导读:本文包含了卵巢癌干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:卵巢癌,铅暴露,致瘤性,Notch信号通路
卵巢癌干细胞论文文献综述
乔谷媛,申向丽,刘春燕,段海霞,张建彬[1]（2019）在《Notch信号通路在低剂量铅暴露对卵巢癌干细胞样细胞体外致瘤功能中的作用》一文中研究指出目的探讨Notch信号通路改变在低剂量铅暴露对卵巢癌干细胞样细胞体外致瘤功能中的作用。方法对SKOV3细胞进行悬浮培养,对其进行低剂量(2μM)的铅暴露。分别观察铅暴露组、对照组SKOV3、细胞球形成率和集落形成率的差异;通过Western blot检测铅暴露组与未处理组SKOV3细胞Notch信号通路的改变;通过Notch信号通路的抑制剂作用SKOV3细胞,检测铅暴露对SKOV3细胞球形成率和集落形成率的改变。结果与对照组相比,铅暴露组SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞球形成率降低,细胞集落形成率显着降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1和Hes1蛋白表达显着增加。当Notch信号通路被抑制后,铅诱导的卵巢癌干细胞样细胞球形成率和集落形成率降低的趋势被逆转(P<0.05)。结论低剂量的铅暴露能够抑制SKOV3细胞球形成率和集落形成率,并且在此过程中Notch信号通路发挥了关键作用,抑制Notch信号通路能够降低铅暴露对SKOV3细胞球形成率和集落形成率。(本文来源于《实用预防医学》期刊2019年12期）
谭长安,郭金珠[2]（2019）在《microRNA-21靶向cdc4影响人卵巢癌干细胞生物学效应的价值》一文中研究指出目的探讨microRNA-21(miR-21)靶向细胞分裂周期蛋白4(cdc4)影响人卵巢癌干细胞生物学效应的价值。方法卵巢癌干细胞OVCAR3分为miR-21 inhibitor组、miR-21 inhibitor NC组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic NC组、blank组。采用脂质体细胞转染法进行转染,分别加入6pmol的转染样本。采用CCK法检测细胞增殖活动,采用流式细胞仪测定细胞凋亡与细胞周期情况,采用Western blot检测cdc4表达情况。结果转染细胞48h后,mimic组的增殖活性下降,inhibitor组增殖活性增强,对比差异有统计学意义(P<0.05);mimic组、mimic NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、blank组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,对比差异有统计学意义(P<0.05);mimic组的G_0/G_1期细胞数目显着高于blank组与mimic NC组,S、G_2/M期细胞数目显着减少(P<0.05)。cdc4蛋白在mimic组、mimic NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、blank组中的相对表达水平分别为0.45±0.22,1.45±0.14,3.89±0.11,1.66±0.33,1.74±0.32,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达miR-21能抑制卵巢癌干细胞的增殖与促进细胞凋亡,调节细胞周期,其具体机制可能是miR-21通过负调控cdc4的表达而实现。(本文来源于《实用癌症杂志》期刊2019年10期）
梁军,邢慧敏,吴小华,张蕾,赵郡[3]（2019）在《人卵巢癌SKOV3细胞筛选获得的肿瘤干细胞样细胞在血管生成拟态形成中的作用》一文中研究指出目的探讨卵巢癌SKOV3细胞中分离肿瘤干细胞样细胞的生物学特性及其在血管生成拟态(VM)形成中的作用。方法采用无血清悬浮培养法对SKOV3细胞培养传代至第7代;流式细胞术测定亲代SKOV3细胞及第1、3、5、7代分选细胞CD133、CD117阳性细胞比例;平板克隆形成和小鼠体内成瘤实验鉴定分选细胞(第7代,下同)生物学特性;叁维立体培养比较分选细胞与亲代SKOV3细胞形成VM的能力。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法及Western blot法检测分选细胞与亲代SKOV3细胞的基质金属蛋白酶2,9的表达水平。