最常见而又最难解决的问题之一。肿瘤细胞产生耐药性是多方面的，其中以多药耐药性(multidrugresistance,MDR)最为常见[1]。MDR基因的过度表达或扩增往往导致肿瘤患者化疗的失败，并伴随病情的发展或肿瘤复发及转移[2]。我们回顾分析了60例肺癌P-gp,MRP、LRP、GST-π的表达，并探讨它们与肺癌生物学行为的相关性，为指导临床用药、判断预后提供理论依据。
1材料与方法
1.1标本来自胸外科手术后的病理组织石蜡标本，均经病理诊断为肺癌，共60例，其中男41例，女19例，中位年龄为54.7岁。病理类型:鳞癌26例，腺癌19例，小细胞癌11例，大细胞癌1例，腺鳞癌3例。分化程度:低分化+小细胞未分化31例，中分化16例，高分化13例。TNM分期(根据1997年UICC标准):Ⅰ期8例,II期14例，Ⅲ期31例，IV期7例。
1.2方法将上述石蜡包埋的蜡块制作成组织芯片（技术由上海芯超生物科技有限公司提供）。免疫组织化学方法：采用SP法。
1.3试剂即用型兔抗人P-gp,MRP,LRP,GST-π抗体，即用型SP免疫组化试剂盒，DAB显色，PBS缓冲剂，枸橼酸盐缓冲剂均购于武汉博士德生物工程公司。
1.4结果判定:阳性细胞记数:每张切片随机取5个视野，每个视野计数100个细胞，以阳性细胞数成≤10%为阴性，>10%为阳性。
1.5统计学处理应用χ2检验分析P-gp,MRP,LRP,GST-π阳性表达与病理类型、TNM分期、分化程度间关系;应用Sperman秩相关比较耐药因子间的相关性。因大细胞癌和腺鳞癌的标本例数均小于5不做分析。
2.结果
2.1肺癌组织中P-gp,MRP,LRP,GST-π阳性表达与病理特征间的关系各多药耐药因子在鳞癌和腺癌中表达无显著性差异（P>0.05），在NSCLC和SCLC中表达有显著性差异（P<0.05），在NSCLC中表达高于SCLC，阳性表达秩序分别为腺癌>鳞癌>SCLC。各多药因子阳性表达在不同TNM分期间无显著性差异（P>0.05）。各多药耐药因子阳性表达在不同分化程度间亦无显著性差异（P>0.05）。
2.2各多药耐药因子共表达情况
各多药耐药因子共表达的比率分别为P-gp与MRP:41.6%，P-gp与LRP:35.0%，P-gp与GST-π:45.0%。MRP与LRP：53.3%，MRP与GST-π:50.0%，LRP与GST-π58.3%，MRP与LRP与GST-π:45.0%,，P-gp与MRP与LRP与GST-π:20.0%。各耐药因子表达的相关性分析结果为:P-gp与MRP,MRP与LRP,MRP与GST-π，LRP与GST-π，P-gp与LRP，
P-gp与GST-π均具有相关性(P值均<0.01)。表明四种因子相互间均有相关性。四种因子其表达率为20.0%(12/60)。
3.讨论
肺癌是少数几种发病率和病死率呈上升趋势的恶性肿瘤之一，目前肺癌多采用化疗或手术+化疗方法治疗但许多患者化疗常失败，其重要原因之一是癌细胞产生了耐药性。
研究表明，肿瘤产生耐药性是多方面的，其中以多药耐药性（MDR）最为常见，MDR的产生是多种机制共同作用的结果，因此检测肺癌的多个MDR基因的表达，同时评估多个MDR指标，以便能更客观地反映它们对肺癌的意义，为临床提供更多的耐药信息，并有助于临床对肺癌化疗药物的选择。
GST是一组与机体解毒作用有关的酶类，其中以GST-π与恶性肿瘤关系最为密切。GST-π以催化方式降解药物，它不但可催化亲电物质与谷胱甘肽结合，还可以和亲脂性细胞毒物结合增加其水溶性，促进其代谢，降低抗肿瘤药物的细胞毒作用而产生耐药。P-gp是由MDR1基因编码的分子量为170KD的膜糖蛋白，它具有ATP依赖性跨膜转运泵功能，即它既具有与抗癌药物结合的位点，也有与ATP接合的位点。一旦与抗癌药物结合，通过ATP提供能量将细胞内药物泵出细胞外，从而使细胞内药物浓度不断降低，细胞毒作用减弱甚至消失，细胞出现耐药。因而P-gp的表达水平与耐药程度成正比。
本实验做了各耐药因子共表达测定及相关性分析.结果表明，耐药因子在肺癌中存在明确的共表达现象，相关性检验分析结果也表明，各耐药因子间存在着明确的相关性而且，从各耐药因子的结构及各自引起MDR的作用机制中也不难看出，它们之间存在着密切的相互联系。本实验中MRP与LRP阳性共表达率为53.3%,相关性分析显'示两者具有明显相关性。GST-π与MRP介导肺癌耐药机制可以说是一个连续的过程，GST-π使抗肿瘤药物与GSH结合形成GS-X从而降低了药物的活性，而MRP能将该复合物排出细胞外，使细胞内药物浓度和GSH浓度下降，促进了二者的进一步结合，从而使耐药发生迅速，逆转机制更为复杂，导致患者预后差。
由此可见，肺癌的MDR现象是多因素、多机制共同参与形成的，而且，从临床对肺癌MDR逆转治疗效果不佳中也进一步反映出，单独对某一耐药蛋白进行耐药逆转，是不可能取得良好的临床效果。因此，确立肺癌MDR现象是由于多个耐药因子共同参与、相互作用结果的观点，是极为重要的，这将会对肺癌的临床化疗具有指导意义，指导临床化疗方案个体化的选择及拓宽肺癌逆转方向的研究视野.也将会对肺癌在细胞学和基因遗传学方面耐药逆转的研究具有一定的指导意义。
参考文献
[1]RolffJ,DornC,MerkJ,etal.ResponseofPatient-DerivedNon-SmallCellLungCancerXenograftstoClassicalandTargetedTherapiesIsNotRelatedtoMultidrugResistanceMarkers.JOncol.2009:814140.
[2]ShiH,LuD,ShuY,etal.Expressionofmultidrugresistance-relatedproteinsp-glycoprotein,glutathione-s-transferases,topoisomerase-IIandlungresistanceproteininprimarygastriccardiacadenocarcinoma.Hepatogastroenterology.2008Sep-Oct;55(86-87):1530-1536.