导读:本文包含了古菌素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:曲古菌素A,B淋巴细胞瘤-2,DNA连接酶4,共济失调毛细血管扩张突变基因
古菌素论文文献综述
方子仪,林晓丽,方华圣[1]（2019）在《曲古菌素A对食管癌EC9706细胞B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、共济失调毛细血管扩张突变基因表达影响》一文中研究指出目的通过检测曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞EC9706的B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、共济失调毛细血管扩张突变基因(atm)表达以及细胞增殖的影响,为进一步探讨TSA的辐射增敏机理提供依据。方法采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测TSA对EC9706增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应技术检测TSA处理与未处理的EC9706细胞的B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、atm的mRNA水平。结果一定浓度的TSA可显着抑制食管癌细胞EC9706的增殖,且癌细胞的相对存活率与TSA的浓度呈线性相关(P<0.05)。TSA同时下调了EC9706细胞的B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4、atm 3个基因的mRNA水平。结论一定浓度的TSA在体外能显着影响基因B淋巴细胞瘤-2、DNA连接酶4和atm在EC9706细胞中的mRNA表达,可有效抑制食管癌细胞的增殖。(本文来源于《临床军医杂志》期刊2019年08期）
陈文佳,孟晓文,王丽娜,孙灿林[2]（2018）在《鞘内注射曲古菌素A对树胶脂毒素诱导的大鼠神经痛的影响》一文中研究指出目的评价曲古菌素A(trichostatin A,TSA)在树胶脂毒素(resiniferatoxin,RTX)诱导的神经病理性疼痛模型(模拟PHN)中的作用。方法雄性健康SD大鼠32只,体重250~280g,采用随机数字表法分成四组:溶媒对照组(C组)、神经痛模型组(RTX组)、二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide)治疗组(DMSO组)和TSA治疗组(TSA组)。C组单次腹腔注射RTX溶剂1ml,RTX组建立病理性神经痛模型,建模方式为每只大鼠在异氟醚(2%O_2)麻醉下接受单次腹腔注射RTX 210μg/kg;DMSO组建立病理性神经痛模型,在建模前60 min和建模后每天鞘内注射TSA溶媒5%DMSO 10μl,持续至建模后7天;TSA组建立病理性神经痛模型,在建模前60min和建模后每天鞘内注射等容量溶于DMSO的TSA 0.5μg/kg,持续到建模后7天。于建模前60min和建模后第1、3、5和7天采用一系列校准的von Frey毛针测定四组大鼠机械痛阈值(MWT),于第7天行为学测定结束后检测脊髓IL-1β、TNF-α和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等分子mRNA表达量。结果与C组比较,建模后第3、5和7天RTX、DMSO和TSA组MWT明显降低(P<0.05)。与RTX和DMSO组比较,建模后第3、5和7天TSA组MWT明显升高(P<0.05)。RTX和DMSO组不同时点MWT差异无统计学意义。与C组比较,RTX、DMSO和TSA组IL1-βmRNA,TNF-αmRNA和GFAP mRNA表达量明显增多(P<0.05)。与RTX和DMSO组比较,TSA组IL-1βmRNA、TNF-αmRNA表达量明显减少(P<0.05)。RTX和DMSO组各指标差异无统计学意义。结论鞘内注射TSA通过减缓脊髓炎性反应缓解RTX诱导的神经病理性痛。(本文来源于《临床麻醉学杂志》期刊2018年06期）
郭云辉[3]（2017）在《曲古菌素A基于FoxO3a干预氧化应激介导的大鼠心肌炎症性凋亡》一文中研究指出急性心肌梗死是当代严重危害人类生命与健康的疾病之一。虽然临床上通过药物溶栓或介入治疗可使梗死心肌恢复血液再灌注,却会造成类似于炎症的心肌缺血再灌注(Ischemia Reperfusion Injury,I/R)损伤,加重组织结构和功能破坏。因此,如何减轻心肌缺血后的再灌注损伤成为目前研究的热点。然而,引起心肌缺血再灌注损伤的机制十分复杂,大量动物实验研究表明心肌I/R损伤产生的机制与钙超载、中性粒细胞浸润、血管紧张素、氧自由基以及一氧化氮产生等有关。心肌I/R损伤是由能量代谢异常引起的一系列连锁反应,其中氧自由基的产生是引起早期心肌细胞损伤的主要原因之一。过多的氧自由基能够与蛋白质、脂类以及核酸等生物大分子发生反应,引起大分子变性、生物膜损伤以及脂质过氧化,造成心肌细胞结构和功能受损,最终引起细胞凋亡。研究表明来源于心肌线粒体过多的ROS会通过诱导NLRP3,招募凋亡相关斑点状蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing CARD,ASC)并激活Caspase-1,而Caspase-1在炎症性凋亡的发生发展过程中扮演着重要角色。曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种广谱的组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂,能够提高组蛋白乙酰化水平,目前广泛用作抗肿瘤的实验研究。