结果 SKOV3部分细胞能在无血清培养基中形成悬浮生长的细胞球,可连续传代至第7代;流式细胞术结果显示CD133、CD117阳性细胞比例随传代递增。分选细胞克隆形成率高于亲代SKOV3细胞(P<0.01)。小鼠体内成瘤实验显示第7代悬浮细胞的成瘤率(6/6)明显高于亲代细胞的成瘤率(0/6)。叁维立体培养发现分选细胞比亲代SKOV3细胞VM形成能力强。第7代分选细胞基质金属蛋白酶2,9基因和蛋白表达较SKOV3细胞均增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论采用无血清悬浮培养法培养的SKOV3分选细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性,具有较强的VM形成能力,可能在VM形成中发挥作用。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2019年09期）
翁艳洁,张筱筱,武雪,郭立丽,王常玉[4]（2019）在《人卵巢癌肿瘤干细胞样细胞——侧群细胞中不同亚群的干性分析》一文中研究指出目的研究卵巢癌细胞系中的肿瘤干细胞(CSC)样细胞—侧群细胞(SP)中不同亚群细胞的干性是否有差异,分析CSC的异质性。方法选择人浆液性卵巢癌顺铂耐药细胞株C13,采用双苯酰亚胺Hochest33342染色,应用流式细胞仪荧光激活分选法获得高度排斥染色的侧群细胞(LSP)、低度排斥染色的侧群细胞(USP)及能被双苯酰亚胺Hochest33342染色的非侧群细胞(NSP),体外试验检测3个不同亚群的细胞体外成球能力、表达干细胞标志物、对高浓度顺铂的耐药性是否有差异。结果人卵巢癌细胞C13存在具有干性特征的SP,其亚群LSP比USP表达更高水平干细胞标志物,具有更高的体外成球能力,对顺铂具有更高的耐药性,差异有统计学意义。NSP不具有干性特征。结论体外试验证明卵巢癌细胞的SP不同亚群细胞具有不同的干性特征,CSC具有异质性。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2019年15期）
尤敏,王福玲,王雅琦,段莹莹[5]（2019）在《脂肪间充质干细胞通过激活EZH2促进卵巢癌的增殖及侵袭》一文中研究指出目的探讨脂肪间充质干细胞是否通过调节EZH2的表达促进卵巢癌细胞生长、侵袭及迁移。方法体外分离、培养健康人大网膜脂肪间充质干细胞并制备脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM),建立EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞系。条件培养基处理稳定转染及未转染的卵巢癌细胞,实时定量PCR及Western blot免疫印迹法检测2组细胞中EZH2mRNA及蛋白的表达差异,CCK-8方法及Transwell培养体系检测条件培养基对2组卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。结果条件培养基处理后的卵巢癌细胞较普通培养基培养的卵巢癌细胞EZH2表达显着升高,并伴随增殖及侵袭能力的增强;我们通过shRNA沉默卵巢癌细胞中的ezh2基因,建立稳定转染的卵巢癌细胞系,再用条件培养基处理EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞,处理后EZH2表达较未转染细胞未见明显升高,说明siRNA成功抑制细胞系中EZH2的表达。CCK-8检测和Transwell侵袭实验结果表明,稳定转染的卵巢癌细胞经条件培养基处理后,脂肪干细胞条件培养基对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力的促进作用消失。结论人脂肪间充质干细胞可能通过调节卵巢癌细胞中EZH2的表达对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力起促进作用。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2019年06期）
