导读:本文包含了病毒包装系统论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:microRNA122,腺相关病毒,基因治疗,天花粉蛋白
病毒包装系统论文文献综述
郭鹏鹏[1]（2018）在《细胞毒性基因—天花粉蛋白的重组腺相关病毒包装系统的构建》一文中研究指出目的:基于mi RNA122对含有靶序列基因的调节功能,通过应用内源mi RNA对转基因表达的负向调控作用,减少目的基因-天花粉蛋白载体中转基因片段的异位表达,构建细胞毒性基因r AAV载体的包装系统。方法:(1)质粒构建:首先,利用分子组装技术将基因片段嵌入由鸡β-肌动蛋白启动子及巨细胞病毒增强子(CBAp)驱动的质粒中,并将插入位点定位于两个末端重复序列(ITR)之间,获得一系列用于r AAV制备的目的基因载体。(2)细胞转染:然后将目的基因构建到腺相关病毒载体,将构建好的重组质粒导入细胞中,检测目的蛋白的表达。(3)双报告基因检测:通过Gaussia Luciferase和Firefly Luciferase报告基因检测,测得报告基因的表达水平,并建立表达mi R122水平更高的细胞株,以增强对mir122T上游基因的调控能力。(4)重组腺相关病毒的包装及纯化:运用q PCR,Western Blot等技术比较原细胞株与新细胞株的一系列生物特性,以检测用于包装r AAV的可行性。结果:内源性和外源性mi R-122具有组织特异性,并可对靶序列基因的表达进行调控;分选获得过表达mi R-122和GLuc的HEK293-mir122-GLuc细胞株,mir122抑制靶序列的表达的作用同样适用于HEK293-mir122-GLuc细胞株,并且在生长速度与转染效率上都优于原有HEK293细胞;并将mir122T序列插入细胞毒性基因表达框的3’端非编码区域以降低工程细胞内毒性基因的表达水平,最终应用该病毒包装系统进行了细胞毒性基因的r AAV载体的制备及感染。结论:细胞毒性基因-天花粉蛋白的重组腺相关病毒包装系统构建成功。(本文来源于《青岛大学》期刊2018-05-19）
刘娜[2]（2018）在《寨卡病毒复制子反式包装系统的构建和药物筛选应用》一文中研究指出Zika virus(ZIKV)是一种虫媒传播病毒,与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等都是一个单股正链的RNA病毒,属于黄病毒属,黄病毒科。自1947年4月从发热的哨兵恒河猴的血清中分离后,已经在很多国家和地区引起疫情并且流行开来,与严重的临床表现和先天性畸形有关。但是,目前还没有有效的抗病毒药物和疫苗可以用于ZIKV的临床治疗,因此对于安全有效的ZIKV抗病毒药物和疫苗的研究刻不容缓。复制子系统已经被证明是一个有效的药物筛选工具。在本文中,我们主要开展了以下叁个方面的工作:稳定表达海肾荧光素酶(Rluc)的ZIKV复制子的构建;复制子用于抗病毒药物筛选实验;ZIKV复制子反式包装系统的构建。一、稳定表达海肾荧光素酶(Rluc)的ZIKV复制子的构建在本文中,我们在ZIKV感染性克隆的cDNA基础上构建了一个ZIKV复制子(Rluc-ZIKV-Rep)。在这个复制子中,引入了一个表达海肾荧光素酶的报告基因Renilla luciferase,复制子在细胞中的表达和复制可以通过细胞中的海肾荧光素酶活性和RT-PCR检测到。二、复制子用于抗病毒药物筛选实验在抗病毒药物筛选研究中,我们使用了一些小分子药物,特别是马尼地平和西尼地平。随着这些药物浓度的增加,Rluc-ZIKV-Rep在细胞内的复制呈现剂量依赖的抑制效应。证明我们构建的ZIKV复制子是一个有效的抗病毒药物筛选的工具。叁、ZIKV复制子反式包装系统的构建在本文中,运用反向遗传学的方法构建ZIKV复制子的反式包装系统,通过PCR的方法从ZIKV感染性克隆的cDNA上扩增出ZIKV的结构蛋白基因,构建了一个含ZIKV结构蛋白的真核表达载体——CprME-pcDNA3.1,并通过Western Blot鉴定了其在两种不同细胞(293T和Vero)中的表达。为了制备复制子包装颗粒,我们将复制子和表达结构蛋白的质粒通过共转染和顺次转染的方法转入细胞,使结构蛋白基因和非结构蛋白基因共表达于细胞中。然后,收集细胞上清,继续感染Vero细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,定量复制子包装出的缺陷型病毒的产量。在此基础上,我们可以通过293T细胞制备出缺陷型的病毒样颗粒,为ZIKV新型疫苗的研究奠定基础。(本文来源于《辽宁大学》期刊2018-05-01）
