导读:本文包含了人食管平滑肌细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:反流性食管炎,旋覆代赭汤,食管平滑肌细胞,5-羟色胺4受体
人食管平滑肌细胞论文文献综述
黄棪,鲁军,王霞,杨东升,张俊杰[1]（2019）在《旋覆代赭汤含药血清对食管平滑肌细胞5-羟色胺4受体、环磷酸腺苷及钙离子浓度的影响》一文中研究指出目的探讨旋覆代赭汤治疗反流性食管炎的可能作用机制。方法 40只大鼠随机分为旋覆代赭汤低、中、高剂量组及空白组,每组10只,旋覆代赭汤低中高剂量组给药量分别为4. 71、9. 42、18. 84g/(kg·d),每日1次,连续灌胃3天,空白组给予10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃。末次灌胃后腹主动脉取血,分离血清。旋覆代赭汤各剂量组分别设5%、10%、20%、30%共4个浓度,采用CCK-8法检测各浓度对食管平滑肌细胞(ESMC)增殖的影响,并筛选最佳给药浓度。原代培养ESMC,在运用5-羟色胺4受体(5-HT4R)激动剂(马来酸替加色罗)和抑制剂(GR113808),及腺苷酸环化酶(AC)的激动剂(Forskolin)和抑制剂(SQ22536)干预5羟色胺(5-HT)通路的信号传导,再用筛选出的旋覆代赭汤含药血清孵育,ELISA法检测胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量,免疫荧光法检测5-HT4R荧光强度,Ca2+探针检测细胞内Ca2+浓度。结果 5%旋覆代赭汤低剂量组对ESMC的增殖作用最强,故选取用于后续实验。与5-HT4R激动剂组比较,5-HT4R激动剂加中药组Ca2+荧光增强比值增加(P <0. 01)。与AC激动剂组比较,AC激动剂加中药组5-HT4R荧光强度、Ca2+荧光强度显着增加(P <0. 01)。与5-HT4R抑制剂组比较,5-HT4R抑制剂加中药组5-HT4R荧光强度、Ca2+荧光增强比值、c AMP浓度均增加(P <0. 05或P <0. 01)。与AC抑制剂组比较,AC抑制剂加中药组5-HT4R荧光增强比值、Ca2+荧光强度、cAMP浓度均增加(P <0. 05或P <0. 01)。结论旋覆代赭汤可能是通过增加5-HT4R表达,继而激活AC,促进cAMP释放,使胞内Ca2+浓度升高,引起食管平滑肌收缩,从而减轻反流。(本文来源于《中医杂志》期刊2019年19期）
高杨[2]（2018）在《人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究》一文中研究指出第一部分食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及鉴定目的:探索最简单、有效的原代食管胃结合部平滑肌细胞培养方法并鉴定平滑肌细胞特有表型。方法:选取2015年1月至2017年10月在河北医科大学第四医院因中高位食管癌行食管大部切除术患者食管胃结合部平滑肌组织共24例,分别以酶消化法(enzymatic digestion with tissue blocks,ED)和组织块法(explant culture with tissue blocks,EC-T)进行平滑肌细胞原代培养。ED组中,消化酶选择胶原酶Ⅱ(collagenaseⅡ)和胰酶/EDTA消化液(Trypsin/EDTA),并以不同消化酶浓度结合不同消化温度和消化时间探索最佳获取原代细胞方法,记录每200倍镜视野可见贴壁细胞个数(Cells/200×)和原代细胞生长至第一次传代所需时间(first passage day,FPD);EC-T组中,对比传统组织块贴壁法(explant culture with tissue blocks,T)与胰酶消化辅助法(explant culture with trypsin digested-tissue,TD-T)和直接利用酶消化法中组织块内注射胶原酶Ⅱ提取细胞后的剩余组织块(explant culture with enzyme injected-tissue,EI-T)叁种方法,记录初次见到细胞由组织块爬出时间(visibility of cells migration,VCM)、FPD、初次分瓶时已爬出细胞的组织块所占比例(Positive