贺敏,陈勇伟,曾康康,郑蓉[6]（2019）在《MiRNA-218对PAG1的调控及其对卵巢癌干细胞的影响》一文中研究指出目的:研究miR-218在卵巢癌干细胞(ovarian cancer stem cells,OCSCs)中的表达,并探讨其对PAG1的调控作用和对OCSCs的影响及作用机制。方法:收集卵巢癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代卵巢癌细胞,用流式细胞仪筛选出CD133~+表型的OCSCs。采用Western印迹法检测干性特异相关基因Nanog和Sox2蛋白的表达。qRT-PCR检测miR-218在OCSCs中的表达。miR-218 mimic转染OCSCs,分为miR-218mimic组和miR-218NC组,MTS检测各组OCSCs增殖;软琼脂克隆实验检测各组OCSCs肿瘤球形成能力的影响;miR-218过表达慢病毒质粒及对照质粒vector感染OCSCs,经1.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定过表达miR-218或vector的OCSCs细胞,注射到BALB/c裸鼠中,观察miR-218对OCSCs体内成瘤能力的影响。Targetscan7.2预测软件及双荧光素酶报道基因试验,分析miR-218对PAG1基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-218mimic组和miR-218NC组OCSCs中PAG1mRNA的表达。Western印迹法检测miR-218mimic组和miR-218NC组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达。结果:Nanog和Sox2蛋白在CD133~+表型OCSCs中的表达显着高于CD133-表型OCSCs中的表达;miR-218在CD133~+表型OCSCs中的表达显着低于CD133-表型OCSCs中的表达(P<0.05)。miR-218mimic组OCSCs增殖减慢,OCSCs肿瘤球形成能力下降。OCSCs_(miR-218)裸鼠成瘤体积显着低于OCSCsvector组(P<0.05)。TargetScan7.2软件预测和双荧光素酶报道基因试验证实PAG1为miR-218的靶基因,miR-218 mimic组PAG1 mRNA的表达减少。Western印迹法检测miR-218 mimic组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达显着减少。结论:MiR-218在OCSCs中低表达,可能通过靶向下调PAG1,抑制pSrc和pAKT蛋白的表达影响OCSCs的干性。(本文来源于《临床与病理杂志》期刊2019年04期）
张婕,齐聪[7]（2019）在《熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响》一文中研究指出目的:观察熊果酸(ursolic acid,UA)联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显着抑制作用,呈剂量依赖性(P <0. 05);流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异(P <0. 05);熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力(P <0. 05); Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高(P <0. 05); Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年10期）
张燕燕[8]（2019）在《卵巢癌干细胞表面标记蛋白CDC50A作用相关机制的研究》一文中研究指出一、研究背景卵巢癌是死亡率最高的女性生殖系统恶性肿瘤,尽管在理想肿瘤细胞减灭术(CRS)的基础上辅助铂类为基础化疗的治疗策略在卵巢癌(OC)患者中取得了很高的应答率,但晚期患者5年生存率仅为30%左右[1-3]。肿瘤的反复复发和对于化疗耐药是主要的原因[4]。深入探讨卵巢癌复发和耐药的机制是改善这一状况的途径之。近年的研究表明,肿瘤是由不同恶性程度的异质性细胞组成的混合物,其中极小部分具有自我更新、分化和肿瘤起始能力的细胞亚群被称为肿瘤干细胞(CSCs)或肿瘤起始细胞(TICs)[5]。1858年Virchow首次提出了具有干细胞(SC)特性的肿瘤细胞的概念。