导读:本文包含了转录病毒载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:冠状动脉旁路移植术,静脉桥血管再狭窄,活化转录因子3,Cas9基因编辑技术
转录病毒载体论文文献综述
周绍酉,周宁,张魁,李扬,赵洋[1]（2019）在《活化转录因子3基因Cas9编辑慢病毒载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建靶向活化转录因子3(ATF3)在CRISPR/Cas9技术编辑的慢病毒载体。方法:针对ATF3基因设计并合成叁条对应的向导(gRNA)序列和一条无意义序列,向导RNA序列与双酶切U6-EF1a-Cas9-FLAG-P2A-EGFP载体链接,DNA测序鉴定重组载体。荧光/绝对定量法测定慢病毒浓度。共转染人微血管静脉内皮细胞(HMEC)后,实时定量荧光PCR检测ATF3 mRNA表达,验证HMEC细胞中是否含有ATF3基因及其是否有突变。对照病毒和叁个靶点慢病毒分别感染Cas9蛋白稳定株,感染后混合克隆进行抽提基因组DNA,将得到PCR产物进行错配酶法进行酶切,对于筛靶中阳性的PCR产物一组序列与野生型对比。Western blot检测ATF3蛋白表达,验证转染效果。定量PCR检测ATF3mRNA的改变。结果:测序表明ATF3在Cas9编辑下慢病毒载体构建成功。HMEC倒置荧光显微镜荧光视野和明视野进行对比,感染可达到80%转染率,GFP持续稳定表达。Western blot结果显示,ATF3蛋白表达有明显下调(P<0.05)。结论:本研究成功构建了ATF3Cas9编辑慢病毒载体,为进一步研究ATF3在静脉桥血管再狭窄中早期内皮功能失调作用机制及基因治疗提供了实验依据。(本文来源于《心肺血管病杂志》期刊2019年07期）
田军,刘晓红,韩林[2]（2019）在《靶向活化转录因子6的短发夹RNA重组腺病毒载体构建及对猪瓣膜间质细胞增殖与凋亡的影响》一文中研究指出目的:构建猪活化转录因子6-短发夹RNA(ATF6-shRNA)重组腺病毒干扰载体,观察其对猪瓣膜间质细胞(VIC)增殖与凋亡的影响。方法:针对猪ATF6序列设计3个shRNA干扰靶点,构建质粒,包装后进行病毒扩增,使用腺病毒转染VIC,通过定量PCR检测腺病毒对VIC中ATF6的干扰效率,通过Western blot法测定下调ATF6后VIC中胱天蛋白酶(caspase)-3的表达情况,并通过CCK-8法检测VIC增殖情况。结果:成功构建靶向ATF6的shRNA重组腺病毒载体。腺病毒转染VIC后,腺病毒对VIC中ATF6干扰效率提高;而ATF6、 caspase-3表达显着降低;自第2天起VIC存活率升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:成功构建靶向ATF6的shRNA重组腺病毒载体,通过降低VIC中ATF6的表达水平,减少VIC凋亡并促进细胞存活。(本文来源于《国际心血管病杂志》期刊2019年03期）
周园红,罗幼珍,周晓琳,刘强[3]（2018）在《人转录因子Slug过表达慢病毒载体的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建Slug过表达的慢病毒载体,为探讨Slug在肿瘤复发转移中的影响提供前期基础。方法从人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得Slug基因片段,与AgeⅠ/Nhe I酶切后成线性化的GV367载体连接,采用PCR及DNA测序的方式鉴定阳性克隆。将构建的LV-Slug转染入293T细胞中,采用荧光法检测LV-Slug的病毒滴度。结果经测序证实Slug基因已成功插入到病毒载体中,其病毒滴度为5×10~8 TU/mL。结论成功构建了携带Slug过表达的慢病毒载体,为探讨Slug在肿瘤转移复发中的影响提供基础。(本文来源于《中国医药导报》期刊2018年07期）
