导读:本文包含了药效物质快速发现方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:超滤质谱技术,α-葡萄糖苷酶,环氧合酶2,抑制剂
药效物质快速发现方法论文文献综述
王晶晶[1]（2016）在《基于超滤质谱技术的中药药效物质基础快速发现方法研究》一文中研究指出目的：中药成分复杂、作用靶点多,进入体内的成分多且量微,加上体内物质的干扰多,和蛋白的结合率高等诸多因素,决定了开展药效物质基础和作用机制研究的难度,许多中药发挥药理活性的机理和和物质基础尚不清楚。要阐明中药体内药效物质基础,必须从思维上进行创新,架起沟通体内药效成分和中药固有成分间的桥梁,以简易、快捷、实用的方法或技术集成,实现体内药效物质的阐明和验证。超滤质谱技术作为一种新兴的药物筛选方法,具有操作简单、分析速度快、特异性强、高通量等特点。为阐明中药的药效物质基础提供线索,本研究选择中药绵枣儿和蟾酥作为药物模型,以α-葡萄糖苷酶和环氧合酶2作为药物靶标,建立基于超滤质谱技术的中药复杂体系药效物质快速辨识的方法。方法：以阿卡波糖为阳性对照药,以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,对绵枣儿乙醇提取物经大孔吸附树脂柱粗分的不同部位进行体外活性评价,发现了具有显着抑制活性的活性部位,进一步采用超滤技术对活性部位中潜在的α-葡萄糖苷酶抑制剂进行筛选,并利用UPLC-qTOF/MS对筛选出的活性成分进行结构鉴定;在亲和超滤技术的基础上,运用LC-MS/MS技术从蟾酥95%乙醇提取物中筛选潜在的环氧合酶2抑制剂,并通过建立LC-MS/MS法测定环氧合酶2催化花生四烯酸的酶反应体系中PGE2、PGD2的生成量或花生四烯酸的减少量,可计算出抑制剂的半数抑制浓度,通过与阳性对照药塞来昔布的对比,初步判断抑制剂的抑制能力,进一步采用分子模拟对接技术评价筛选结果的可靠性。结果：体外酶活性评价方法显示绵枣儿95%乙醇提取物经大孔树脂粗分的95%乙醇洗脱部位和绵枣儿95%乙醇提取物经乙酸乙酯萃取部位具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,从绵枣儿95%乙醇提取物经大孔树脂粗分的95%乙醇洗脱部位中筛选得到16种α-葡萄糖苷酶抑制剂,包括13个高异黄酮和3个二苯乙烯类化合物,经结构鉴定分别为2-hydroxy-7-methoxy scillascillin, scillascillin,5,7-dihy droxy-3',4'-dimethoxyspiro{2H-1-b enzopyran-7'-bic yclo[4.2.0]octa[1,3,5]-trien}-4-one,solinone,scillavone A,3,9-dihydroe ucomnalin,3-(3一hydroxy-4-methoxybenzyl)-5,7一dihydroxychroman-4-one, (3R)-5,7,3'-trihydroxy-4'-methoxyspiro{2H-1-benzopyran-7'-bicyclo[4,2,0 ]octa[1,3,5]-trien}-4-one,2-hydroxy scillascillin,3-(4-hydroxybenzyl)-5,7-dihydro xychroman-4-one,3-(4-hydroxybenzylidene)-5,7-dihydroxy-chroman-4-one,3-(4-hydroxybenzyl)-5-hydroxy-7,8-dimethoxychroman-4-one,3-(4-hydroxybenzyl)-5-hydroxy-6,8-dimethoxychroman-4-one, 4-methylre sveratrol,(E)-resveratrol和scillabene A,其中化合物3-(4-羟基苄基)-5,7-二羟基苯并二氢吡喃-4-酮和3-(4-羟基亚苄基)-5,7-二羟基苯并二氢吡喃-4-酮被用于酶活性验证,IC50分别为180.3μM和62.79μM;从蟾酥提取物中筛选得到2种环氧合酶2抑制剂,均为蟾蜍甾类物质,经结构鉴定分别为cinobufagin和resibufogenin,分子模拟对接结果显示resibufogenin与环氧合酶2的结合能力较强,接近阳性对照药塞来昔布。