导读:本文包含了美洲型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒,单克隆抗体,GP4蛋白,表位
美洲型论文文献综述
刘梦莹[1]（2019）在《美洲型PRRSV GP4蛋白中和单抗的制备及其抗原表位鉴定》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,我国发现的位于PRRSV 5亚群的PRRSV类NADC30株自2013年以来广泛流行。PRRSV的糖蛋白GP4在PRRSV感染以及产生中和抗体过程中发挥重要作用,但对于具有中和活性GP4 MAb的制备与研究却鲜有报道。本研究目的是制备具有中和活性的PRRSV GP4蛋白的单克隆抗体(MAb)并鉴定出MAb识别的抗原表位,对了解PRRSV基因组的结构与功能,以及进一步利用中和单抗对PRRS进行免疫防治具有非常重要的意义。本研究用纯化的PRRSV SD53株病毒免疫6周龄的BALB/c雌鼠叁次,第叁次免疫7天后,经IFA检测结果显示小鼠血清全部转阳。取血清已经转为阳性的小鼠脾细胞和骨髓瘤SP2/0细胞进行细胞融合。经四次亚克隆,并对所筛选杂交瘤细胞分泌出的抗体进行稳定性验证,结果表明成功获得一株能够稳定分泌抗PRRSV MAb的阳性杂交瘤细胞株,命名为LM26;对所获得的阳性杂交瘤细胞大量培养,并以这株细胞制备腹水,收集制备的腹水,经亲和层析纯化,western blot分析结果表明,已经获得了纯化后的MAb。IFA测定MAb LM26的细胞培养上清及腹水的效价为1:16和1:1600。该MAb对北美洲型PRRSV SD53株具有中和活性,中和效价最低为1:6,最高为1:50。该MAb亚型为IgG2a亚类,轻链为κ链。本研究进一步明确了LM26为抗PRRSV GP4单抗,并精确鉴定其识别的抗原表位。首先,将PRRSV SD53株一系列结构蛋白的核酸序列扩增后回收,利用两个核酸内切酶切开,并将回收后的片段连入到pGEX-6P-1表达的载体中,把一系列重组表达的质粒构建出来,利用这些质粒,进行重组蛋白的诱导和表达,获得了一系列表达的结构蛋白短肽与GST的融合蛋白。western blot结果显示,一系列重组蛋白均成功表达,且LM26仅与PRRSV重组表达后的GP4蛋白能够特异性的结合。其次,将测序正确后的质粒pCAGGS-FLAG-GP4瞬时转染到293T细胞作为检测抗原,用IFA验证已经成功表达的重组GP4蛋白与LM26反应,证明抗PRRSV GP4 MAb已经被成功的制备。最后,对该MAb识别GP4蛋白上抗原表位进行鉴定,western blot结果显示LM26识别GP4蛋白的aa 57~aa 62(~(57)VVLQDI~(62))。将序列~(57)VVLQDI~(62)与在GenBank中下载的28株国内外PRRSV株GP4氨基酸序列比对,结果显示,位于GP4蛋白的aa 57~aa 62这段序列,在HP-PRRSV株以及类NADC30 PRRSV株中呈现高度保守;在经典PRRSV株中存在2个突变位点,分别是V~(57)A和Q~(60)H;在欧洲PRRSV株中存在1个突变位点V~(57)M。然而,IFA检测结果显示,LM26与疫苗株HuN4-F112、CH-1R、MLV、TJM-F92反应,与欧洲株DV、VP046BIS不反应,由此推测V~(57)A、Q~(60)H突变不影响LM26对抗原表位的识别,该表位在美洲型PRRSV中相对保守。综上所述,本研究成功制备出一株具有中和活性的抗PRRSV GP4蛋白MAb,并鉴定了其识别表位位于GP4蛋白~(57)VVLQDI~(62),该MAb有助于进一步研究PRRSV基因组的结构和功能。(本文来源于《福建农林大学》期刊2019-06-01）
刘梦莹,李敏华,王倩,田志军,周伦江[2]（2019）在《美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定》一文中研究指出为制备具有中和活性的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用PRRSV SD53株的超离病毒作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠并进行细胞融合。采用PRRSV SD53株和真核表达的PRRSV各结构蛋白作为检测抗原,应用间接免疫荧光试验(IFA)筛选到一株稳定分泌抗SD53株GP4蛋白的杂交瘤细胞株(LM26)。抗体亚类鉴定其为IgG2a,轻链为κ链。原核表达一系列截短的GP4蛋白鉴定LM26的抗原表位结果显示,LM26识别的抗原表位序列为~(57)VVLQDI~(62),此抗原表位在美洲型PRRSV中相对保守。病毒中和试验结果显示,MAb LM26仅针对PRRSV SD53株具有中和活性,中和效价最高为1∶50,对其它美洲株PRRSV均不具有中和活性。该MAb的制备为进一步研究PRRSV GP4蛋白的结构和功能奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年06期）