我们课题组前期研究证明TSA可以减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,但具体机制还有待于进一步探讨。Fox O(Forkhead box O transcription factors)作为叉头蛋白家族的一员在新陈代谢、细胞存活及对抗氧化应激反应等过程中起重要作用。作为Fox O蛋白家族的成员之一,Fox O3a可以通过对抗氧化应激的机制减轻小鼠心肌损伤,但其在体大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用尚未见报道。研究表明,在糖尿病心肌病模型中,Mir-30d可以通过抑制Fox O3a和抗凋亡蛋白ARC的表达,上调caspase-1而诱导炎症性凋亡。而在肾细胞中,内源性HDAC抑制剂β-OHB通过抑制HDAC1活性,升高FOXO3a启动子区域组蛋白乙酰化水平,促进FOXO3a转录进而减轻氧化应激损伤。我们推测Fox O3a可能在TSA减轻心肌缺血再灌注损伤的作用中扮演重要角色,并且Fox O3a可能参与心肌I/R损伤后炎症性凋亡的调控。为了验证我们的推测,我们进行了如下实验:1.大鼠心肌缺血再灌注损伤中伴有炎症性凋亡的产生我们分别进行了体内和体外实验。采用结扎及松开冠状动脉的左前降支方法制备大鼠心肌I/R损伤模型,采用免疫组织化学方法检测了大鼠心肌组织炎症性凋亡关键蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达变化。结果显示,与假手术组比较,I/R组心肌组织炎症性凋亡关键蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达显着升高,表明I/R损伤可能会诱发大鼠心肌产生炎症性凋亡。同时我们检测了再灌注损伤大鼠心肌组织ROS的表达情况,结果显示,与Sham组比较,I/R组大鼠心肌组织中ROS的表达明显增加,初步验证大鼠I/R可能通过增加心肌组织ROS引发炎症性凋亡。随后我们选取H9c2大鼠心肌细胞系,采用H2O2建立体外氧化应激损伤模型,进一步观察是否氧化应激损伤导致ROS增多会导致心肌产生炎症性凋亡。我们采用CCK-8法检测H9c2大鼠心肌细胞的存活率筛选出H2O2引起H9c2细胞氧化应激损伤较为稳定的最适浓度。另外,我们采用ROS试剂盒检测了不同时间点ROS的表达变化,采用免疫荧光法检测了炎症性凋亡关键蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达变化,发现与空白对照组相比,H2O2处理组炎症相关蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达量显着增加,表明氧化应激可能引起H9c2细胞产生炎症性凋亡。2.TSA减轻大鼠心肌氧化应激引起的炎症性凋亡第一部分我们通过体内外实验初步验证了大鼠心肌缺血再灌注损伤可能通过增加ROS引发炎症性凋亡,为了明确TSA是否能够通过影响大鼠I/R损伤引发氧化应激诱导的炎症性凋亡,发挥对再灌注后的心肌保护作用,我们进行了如下实验:(1)TSA对I/R损伤的大鼠心肌损伤的影响:为了验证TSA对I/R损伤大鼠的影响,我们采用TTC法测定了I/R损伤后大鼠的心肌梗死面积,通过试剂盒检测了大鼠血清心肌酶活性,HE染色对大鼠心肌组织进行形态学观察,结果显示,TSA可以减少大鼠心肌梗死面积,降低血清心肌酶的活性,改善大鼠心肌的组织形态,从而减轻大鼠I/R损伤。(2)TSA对I/R损伤大鼠氧化应激的影响:我们采用流式细胞术检测大鼠心肌组织ROS的水平,结果显示TSA干预的I/R大鼠心肌组织ROS的水平明显降低。采用SOD和MDA试剂盒检测了大鼠心肌组织SOD的活性和MDA的含量,结果显示TSA干预的I/R大鼠心肌组织SOD活性增加、MDA含量降低。(3)TSA能否影响大鼠I/R损伤诱导的炎症性凋亡:我们首先采用流式细胞术初步观察TSA对I/R损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响,结果表明TSA干预组较I/R组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低。随后采用免组化及Western blot方法观察了TSA对I/R损伤大鼠炎症性凋亡关键蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18表达的影响,结果表明TSA可明显降低I/R损伤大鼠心肌组织Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达。(4)TSA对I/R损伤大鼠血清炎症相关因子的影响:炎症性凋亡发生发展过程中伴有大量促炎症因子的释放,为了验证TSA是否会影响炎症性凋亡过程中炎症因子表达,我们采用ELISA方法对血清炎症相关因子进行了检测。结果显示TSA干预组大鼠血清炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-18及IL-1β的表达明显低于I/R组大鼠。3.Fox O3a是TSA干预氧化应激诱导大鼠心肌炎症性凋亡的关键分子。研究表明Fox O3a通过对抗氧化应激减轻小鼠心肌损伤,并且内源性HDAC抑制剂β-羟基丁酸能增加Fox O3a启动子区乙酰化对抗HEK293细胞的氧化应激反应。