鲁念,刘兴健,胡小元,李轶女,易咏竹[3]（2018）在《利用BmNPV-家蚕表达系统包装重组腺相关病毒2型(rAAV2)研究》一文中研究指出腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是基因治疗中最常用的病毒载体之一,目前用于基因治疗的AAV多利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒表达系统(AcMNPV-sf9)包装,但较高的包装成本限制了AAV在基因治疗中的广泛应用。家蚕杆状病毒表达系统与AcMNPV-sf9系统相比,具有包装量更高、成本更低的优势,因此更适用于包装重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)。首先,将AAV2功能基因cap和rep进行序列优化后合成,克隆到杆状病毒转移载体pVL1393上,将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和荧光素酶(luciferase,Luc)基因分别作为报告基因克隆到含有巨噬细胞病毒IE(cytomegalovirus-IE,CMV-IE)启动子的病毒转移载体pVL1393-ITRs-MCS上。随后,将构建好的转移载体分别与缺陷型家蚕杆状病毒re Bm Bac共转染Bm N细胞系,获得分别重组有cap、rep和报告基因的家蚕杆状病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)。再将纯化的重组病毒(re Bm-Cap2、re Bm-Rep2)与re Bm-EGFP、re Bm-Luc分别混合后感染家蚕,收获其表达产物,纯化得到含有目的基因的rAAV病毒。利用rAAV病毒感染哺乳动物细胞后,通过检测EGFP、Luc的表达状态来验证rAAV包装成功与否。结果显示,利用家蚕杆状病毒系统成功包装了rAAV2,并且在哺乳动物细胞中实现了报告基因的表达。(本文来源于《生物技术进展》期刊2018年01期）
阮峥,王文天,杨洋,段永娟,胡晓[4]（2014）在《第叁代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探》一文中研究指出目的:对目前最为常用的叁质粒慢病毒包装系统进行优化,以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒包装效率的重要性。方法:在限定总质粒量为10μg的情况下,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的目的质粒、表达gag/pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同比例混合,转染293T细胞进行病毒包装,48 h后收集上清用于感染293T及K562细胞,72 h后经流式细胞术检测GFP+阳性细胞比例,分析所获病毒的感染效率。结果:采用不同的质粒混合比例包装的病毒感染效率具有明显差异,其中携带GFP的目的质粒量影响作用最为显着,当目的质粒量从15%(1.5μg)增至35%(3.5μg)时,GFP+293T细胞比例从14.2%升至45.1%,增加了3.2倍。当固定目的质粒量为35%,同时分别将表达gag/pol或Rev的质粒量从15%提高到25%时,改变Rev组的GFP+阳性率提升最明显,为1.5倍;而改变VSVG质粒量在已测试的混合比例中作用不显着。包装病毒感染K562细胞的结果与293T细胞类似。结论:通过对比包装病毒的感染效率,优化了慢病毒包装的混合质粒条件,并成功地应用于感染白血病细胞系;首次发现提高Rev质粒量可以更有效地提高病毒的包装效率,为利用慢病毒表达体系研究多种基因在血液系统中的功能奠定了技术基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2014年06期）
柳云帆,尉迟捷,王刚,田文洪,陆月[5]（2011）在《基于λ-Red重组酶系统的Ⅳa2基因缺失及重组腺病毒的包装》一文中研究指出本研究用λ-Red重组酶介导的PCR打靶方法缺失腺病毒基因组上Ⅳa2基因的大部分编码序列(1104 bp),并获得一种Ⅳa2基因缺失的重组腺病毒。首先构建PCR打靶的含有卡那霉素抗性表达盒的模板质粒pAK,再以pAK为模板扩增出两端含39 bp同源臂的线性DNA片段;将pFG140质粒及线性DNA片段依次转化到宿主菌BW25113/pIJ790中,通过λ-Red重组酶介导的同源重组获得了缺失Ⅳa2基因的腺病毒基因组质粒pFG140-ΔⅣa2(1104)。酶切及DNA测序结果显示,用λ-Red重组酶介导的PCR打靶方法在pFG140上精确地缺失了预计的Ⅳa2基因3'端的1104bp片段。用PCR方法扩增获得Ⅳa2基因全长ORF,插入表达载体pAAV2neo中,构建成Ⅳa2基因表达质粒pAAV2neo-Ⅳa2。将pFG140-ΔⅣa2(1104)与pAAV2neo-Ⅳa2共转染HEK293细胞,成功地获得了重组腺病毒Ad5ΔⅣa2(1104)。Western Blot的结果表明,Ad5ΔⅣa2(1104)病毒感染的HEK293细胞检测不到Ⅳa2蛋白的表达。本研究建立了一种对腺病毒基因组直接进行缺失操作的λ-Red重组酶介导的PCR打靶方法,并获得了一种IVa2基因大部分缺失的重组腺病毒。(本文来源于《病毒学报》期刊2011年03期）