blocks(%)),选择效率最高的原代细胞培养方法;以CCK-8测定体外培养的细胞在平滑肌细胞培养基(smooth muscle cell medium,SMCM)和含10%新生牛血清的DMEM/F-12(10%-F12)培养基中的增殖的情况,并采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)、realtime RT-PCR、免疫荧光(immunofluore-scence,IF)、incellwestern方法检测平滑肌组织和所获得细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM22α)、波形蛋白(vimentin)、肌间线蛋白(desmin)、分化抗原簇90(cluster of differentiation 90,CD90)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况,以对细胞进行鉴定。结果:ED和EC-T两种方法均可获得原代细胞。ED组以Cells/200×比较无统计学差异(P=0.864),但以FPD进行比较,可见以低浓度(0.5mg/ml)胶原酶Ⅱ注射入组织块内并低温(4℃)、长时间(14~24h)消化所得细胞的时间最短(中位时间8.00d,P<0.05);EC-T组中,以EI-T法获得的原代细胞在VCM(中位时间6.00d,P<0.05)、FPD(中位时间15.50d,P<0.05)、Positive blocks(%)(中位比例86.00%,P<0.05)方面均优于其他两种方法;ED组和EC-T组总FDP比较显示ED组明显短于EC-T组(P=0.000)。所培养原代细胞以梭型和长梭形为主,大小不均,可自行沿一定方向生长,表现为峰谷样图案;在SMCM中增殖良好,但在10%-F12中增殖效果不佳。这些细胞在SMCM中可传代至第6~8代,但在10%-F12中仅可传至第3~4代;细胞会随着传代次数增加体积逐渐增大并丧失梭形结构。原代培养的细胞同相应平滑肌组织一样,均可检测到α-SMA、SM22α、Vimentin、Desmin、CD90和PCNA的mRNA和蛋白,但不同体外培养条件下其平滑肌标志物表达水平不同,以10%-F12培养的细胞平滑肌标志物表达水平均高于SMCM组。结论:以平滑肌标志物鉴定ED法和EC-T法所获得的细胞为平滑肌细胞,提取食管胃结合部平滑肌细胞进行体外培养是可行的;ED法获得的细胞培养周期短;以SMCM培养平滑肌细胞可有效扩大细胞种群,但以10%-F12培养的细胞具有更好的平滑肌细胞表型。第二部分乙酰胆碱对体外培养人食管胃结合部平滑肌细胞内钙离子浓度的影响目的:使用乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对体外培养的人食管胃结合部(esophagogastric junction,EGJ)平滑肌细胞内钙荧光变化的影响,明确各种平滑肌细胞内钙荧光变化特点,确定最佳体外人源性EGJ平滑肌细胞培养方式。方法:选取2016年11月至2017年10月因中高位食管癌行食管大部切除术患者共9例,以酶消化法和组织块法获取套索纤维、钩状纤维、食管环行肌、食管纵行肌、胃小弯侧环行肌和胃大弯侧环行肌6种人EGJ原代平滑肌细胞并分别以平滑肌培养基(smooth muscle cell medium,SMCM)和含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基(10%-F12)进行培养。以5μmol/L Fluo-3/am溶液负载体外培养的SMCM第3代和10%-F12第2代EGJ平滑肌细胞,在共聚焦显微镜下观察10~-66 mM Ach对有钙缓冲液和无钙缓冲液中平滑肌细胞内钙荧光的影响,记录荧光活动的起始值、峰值和结束值并记录相应时间长度,对比同种组织来源细胞钙荧光在有钙缓冲液和无钙缓冲液以及钙活动前后的差异。结果:不同培养基培养的EGJ平滑肌细胞存在不同的基础钙荧光。各组细胞加入Ach约2 s后即可见细胞内钙荧光变化。食管纵行肌细胞、胃大弯侧环形肌细胞和胃小弯侧环形肌细胞钙荧光活动相对于套索纤维细胞、钩状纤维细胞和食管环行肌细胞温和。在含钙缓冲液中,各种细胞的基础钙荧光强于无钙缓冲液,且钙活动总时间长,但荧光峰值不高。