为了明确TSA是否与通过Fox O3a改善心肌损伤,我们采用体内外实验进行了如下研究:(1)TSA对氧化应激损伤大鼠Fox O3a表达的影响:首先我们采用Western blot方法检测I/R损伤大鼠及H2O2作用H9c2细胞不同时间点Fox O3a蛋白表达的变化,结果显示再灌注6h、12h和24h后,Fox O3a的表达呈时间依赖性下降,且再灌注24h下降尤为显着;H2O2作用H9c2细胞不同时间点Fox O3a表达也逐渐下降,且在400μM H2O2处理2h后显着下降。接下来我们采用Western blot方法检测了TSA对再灌注24h大鼠Fox O3a表达的影响,结果表明,0.2 mg·kg-1 TSA可明显增加I/R损伤大鼠Fox O3a的表达。免疫荧光及Western blot结果显示TSA可增加H2O2诱导的H9c2细胞Fox O3a的表达。(2)TSA对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的影响:我们采用DCFH-DA荧光探针,检测ROS的水平,采用JC-1染色法,检测线粒体膜电势,采用Western blot方法观察TSA对SOD2和Catalase表达的影响。结果表明TSA处理组ROS及线粒体膜电势下降,SOD2和Catalase的表达量明显升高,提示TSA能够减轻氧化应激损伤。(3)TSA对H2O2诱导的大鼠心肌H9c2细胞炎症性凋亡的影响:为了初步探讨TSA对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞炎症性凋亡的影响,我们采用Annexin V-FITC/PI方法检测了心肌细胞凋亡率,采用Western blot方法观察了炎症性凋亡关键蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达,结果显示,TSA干预组大鼠心肌H9c2细胞凋亡率明显降低,Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达亦明显降低,提示TSA能减轻H2O2诱导的大鼠心肌H9c2细胞炎症性凋亡。(4)TSA对H2O2诱导的大鼠心肌H9c2细胞炎症相关因子分泌的影响:为了验证TSA是否会影响炎症性凋亡过程中炎症因子发达的变化,我们采用ELISA法检测了大鼠心肌H9c2细胞培养基中炎症相关因子的表达,结果表明TSA干预组大鼠心肌H9c2细胞培养基中炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-18及IL-1β的表达明显低于H2O2组,提示TSA能够降低炎性因子的分泌。(5)TSA基于Fox O3a干预氧化应激介导大鼠心肌炎症性凋亡:我们利用RNA干扰技术敲低大鼠H9c2心肌细胞内的Fox O3a,在确保转染效率的前提下,Fox O3a si RNA能够有效抑制Fox O3a基因及蛋白的表达。同时,H2O2及TSA处理组的catalase和SOD2也明显受到抑制;而H2O2及TSA处理组的炎症性凋亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达则明显增加,提示TSA可能基于Fox O3a干预氧化应激介导的大鼠心肌炎症性凋亡。4.TSA调控Fox O3a表达的机制研究第叁部分的实验中,我们初步验证TSA可能基于Fox O3a干预氧化应激介导的大鼠心肌炎症性凋亡,但TSA又是如何对Fox O3a进行调控的呢,我们进行了如下实验:(1)Ⅰ类HDACs(HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8)与心血管疾病发生发展密切相关,因此我们采用HDAC活性试剂盒通过比色法对它们进行检测,结果显示,与control组相比,H2O2组H9c2细胞Ⅰ类HDACs的活性明显增加,TSA干预组Ⅰ类HDACs的活性明显降低。提示氧化应激损伤可能导致H9c2细胞中Ⅰ类HDACs活性升高,TSA可以有效降低H2O2诱导的H9c2细胞Ⅰ类HDACs的活性。(2)TSA对Fox O3a基因启动子区H3及H4组蛋白乙酰化修饰的影响:为了验证TSA是否通过改变基因启动子区组蛋白的乙酰化水平影响Fox O3a基因转录,我们采用Ch IP方法检测了TSA处理后Fox O3a基因启动子区H3、H4乙酰化水平,结果显示TSA干预组Fox O3a基因启动子区的组蛋白H4乙酰化程度显着升高,而组蛋白H3的乙酰化程度没有明显变化,说明TSA可能通过改变了Fox O3a基因启动子区组蛋白H4的乙酰化程度进而影响Fox O3a的基因转录。通过上述实验,我们得出如下结论:1.大鼠心肌氧化应激损伤可引起炎症性凋亡。2.TSA可以减轻大鼠心肌氧化应激引起的炎症性凋亡。3.Fox O3a是TSA干预氧化应激诱导大鼠心肌炎症性凋亡的关键分子。4.TSA通过改变Fox O3a基因启动子区组蛋白H4的乙酰化水平影响Fox O3a的表达。综上所述,曲古菌素A基于Fox O3a干预氧化应激介导的大鼠心肌炎症性凋亡。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-11-01）
张卉,董喜凤[4]（2017）在《曲古菌素A对多发性骨髓瘤细胞增殖影响的相关研究》一文中研究指出目的:研究VEGF受体(Vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)在多发性骨髓瘤KM3细胞株中的表达及曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)对KM3细胞增殖的影响,并进一步探讨其抗肿瘤机制。方法:体外培养KM3细胞株,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测VEGFR m RNA表达。结果:TSA能明显抑制KM3细胞的增殖,且具有时间剂量依赖性(P<0.05)的特点;TSA处理KM3细胞48h可诱导KM3细胞凋亡,凋亡率最高达42.72%±4.61%,呈剂量依赖性(P<0.05)特点;RT-PCR结果显示,KM3细胞仅表达VEGFR-1(flt-1),TSA能在m RNA水平抑制VEGFR-1的表达。结论:TSA可通过下调骨髓瘤细胞株KM3细胞表面VEGFR的表达,从而诱导KM3细胞的凋亡,而达到抑制其增殖的目的。(本文来源于《药品评价》期刊2017年16期）