刘春晓,张洪亮,张文立,相丽润,李真[3]（2017）在《2016年～2017年我国华北地区某规模化猪场经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析》一文中研究指出为了解近期我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究对该地区某猪场采集33份2016年~2017年疑似患PRRS猪病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行病毒分离,并从分离株中选择两株病毒(SD158和SD192)进行全基因的序列扩增及分析。结果显示,检测到13份PRRSV阳性病料样品,病原为经典美洲型PRRSV,但仅分离到11株病毒(4株感染MARC-145细胞,另外7株感染PAM细胞)。SD158和SD192株与Resp PRRS MLV株(疫苗株)的核苷酸同源性最高,分别为99.7%和99.4%。对这两株PRRSV与VR-2332、Resp PRRS MLV的各基因的推导氨基酸序列进行分析,结果显示在VR-2332与Resp PRRS MLV株22处差异氨基酸中,SD158株有15处、SD192株有14处氨基酸和Resp PRRS MLV株相同,但二者仅各有6处及7处氨基酸与VR-2332株一致,在鉴别PRRSV VR-2332株与Resp PRRS MLV株的7处可能与毒力相关的氨基酸位点时发现,SD158与SD192株各有5处基酸与VR-2332株相同。根据以上结果推测SD158与SD192株可能来源于PRRSV Resp PRRS MLV株,具有上述分子变化特征的PRRSV在我国的流行状况值得关注。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2017年09期）
刘春晓,张洪亮,张文立,相丽润,彭金美[4]（2017）在《经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析》一文中研究指出引言猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种疫病,表现为母猪的繁殖障碍,断奶仔猪死亡和呼吸道疾病。PRRSV被划分为两个基因型,以LV为代表的欧洲型(基因I型)和VR2332为代表的美洲型(基因Ⅱ型)。2017年,Zhang等从PRRS疑似病料中检测到了经典美洲型PRRSV,但只对ORF5(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集》期刊2017-08-20）
温青娜,周玲玲,申红,杨菊凤,林祥群[5]（2015）在《多重实时荧光定量PCR鉴别欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV检测方法的建立》一文中研究指出根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够检测欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV的多重实时荧光定量PCR方法。该方法的重复试验表明其批内和批间的变异系数最高值分别为1.84%和1.76%;灵敏性试验表明其检测下限为10copies/μL;特异性试验表明与其他一些猪源病毒无交叉反应,具有良好的特异性;临床试验表明,该方法能够快速准确地检测出临床组织样本中美洲型及高致病性PRRSV的核酸;此外,本研究用欧洲型PRRSV质粒进一步验证了该方法可以检测出欧洲型PRRSV的目的基因。该方法的建立为不同类型的PRRSV快速检测提供了有效手段,可用于猪繁殖与呼吸综合征疫情的监测及防控。(本文来源于《动物医学进展》期刊2015年06期）
辛舒[6]（2015）在《以HBc为载体美洲型PRRSV颗粒候选疫苗构建及免疫原性分析》一文中研究指出目前,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)在全球范围内流行,基因型表现出高度可变性,对疾病的防控产生了巨大的阻碍。现阶段对PRRS的防控主要采取疫苗接种的方式,但存在一定的局限性,现有疫苗不能对猪群提供全面持久的保护,因此积极发展新型疫苗对控制PRRSV感染与流行有着重要的意义。自成功采用乙肝病毒核心蛋白(HBc)作为疫苗载体表达了口蹄疫病毒抗原表位以来,HBc被越来越多的应用于病毒样颗粒(VLPs)疫苗的研制。作为VLPs疫苗载体,HBc具有以下特点:天然条件下能够自我组装成颗粒样结构,插入位点灵活,装配效率高(>95%),可以提呈抗原,能够在多种表达系统中稳定表达等。