在无钙缓冲液中,酶消化法获得的细胞钙荧光更多见典型的细胞内存储钙离子释放,且仍可见较长时间钙活动。钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌和胃小弯侧环形肌以细胞内存储钙离子释放为主要特点,而食管纵行肌、胃大湾环形肌以细胞外钙离子内流为主要特点;以酶消化法获取并以10%-F12培养的钩状纤维细胞、套索纤维细胞、食管环行肌细胞和食管纵行肌细胞在有钙缓冲液和无钙缓冲液中的钙离子活动峰值荧光差均有统计学差异。组织块法获取的细胞中,仅胃大弯侧环行肌和以10%-F12培养的套索纤维细胞峰值荧光差存在统计学差异,且各组细胞钙活动特点不如酶消化法组细胞典型。结论:在Ach诱发体外培养的EGJ平滑肌细胞内钙荧光变化过程中,钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌、食管纵行肌、胃大弯侧环形肌和胃小弯侧环形肌均不单纯依赖于某种钙离子活动,而是将细胞内存储钙离子释放与细胞外钙离子内流相结合以有效维持较长时间的钙活动。以酶消化法获取细胞并以10%-F12进行培养是最佳体外人EGJ平滑肌细胞培养方式。第叁部分钙离子相关蛋白及一氧化氮合酶在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌中表达的初步研究目的:明确参与细胞内Ca~(2+)变化的相关钙离子蛋白和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)在贲门失弛缓症(achalasia of the cardia,AC)患者腹段食管段环行肌的表达。方法:收集河北医科大学第四医院胸外科AC患者共10例为实验组,选取因中高位食管癌行食管大部切除术患者共17例为对照组。手术中收集两组贲门水平以上2~5cm以内腹段食管环行肌组织。以L-型钙离子通道(L-type calcium channel,LTCC)、叁磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5-triphosphate recptors,IP_3Rs)、雷诺定受体(ryanodine receptors,RyRs)叁种大分子蛋白和NOS为研究对象,分别采用realtime RT-PCR和免疫组织化学(SP法)技术检测LTCC、RyRs、IP_3Rs和NOS各亚型在实验组与对照组表达的差异,同时以RT-PCR扩增各cDNA并进行碱基测序以明确判断相应mRNA是否表达。检验实验组各受体mRNA相对表达量与食管综合松驰压(integrated relaxation pressure,IRP)是否存在线性关系。结果:通过对实验组和对照组腹段食管环行肌(esophageal circular smooth muscle of control,EC)组织cDNA扩增显示,各蛋白亚型mRNA中i NOS、n NOS、Cav1.2、Cav1.3、RyR2、IP_3R1、IP_3R2和IP_3R3在两组中均为阳性表达,但eNOS、Cav1.1、RyR1、RyR3不表达;经统计分析,iNOS、n NOS、Cav1.3、IP_3R1和IP_3R2的mRNA在AC表达均增高;iNOS和Cav1.3相对mRNA表达量与IRP之间存在正相关关系。通过免疫组织化学技术检测,在实验组和对照组平滑肌组织中n NOS、Cav1.2、Cav1.3、IP_3R1、IP_3R2、IP_3R3和RyR2 7种蛋白均表达,其中n NOS局限分布于AC平滑肌组织中的神经纤维并呈强阳性染色,但平滑肌细胞质染色较对照组明显浅淡。经统计分析仅IP_3R2在AC表达升高且与mRNA表达情况一致,两组中其余蛋白表达无统计学差异。结论:在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌病理变化中,NOSs依然参与食管平滑肌病理状态的调节,但iNOS mRNA异常增高且n NOS在平滑肌细胞的表达明显减少;钙离子相关蛋白表达异常的肌源性因素也许在贲门失弛缓症病理生理机制中扮演着重要角色。结论:1.以平滑肌标志物鉴定酶消化法和组织块法所获得的食管胃结合部平滑肌组织来源的细胞为平滑肌细胞,提取食管胃结合部平滑肌细胞进行体外培养是可行的。