结论：运用超滤质谱技术分别从中药绵枣儿和蟾酥提取物中筛选出16种α-葡萄糖苷酶抑制剂和2种环氧合酶2抑制剂,为从中药提取物等复杂体系中快速辨识药效物质的方法提供参考。(本文来源于《河南中医药大学》期刊2016-04-30）
陶珊[2]（2015）在《基于化学计量学及固定化酶的中药药效物质快速发现方法研究》一文中研究指出中药药效物质发现是中药药效物质基础研究的核心步骤,对推动中药现代化研究和创新药物研发均具有十分重要的意义。本论文在传统的“活性追踪”研究模式上,发展了两种新的中药药效物质快速发现方法,包括通过液质联用技术与化学计量学方法相集成,发展了一种基于偏最小二乘建模排序的中药药效成分快速发现方法,用于中成药通脉养心丸中心肌细胞保护活性物质和抗炎活性物质筛选；基于亲和选择分离配体化合物的原理,建立了埃洛石纳米管吸附固定脂肪酶的方法,利用固定脂肪酶的埃洛石纳米管结合液质联用技术,成功从中药厚朴组分中发现了多个脂肪酶抑制剂。研究结果为中药药效物质快速发现提供了新的研究思路。本论文的主要研究内容包括：1.采用过氧化氢氧化损伤H9c2大鼠心肌细胞模型,筛选通脉养心丸中具有心肌细胞保护活性物质。成功筛选出五个具有较强心肌细胞保护活性的组分,均呈现出良好的量效关系,其EC5o在7.332到17.44μg/mL之间。采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)对这五个活性组分进行了分析,鉴定推断出11个可能的心肌细胞保护活性化合物。2.提出了一种基于偏最小二乘建模排序的中药药效成分快速发现方法。该方法能够对LC-MS数据和活性评价数据进行相关性分析,快速指认潜在的活性化合物。采用细菌脂多糖(LPS)刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞模型对通脉养心丸活性组分进行了活性评价,发现有五个具有显着抗炎活性的组分,其IC50在6.702到32.31μg/mL之间,且呈现出良好的量效关系。在已推断鉴定出通脉养心丸中82个化合物的基础上,对通脉养心丸中所有18个组分进行LC-MS分析,推断每个组分中所含有的化合物。采用偏最小二乘法(PLS)回归模型来分析通脉养心丸中所含化合物与抗炎活性的相关性,并根据其相关性强弱进行排名。对排名在前的化合物进行抗炎活性验证,发现验证的7个化合物中,有6个都具有一定的抗炎活性且量效关系良好。由此表明,该方法具有较好的准确性,可应用于中药活性物质的快速筛选发现。3.建立了埃洛石纳米管(HNTs)吸附固定化脂肪酶法,并对吸附固定化酶的操作条件进行优化。以降脂药奥利司他(orlistat)为阳性药,五味子醇甲为阴性对照药,发现HNTs固定化脂肪酶可用于脂肪酶抑制剂的筛选。运用该方法,从中药厚朴组分中成功筛选出4个脂肪酶的配体化合物,并分离制备出其中的两个化合物Magnotriol A和Magnaldehyde B。经实验验证这两个化合物都具有良好的脂肪酶抑制活性,其IC50分别为213.03μM和96.96μM,且都为首次发现。进一步的分子对接研究结果表明,这类化合物能够与脂肪酶活性域中关键氨基酸结合,可能通过占用酶的催化位点来抑制脂肪酶的活性。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-01-01）