本研究以HBc为载体表达PRRSV GP5保护性抗原,构建了HBc-GP5表位VLPs候选疫苗,并对其进行小鼠免疫评价。首先根据Escherichia coli(strain K12)密码子偏好性对HBc序列进行密码子优化,并将其克隆至改造的pET-28a原核表达载体中,获得重组质粒pEO-NEW。经SDS-PAGE、Western blot及透射电镜等方法对表达获得的VLPs进行鉴定,结果表明成功诱导表达了HBc蛋白且表达后蛋白能够自主装配成VLPs,为下一步重组疫苗制备提供研究基础。基于所得到的pEO-NEW表达载体,将优化后的GP5基因插入至pEO-NEW载体的免疫显性区(MIR),获得重组质粒pEO-LEORF。通过SDS-PAGE和Western blot方法鉴定重组目的蛋白,结果显示,成功诱导表达GP5蛋白。经透射电镜对其形态进行观察,结果显示,诱导后的重组蛋白能够自主装配成VLPs。以小鼠为模型分析该HBc-GP5 VLPs候选疫苗的免疫原性,利用ELISA进行抗体检测,结果表明其能够诱导机体产生较高的特异抗体水平;对T细胞亚群及细胞因子进行检测结果表明,疫苗免疫组小鼠CD3+CD4+T细胞淋巴细胞亚型数量及IL-4水平显着高于对照组(P<0.05),淋巴细胞刺激指数(SI)及第叁次免疫后IFN-γ含量与对照组相比显著提高(P<0.05),说明HBc-GP5表位VLPs候选疫苗能够模拟病毒样颗粒,有效提呈GP5并诱导机体产生体液和细胞免疫,为下一步实验研究提供数据基础。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2015-05-01）
于新友,李天芝,王金良,唐娜,李峰[7]（2015）在《美洲型和欧洲型PRRSV一步法二重RT-PCR快速检测方法的建立和应用》一文中研究指出根椐GenBank中已发表的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)2种病毒基因序列,分别设计2对引物。在建立2种病毒单项一步法RT-PCR检测方法的基础上,优化一步法二重RT-PCR反应条件,建立了2种病毒的一步法二重RT-PCR检测方法,用这2对引物对同一样品中的美洲型PRRSV、欧洲型PRRSV核酸模板进行一步法二重RT-PCR扩增,结果可同时扩增美洲型PRRSV的265 bp和欧洲型PRRSV的451 bp的特异性片段,而对其他4种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该方法能检出10 Pg的美洲型PRRSV和10 pg的欧洲型PRRSV模板。通过对175份临床病料检测,将建立的一步法二重RT-PCR技术和单项一步法RT-PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的一步法二重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对美洲型和欧洲型PRRSV的同时检测和鉴别诊断。(本文来源于《猪业科学》期刊2015年04期）
施开创,邹联斌,胡杰,张步娴,莫胜兰[8]（2015）在《CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV多重qRT-PCR鉴别检测方法的建立及应用》一文中研究指出根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪的其它常见病毒无交叉反应;对CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV3种重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。应用该方法对253份临床疑似样品进行检测,结果病原阳性106份,其中20份为CSFV阳性,86份为美洲型PRRSV阳性,11份为CSFV和美洲型PRRSV混合感染,未检测到欧洲型PRRSV。试验表明,研究建立的多重qRT-PCR方法可用于CSFV和PRRSV的快速鉴别检测及流行病学调查。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2015年03期）
蒲静,汪琳,尹羿,柏亚铎,任彤[9]（2015）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型RT-LAMP检测方法建立》一文中研究指出本研究针对猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型ORF6基因的6个区域,利用2对引物建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-LAMP快速检测方法,该方法具有高灵敏度,高特异性的优点,在2小时左右即可得出结果,其灵敏度与PRRSV荧光RT-PCR检测方法相近,高于普通RT-PCR检测方法。将灭活的猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型培养物作10倍系列稀释,结果显示建立的荧光RT-PCR的检测极限可达10-7,RT-PCR检测方法的检测极限为10-5,RT-LAMP检测方法达到10-8,表明建立的RT-LAMP检测方法非常灵敏,可用于检测猪组织样本中的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2015年02期）