宋力,何佳平,方彧聃,曾凡一,张敬之[4]（2017）在《降低慢病毒载体转录通读率以避免激活其被转导细胞基因组DNA的表达进而提高其临床应用安全性的研究》一文中研究指出目的慢病毒载体是目前基因治疗研究中最常用的基因转移工具,而慢病毒载体的转录通读可引起其整合位点附近原沉默基因的激活表达而引发安全隐患。本研究旨在探讨在慢病毒载体中加入隔离子等元件来降低其转录通读率的可行性。方法在慢病毒载体插入隔离子等元件,来改造慢病毒载体,并建立新的转录通读率检测方法,筛选出大幅降低转录通读率的更加安全的慢病毒载体。结果将改造后的慢病毒载体分别转导至293T细胞或者PBMC(peripheral blood mononuclear cells)细胞,并检测其转录通读率,得出以下结果。(1)在△U3区反向插入400 bp的cHS4隔离子核心序列可以屏蔽周围环境的影响,从而减少下游基因的激活,其降低转录通读率效果略优于插入2个拷贝的SV40 USE元件的慢病毒载体,单独插入cHS4或SV40 USE的通读率降低的效果不如两者的组合使用。(2)降低慢病毒载体转录通读效果与所使用的隔离子长度及插入方向有关。(3)嵌合体慢病毒载体将有效降低其转录通读率。(4)在293T细胞感染实验中,这些改造后的慢病毒载体其生物滴度均有所降低。结论我们建立的新的降低慢病毒载体通读率的方法将进一步提高慢病毒载体的安全性和临床适用性。(本文来源于《2017中国长叁角遗传学大会会议手册》期刊2017-10-27）
周恒,唐其柱,邓伟,袁园,倪健[5]（2016）在《大鼠免疫球蛋白样转录物3过表达腺病毒载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建免疫球蛋白样转录物3(immunoglobulin-like transcript 3,ILT3)过表达腺病毒载体,以期进一步研究ILT3基因功能及其在心血管疾病中的作用。方法针对大鼠ILT3设计引物,通过PCR扩增获取目的基因,以琼脂糖凝胶电泳鉴定,行胶回收与PCR产物纯化。使用限制性内切酶Bam HⅠ与AgeⅠ对载体质粒以及纯化后的PCR产物进行双酶切,将酶切后的PCR产物与载体连接,连接产物加入至感受态细胞培养后挑取菌落进行PCR鉴定、测序、比对及质粒抽提。将ILT3重组质粒与腺病毒辅助包装质粒共转染至HEK293细胞,获取病毒粗提液并进行扩增、纯化,终点稀释法进行病毒效价检测,在荧光显微镜下观察腺病毒转染效率。结果 PCR与测序鉴定表明GV314-ILT3重组质粒构建成功。终点稀释法测得病毒效价为1×109PFU/ml,荧光显微镜下观察显示病毒转染效率较高。结论携带ILT3基因的腺病毒载体构建成功,获取的腺病毒具有较高的效价与转染效率。(本文来源于《医学研究杂志》期刊2016年08期）
刘晨阳,颜文杰,王敏,孙文逵,苏欣[6]（2016）在《人转录因子PU.1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的 PU.1是调控肺泡巨噬细胞天然免疫功能的重要转录因子之一。文中旨在构建并鉴定表达人转录因子PU.1基因的重组腺病毒载体。方法将PU.1基因SPI1和真核表达载体p IRES-EGFP进行双酶切、连接酶连接,PCR扩增目的片段SPI1-IRES-EGFP,与中间质粒p DONR221和腺病毒骨架质粒p Ad/CMV/V5-DEST进行重组,线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,获得重组腺病毒p AD-SPI1-IRES-EGFP,经过大量扩增后获得高浓度的重组腺病毒。TCID 50法测定重组腺病毒滴度,通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)鉴定PU.1基因在HEK293细胞中的表达。结果菌落PCR、酶切电泳及测序结果均表明重组腺病毒携带有正确的PU.1基因,TCID 50法计算腺病毒滴度为8×1011IU/m L,荧光显微镜下可见明显的绿色荧光,Real-time q PCR转染重组腺病毒组PU.1 mRNA表达量是转染空病毒组的2189.93倍。结论成功构建并获得了高浓度的人转录因子PU.1基因重组腺病毒,为后续研究高表达PU.1在宿主抗烟曲霉感染中的天然免疫作用奠定了基础。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2016年05期）
