导读:本文包含了正向互补论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:铜绿假单胞菌,MexAB-OprM,外排泵,反义RNA
正向互补论文文献综述
刘忆霜[1]（2009）在《铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵抑制剂筛选模型的构建以及反义RNA、正向互补RNA对MexAB-OprM外排泵表达调控的研究》一文中研究指出细菌的耐药性问题日益严峻,尤其是多重耐药菌的增多,以至抗细菌感染的治疗变得愈加困难,原本具有良好抗菌活性的药物失去了应有的疗效。细菌可以通过多种途径来产生对抗生素的耐药性,其中很重要的一条途径就是通过外排泵将胞内抗生素排出,降低胞内抗生素的浓度,减弱其作用。细菌外排泵的作用,除了可直接降低抗生素胞内浓度以保护细菌外,还能提高细菌耐药突变率。因此,寻找外排泵抑制剂,一方面可以解决由于外排泵产生的细菌耐药问题,另一方面还可以降低细菌耐药突变的发生率,对于抗细菌感染的治疗具有重要意义。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是临床上常见的一种院内感染条件致病菌,其耐药性机理十分复杂,但是对于多种抗生素高度耐药,主要是由于两种机制的存在:一种是通透性很低的外膜可以阻止抗生素进入胞内;而另一种机制则是存在可以主动外排多种抗生素的多重耐药外排泵。在铜绿假单胞菌中,主要存在7种RND型外排泵,而在这些外排泵中,只有MexAB-OprM外排泵既为组成性表达,又能显着影响耐药性,因此是铜绿假单胞菌最主要的外排泵,也是通过提高细菌对抗生素敏感性以进行抗细菌感染治疗的理想靶点。在本课题中,对于外排泵抑制剂的研究采用了两条设计路线:第一条路线是建立MexAB-OprM外排泵抑制剂高通量筛选模型,筛选具有外排泵抑制剂活性的化合物和天然产物。我们通过在多种外排泵缺陷的铜绿假单胞菌变株N150中克隆表达MexAB-OprM外排泵的方法构建了模式菌株,并通过抗生素敏感性检测、mexAB-oprM转录的分子水平验证以及对已知外排泵抑制剂的敏感性检测等方面对该模式菌株进行评价。利用该模式菌株构建了铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵抑制剂筛选模型,并对化合物与微生物来源的天然产物进行了筛选。第二条路线是尝试利用RNA技术,为寻找可以使外排泵相关基因发生沉默寡核苷酸药物奠定基础。反义RNA药物的优点是具有靶点特异性,可以特异地抑制靶基因的表达,从而实现对疾病的治疗。因此目前针对微生物感染和肿瘤等疾病的反义寡核苷酸药物的研究已有大量报道。我们针对mexAB-oprM操纵子设计了一系列的反义RNA,并构建了反义RNA表达载体,在相应的铜绿假单胞菌菌株K335和K854中表达反义RNA。通过反义RNA表达株对盐酸环丙沙星敏感性的检验得到了不同反义RNA的作用效果,发现mexR和mexA基因被反义RNA沉默后能明显影响MexAB-OprM外排泵的作用,并了解到基因上游区域以及互补区域长度对于反义RNA在铜绿假单胞菌中发挥作用的重要性。摸索反义RNA的作用特点为反义寡核苷酸类外排泵抑制剂的研究奠定理论和实验基础。本论文还对正向互补RNA诱导铜绿假单胞菌mexA基因特异性沉默进行探索性研究。俄国学者首先在大肠杆菌中发现了正向互补RNA诱导基因特异性沉默的作用,并通过序列分析提出正向互补RNA参与基因调控的机制可能广泛存在于原核生物中。如果在其他原核生物中也发现平行互补RNA诱导基因特异性沉默现象,那么,可以借鉴反义寡核苷酸药物的研究策略,开展正向互补寡核苷酸药物的研究,这将对抗细菌药物的研发提供新的思路。我们在铜绿假单胞菌中,选择铜绿假单胞菌mexA基因作为目的基因进行正向互补RNA诱导基因沉默的研究。通过人工设计合成了表达mexA正向互补RNA的DNA片段。我们构建了正向互补RNA表达载体,在铜绿假单胞菌菌株K854中表达正向互补RNA。通过药物敏感性检测,发现对于正向互补RNA表达株,数种MexAB-OprM底物抗生素的MIC均降低了1/2。通过EB转移检测,发现EB在正向互补RNA表达株中的积累初速度为对照菌的2倍。这些实验结果表明,在正向互补RNA表达株中,正向互补RNA可能通过抑制mexA的表达而抑制了MexAB-OprM外排泵的作用。本论文首次揭示了铜绿假单胞菌中可能存在正向互补RNA诱导基因特异性沉默的现象。所得初步研究结果将为深入开展以铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵为靶点的正向互补RNA药物研究提供参考。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2009-05-01）
刘忆霜,肖春玲[2]（2008）在《正向平行互补RNA抑制铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的初步探索》一文中研究指出近年在大肠杆菌中发现了正向平行互补RNA诱导基因特异性沉默的现象,提示了崭新的小RNA参与基因调控机制。本研究在铜绿假单胞菌中探索正向平行互补RNA的基因沉默作用,尝试证明这一基因调控作用的广泛性。我们以MexAB-OprM外排泵组成蛋白基因mexA为目的基因,设计了与mexA mRNA正向平行互补的RNA,构建了正向平行互补RNA表达载体,并在敲除了mexAB-oprM操纵子阻遏蛋白基因mexR的铜绿假单胞菌中进行表达。(本文来源于《2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集》期刊2008-11-07）
正向互补论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近年在大肠杆菌中发现了正向平行互补RNA诱导基因特异性沉默的现象,提示了崭新的小RNA参与基因调控机制。本研究在铜绿假单胞菌中探索正向平行互补RNA的基因沉默作用,尝试证明这一基因调控作用的广泛性。我们以MexAB-OprM外排泵组成蛋白基因mexA为目的基因,设计了与mexA mRNA正向平行互补的RNA,构建了正向平行互补RNA表达载体,并在敲除了mexAB-oprM操纵子阻遏蛋白基因mexR的铜绿假单胞菌中进行表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
正向互补论文参考文献
[1].刘忆霜.铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵抑制剂筛选模型的构建以及反义RNA、正向互补RNA对MexAB-OprM外排泵表达调控的研究[D].中国协和医科大学.2009
[2].刘忆霜,肖春玲.正向平行互补RNA抑制铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的初步探索[C].2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集.2008
标签：铜绿假单胞菌; MexAB-OprM; 外排泵; 反义RNA;