戴光文,谢丽华,江精华,李媚,梁真[10]（2014）在《美洲型和欧洲型PRRSV RT-PCR鉴别检测方法的建立》一文中研究指出在分析不同美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因组基础上,设计一对能扩增2种PRRSV毒株NSP2基因序列的特异性共有引物。RT-PCR结果显示,变异株和经典株扩增片段分别为342bp和432bp。结果表明,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好等特点,可同时鉴别检测美洲型PRRSV变异毒株与经典毒株。临床应用于16份样品检测,PRRSV总体检出率为37.5%,高致病性特征变异株占总毒株的83.3%。(本文来源于《动物医学进展》期刊2014年06期）
美洲型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为制备具有中和活性的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用PRRSV SD53株的超离病毒作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠并进行细胞融合。采用PRRSV SD53株和真核表达的PRRSV各结构蛋白作为检测抗原,应用间接免疫荧光试验(IFA)筛选到一株稳定分泌抗SD53株GP4蛋白的杂交瘤细胞株(LM26)。抗体亚类鉴定其为IgG2a,轻链为κ链。原核表达一系列截短的GP4蛋白鉴定LM26的抗原表位结果显示,LM26识别的抗原表位序列为~(57)VVLQDI~(62),此抗原表位在美洲型PRRSV中相对保守。病毒中和试验结果显示,MAb LM26仅针对PRRSV SD53株具有中和活性,中和效价最高为1∶50,对其它美洲株PRRSV均不具有中和活性。该MAb的制备为进一步研究PRRSV GP4蛋白的结构和功能奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
美洲型论文参考文献
[1].刘梦莹.美洲型PRRSVGP4蛋白中和单抗的制备及其抗原表位鉴定[D].福建农林大学.2019
[2].刘梦莹,李敏华,王倩,田志军,周伦江.美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J].中国预防兽医学报.2019
[3].刘春晓,张洪亮,张文立,相丽润,李真.2016年～2017年我国华北地区某规模化猪场经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[J].中国预防兽医学报.2017
[4].刘春晓,张洪亮,张文立,相丽润,彭金美.经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集.2017
[5].温青娜,周玲玲,申红,杨菊凤,林祥群.多重实时荧光定量PCR鉴别欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV检测方法的建立[J].动物医学进展.2015
[6].辛舒.以HBc为载体美洲型PRRSV颗粒候选疫苗构建及免疫原性分析[D].吉林农业大学.2015
[7].于新友,李天芝,王金良,唐娜,李峰.美洲型和欧洲型PRRSV一步法二重RT-PCR快速检测方法的建立和应用[J].猪业科学.2015
[8].施开创,邹联斌,胡杰,张步娴,莫胜兰.CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV多重qRT-PCR鉴别检测方法的建立及应用[J].家畜生态学报.2015
[9].蒲静,汪琳,尹羿,柏亚铎,任彤.猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型RT-LAMP检测方法建立[J].中国动物检疫.2015
[10].戴光文,谢丽华,江精华,李媚,梁真.美洲型和欧洲型PRRSVRT-PCR鉴别检测方法的建立[J].动物医学进展.2014
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