1875年科恩海姆改进了这一模型,提出胚胎样细胞保留在成人组织中,在生命后期被激活后发展成肿瘤[6-7]。肿瘤干细胞理论认为:在异构的卵巢肿瘤中,有极小部分的群体(通常少于2%的细胞),具有比其它肿瘤细胞更强的致瘤、分化能力[8-10]。卵巢癌为一种干细胞疾病的有其合理的原因:首先,卵巢癌的临床过程。卵巢癌多数为化疗敏感肿瘤,即使是复发后仍有很大部分患者对化疗依然敏感,在不断的复发过程中肿瘤的无铂化疗间期不断缩短,一般从第二次复发后就逐渐走入耐药。说明这种复发肿瘤是由多数化疗敏感细胞与极少量耐药细胞组成的异质性群体,经过多轮化疗后存活的细胞群体存在分化能力[9]。其次,卵巢癌发生的病理过程。卵巢表面上皮细胞(OSE)在基因水平上具有更多的间充质成分被表达,且分化程度较低[11]。如何分离出具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞成为验证这一科学设想的关键问题。目前一些标记物是基于功能分析,如侧群体(SP)、基于蛋白质的表达[8]。寻找卵巢癌特异性的表面标记蛋白并探索其作用机制,探讨卵巢癌的发病与耐药机制以及可能的靶向治疗意义重大。本课题组先后两次受国家自然科学基金资助,通过微量蛋白组学及比较蛋白组学分析技术,筛选出了卵巢癌表面标记候选蛋白CDC50A。通过体外及体内实验充分证明了 CDC50A是卵巢癌干细胞的表面标记蛋白。进一步利用RNA干扰技术证实卵巢癌细胞中CDC50A表达上调后可显着增强卵巢癌的干细胞特性。在研究CDC50A发挥干细胞作用机制时,利用半定量PCR技术发现了 P4型腺苷叁磷酸酶磷脂转移蛋白家族(P4 family of ATPase phospholipid transporting,简称 P4-ATPases)中的ATP11A、ATP11B在CDC50A+细胞中高表达。ATPases是以叁磷酸腺苷为能量的多级跨膜转运蛋白,是维持生命活动的重要功能蛋白[12]。目前认为,ATPases蛋白家族能够和CDC50A协同作用将磷脂由细胞外质转移到细胞双磷脂层内侧的细胞质小叶[13]。P4-ATPases家族共有14种亚型,在肿瘤的研究中发现ATP8A1与肿瘤的侵袭转移相关[14],ATP8B1和ATP11B与化疗耐药相关[15-16],ATP11C与细胞凋亡相关[17]。Hiroyuki Takatsu[18]等研究发现第5类(ATP 10A、ATP 10B 和 ATP 10D)和第 6 类(ATP 11A、ATP 11B 和 ATP 11C)P4-ATP酶需要CD 50蛋白(主要是CDC50A)才能退出内质网(ER),最终完成亚细胞定位。本课题组前期实验表明:在卵巢癌细胞系中,同时上调ATP11A、ATP11B的表达可协助增强CDC50A干细胞特性,并在一定的顺铂浓度下,可增强其耐药性。本论文在上述研究的基础上,以卵巢癌细胞系为载体,深入观察下调CDC50A表达对其干细胞特性的影响;进一步利用高通量基因组测序技术对人卵巢癌原代标本中CDC50A+及CDC50A-细胞分别行全外显子及转录组测序并对比,进一步寻找CDC50A发挥干细胞表面标记物作用的可能机制;并下调ATP11A、ATP11B的表达,研究其对CDC50A阳性细胞干性功能的影响。二、研究方法1、通过下调卵巢癌细胞系中CDC50A的表达,进一步验证其作为卵巢癌干细胞标记物特异性的改变。首先利用慢病毒包装技术,构建表达shCDC50A的慢病毒载体。采用外源基因转染技术转染293FT细胞,利用293FT细胞产生的病毒液感染SKOV3、OVCAR4细胞系。流式分选技术获稳定细胞系(SKOV3-shCDC50A、OVCAR4-shCDC50A)。经一定浓度的顺铂处理细胞后,采用CCK-8法染色,酶标仪检测不同细胞群体在OD450nm处吸光度,验证SKOV3-shCDC50A、OVCAR4-shCDC50A细胞对化疗耐药性的改变。顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,Annexin V及DAPI染色细胞,流式细胞技术检测CDC50A下调后细胞凋亡率的改变。2、利用高通量测序技术对人卵巢癌原代标本CDC50A+、CDC50A-细胞分别进行基因测序,通过比较分析,探讨CDC50A发挥干性功能作用机制。收集2例卵巢癌患者新鲜肿瘤组织,经组织消化后分离得到卵巢癌细胞,流式细胞分选仪分选获得CDC50A+和CDC50A-细胞,微量DNA、RNA提取技术分别提取DNA和RNA,全外显子及转录组基因测序,获得两组细胞的差异表达基因并分析。