岳磊[6]（2010）在《登革病毒复制子反式包装系统的建立》一文中研究指出目的：利用反向遗传学操作构建登革病毒复制子的反式包装系统；在此基础上,制备登革病毒单轮感染性颗粒,为登革热新型疫苗的研究奠定基础。方法：1.在登革1型病毒广州分离株基因组全长感染性克隆的基础上,利用重迭PCR扩增获得病毒基因组5’端与GFP融合片段,将其插入病毒基因组中以替换病毒的绝大部分结构基因,并获得带有绿色荧光蛋白的病毒复制子DV1-EGFP-RP。同步构建其致死性突变复制子DV1-EGFP△GDD-RP作为对照。通过报告基因和RT-PCR的方法鉴定病毒复制子的复制特性。2.利用重迭PCR扩增获得DV/JEV嵌合型prME片段,将其插入pcDNA3.1质粒构建相应真核表达载体,转染BHK21细胞后,通过RT-PCR和免疫荧光鉴定登革病毒prME的胞内表达特性。利用超速离心对上清中的病毒样颗粒进行纯化,通过电镜和western blot对其进行鉴定。3.为制备获得复制子包装颗粒,首先将病毒复制子RNA电转BHK-21细胞后,再利用脂质体转染方法将辅助包装质粒导入细胞,以使病毒结构和非结构蛋白共表达于宿主细胞中。利用超速离心获得细胞培养上清中的病毒样颗粒,利用RT-PCR、western blot方法对其复制子包装颗粒的生化组分进行鉴定。最后将该病毒样颗粒接种BHK-21细胞,明确其单轮感染性特征。结果：1.获得了高效表达的含绿色荧光蛋白报告基因的登革病毒复制子载体。2.成功构建了登革病毒prME嵌合质粒pcDV/JEV prME,并制备了分泌性病毒样颗粒。3.制备了具有单轮感染性的登革病毒病毒样颗粒。结论：成功建立了基于登革病毒复制子的反式包装系统,制备了具有单轮感染性的病毒样颗粒,为下一步的研究工作打下良好的基础。(本文来源于《暨南大学》期刊2010-05-15）
张磊,刘庆友,胡天,张晓溪,崔奎青[7]（2009）在《第叁代慢病毒高效率包装系统的建立》一文中研究指出慢病毒介导法是最有前途的转基因动物生产方法之一,高滴度慢病毒颗粒的包装是慢病毒转基因动物技术的关键。本研究应用含有增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)的第3代慢病毒载体系统,用脂质体转染法将慢病毒系统4质粒共转染293T包装细胞,培养48～72h收集病毒上清液,通过超速离心进行浓缩,采用批量快速测定法(LaSRT)测定病毒滴度。结果显示,用脂质体转染法包装的慢病毒能成功地感染293T细胞,经检测病毒滴度达到5×108IU/mL以上,初步建成了高滴度慢病毒包装平台,为慢病毒介导制作转基因动物奠定了良好的研究基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2009年02期）
房师松,董捷,程小雯,吕星,何建凡[8]（2008）在《带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统的初步构建》一文中研究指出目的构建带TAP标签流感病毒8质粒反向遗传包装系统,以期应用于流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理的研究。方法两步RT-PCR方法扩增流感病毒8基因,人工合成TAP基因序列,并采用3次PCR的方法融合TAP基因和NP基因。将流感病毒8基因和NP-TAP基因克隆于反向遗传载体PIVVⅡ-1,阳性克隆用PCR和序列测定进行鉴定。结果经PCR和序列分析鉴定,筛选到了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传阳性克隆。结论成功构建了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统,为进一步研究流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理奠定了基础。(本文来源于《中国热带医学》期刊2008年06期）
李望,孙晓青,胡书群,裴东生,陈波[9]（2006）在《大鼠FasL基因重组慢病毒载体叁质粒包装细胞系统的建立》一文中研究指出目的建立真核细胞表达的大鼠FasL基因重组慢病毒载体叁质粒包装细胞系统,为进一步研究转FasL基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受、保护移植物的作用奠定基础。方法制备完整的重组慢病毒载体叁质粒系统:转移质粒(pLO134-FasL),包装质粒(ΔNRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G)。脂质体法将叁质粒共转染包装细胞293T,72 h后收集病毒上清,Western-blot法检测293T细胞的FasL蛋白表达。结果转染后的293T细胞表达FasL蛋白。结论成功建立重组慢病毒载体的叁质粒包装细胞系统。(本文来源于《徐州医学院学报》期刊2006年01期）