在酶消化法中,以低浓度(0.5mg/ml)胶原酶Ⅱ注射于组织块并在低温(4℃)、长时间(14~24h)条件下消化的方法获取平滑肌细胞效率最佳且细胞培养周期短;以此残余组织块直接用于组织块培养法,其获取平滑肌细胞的效率最佳。体外培养的平滑肌细胞以合成型为主,形态学表现多为梭型和长梭形;在不同培养条件下其平滑肌特异性标志物的表达水平不同;以专业培养基培养平滑肌细胞可有效扩大细胞种群,但以含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基培养的平滑肌细胞拥有更好的平滑肌细胞表型。2.在Ach诱发体外培养的食管胃结合部平滑肌细胞内钙荧光变化过程中,体外培养的钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌和胃小弯侧环形肌细胞以细胞内存储钙离子释放为主要特点;食管纵行肌、胃大弯侧环形肌细胞以细胞外钙离子内流为主要特点。但以上细胞均不单纯依赖于某种钙离子活动,而是将细胞内存储钙离子释放与细胞外钙离子内流相结合以有效维持较长时间的钙活动,尤以酶消化法获取并以含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基进行培养的平滑肌细胞在乙酰胆碱介导的细胞内钙离子浓度变化中表现最佳,可作为最佳人EGJ平滑肌细胞体外培养方式。3.在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌病理变化中,一氧化氮合酶依然参与食管平滑肌病理状态的调节,但诱生型一氧化氮合酶mRNA异常增高且神经元型一氧化氮合酶在平滑肌细胞的表达明显减少。钙离子相关蛋白表达异常的肌源性因素也许在贲门失弛缓症病理生理机制中扮演着重要角色,其与一氧化氮合酶的相应变化在贲门失弛缓症病理生理过程中的作用应受到关注。(本文来源于《河北医科大学》期刊2018-04-01）
张盈盈,齐元富[3]（2015）在《食管平滑肌肉瘤合并小细胞神经内分泌癌一例报告并文献复习》一文中研究指出1病例报告患者,男,51岁,2013-03-06因进食干硬食物时出现阻挡感2个月余于山东省立医院就诊,半流质、流质饮食无明显阻挡感,偶有烧心感,无胸背痛及腹痛。体格检查:颈部、锁骨上和腹股沟等浅表淋巴结未触及肿大,胸腹部检查未见明显异常。自述有青霉素过敏史及输血史;吸烟史30年,20支/d;饮酒史30年,500g/d。家族中无类似病史者。食管钡餐影像学表现:食管中段可见长约4.5cm的不规则充盈缺损,壁(本文来源于《中华肿瘤防治杂志》期刊2015年22期）
卢强,黄立军,张志培,刘同刚,李小飞[4]（2012）在《人食管平滑肌细胞Kir3亚型表达的实验观察》一文中研究指出目的:探讨食管下段平滑肌中是否表达Kir3及其各亚型之间表达的差异性,同时明确食管环形平滑肌(CM)与纵行平滑肌(LM)之间表达的区别。方法:根据24h食管pH值检测、食管镜检查及HE染色结果,分辨、筛选正常人食管平滑肌,按人Kir3.1～3.4序列设计并合成各自的高效引物,利用RT-PCR、蛋白质印迹法检测人食管平滑肌细胞中Kir3的表达及其亚型Kir3.1～3.4表达的差异。结果:在人食管LM、CM层平滑肌细胞中mRNA的表达分别为0.121±0.015及0.124±0.017(Kir3.2)、0.255±0.018及0.295±0.028(Kir3.3)和0.685±0.040及0.693±0.037(Kir3.4)。蛋白表达分别为0.053±0.010及0.068±0.009(Kir3.2)、0.160±0.021及0.192±0.032(Kir3.3)和0.488±0.040及0.504±0.033(Kir3.4)。Kir3.4表达最丰富,与Kir3.2与Kir3.3的表达差异有统计学意义,P<0.05;LM和CM组的表达差异无统计学意义,P>0.05。结论:人食管平滑肌细胞仅表达Kir3中的Kir3.2、Kir3.3和Kir3.4,其中Kir3.4的表达最丰富;人食管LM和CM Kir3.2、Kir3.3和Kir3.4的表达无显着差异性。(本文来源于《中华肿瘤防治杂志》期刊2012年09期）