3、通过下调卵巢癌细胞系中ATP 11A、ATP 11B的表达,探讨CDC50A与ATP 11A、ATP11B的相互作用机制:1)下调卵巢癌细胞系中ATP11 A、ATP11B的表达后,采用RT-PCR及western-blot技术在基因和蛋白水平验证CDC50A表达水平的改变。利用外源基因转染技术、RT-PCR及western-blot等分子技术筛选shATP11A、shATP11B质粒。利用筛选后的质粒构建低表达ATP11A、ATP11B慢病毒载体,转染293FT细胞。利用293FT细胞产生的病毒液,经外源基因感染技术感染SKOV3-CDC50A细胞,流式分选技术获稳定共表达基因组细胞系SKOV3-CDC50A-shATP11A、SKOV3-CDC50A-shATP11B。RT-PCR 及 western-Blot技术鉴定卵巢癌细胞系中稳定下调ATP 11 A、ATP 11B后CDC50A表达水平的改变。2)通过sphere形成实验及NSG小鼠成瘤实验验证稳定低表达ATP11A、ATP11B卵巢癌细胞系干性功能的改变。采用无血清悬浮培养的方法分别检测 SKOV3,SKOV3-CDC50A,SKOV3-CDC50A-shNC,SKOV3-CDC50A-shATP11A以及SKOV3-CDC50A-shATP11B等不同组间sphere的形成能力。利用已获得以上稳定细胞系建立NSG小鼠卵巢癌移植瘤模型,初步观察成瘤情况,验证ATP11A或ATP11B对CDC50A阳性细胞干性功能的影响。叁、研究结果1、在SKOV3与OVCAR4等两种卵巢癌细胞系中,下调CDC50A的表达后,其相关干细胞特性明显减弱,经顺铂处理后的细胞活力明显下降、细胞凋亡明显增多。经9ug/ml的顺铂处理后,分别在24h、48h、72h等不同时间点检测两种细胞群体的细胞活力。结果发现,SKOV3-shCDC50A的细胞活性显着低于SKOV3-shNC 细胞群,24h 平均细胞活力 19.11%vs 44.51%,P=0.0178;48h,9.33%vs 35.69%,P=0.024;72h,0.26%vs 11.50%;P<0.001。OVCAR4-shCDC50A群体的细胞活性也显着低于OVCAR4-shNC,24h平均细胞活力22.33%vs 29.33%,P=0.041;48h,2.90%vs 5.93%,P=0.021;72h,0.63%vs 3.13%,P<0.001。经6ug/ml浓度顺铂处理后,SKOV3-shCDC50A群体凋亡细胞(早期凋亡+晚期凋亡)比例显着高于 SKOV3-shNC(47.92±11.43 vs 22.98±10.02,P=0.024);OVCAR4-shCDC50A群体凋亡细胞比例显着高于OVCAR4-shNC(43.95±0.778 vs 25.71±1.158,P<0.001)。2、分别收集2对人卵巢癌原代标本,流式分析分离出CDC50A+、CDC50A-细胞,对其全外显子及转录组基因进行测序。结果表明,CDC50A+和CDC50A-细胞在外显子水平上并无明显差异。在转录组水平上:CDC50A+和CDC50A-细胞共有1617个蛋白编码基因表达有显着差异(FDR<0.1)。差异表达的基因(Degs)显着集中(q值=0.0229)在磷脂转运ATP酶活性的基因本体(GO)的分子功能(MF)类别上;在23个具有磷脂转运ATP酶活性的基因中有7个基因表达存在差异显着,包括 ATP11A、ATP11B、ATP8B2、ATP8B4、ATP10A、ABCA1 和ABCA7。3、卵巢癌细胞系中ATP11A、ATP11B的表达下调后,CDC50A在基因及蛋白水平表达也明显下降、sphere形成能力及小鼠成瘤能力明显减弱。分别比较SKOV3-shNC,SKOV3-CDC50A,SKOV3-CDC50A-shNC,SKOV3-CDC50A-shATP11A,SKOV3-CDC50A-shATP11B 等 5 种细胞群体间的 sphere形成能力,结果发现SKOV3-CDC50A群体显着高于SKOV3-shNC(平均成球数目:18.67 vs 7.68,P=0.021),SKOV3-CDC50A-shATP1 1A 及 SKOV3-CDC50A-shATP1 1B的sphere形成能力显着低于SKOV3-CD50A-shHC(8.67vs 15,P=0.02;8.67 vs 15,P=0.021)。