盛佳佳,刘雨生[5]（2017）在《曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导卵巢癌SK0V-3细胞株凋亡的研究》一文中研究指出目的探讨TSA联合ATRA对卵巢癌SKOV-3细胞的协同增殖抑制和凋亡作用。方法 TSA联合ATRA处理卵巢癌细胞SKOV-3细胞株,分别检测SK0V-3细胞增殖抑制情况和细胞凋亡率及相关蛋白表达变化。结果 TSA联合ATRA协同抑制SKOV-3细胞生长,差异有统计学意义(P<0.05);联合组SKOV-3细胞凋亡率明显升高,与对照组和单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TSA联合ATRA在体外对卵巢癌SKOV-3细胞具有较强的协同增殖抑制和促进凋亡作用。(本文来源于《临床输血与检验》期刊2017年04期）
王璇[6]（2017）在《曲古菌素A调控大鼠心梗组织中成熟树突状细胞的机制研究》一文中研究指出心肌梗死(Myocardial Infarction,MI)是一种致死率较高的心血管系统疾病。在我国每年大约有数百万人因为急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)或者心力衰竭而死亡。心肌梗死后炎性微环境在调控心肌修复的过程中具有重要作用。因此,心肌梗死后组织修复的过程中炎性微环境的合理调控,对于阻止梗死后心脏渐进性功能障碍、抑制病理性重构、减少心力衰竭的发生具有重要意义。研究炎性微环境的调控机制可为心肌梗死后组织修复提供新的靶标,为提高心肌梗死病人生存质量提供新的策略。树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是心肌梗死后炎性微环境的重要调控者,其通过调控适度的炎症反应,清除坏死心肌细胞,促进心肌组织的损伤修复。然而,心肌梗死后组织修复的机制复杂,过度的炎症反应会引起心脏基质降解与细胞凋亡,延缓损伤的修复。有文献报道,心肌梗死大鼠梗死区和梗死边缘区的DCs数量增加,DCs对于心肌梗死后炎性微环境的调控存在不容忽视的作用。DCs按其成熟程度可分为未成熟树突状细胞(immature DCs,im DCs)和成熟树突状细胞(mature DCs,m DCs),未成熟DCs具有较强的摄取和加工抗原能力及迁移能力,在炎症信号刺激下转变为成熟DCs;成熟DCs抗原提呈能力明显增强,高表达共刺激分子和趋化因子受体,能够使T细胞活化、增殖和分化成功能不同的T细胞亚群。成熟DCs分泌的细胞因子和趋化因子能够吸引和活化天然免疫细胞以形成免疫应答与调控的网络,进而调控炎性微环境,改善心肌梗死后组织修复的进程。JAKs(Janus Kinase)和STATs(Signal transducers and activators of transcription)的功能随着生长因子和细胞因子的研究而逐渐被大家所熟知。JAK/STAT信号通路可以调控心肌梗死后的组织修复。近年来,研究表明JAK2和STAT5能够调控DCs分化与成熟。但JAK2/STAT5信号通路对心肌梗死后DCs的成熟的调控尚未见报道。我们前期研究发现,曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)可以促进心肌梗死大鼠心肌损伤修复,并增加心肌梗死大鼠心肌组织中DCs细胞的数量。由此我们可知TSA对梗死大鼠心肌具有保护作用,同时可增加心肌梗死后浸润到梗死区域的DCs数量。然而TSA调控心肌梗死后DCs成熟的机制尚未明确。我们推测TSA可能是通过影响DCs的成熟,调控心肌梗死后的炎性反应,从而促进心肌梗死后的组织修复。研究目的:本研究旨在探讨TSA调控DCs的成熟,调控心肌梗死后的炎性反应,促进心肌梗死后的组织修复机制。实验方法:本实验以雄性Wistar大鼠为研究对象,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,采用预防给药方式,术前连续5天给予TSA或者生理盐水,术前连续3天给予JAK2抑制剂AG490,分别在术后1d、3d、7d、14d以及28d取材;采用TTC染色法检测心肌梗死面积;采用血清心肌酶试剂盒检测心肌叁酶活性,观察TSA对心肌梗死大鼠的保护作用;采用流式细胞术检测成熟DCs的表面标记CD103、MHC II、CD80、CD86,观察心肌梗死大鼠心肌组织中成熟DCs数量随心肌梗死时间的变化趋势;采用Western-blot检测P-JAK2、P-STAT5蛋白的表达,观察TSA、JAK2抑制剂AG490对调控DCs成熟JAK2/STAT5信号通路的影响;采用ELISA法,检测TSA对心肌梗死大鼠血清IL-1、TNF-α、IFN-γ、IL-10及TGF-β等细胞因子表达的影响。实验结果:在所观察的各个时间点,观察到如下结果:(1)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠心肌梗死面积均增大(P<0.01);血清中CK、AST和LDH的活性均升高(P<0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠心肌梗死面积均减小(P<0.05),血清中CK、AST和LDH的活性均有所降低(P<0.05),说明TSA对梗死心肌具有保护作用。