卢强[5]（2009）在《RNA干扰人食管平滑肌细胞GIRK4基因表达的实验研究》一文中研究指出研究一人食管平滑肌细胞中GIRK表达的实验研究目的:探讨食管下段平滑肌中有无GIRK的表达以及各亚型之间表达的差异性,同时明确食管环形平滑肌(CM)与纵行平滑肌(LM)之间表达的区别,从食管自节律入手深入研究食管运动功能的深层机制,为进一步研究食管功能的调节打下基础。方法:根据24h食管pH值检测、食管镜检查及HE染色结果,分辨、筛选正常人食管平滑肌,按人GIRK 1-4序列设计并合成各自的高效引物,利用RT-PCR、Western Blotting方法检测人食管平滑肌细胞中GIRK 1-4的表达。结果:RT-PCR及Western Blotting检测证明人食管平滑肌细胞仅表达GIRK 1-4中的GIRK2、3、4;其中GIRK4表达最为丰富;但GIRK2与GIRK3的表达无明显差异性(P>0.05);而GIRK2与GIRK4,GIRK3与GIRK4的表达却差异均显着( P<0.05); LM和CM组的表达亦无明显差异(P>0.05)。结论:人食管平滑肌细胞不表达GIRK1,仅表达GIRK 2、3、4;其中GIRK4的表达最丰富;GIRK2、GIRK3的表达相对较少;人食管LM和CM GIRK 2、3、4的表达无显着差异性。研究二筛选高效人GIRK4基因RNA干扰序列、构建重组腺病毒载体实验一:RNA干扰质粒的构建目的:构建编码人GIRK4的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术从转录后水平进行GIRK4的研究做准备。方法:根据人GIRK4序列设计并合成四组shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGCsi-U6,采用PCR进行鉴定,并使用377型测序仪进行测序分析。结果:PCR证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与与设计的相同,获得了人GIRK4的shRNA表达载体质粒(pGCsi-GIRK4-shRNA-U6)。结论:构建GIRK4的shRNA真核表达载体可进入哺乳动物细胞内表达短发夹RNA,通过Dicer酶裂解成siRNA并降解靶基因mRNA,而达到RNA干扰的作用,为利用其进行GIRK4功能研究奠定基础。实验二:GIRK4基因融合蛋白表达载体的构建目的:构建编码人GIRK4真核表达载体质粒,为进行人GIRK4的shRNA序列的筛选作准备。方法:以购买的人GIRK4基因为模板,PCR其cDNA编码序列克隆进入载体pEGFP-C1,进行PCR鉴定、测序及转染293细胞在荧光显微镜下观察。结果:PCR证明cDNA已插入载体,经测序显示与与设计的序列相同,获得人GIRK4融合蛋白的表达载体质粒(pEGFP-GIRK4-C1),并能转染293细胞表达融合蛋白。结论:构建的人GIRK4真核表达载体可进入哺乳细胞内表达GIRK4-EGFP融合蛋白,为进行针对GIRK4基因RNA干扰序列筛选打下基础。实验叁:RNA干扰有效靶点的筛选目的:确定外源表达系统中(HEK293 cell)GIRK4-shRNA沉默GIRK4基因表达的有效性及选择高效的干扰序列。方法:将已构建的四个靶向GIRK4基因不同区域GIRK4的shRNA表达载体质粒(pGCsi-GIRK4-shRNA-U6)、对照质粒分别与人GIRK4的真核表达载体质粒(pEGFP-GIRK4-C1)共转染HEK293细胞,收集转染48h后的细胞,进行Western blotting检测。结果:转染48小时后与对照组相比,四个不同序列的shRNA表达载体质粒(pGCsi-GIRK4-shRNA-U6)使GIRK4表达在48小时分别减少78.1%、85.3%、88.3%、94.3%,其中以4#载体GGCTGAGCAGAATGAAGAA呈最有效的干扰序列。结论:成功地在外源表达系统筛选出了针对人GIRK4基因的高效RNA干扰序列GGCTGAGCAGAATGAAGAA。实验四:腺病毒表达载体构建目的:利用AdMax腺病毒载体系统构建重组腺病毒载体Ad-GIRK4-shRNA并在293细胞中扩增制备重组腺病毒载体。方法:将合成的针对GIRK4的4#高效干扰序列,克隆到pDC316-EGFP-U6载体中,再将pDC316-GIRK4-shRNA-EGFP-U6载体和骨架病毒pBHGlox_E1,3Cre共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,并行PCR鉴定和测序。