NSG小鼠成瘤实验表明,低表达ATP11A或ATP11B的卵巢癌细胞系的成瘤能力明显降低。5X105细胞均可使小鼠成瘤,相同时间处死小鼠,SKOV3-CDC50A-shNC组小鼠移植瘤重量明显高于SKOV3-CDC50A-shATP11A、SKOV3-CDC50A-shATP11B 组(P 值分别为 0.003、0.0028);进一步行流式分析:SKOV3-CDC50A-shNC组CDC50A+/Lin-细胞的绝对值明显高于 SKOV3-CDC50A-shATP11A、SKOV3-CDC50A-shATP11B 组(P值分别为0.037、0.032)。四、结论1、卵巢癌细胞系中下调CDC50A表达后可明显减弱卵巢癌细胞对化疗耐药等干细胞特性,进一步证明了 CDC50A是卵巢癌干细胞特异性的标记物。2、通过对CDC50A+、CDC50A-细胞的全外显子及转录组基因的测序结果分析,提示CDC50A可能通过ATP家族在代谢水平调控卵巢癌干细胞的功能。3、在卵巢癌细胞系中,下调ATP11A或ATP11B表达水平均可明显降低CDC50A表达水平,减弱CDC50A阳性细胞的卵巢癌干细胞特性,提示CDC50A阳性的卵巢癌细胞通过ATP11A或ATP11B发挥其干细胞作用。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2019-03-31）
付杨,夏霁,韩凤娟[9]（2019）在《理冲生髓饮有效组分对卵巢癌干细胞调控相关基因及顺铂耐药性的影响及其作用机制研究》一文中研究指出背景本课题组前期对理冲生髓饮有效组分进行了抗卵巢癌的研究,结果表明中药复方可以抑制卵巢癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,减少癌细胞黏附,抑制血管新生,由此提出理冲生髓饮有效组分可以逆转卵巢癌干细胞耐药这一假说。目的探讨理冲生髓饮有效组分对卵巢癌干细胞调控相关基因及顺铂耐药性影响及其作用机制。方法2017年10月—2018年4月,选取BALB/C裸鼠48只,构建卵巢癌SKOV3荷瘤鼠模型,将裸鼠分为空白组(给予0.9%氯化钠溶液,12只)、顺铂组(给予顺铂,12只)、中药组(给予理冲生髓饮有效组分混合物,12只)、中药+顺铂组(除给予理冲生髓饮有效组分混合物外同时给予顺铂,12只)。于造模第8天开始给药,共给药18 d。最终空白组死亡4只裸鼠,顺铂组死亡3只裸鼠,中药组死亡1只裸鼠,中药+顺铂组死亡1只裸鼠。绘制各组肿瘤生长曲线。给药结束后处死裸鼠,制备肿瘤组织,HE染色观察肿瘤病理学特征,免疫荧光染色观察肿瘤CD~+_(44)、CD~+_(117)、CD_(44)、CD_(117)、CD_(133)细胞情况,PCR检测肿瘤Nanog、Oct4、ABCC1 mRNA表达水平,免疫组化法检测肿瘤Nanog、Oct4、ABCC1表达水平。结果各组在给药第1～7天肿瘤生长速度均逐渐增快;在给药第7～10天中药组和中药+顺铂组肿瘤生长速度明显变慢,而空白组和顺铂组肿瘤生长速度较快;中药组和中药+顺铂组肿瘤在第13天生长体积达到高峰,之后逐渐下降,而空白组和顺铂组肿瘤生长速度仍逐渐增快。顺铂组肿瘤细胞数目明显减少,体积缩小,核分裂象可见,可见大量肿瘤细胞凋亡,间质纤维组织明显增生;中药组肿瘤细胞数目减少,肿瘤组织呈较明显的片状坏死,间质中纤维组织和纤维细胞增生;中药+顺铂组肿瘤细胞数目明显减少,可见大量肿瘤细胞凋亡,间质纤维组织明显增生。肿瘤中可见少量CD~+_(44)、CD~+_(117)、CD_(133)、CD_(44)、CD_(117)细胞。顺铂组、中药组、中药+顺铂组肿瘤Nanog、Oct4 m RNA表达水平高于空白组(P<0.05);中药组肿瘤Nanog mRNA表达水平高于顺铂组、中药+顺铂组(P<0.05);中药+顺铂组肿瘤ABCC1 mRNA表达水平低于空白组、顺铂组、中药组(P<0.05)。顺铂组、中药+顺铂组肿瘤Nanog表达水平低于空白组(P<0.05);中药组肿瘤Oct4表达水平低于空白组、顺铂组(P<0.05);中药组、中药+顺铂组肿瘤ABCC1表达水平低于空白组、顺铂组(P<0.05)。结论理冲生髓饮有效组分可通过下调ABCC1及其m RNA表达水平,增高肿瘤细胞中药物浓度,还可通过影响卵巢癌干细胞特性和顺铂敏感性,从而逆转卵巢癌对顺铂的耐药性。(本文来源于《中国全科医学》期刊2019年09期）
