本文主要研究内容
作者贾杨彦圣（2019）在《探究Slc5a8在小鼠眼角膜上皮表达的时空分布》一文中研究指出：角膜缘干细胞(Limbal stem cells,LSCs)存在于角膜缘区域。在个体发育过程中,LSCs向心移行并分化为成熟角膜上皮细胞。据此,可以作为LSCs和成熟角膜上皮细胞的鉴定和定位的理论基础。小鼠是重要的模式动物之一,但关于小鼠角膜缘细胞基因差异性表达的研究尚未见相关报道。本课题结合分子生物学技术和高通量组学技术探究小鼠眼角膜不同区域的差异表达,加深人们对于小鼠眼角膜细胞基因差异性表达的认知。SLC5A8是钠偶联的单羧酸转运蛋白(也称为SMCT1)参与乳酸和短链脂肪酸的运载,这一运载体不仅可以在卵细胞中表达,在其他体细胞中也同样表达。我们推测在小鼠角膜也会表达。本研究利用HE染色、免疫组化染色进行小鼠眼角膜形态学观察,界定角膜缘区域。在此基础上,通过获取角膜缘组织并将角膜缘区域根据冠状面象限分为上(Superior,S)、下(Inferior,I)、鼻(Nasal,N)、颞(Temporal,T)四个组,以中央角膜区域和结膜区域作为对照组进行转录组测序(RNA-seq)。然后对测序结果进行差异分析、GO注释和KEGG通路分析。通过差异分析获得细胞基因差异性表达的概况,筛选出有研究意义的差异基因并探究其在小鼠眼角膜中不同水平的差异性表达。我们成功地对小鼠角膜缘区域进行了准确界定。18个样品的RNA-seq测序质量均符合公认的要求(Q20≥95%、Q30≥85%),其中,Q20最小值为95.79%,Q30最小值88.71%,clean reads ratio最小值为94.89%。差异分析结果显示Slc5a8在各实验组中差异表达,因此,进一步通过qRT-PCR和Western Blotting对其进行定量和半定量检测,并利用单分子RNA原位检测和免疫组化分别探究其在转录水平和蛋白水平的空间分布情况。qRT-PCR和单分子RNA原位检测结果显示Slc5a8在转录水平主要高表达于角膜缘上皮区域,Western Blotting和免疫组化结果显示SLC5A8在蛋白水平却主要高表达于中央角膜上皮区域。这种表达反差提示Slc5a8基因在转录水平可作为LSCs候选标志物,在蛋白水平可作为角膜上皮细胞候选标志物。
Abstract
jiao mo yuan gan xi bao (Limbal stem cells,LSCs)cun zai yu jiao mo yuan ou yu 。zai ge ti fa yo guo cheng zhong ,LSCsxiang xin yi hang bing fen hua wei cheng shou jiao mo shang pi xi bao 。ju ci ,ke yi zuo wei LSCshe cheng shou jiao mo shang pi xi bao de jian ding he ding wei de li lun ji chu 。xiao shu shi chong yao de mo shi dong wu zhi yi ,dan guan yu xiao shu jiao mo yuan xi bao ji yin cha yi xing biao da de yan jiu shang wei jian xiang guan bao dao 。ben ke ti jie ge fen zi sheng wu xue ji shu he gao tong liang zu xue ji shu tan jiu xiao shu yan jiao mo bu tong ou yu de cha yi biao da ,jia shen ren men dui yu xiao shu yan jiao mo xi bao ji yin cha yi xing biao da de ren zhi 。SLC5A8shi na ou lian de chan suo suan zhuai yun dan bai (ye chen wei SMCT1)can yu ru suan he duan lian zhi fang suan de yun zai ,zhe yi yun zai ti bu jin ke yi zai luan xi bao zhong biao da ,zai ji ta ti xi bao zhong ye tong yang biao da 。wo men tui ce zai xiao shu jiao mo ye hui biao da 。ben yan jiu li yong HEran se 、mian yi zu hua ran se jin hang xiao shu yan jiao mo xing tai xue guan cha ,jie ding jiao mo yuan ou yu 。zai ci ji chu shang ,tong guo huo qu jiao mo yuan zu zhi bing jiang jiao mo yuan ou yu gen ju guan zhuang mian xiang xian fen wei shang (Superior,S)、xia (Inferior,I)、bi (Nasal,N)、nie (Temporal,T)si ge zu ,yi zhong yang jiao mo ou yu he jie mo ou yu zuo wei dui zhao zu jin hang zhuai lu zu ce xu (RNA-seq)。ran hou dui ce xu jie guo jin hang cha yi fen xi 、GOzhu shi he KEGGtong lu fen xi 。tong guo cha yi fen xi huo de xi bao ji yin cha yi xing biao da de gai kuang ,shai shua chu you yan jiu yi yi de cha yi ji yin bing tan jiu ji zai xiao shu yan jiao mo zhong bu tong shui ping de cha yi xing biao da 。wo men cheng gong de dui xiao shu jiao mo yuan ou yu jin hang le zhun que jie ding 。18ge yang pin de RNA-seqce xu zhi liang jun fu ge gong ren de yao qiu (Q20≥95%、Q30≥85%),ji zhong ,Q20zui xiao zhi wei 95.79%,Q30zui xiao zhi 88.71%,clean reads ratiozui xiao zhi wei 94.89%。cha yi fen xi jie guo xian shi Slc5a8zai ge shi yan zu zhong cha yi biao da ,yin ci ,jin yi bu tong guo qRT-PCRhe Western Blottingdui ji jin hang ding liang he ban ding liang jian ce ,bing li yong chan fen zi RNAyuan wei jian ce he mian yi zu hua fen bie tan jiu ji zai zhuai lu shui ping he dan bai shui ping de kong jian fen bu qing kuang 。qRT-PCRhe chan fen zi RNAyuan wei jian ce jie guo xian shi Slc5a8zai zhuai lu shui ping zhu yao gao biao da yu jiao mo yuan shang pi ou yu ,Western Blottinghe mian yi zu hua jie guo xian shi SLC5A8zai dan bai shui ping que zhu yao gao biao da yu zhong yang jiao mo shang pi ou yu 。zhe chong biao da fan cha di shi Slc5a8ji yin zai zhuai lu shui ping ke zuo wei LSCshou shua biao zhi wu ,zai dan bai shui ping ke zuo wei jiao mo shang pi xi bao hou shua biao zhi wu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自华侨大学的贾杨彦圣，发表于刊物华侨大学2019-10-31论文，是一篇关于角膜缘论文,角膜缘干细胞论文,转录组测序论文,差异表达基因论文,华侨大学2019-10-31论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自华侨大学2019-10-31论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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