张璐玢,谢梦晓,陈云鹏,徐晓昱,张彩云[7]（2016）在《小鼠microRNA-31反转录病毒载体重组质粒的构建及鉴定》一文中研究指出目的:以p MSCV-puro载体(MGP)为骨架,构建带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠micro RNA-31(mi R-31)反转录病毒载体MGP-31。方法:PCR扩增带有NotⅠ以及XhoⅠ酶切位点的mi R31的前体(premi R-31)序列,然后克隆至MGP载体上,测序鉴定。将构建的MGP-31质粒转染HEK-293T细胞,通过荧光显微镜观察GFP的表达情况,实时定量PCR检测mi R-31转录水平以评估MGP-31质粒的转染效率。结果:基因序列分析显示pre-mi R-31基因序列正确,并成功插入MGP载体,转染HEK-293T细胞可表达GFP,实时定量PCR结果表明转染MGP-31质粒的HEK-293T细胞可高表达mi R-31。结论:MGP-31反转录病毒载体构建成功。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2016年01期）
秦建如,黎娜铭,许长剑,廖明,曹伟胜[8]（2015）在《反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达》一文中研究指出为建立反转录病毒载体RCASBP介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在DF-1细胞中的表达体系,本研究将PCR获得的EGFP基因插入反转录病毒载体RCASBP,构建重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP,之后将重组载体转染DF-1细胞;用基于禽白血病病毒(ALV)p27抗原的ELISA检测盲传至第4代的细胞上清,ELISA阳性结果说明重组病毒拯救成功;荧光显微镜观察发现80%以上DF-1细胞都有明显的绿色荧光信号,证明DF-1细胞表达绿色荧光蛋白;对DF-1细胞基因组进行特异性PCR检测,扩增出特异性条带说明重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP携带的EGFP基因整合到DF-1细胞的基因组中。本研究建立的RCASBP介导反转录病毒表达体系为研究ALV基因的结构和功能奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2015年10期）
杨华安,张扬,杨钰兴,胡溯,苟欣[9]（2015）在《携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总RNA通过STAT3引物逆转录为cDNA PCR扩增、回收后,同pLVX-IRES-ZsGreen1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293T细胞,48h后收集细胞,Western blot检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。结果测序结果证实STAT3成功插入pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293T细胞48h,Western blot检测STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。结论成功构建了STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。(本文来源于《重庆医学》期刊2015年27期）
马婷,张西倩,丁向真,李志英,王盛[10]（2016）在《聚合酶Ⅱ转录的sRNA与RNA沉默抑制子对TMV病毒载体表达系统作用的比较》一文中研究指出聚合酶Ⅱ介导合成的外源短链RNA(short RNA,s RNA)可以竞争性地抑制内源m RNA的核质转运,推测共表达s RNA可以间接地提高病毒载体表达系统的表达效率。为了验证这一假说和评价其应用潜能,本研究采用基因体外合成技术和亚克隆技术,分别构建了聚合酶Ⅱ转录的拟南芥U6-1 RNA和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)编码的RNA沉默抑制子(RNA silencing suppressors,RSSs)2b的植物表达载体。以农杆菌渗滤技术,与烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)表达载体共接种寄主植物本氏烟(Nicotiana benthamiana),通过对报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的荧光观察,并以Western blot和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)测定GFP在烟草中的表达情况,分析s RNA对植物病毒载体表达系统的作用和可能的作用机制。