尤玥[10]（2019）在《BRCA1调节自噬和凋亡促进卵巢癌干细胞顺铂耐药的机制研究》一文中研究指出目的:在妇科恶性肿瘤中,卵巢癌(ovarian cancer,OC)的发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌,而死亡率位居首位。因卵巢解剖部位隐蔽,早期缺乏典型的临床症状和可靠的检测方法,多数患者在发现及诊断出卵巢癌时已处于疾病晚期。目前针对卵巢癌的有效靶向治疗仍然是妇科临床医师亟需思考的问题,其耐药机制的研究也一直是近几年来的研究重点。本研究主要探讨乳腺癌1号基因(breast cancer 1,BRCA1)、自噬与卵巢癌顺铂耐药之间的关系,化疗耐药的上皮源性卵巢癌干细胞(epithelial ovarian cancer stem cells,EOCSCs)中自噬相关基因及蛋白表达的改变及调节BRCA1表达后自噬水平及耐药性变化的机理,进而丰富卵巢癌病因学理论,为卵巢癌这种发病率高、恶性程度高、死亡例数高的妇科肿瘤的治疗提供新思路。研究方法:1、利用Realtime PCR方法和Western Blot方法检测BRCA1在人卵巢癌化疗敏感组织标本和化疗耐药组织标本中的表达,并结合组织样本信息进行临床病理学参数分析。利用Realtime PCR方法检测卵巢癌组织中自噬及耐药相关基因的表达;利用Western Blot法检测卵巢癌组织中自噬调节蛋白、自噬标记蛋白以及干细胞标记蛋白的表达;分析卵巢癌组织样本中BRCA1和耐药相关基因表达的相关性。2、培养人卵巢癌细胞系SKOV3,采用无血清悬浮球方法富集SKOV3-EOCSCs。利用流式细胞术检测EOCSCs表面干细胞标记物的表达;利用Realtime PCR方法检测EOCSCs中细胞干性及耐药相关基因的表达;利用Western Blot方法检测EOCSCs中干细胞标记蛋白的表达;通过CCK-8法和EdU实验检测EOCSCs的细胞活力和增殖活性;利用Realtime PCR和Western Blot方法检测EOCSCs中BRCA1的表达;利用Western Blot方法检测耐药相关蛋白的表达和LC3-II/I比值;通过mRFP-GFP-LC3双标腺病毒转染的方法检测自噬流强度。3、构建BRCA1过表达载体,转染到EOCSCs中并通过Western Blot方法对转染效率进行验证。利用Western Blot方法检测自噬调节蛋白、自噬标记蛋白耐药相关蛋白以及干细胞标记蛋白的表达;通过mRFP-GFP-LC3双标腺病毒转染的方法检测自噬流强度;利用流式细胞术检测细胞在顺铂处理后的凋亡水平。将BRCA1过表达质粒转染到贴壁的人卵巢癌细胞系SKOV3中,并利用流式细胞术检测细胞表面干细胞标记物的表达。构建si-BECN1、si-ATG5,敲低自噬调节基因,将各组siRNA分别转染至EOCSCs中,并通过Realtime PCR和Western Blot的方法对转染效率进行验证。利用流式细胞术检测各组细胞在顺铂处理后的凋亡水平。4、构建BRCA1表达敲低慢病毒载体,将慢病毒转染至EOCSCs中,通过Western Blot方法验证转染效率并通过荧光显微镜观察转染情况。自噬激活实验:2.5μM Torkinib(PP242)作用24 h,100nM Rapamycin作用36h,激活自噬后开始顺铂干预;自噬抑制实验:100μM Chloroquine作用48 h,100mM 3-methyladenosine作用24 h,抑制自噬后开始顺铂干预。在BRCA1不同表达水平的EOCSCs中调节自噬活性,通过CCK-8法检测各组细胞的细胞活力和增殖活性;利用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期。最后利用Western Blot方法检测各组EOCSCs中BRCA1、自噬调节蛋白、干细胞标记蛋白和耐药相关蛋白的表达变化以及LC3-II/I比值变化。结果:1、BRCA1在人卵巢癌化疗耐药组织中表达显着上调;BECN1、ATG5、ATG7、ABCG2、ABCB1的mRNA水平在化疗耐药卵巢癌组织中明显高于化疗敏感卵巢癌组织,Beclin-1、ATG5、POU5F1、NANOG的蛋白表达水平在化疗耐药卵巢癌组织中明显高于化疗敏感卵巢癌组织,LC3-II/I比值明显增高,ATG7表达增高不显着,p62表达水平变化无统计学意义;卵巢癌组织中BRCA1与ABCG2基因表达水平存在正相关。