(2)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠心肌组织中成熟DCs数量均增多(P<0.05),且在第7天达到峰值(P<0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠心肌组织中成熟DCs数量均增多(P<0.05),且在第7天达到峰值,说明TSA可以增加大鼠心肌组织中成熟DCs的数量。(3)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠心肌组织中P-JAK2、P-STAT5蛋白表达量升高(P<0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠心肌组织中P-JAK2、P-STAT5蛋白表达量升高(P<0.05),并且与成熟DCs数量的变化趋势一致;与TSA组实验结果相比,Model-TSA+AG490组大鼠心肌组织中P-JAK2、P-STAT5蛋白表达量均降低(P<0.05)、成熟DCs数量均降低(P<0.05),说明TSA通过JAK2信号通路促进心肌组织中成熟DCs数量的增加。(4)与假手术组实验结果相比,模型组大鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ、IL-10及TGF-β等细胞因子表达量均上调(P<0.05);与模型组实验结果相比,TSA组大鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ、及TGF-β等细胞因子表达量均上调(P<0.05),IL-10的表达下调(P<0.05);与TSA组实验结果相比,Model-TSA+AG490组大鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ、及TGF-β等细胞因子表达量均下调(P<0.05),IL-10的表达上调(P<0.05),说明TSA通过JAK2信号通路调控细胞因子水平。实验结论:(1)TSA减少心肌梗死面积、降低心肌叁酶的表达,发挥心肌保护作用;(2)TSA通过JAK2/STAT5信号通路增加大鼠心肌组织中成熟DCs的数量、改变细胞因子水平。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-04-01）
蒋红云[7]（2017）在《曲古菌素A对氧糖剥夺条件下树突状细胞成熟与功能的影响及其机制》一文中研究指出树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是机体免疫系统功能最强大的抗原提呈细胞(Antigen-presenting cells,APC),能够启动适应性免疫反应和炎性反应。DCs是一类异质性细胞群体,根据其分化状态可分为成熟DCs和未成熟DCs。从表型上来看,成熟DCs高表达MHC-II类分子、CD80、CD86及CD83分子;未成熟DCs中这些分子的表达水平则相对较低。从功能上来看,成熟DCs具有强大的抗原提呈功能,不具备摄取功能;而未成熟DCs则具备较强的摄取功能,不具备抗原提成功能,且能够诱导免疫耐受。有报道指出,在心肌缺血和病毒性心肌炎中,病灶内有DCs浸润。此外,DCs能够调节炎性反应,参与心肌组织损伤的修复过程。已有文献报道,DCs的成熟、分化及功能与其组蛋白乙酰化水平密切相关。曲古菌素A(Trichostatin A,TSA),是一种广谱的组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitors,HDACIs)。我们前期工作证明,TSA能够参与心肌组织修复过程,减小大鼠心肌梗死面积,减轻心肌损伤。在TSA促进心肌组织损伤修复过程中,浸润至心肌组织中的DCs数量明显升高。但TSA对DCs有何作用,尚不十分明确。有研究表明,局部浸润的DCs多为成熟DCs。因此,我们推测TSA能够影响心梗后氧糖剥夺环境中DCs的成熟与功能。同大多数细胞一样,在正常情况下,DCs通过氧化磷酸化(Oxidative phosphorylation,OXPHOS)产生能量。有研究表明,DCs在缺氧条件下,会进行代谢重编程,如糖酵解增强。丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)是糖酵解过程中的关键酶之一。M1型丙酮酸激酶(PKM1)能够促进线粒体内丙酮酸氧化生成乙酰辅酶A(Acetyl-CoA);而M2型丙酮酸激酶(PKM2)能够促进缺氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)的表达,诱导乳酸脱氢酶A(Lactic dehydrogenase A,Ldha)的产生,Ldha可以催化丙酮酸生成乳酸。此外,有报道指出,心肌缺血大鼠心脏中PKM2的表达增加,能够改善大鼠心肌缺血损伤。因此,我们推测:在心肌缺血后氧糖剥夺环境中,TSA能够通过影响DCs的糖酵解过程中PKM2的表达,改变DCs的表型和功能,发挥心肌保护作用。研究目的:本研究将以小鼠dc2.4细胞系为研究对象,应用体外氧糖剥夺条件,模拟心肌梗死后组织氧糖剥夺环境,观察tsa对dc2.4细胞的表型与功能的影响,揭示心梗时tsa保护心肌的作用机制,从而为心肌缺血疾病的治疗提供新的理论依据。