陈锥[3]（2014）在《一种基于磁珠富集的中药药效物质快速发现方法研究》一文中研究指出中药药效物质发现是中药药效物质基础研究的核心步骤,其对于推动中药现代研究和创新药物研发均具有十分重要的意义。本论文着重研究基于磁珠富集的中药药效物质快速发现新方法,研究了磁珠富集-液质联用集成的筛选方法,建立了脂肪酶抑制剂磁珠筛选法、BSA配体纳米磁珠筛选法等2种中药活性化合物快速筛选方法,其优点在于：能够快速发现与特定靶标结合的活性化合物,为活性化合物的重点制备提供了指引；能够同时实现活性化合物分离和富集,大大提高了分离速度和富集效率；利用液质联用技术,能够获得活性化合物的分子量和部分结构信息。应用上述所建立的新方法,从枳壳总黄酮、以及通脉养心丸中筛选出11个活性化合物。此外,本论文还系统研究了通脉养心丸的化学物质基础,鉴定推断出80个化合物。本论文主要研究内容包括：1.将酶键合磁珠与液质联用相结合,研究建立了脂肪酶抑制剂的磁珠筛选方法。应用所建方法对枳壳总黄酮提取物进行筛选,分别发现4个脂肪酶的配体化合物,其中3个化合物具有脂肪酶抑制活性,并且一个化合物的脂肪酶抑制活性为首次发现。2.通脉养心丸的化学成分研究。从通脉养心丸中检测到80个化合物(包括23个黄酮及黄酮苷类成分、6个苯乙醇苷类成分、20个叁萜皂苷类成分、15个木脂素类成分以及16个其他类成分),基本揭示了通脉养心丸的化学物质基础。3.研究建立了基于纳米磁珠富集的BSA配体化合物的筛选方法。应用所建方法对通脉养心丸提取物进行筛选,发现8个BSA的配体化合物,并验证了其中两个化合物与BSA能够相互作用。(本文来源于《浙江大学》期刊2014-01-01）
林丽美[4]（2008）在《以银翘药对为对象探讨建立中药药效物质快速发现的方法》一文中研究指出金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花,连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspense(Thunb.)Vahl的干燥果实,二者均为常用清热解毒中药。金银花清热解毒,偏于上半身之热;而连翘清热解毒,散结消肿,便于透达全身之热。二药配伍,清热解毒力量倍增,流通气血以消肿散结止痛,且银翘药对是临床上公认的常用有效药对。所以本课题在总结前人研究工作的基础之上,以银翘药对为示范性研究对象,探讨建立适宜于复杂体系——中药或中药复方的药效物质基础快速发现的方法。该模式的核心思想是:建立在“入血成分才可能是药效成分”的基础之上,通过比较研究银翘药对在大鼠肠管外翻模型中的吸收成分和其在大鼠体内入血成分之间的相关关系,从而采用体外吸收模型来替代整体动物模型的可行性研究,达到初步建立快速、简便和低成本的药效物质基础快速发现的方法。围绕着本课题核心思想,对银翘药对的主要药效作用,银翘药对有效部位体内外过程,金银花、连翘以及银翘药对药材配伍后的化学成分变化和体内外过程,金银花、连翘、银翘药对药材煎煮过程的化学成分变化、银翘药对水溶性化学成分研究等进行了较系统的研究,以期探讨建立适宜于复杂体系——中药或中药复方的药效物质基础快速发现的方法,初步揭示银翘药对可能的药效物质基础,为对银翘药对进行有效和科学的质量控制提供部分依据。在药效学方面,采用巴豆油致小鼠耳廓肿胀模型和酵母致大鼠发热模型筛选金银花、连翘以及银翘药对药材不同配伍比例的抗炎解热作用,试验结果表明:银翘药对的抗炎解热作用均优于单味药金银花和连翘,在银翘药对药材不同的配伍比例中,银翘药对1:1的抗炎解热作用优于银翘药对药材的其它配伍比例。在得到银翘药对药材最佳配伍比例的基础上,采用巴豆油致小鼠耳廓肿胀模型和酵母致大鼠发热模型筛选银翘药对1:1,其大孔树脂水洗部位和乙醇洗部位的抗炎解热作用,试验结果表明:银翘药对1:1的大孔树脂乙醇洗脱部位的抗炎解热作用优于其水洗部位,且优于原药(银翘药对药材1:1)。在得到银翘药对有效部位之后,本论文以银翘药对有效部位为研究对象,初步探讨建立了适宜于复杂体系——中药或中药复方的药效物质基础快速发现的方法。主要包括了以下内容:银翘药对有效部位在Caco-2细胞模型中的吸收,结果发现:Caco-2细胞吸收模型所提供的信息量相对较少。