结果:经PCR鉴定和测序,证实构建的4#干扰序列重组腺病毒载体(Ad-GIRK4-shRNA)正确并制备出高滴度重组病毒。结论:成功构建了携带人GIRK4 shRNA片段的高效重组腺病毒载体(Ad-GIRK4-shRNA),为深入研究人食管平滑肌GIRK4基因奠定了基础。研究叁RNA干扰人食管平滑肌细胞GIRK4基因的实验研究实验一:人食管平滑肌细胞的培养目的:培养出一定数量状态良好的人食管平滑肌细胞备实验二用。方法:联合运用Ⅰ型胶原酶和ⅩⅣ型蛋白酶消化人下段食管标本,利用差速贴壁法消除大部分非食管平滑肌细胞,采用α-actin染色,Elivision二步法进行免疫组化鉴定。结果:经actin抗体鉴定,培养出的细胞90%以上均为食管平滑肌细胞。结论:成功培养出人食管平滑肌细胞,可供进一步行RNA干扰人食管平滑肌细胞GIRK4基因实验所用。实验二:RNA干扰人食管平滑肌细胞GIRK4基因的实验研究目的:探讨GIRK4 shRNA导入人食管平滑肌细胞进行RNA干扰GIRK4表达的可行性,观察对迷走神经通路上的M2AChR表达及IKACh电流密度的影响。方法:用重组腺病毒载体Ad-GIRK4-shRNA转染人食管平滑肌细胞,于转染后不同时间收集细胞,利用RT-PCR、蛋白印迹来检测GIRK4、M2AChR的表达,全细胞膜片钳技术检测IKACh、IK1电流密度的变化。结果:Ad-GIRK4-shRNA在MOI 20对人食管平滑肌细胞转染效率达到95%以上,呈现剂量依赖性和时间依赖性: MOI 5 , 20 , 50时,Ad-GIRK4-shRNA干扰效率分别为15.1%, 35.2%, 51.1%(P<0.05);与空病毒感染组比较,人食管平滑肌细胞感染Ad-GIRK4-shRNA后GIRK4 mRNA表达在24th、48 th、96 th分别为50.9%、14.7%、98.1%;Ads-GIRK4-shRNA在mRNA和蛋白水平使M2AChR的表达增加了19.6%,18.6%(P<0.05)。Ad-GIRK4-shRNA对IK1的电流密度无影响(P>0.05),使IKACh的电流密度下降了53%(P<0.05)。结论:Ad-GIRK4-shRNA可高效、成功转染人食管平滑肌细胞,其可能在mRNA和蛋白水平降低了GIRK4的表达,呈现剂量依赖和时间依赖性关系;提示人食管平滑肌细胞行RNA干扰GIRK4的表达是可能的;GIRK4的表达下降进而导致M2AChR表达的增高,IKACh的电流密度下降;表明GIRK4在食管M2受体-G蛋白-IKACh通路和IKACh通道中起重要作用,干扰GIRK4的表达具有潜在的治疗效应;为将RNA干扰技术引入食管运动功能障碍机制的研究、基因治疗提供了新思路。(本文来源于《第四军医大学》期刊2009-04-01）
刘晓霓,金秀东,李月珍,刘桂莲,孙卫[6]（2008）在《半夏泻心汤对食管炎大鼠食管平滑肌收缩调控蛋白基因和细胞内游离钙的影响》一文中研究指出目的:从食管运动角度探讨半夏泻心汤防治反流性食管炎的机制。方法:60只大鼠随机分为伪手术组、模型组、阳性对照组(西沙必利)和半夏泻心汤组(BX)。采用胃-十二指肠混合反流模型;应用多导生理信号记录仪观察离体食管肌条收缩情况;采用RT-PCR的方法观察食管平滑肌收缩调控蛋白基因表达情况;激光共聚焦的方法观察细胞内游离钙的变化。结果:与模型组相比,半夏泻心汤组大鼠食管离体肌条收缩幅度增强;调宁蛋白和钙调蛋白结合蛋白基因表达量降低;细胞内游离钙的浓度增加。结论:半夏泻心汤防治反流性食管炎的机制可能是通过下调调宁蛋白和钙调蛋白结合蛋白基因表达,增加细胞内游离钙的浓度进而增加食管平滑肌收缩能力实现的。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2008年11期）
聂祥碧,续华,卜一夫[7]（2008）在《小细胞肺癌并食管平滑肌肉瘤1例》一文中研究指出1病例报告患者男,78岁。因进行性乏力5年,伴下肢肌肉肿胀、行走困难1个月于2004-03-19入住本院。5年前患者于旅游途中出现乏力,休息后症状无减轻,下肢无力进行性加重,因未明显影响日常生活未作进一步诊治。1个月前出现下肢肌肉肿胀、乏力明显,行走困难(本文来源于《新医学》期刊2008年08期）