实验方法:以dc2.4细胞系为研究对象,通过mtt实验检测氧糖剥夺条件下不同时间及不同tsa浓度作用的细胞存活率,分组包括:对照组(control组),单纯缺糖组(gd),单纯缺氧组(od)以及氧糖剥夺组(ogd);每个模型分别给予4个tsa给药剂量:200nm、400nm、800nm、1000nm;时间设置为:24h,12h,8h以及4h,以确定氧糖剥夺时间、气体条件以及tsa的工作浓度;采用流式细胞术,检测在确定的给药浓度和给药时间条件下,tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞表型的影响。以fitc-dextran作为dc2.4细胞摄取物,检测tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞抗原摄取功能的影响;采用细胞划痕实验,观察tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞迁移能力的影响;应用elisa检测试剂盒,检测tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞上清液中il-1β、il-10、il-12和tgf-β细胞因子分泌的影响;采用atp和乳酸检测试剂盒,检测tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞产生atp和乳酸的含量的影响;采用western-blot技术检测氧糖剥夺条件下dc2.4细胞中pkm1/pkm2以及上游剪接因子srsf3的表达情况;采用rt-qpcr的检测方法,检测tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞内pkm1/pkm2和srsf3的mrna表达的影响,同时检测tsa对糖酵解相关基因tpi1、hk2、ldha和hif-1α的mrna表达的影响;应用shrna干扰srsf3和pkm2基因的表达,检测干扰srsf3后氧糖剥夺条件下dcs表达pkm2的情况,以及tsa对该条件下dcs产生atp和乳酸及分泌细胞因子的影响。实验结果:(1)tsa对氧糖剥夺条件下dc2.4细胞的保护作用:mtt结果显示:缺氧时间在8h及以上时,细胞存活率过低,分别为8h:(32.03±1.04)%;12h:(12.19±3.35)%;24h:(8.56±2.29)%;因此,确定tsa在常氧、给药时间低于12h时对细胞存活率无影响后,确立ogd模型的缺氧时间为4h(存活率为:44.76±2.34%)。同时,我们发现tsa200nm作用4h后,dcs存活率达到(70±3.11)%,因此,确定tsa给药浓度为200nm。(2)tsa对dc2.4细胞成熟的影响:与control组相比,gd组、od组以及ogd组中cd80与cd86的表达有所升高;tsa200nm处理4h后,与各自的模型组相比,dc2.4细胞表面cd80与cd86表达明显上升(p<0.05)。(3)tsa对dc2.4细胞抗原摄取功能的影响:与control组相比,gd组、od组以及ogd组中fitc阳性率有所降低;而与各自的模型组相比,tsa处理(同上)后,dc2.4细胞的fitc阳性率显着降低(p<0.05)。(4)tsa对dc2.4细胞迁移的影响:与control组相比,gd组,od组以及ogd组迁移距离明显减少;而与各自的模型组相比,tsa处理后,dc2.4细胞的迁移距离显着增加(p<0.05)。(5)tsa对dc2.4细胞分泌细胞因子的影响:与各自模型组相比,control、gd以及od组,在tsa处理后il-1β,il-10、il-12和tgf-β四种细胞因子分泌均减少,ogd组在tsa处理后il-1β的分泌减少,il-10、il-12和tgf-β的分泌则增多(p<0.05)。(6)tsa对dc2.4细胞中atp产生的影响:与control组相比,gd组与ogd组细胞上清液中atp含量明显减少(p<0.05),od组变化较小;与各自的模型组相比较,tsa处理后,细胞上清液中atp含量明显增多(p<0.05)。(7)tsa对dc2.4细胞中乳酸产生的影响:与control组相比,gd组、od组以及ogd组细胞上清液中乳酸含量均有所减少,ogd组乳酸含量减少更为显着(p<0.05);除control组以外,与各自的模型组相比较,tsa处理后,细胞上清液中乳酸含量均有增多,且gd组与ogd组给药后,细胞上清液中乳酸显着增多(p<0.01)。(8)TSA对DC2.4细胞糖酵解相关基因mRNA表达的影响:给予TSA后,HIF-1α、Tpi1、HK2及Ldha的mRNA水平较之相应的模型组显着升高(P<0.05)。(9)TSA对DC2.4细胞中PKM2、PKM1和SRSF3蛋白表达的影响:TSA处理后,PKM2与SRSF3蛋白表达较之相应模型组显着升高。而PKM1的表达则显着下调(P<0.05)。(10)TSA对DC2.4细胞中PKM2、PKM1、SRSF3 mRNA表达的影响:TSA处理后,PKM2与SRSF3的mRNA表达量较之相应的模型组显着增多,PKM1的mRNA表达量较之相应的模型组显着减少(P<0.05)。(11)TSA对干扰SRSF3和PKM2后DC细胞产生ATP和乳酸含量的影响:干扰SRSF3和PKM2后,ATP和乳酸含量均减少(P<0.05)。TSA处理后,与Vector组相比,各实验组细胞上清液中ATP和乳酸含量均显着增加(P<0.05)。实验结论:(1)TSA能够提高OGD条件下DC2.4细胞的存活率;(2)TSA能够降低OGD条件下DC2.4细胞的抗原摄取能力、促进DC2.4细胞成熟;(3)TSA能够促进OGD条件下DC2.4细胞的迁移、减少IL-1β的分泌、增加IL-10、IL-12和TGF-β的分泌。(4)TSA可能通过上调DC2.4细胞剪接因子SRSF3的表达,促进DC2.4细胞中PKM2的表达,促进糖酵解,增加ATP的产生,从而促进DC2.4细胞存活,并且影响DC2.4细胞的成熟与功能。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-04-01）