为了得到更多的信息,采用大鼠肠管外翻模型来研究银翘药对有效部位的吸收,结果发现:大鼠肠管外翻模型能吸收银翘药对有效部位中的主要色谱峰。为了说明直接采用大鼠肠管外翻模型来研究银翘药对的合理性,将银翘药对直接灌胃后,不同时间点取在体大鼠胃液和肠液样品进行HPLC-DAD分析,结果发现:银翘药对在大鼠灌胃后,在胃肠液中没有新的主要色谱峰产生或消失,说明直接采用大鼠肠管外翻模型来研究银翘药对有效部位的吸收是可行的。为了探讨银翘药对的药效物质基础,研究了银翘药对有效部位的入血成分,试验结果发现:银翘药对有效部位的主要入血成分与大鼠肠管外翻模型中的主要吸收成分一致。为了进一步验证银翘药对的药效物质基础,研究了银翘药对有效部位在大鼠组织脏器中的分布,结果发现银翘药对主要在心和肺中有分布,且心肺中分布的主要色谱峰与大鼠肠外翻吸收模型中的主要吸收成分一致。综合上面的试验结果可知:银翘药对的药效物质基础可能是入血成分中的主要色谱峰,银翘药对有效部位的主要入血成分与肠外翻模型中的主要吸收成分一致,说明以银翘药对为研究对象,初步建立了采用体外吸收模型来替代整体动物模型的可行性研究,达到了初步建立快速、简便和低成本的药效物质基础快速发现的方法,给中药或中药复方质量控制提供了一定的依据。在建立该药效物质基础快速发现的方法之后,研究了金银花、连翘以及银翘药对药材不同配伍比例的样品在大鼠肠管外翻模型中的吸收,试验结果发现:在大鼠肠管外翻模型中,金银花、连翘以及银翘药对药材不同配伍比例样品的主要色谱峰都能吸收进入小肠段,在吸收过程中并没有主要成分的产生或消失,证明了上述所建立的药效物质基础快速发现方法的技术适应性,同时也说明了主要色谱峰之间的比例关系影响银翘药对的药效物质基础。因此接下来对金银花、连翘以及银翘药对药材不同配伍比例样品在人工胃肠液中进行了孵育,结果发现:经人工胃液和人工肠液孵育后的金银花、连翘及银翘药对药材不同配伍比例样品的主要色谱峰都能在相应的药材样品中找到归属,在孵育过程中并没有量大成分的产生或消失,但经人工肠液孵育后样品的主要色谱峰面积均高于经人工胃液孵育后相应样品的相应色谱峰面积,说明人工胃肠液能够影响样品中主要色谱峰的比例。为了深入探讨银翘药对的药效物质基础,富集主要药效成分的量,接下来研究了银翘药对水溶性化学成分。首先采用HPLC-DAD研究金银花、连翘和银翘药对1:1之间的化学成分差异,试验结果表明:银翘药对1:1中的主要色谱峰都能归属到单味金银花和连翘中,并没有明显的新色谱峰产生和消失,提示可以通过研究单味药金银花和连翘的水溶性化学成分来实现银翘药对的水溶性化学成分研究。因此,接下来对单味药金银花和连翘的水溶性成分进行了研究。采用溶剂法和各种色谱分离技术,对金银花、连翘的水溶性成分进行了较为系统的研究。从金银花中分离得到16个化合物,鉴定了16个化合物,包括6个环烯醚萜苷,5个叁萜皂苷,2个黄酮、3个其它类。其中3-O-β-D-glucopyranosyl hederagenin28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[β-D-xylopy-ranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosylester和3-O-β-D-glucopyranosyl-28-O-[α-L-rham-nopyranosyl-(1→2)-[β-D-xylo-pyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosyl]oleanolic acid为新化合物;2,6-dimethyl-6-hydroxyl-2,7-diene-1-octyl alcohol glucopyranoside为首次从该属植物中分离得到;獐芽菜苷,loganin和centauroside为首次从该种中分离得到。从连翘水煎剂中分离得到了18个化合物,鉴定了15个,包括4个木脂素类、3个有机酸类、2个黄酮、其它类6个其中吴茱萸次碱为首次从该属植物中分离得到。本研究是在中医药学理论和实践的指导下,将天然药物化学、分析化学、药理学、药代动力学等手段相结合,研究了银翘药对的主要药效、配伍变化、化学成分以及体内外过程,初步阐明银翘药对的可能药效物质基础,为中药或中药复方的药效物质基础研究模式提供了很好的参照方法和思路,为中药现代化做了有意义的探索性和创新性工作。(本文来源于《中国中医科学院》期刊2008-05-01）