2、通过无血清悬浮球方法能够从人卵巢癌细胞系SKOV3中分离和富集EOCSCs,且与SKOV3细胞系相比EOCSCs拥有更强的细胞活力和增殖能力,高表达的干细胞相关因子CD44、CD133、POU5F1、NANOG,高表达的耐药相关蛋白P-gp、ABCG2和更强的耐药性,以及高表达的BRCA1和更高的自噬通量。3、以EOCSCs为工具细胞,过表达BRCA1显着促进了自噬的发生和发展,ATG5、Beclin-1蛋白水平明显增高,ATG7变化不显着,自噬流明显增强;过表达BRCA1能够上调耐药相关蛋白P-gp、ABCG2的表达,对TP53-BP1的调节作用不明显;随着BRCA1表达和自噬水平的增高,干细胞相关标记蛋白POU5F1和NANOG的表达明显增高。在贴壁的SKOV3细胞中上调BRCA1后,干细胞相关表面标记物CD44的表达有明显增高。在顺铂作用下,过表达BRCA1能够抑制EOCSCs的凋亡,敲低自噬调节基因BECN1和自噬相关基因ATG5能够促进凋亡。4、沉默BRCA1显着降低了EOCSCs的细胞活力,细胞周期出现G2/M期阻滞;激活自噬后细胞活力出现明显增加,G2/M期阻滞程度有所缓解;抑制自噬活性后,细胞活力出现明显减弱,G2/M期阻滞程度增加,出现明显凋亡峰。沉默BRCA1通过负性调节Beclin-1表达,抑制LC3-I向LC3-II转化,阻碍自噬发生发展进程,进而抑制P-gp表达,降低EOCSCs耐药性,同时对卵巢癌细胞的干细胞特性转化起到负向调节作用;激活自噬后BRCA1表达降低。结论:1、BRCA1在化疗耐药的卵巢癌组织和EOCSCs中表达,BRCA1呈高表达,且化疗耐药的卵巢癌组织具有较高水平的基础自噬。2、利用无血清悬浮球方法从人卵巢癌细胞系SKOV3中分离并富集EOCSCs,能够表达多能干细胞表面标记CD44、CD133和干细胞相关因子POU5F1、NANOG,且EOCSCs与亲本细胞相比具有较高的细胞活力和增殖能力,较高的自噬水平及耐药能力。3、BRCA1可以通过正向调节自噬的发生发展,增强EOCSCs的细胞活力和促进增殖、抑制细胞凋亡、缓解细胞周期G2/M期阻滞、增强耐药性以及促进干细胞特性转化。激活自噬能够一定程度上降低BRCA1表达,两者存在相互调节作用。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
卵巢癌干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨microRNA-21(miR-21)靶向细胞分裂周期蛋白4(cdc4)影响人卵巢癌干细胞生物学效应的价值。方法卵巢癌干细胞OVCAR3分为miR-21 inhibitor组、miR-21 inhibitor NC组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic NC组、blank组。采用脂质体细胞转染法进行转染,分别加入6pmol的转染样本。采用CCK法检测细胞增殖活动,采用流式细胞仪测定细胞凋亡与细胞周期情况,采用Western blot检测cdc4表达情况。结果转染细胞48h后,mimic组的增殖活性下降,inhibitor组增殖活性增强,对比差异有统计学意义(P<0.05);mimic组、mimic NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、blank组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,对比差异有统计学意义(P<0.05);mimic组的G_0/G_1期细胞数目显着高于blank组与mimic NC组,S、G_2/M期细胞数目显着减少(P<0.05)。cdc4蛋白在mimic组、mimic NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、blank组中的相对表达水平分别为0.45±0.22,1.45±0.14,3.89±0.11,1.66±0.33,1.74±0.32,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达miR-21能抑制卵巢癌干细胞的增殖与促进细胞凋亡,调节细胞周期,其具体机制可能是miR-21通过负调控cdc4的表达而实现。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
卵巢癌干细胞论文参考文献
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