李佳[8]（2017）在《曲古菌素A调控Gpnmb影响大鼠心梗后组织修复的机制》一文中研究指出心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是目前危害人类健康的主要疾病之一。目前临床通常采用药物溶栓或介入治疗的方法治疗急性心肌梗死,然而冠脉疏通后虽然能在一定程度上改善心脏功能,却会造成再灌注损伤。因此,急需寻找治疗心肌梗死的合适靶点。成年心肌受损后不能再生,其组织损伤修复主要依赖于对坏死细胞的清除和瘢痕形成。心肌组织60%由心肌成纤维细胞构成,它能够分泌胞外基质蛋白,参与组织损伤后的修复、瘢痕形成及损伤后重构等过程,在心梗后心脏功能的维持与修复过程中具有重要作用。非转移性黑素瘤糖蛋白B(Glycoprotein nonmelanosoma protein B,Gpnmb)是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,在多种组织和细胞中表达。研究表明,在大鼠肝组织损伤后,Gpnmb表达增多,而Gpnmb缺失会导致胶原沉积减少。提示Gpnmb可能通过调节纤维化程度参与组织修复。在遗传性心肌炎中,心肌组织中高表达树突状细胞(dendritic cells,DCs)标记物OX-62,同时Gpnmb表达水平上调。已有文献报道,DCs在心肌梗死大鼠心肌组织中上调,而Gpnmb在DCs细胞上有表达,提示DCs可能通过Gpnmb促进组织修复。但Gpnmb在心肌组织修复中发挥的作用尚未阐明。组蛋白乙酰化修饰是一种常见的基因调控方式,Gpnmb也可以受到组蛋白乙酰化修饰的调控。曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种广谱的组蛋白去乙酰化酶抑制剂,可上调组蛋白乙酰化水平,从而影响基因的表达调控。我们的前期实验证明,TSA可以减小大鼠心肌梗死面积,对心肌梗死大鼠起到保护作用,但其是否调控Gpnmb参与组织修复尚未阐明。实验目的:本实验拟探讨在大鼠心肌梗死条件下,TSA是否通过调控Gpnmb表达,进而研究TSA对心肌梗死损伤修复的保护机制。实验方法:本实验以健康成年Wistar雄性大鼠为研究对象,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型。采用TTC法检测心肌梗死面积。采用ELISA法,检测心肌酶CK-MB、c Tn T的含量,明确TSA对心肌梗死损伤的保护作用。采用Western blot法,检测TSA对心肌梗死后不同时程的Gpnmb和α-SMA、TGF-β1、CTGF蛋白表达的影响。采用染色质免疫共沉淀法,检测TSA对Gpnmb基因启动子区组蛋白H3、H4的乙酰化水平的调控作用。采用天狼猩红染色法,检测TSA对梗死心肌组织胶原表达的影响。采用免疫荧光法,观察心肌梗死后Gpnmb的表达以及与浸润到心肌组织中的树突细胞标志物OX-62的共定位情况。实验结果:与对照组相比,模型组大鼠心肌梗死后1、3、7、14、21、28天心肌梗死面积显着增加(P<0.01),且呈时间依赖性;与模型组相比,TSA组心梗面积均显着降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠血清中CK-MB在心肌梗死后1天表达升高且达到峰值,c Tn T在心肌梗死后表达升高在3天达到峰值;与模型组相比,TSA组CK-MB和c Tn T的表达均明显下调(P<0.05)。Western blot结果显示:与对照组相比,模型组大鼠梗死心肌组织中,Gpnmb表达显着升高(P<0.05),随时程逐渐升高并在21天达到峰值,随后下调;与模型组相比,TSA组Gpnmb表达进一步上调(P<0.05)。免疫荧光结果表明:与模型组相比,TSA组的Gpnmb表达显着上调(P<0.05)。染色质共沉淀结果显示:与对照组相比,模型组Gpnmb启动子区域H3、H4乙酰化水平均呈现上升趋势(P<0.05);给予TSA处理的模型组,Gpnmb启动子区域组蛋白H3、H4乙酰化水平进一步上调(P<0.05)。与对照组相比,模型组的心肌组织胶原随时程变化表达增加;与模型组相比,TSA预处理的心肌组织胶原表达进一步升高(P<0.05)。皮尔森相关性分析结果显示,模型组的Gpnmb与胶原表达呈正相关(r=0.803,P<0.05);在TSA组,两者也呈现正相关(r=0.795,P<0.05)。给予TSA处理后,调控肌成纤维细胞转化的TGF-β1与其下游CTGF及肌成纤维细胞转化标志物α-SMA也呈现出上升趋势。免疫荧光结果显示,Gpnmb与OX-62共定位,表明心肌梗死大鼠心肌组织中的Gpnmb部分表达在DCs。实验结论:TSA通过上调Gpnmb基因启动子区域组蛋白H3、H4的乙酰化水平进而上调Gpnmb表达;TSA上调胶原表达,同时调控肌成纤维细胞转化的因子TGF-β1与其下游CTGF以及肌成纤维细胞转化标志物α-SMA的表达;TSA上调Gpnmb与胶原表达呈现正相关性;TSA上调心梗组织中的Gpnmb,部分来源于浸润到梗死心肌的DCs。TSA可能通过调节Gpnmb参与组织损伤修复进程。我们的研究为调控心梗后组织修复提供新思路,为提高心梗患者生存质量提供新的实验依据。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-04-01）