药效物质快速发现方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
中药药效物质发现是中药药效物质基础研究的核心步骤,对推动中药现代化研究和创新药物研发均具有十分重要的意义。本论文在传统的“活性追踪”研究模式上,发展了两种新的中药药效物质快速发现方法,包括通过液质联用技术与化学计量学方法相集成,发展了一种基于偏最小二乘建模排序的中药药效成分快速发现方法,用于中成药通脉养心丸中心肌细胞保护活性物质和抗炎活性物质筛选；基于亲和选择分离配体化合物的原理,建立了埃洛石纳米管吸附固定脂肪酶的方法,利用固定脂肪酶的埃洛石纳米管结合液质联用技术,成功从中药厚朴组分中发现了多个脂肪酶抑制剂。研究结果为中药药效物质快速发现提供了新的研究思路。本论文的主要研究内容包括：1.采用过氧化氢氧化损伤H9c2大鼠心肌细胞模型,筛选通脉养心丸中具有心肌细胞保护活性物质。成功筛选出五个具有较强心肌细胞保护活性的组分,均呈现出良好的量效关系,其EC5o在7.332到17.44μg/mL之间。采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)对这五个活性组分进行了分析,鉴定推断出11个可能的心肌细胞保护活性化合物。2.提出了一种基于偏最小二乘建模排序的中药药效成分快速发现方法。该方法能够对LC-MS数据和活性评价数据进行相关性分析,快速指认潜在的活性化合物。采用细菌脂多糖(LPS)刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞模型对通脉养心丸活性组分进行了活性评价,发现有五个具有显着抗炎活性的组分,其IC50在6.702到32.31μg/mL之间,且呈现出良好的量效关系。在已推断鉴定出通脉养心丸中82个化合物的基础上,对通脉养心丸中所有18个组分进行LC-MS分析,推断每个组分中所含有的化合物。采用偏最小二乘法(PLS)回归模型来分析通脉养心丸中所含化合物与抗炎活性的相关性,并根据其相关性强弱进行排名。对排名在前的化合物进行抗炎活性验证,发现验证的7个化合物中,有6个都具有一定的抗炎活性且量效关系良好。由此表明,该方法具有较好的准确性,可应用于中药活性物质的快速筛选发现。3.建立了埃洛石纳米管(HNTs)吸附固定化脂肪酶法,并对吸附固定化酶的操作条件进行优化。以降脂药奥利司他(orlistat)为阳性药,五味子醇甲为阴性对照药,发现HNTs固定化脂肪酶可用于脂肪酶抑制剂的筛选。运用该方法,从中药厚朴组分中成功筛选出4个脂肪酶的配体化合物,并分离制备出其中的两个化合物Magnotriol A和Magnaldehyde B。经实验验证这两个化合物都具有良好的脂肪酶抑制活性,其IC50分别为213.03μM和96.96μM,且都为首次发现。进一步的分子对接研究结果表明,这类化合物能够与脂肪酶活性域中关键氨基酸结合,可能通过占用酶的催化位点来抑制脂肪酶的活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
药效物质快速发现方法论文参考文献
[1].王晶晶.基于超滤质谱技术的中药药效物质基础快速发现方法研究[D].河南中医药大学.2016
[2].陶珊.基于化学计量学及固定化酶的中药药效物质快速发现方法研究[D].浙江大学.2015
[3].陈锥.一种基于磁珠富集的中药药效物质快速发现方法研究[D].浙江大学.2014
[4].林丽美.以银翘药对为对象探讨建立中药药效物质快速发现的方法[D].中国中医科学院.2008