同时通过与RSSs比较,评价s RNA在植物生物反应器中的应用潜能。实验结果表明,聚合酶Ⅱ转录的s RNA能有效地提高TMV病毒载体介导的外源基因在植物中的表达(GFP表达量比对照组高约2.5倍),而且能够显着地降低TMV诱导的病程相关蛋白2(Pathogenesis-related protein 2,PR2)在细胞内的积累水平(PR2表达量比对照组下降约8倍)。推测Ⅱ型启动子转录的s RNA通过竞争性地抑制宿主抵御病毒入侵相关蛋白合成的m RNA核质运转促进病毒RNA介导的外源基因在植物中的表达。此外,Ⅱ型启动子转录的s RNA的作用效果与CMV病毒编码的RNA沉默抑制子2b相当。研究结果为提高病毒载体介导的外源基因在植物中的表达提供了一条可供借鉴的思路。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2016年01期）
转录病毒载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建猪活化转录因子6-短发夹RNA(ATF6-shRNA)重组腺病毒干扰载体,观察其对猪瓣膜间质细胞(VIC)增殖与凋亡的影响。方法:针对猪ATF6序列设计3个shRNA干扰靶点,构建质粒,包装后进行病毒扩增,使用腺病毒转染VIC,通过定量PCR检测腺病毒对VIC中ATF6的干扰效率,通过Western blot法测定下调ATF6后VIC中胱天蛋白酶(caspase)-3的表达情况,并通过CCK-8法检测VIC增殖情况。结果:成功构建靶向ATF6的shRNA重组腺病毒载体。腺病毒转染VIC后,腺病毒对VIC中ATF6干扰效率提高;而ATF6、 caspase-3表达显着降低;自第2天起VIC存活率升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:成功构建靶向ATF6的shRNA重组腺病毒载体,通过降低VIC中ATF6的表达水平,减少VIC凋亡并促进细胞存活。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转录病毒载体论文参考文献
[1].周绍酉,周宁,张魁,李扬,赵洋.活化转录因子3基因Cas9编辑慢病毒载体的构建及鉴定[J].心肺血管病杂志.2019
[2].田军,刘晓红,韩林.靶向活化转录因子6的短发夹RNA重组腺病毒载体构建及对猪瓣膜间质细胞增殖与凋亡的影响[J].国际心血管病杂志.2019
[3].周园红,罗幼珍,周晓琳,刘强.人转录因子Slug过表达慢病毒载体的构建与鉴定[J].中国医药导报.2018
[4].宋力,何佳平,方彧聃,曾凡一,张敬之.降低慢病毒载体转录通读率以避免激活其被转导细胞基因组DNA的表达进而提高其临床应用安全性的研究[C].2017中国长叁角遗传学大会会议手册.2017
[5].周恒,唐其柱,邓伟,袁园,倪健.大鼠免疫球蛋白样转录物3过表达腺病毒载体的构建及鉴定[J].医学研究杂志.2016
[6].刘晨阳,颜文杰,王敏,孙文逵,苏欣.人转录因子PU.1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定[J].医学研究生学报.2016
[7].张璐玢,谢梦晓,陈云鹏,徐晓昱,张彩云.小鼠microRNA-31反转录病毒载体重组质粒的构建及鉴定[J].江苏大学学报(医学版).2016
[8].秦建如,黎娜铭,许长剑,廖明,曹伟胜.反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达[J].中国畜牧兽医.2015
[9].杨华安,张扬,杨钰兴,胡溯,苟欣.携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定[J].重庆医学.2015
[10].马婷,张西倩,丁向真,李志英,王盛.聚合酶Ⅱ转录的sRNA与RNA沉默抑制子对TMV病毒载体表达系统作用的比较[J].农业生物技术学报.2016
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