汪亚君,张海涛,熊禹真,刘彬,伍俊[9]（2016）在《应用基因芯片技术筛选曲古菌素A诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP差异表达的凋亡基因》一文中研究指出目的应用基因芯片技术筛选曲古菌素A(TSA)处理顺铂耐药肺癌细胞株A549/CDDP后的凋亡相关基因的表达变化,筛选TSA治疗顺铂耐药肺癌的靶分子。方法 TSA处理A549/CDDP细胞24h,以未经TSA处理的A549/CDDP细胞作为对照组,提取两组细胞总RNA并反转录为c DNA,采用Nimble Gen全基因组表达芯片检测基因表达情况,以Nimble Scan 2.5软件结合GO分析比较TSA处理组与对照组基因表达谱的变化,从差异表达基因中筛选出与凋亡和增殖相关的基因。结果与对照组相比,共筛选到TSA上调的凋亡相关基因85个以及下调的细胞增殖和生长相关基因43个。GO分析发现,这些基因的分子功能主要是调节细胞凋亡和细胞对化学刺激的抵抗作用,以及参与细胞生长、增殖、细胞生物质量维持等生物过程。TSA不仅激活了线粒体凋亡通路,而且激活了死亡受体相关凋亡通路,下调了与细胞耐药相关的基因BAG3和ABCC2。结论 TSA改变了A549/CDDP细胞中凋亡和增殖基因的表达,这些基因可能在TSA治疗顺铂耐药肺癌中发挥了重要作用。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2016年08期）
余美霞,刘迅,倪健,冯磊,张灵[10]（2016）在《曲古菌素A诱导淋巴瘤Raji细胞表达共刺激分子CD80及CD86的表达》一文中研究指出目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)诱导淋巴瘤细胞Raji细胞表达共刺激分子CD80和CD86及其与免疫应答的关系。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度TSA对Raji细胞的抑制作用,流式细胞仪检测150 nmol/L TSA作用Raji细胞后的细胞表达共刺激分子CD80和CD86及细胞活力,RT-PCR分析CD80 mRNA和CD86 mRNA表达情况。结果 TSA对Raji细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,150 nmol/L TSA作用后可上调Raji细胞表达CD80,并对Raji细胞有直接杀灭作用。结论 TSA可以诱导Raji细胞表达共刺激分子CD80,不表达CD86,促进细胞的免疫应答,为抗恶性血液病提供了一个新的免疫治疗方法。(本文来源于《实用药物与临床》期刊2016年03期）
古菌素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的评价曲古菌素A(trichostatin A,TSA)在树胶脂毒素(resiniferatoxin,RTX)诱导的神经病理性疼痛模型(模拟PHN)中的作用。方法雄性健康SD大鼠32只,体重250~280g,采用随机数字表法分成四组:溶媒对照组(C组)、神经痛模型组(RTX组)、二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide)治疗组(DMSO组)和TSA治疗组(TSA组)。C组单次腹腔注射RTX溶剂1ml,RTX组建立病理性神经痛模型,建模方式为每只大鼠在异氟醚(2%O_2)麻醉下接受单次腹腔注射RTX 210μg/kg;DMSO组建立病理性神经痛模型,在建模前60 min和建模后每天鞘内注射TSA溶媒5%DMSO 10μl,持续至建模后7天;TSA组建立病理性神经痛模型,在建模前60min和建模后每天鞘内注射等容量溶于DMSO的TSA 0.5μg/kg,持续到建模后7天。于建模前60min和建模后第1、3、5和7天采用一系列校准的von Frey毛针测定四组大鼠机械痛阈值(MWT),于第7天行为学测定结束后检测脊髓IL-1β、TNF-α和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等分子mRNA表达量。结果与C组比较,建模后第3、5和7天RTX、DMSO和TSA组MWT明显降低(P<0.05)。与RTX和DMSO组比较,建模后第3、5和7天TSA组MWT明显升高(P<0.05)。RTX和DMSO组不同时点MWT差异无统计学意义。与C组比较,RTX、DMSO和TSA组IL1-βmRNA,TNF-αmRNA和GFAP mRNA表达量明显增多(P<0.05)。与RTX和DMSO组比较,TSA组IL-1βmRNA、TNF-αmRNA表达量明显减少(P<0.05)。RTX和DMSO组各指标差异无统计学意义。结论鞘内注射TSA通过减缓脊髓炎性反应缓解RTX诱导的神经病理性痛。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
古菌素论文参考文献
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[2].陈文佳,孟晓文,王丽娜,孙灿林.鞘内注射曲古菌素A对树胶脂毒素诱导的大鼠神经痛的影响[J].临床麻醉学杂志.2018
[3].郭云辉.曲古菌素A基于FoxO3a干预氧化应激介导的大鼠心肌炎症性凋亡[D].吉林大学.2017
[4].张卉,董喜凤.曲古菌素A对多发性骨髓瘤细胞增殖影响的相关研究[J].药品评价.2017
[5].盛佳佳,刘雨生.曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导卵巢癌SK0V-3细胞株凋亡的研究[J].临床输血与检验.2017
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标签：曲古菌素A; B淋巴细胞瘤-2; DNA连接酶4; 共济失调毛细血管扩张突变基因;