张桐,王文亮,王伯云,颜子颖,杨新科[10]（1997）在《表达β-半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究》一文中研究指出表达β－半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究张桐１王文亮１王伯云１颜子颖２杨新科２候云德２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室）关键词β－半乳糖苷酶腺伴随病毒载体...(本文来源于《第四军医大学学报》期刊1997年03期）
病毒包装系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
Zika virus(ZIKV)是一种虫媒传播病毒,与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等都是一个单股正链的RNA病毒,属于黄病毒属,黄病毒科。自1947年4月从发热的哨兵恒河猴的血清中分离后,已经在很多国家和地区引起疫情并且流行开来,与严重的临床表现和先天性畸形有关。但是,目前还没有有效的抗病毒药物和疫苗可以用于ZIKV的临床治疗,因此对于安全有效的ZIKV抗病毒药物和疫苗的研究刻不容缓。复制子系统已经被证明是一个有效的药物筛选工具。在本文中,我们主要开展了以下叁个方面的工作:稳定表达海肾荧光素酶(Rluc)的ZIKV复制子的构建;复制子用于抗病毒药物筛选实验;ZIKV复制子反式包装系统的构建。一、稳定表达海肾荧光素酶(Rluc)的ZIKV复制子的构建在本文中,我们在ZIKV感染性克隆的cDNA基础上构建了一个ZIKV复制子(Rluc-ZIKV-Rep)。在这个复制子中,引入了一个表达海肾荧光素酶的报告基因Renilla luciferase,复制子在细胞中的表达和复制可以通过细胞中的海肾荧光素酶活性和RT-PCR检测到。二、复制子用于抗病毒药物筛选实验在抗病毒药物筛选研究中,我们使用了一些小分子药物,特别是马尼地平和西尼地平。随着这些药物浓度的增加,Rluc-ZIKV-Rep在细胞内的复制呈现剂量依赖的抑制效应。证明我们构建的ZIKV复制子是一个有效的抗病毒药物筛选的工具。叁、ZIKV复制子反式包装系统的构建在本文中,运用反向遗传学的方法构建ZIKV复制子的反式包装系统,通过PCR的方法从ZIKV感染性克隆的cDNA上扩增出ZIKV的结构蛋白基因,构建了一个含ZIKV结构蛋白的真核表达载体——CprME-pcDNA3.1,并通过Western Blot鉴定了其在两种不同细胞(293T和Vero)中的表达。为了制备复制子包装颗粒,我们将复制子和表达结构蛋白的质粒通过共转染和顺次转染的方法转入细胞,使结构蛋白基因和非结构蛋白基因共表达于细胞中。然后,收集细胞上清,继续感染Vero细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,定量复制子包装出的缺陷型病毒的产量。在此基础上,我们可以通过293T细胞制备出缺陷型的病毒样颗粒,为ZIKV新型疫苗的研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒包装系统论文参考文献
[1].郭鹏鹏.细胞毒性基因—天花粉蛋白的重组腺相关病毒包装系统的构建[D].青岛大学.2018
[2].刘娜.寨卡病毒复制子反式包装系统的构建和药物筛选应用[D].辽宁大学.2018
[3].鲁念,刘兴健,胡小元,李轶女,易咏竹.利用BmNPV-家蚕表达系统包装重组腺相关病毒2型(rAAV2)研究[J].生物技术进展.2018
[4].阮峥,王文天,杨洋,段永娟,胡晓.第叁代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探[J].生物技术通讯.2014
[5].柳云帆,尉迟捷,王刚,田文洪,陆月.基于λ-Red重组酶系统的Ⅳa2基因缺失及重组腺病毒的包装[J].病毒学报.2011
[6].岳磊.登革病毒复制子反式包装系统的建立[D].暨南大学.2010
[7].张磊,刘庆友,胡天,张晓溪,崔奎青.第叁代慢病毒高效率包装系统的建立[J].基因组学与应用生物学.2009
[8].房师松,董捷,程小雯,吕星,何建凡.带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统的初步构建[J].中国热带医学.2008
[9].李望,孙晓青,胡书群,裴东生,陈波.大鼠FasL基因重组慢病毒载体叁质粒包装细胞系统的建立[J].徐州医学院学报.2006
[10].张桐,王文亮,王伯云,颜子颖,杨新科.表达β-半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究[J].第四军医大学学报.1997
标签：microRNA122; 腺相关病毒; 基因治疗; 天花粉蛋白;