平静,黄炳臣,卢运龙,唐习强,陈宏明[8]（2008）在《食管低分化鳞状细胞癌合并食管平滑肌瘤1例》一文中研究指出1病例简介患者,男,57岁,进行性吞咽困难4月余,伴明显的食物滞留感。体检:浅表淋巴结不肿大,心肺(-),肝脾不大。胃镜示“食管上段癌”,胸部、腹部CT未见明显异常。手术所见:食管颈段近咽部胸廓入口上方约1cm处见一大小约2.5cm×2cm×1cm肿物,(本文来源于《右江民族医学院学报》期刊2008年02期）
徐恩斌,张忠兵,谢渭芬,宁守斌,林勇[9]（2004）在《乙酰胆碱酯酶基因重组腺病毒的构建及其对猫食管平滑肌细胞的影响》一文中研究指出目的:利用AdEasy系统构建乙酰胆碱酯酶催化亚单位(AChET)重组腺病毒(AdAChET),并观察其对平滑肌细胞的影响. 方法:将质粒pEFbos/AChET扩增、酶切获得AChET cDNA 片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack- CMV-AChET,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd AChET,经293 细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad AChET;将Ad AChET体外感染猫平滑肌细胞,以RT-PCR检测AChET 在平滑肌细胞的表达;同时测定胆碱酯酶活力. 结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd AChET; 经293细胞包装,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得约4×1013efu/L滴度的重组病毒;AdAChET体外感染平滑肌细胞3 d后,AChET 表达明显增加,乙酰胆碱酯酶活力较Ad GFP感染组和阴性对照组明显增加(0.546±0.048 vs 0.495±0.039,0.546±0.048 vs 0.501±0.037)(P均<0.01). 结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和AChET的重组腺病毒Ad AChET;Ad AChET 体外感染平滑肌细胞可显着提高AChET的表达,这将为基因治疗贲门失弛缓症提供新的手段.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2004年01期）
宁守斌,张忠兵,谢渭芬,杨秀疆,邱镇[10]（2003）在《内皮型一氧化氮合酶重组腺病毒表达载体的构建及其在食管平滑肌细胞中的表达和调控》一文中研究指出背景:一氧化氮(NO)是一种重要的抑制性神经递质,其合成障碍与多种胃肠道动力障碍性疾病的发生密切相关。目的:构建四环素调控的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)重组腺病毒表达载体,实现eNOS在食管平滑肌细胞(ESMC)中表达的精确调控。方法:可调控重组腺病毒表达载体的构建分为3个步骤:首先,将编码目的基因eNOS的全长cDNA定向克隆于穿梭质粒pTRE-Shuttle中,获得一个能被四环素或其类似物强力霉素调控的表达盒(Tet-responsive expression cassette):然后,将表达盒与腺病毒DNA(Adeno.XTM viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒Ad-eNOS;最后,Ad-eNOS转染人胚肾293细胞后被包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒Adeno-X-TRE-eNOS。用Adeno-X-TRE-eNOS和调控病毒Adeno-X.Tet-off共感染体外培养的ESMC,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot评价eNOS在靶细胞中的表达以及强力霉素对表达强度的调控情况。结果:体外连接法成功构建了可调控重组腺病毒表达载体Adeno-X-TRE-eNOS,其与调控病毒共感染ESMC后,RT-PCR和Western blot出现阳性结果。加入不同浓度的强力霉素可以抑制eNOS基因的转录强度,其抑制作用呈剂量-效应关系,强力霉素浓度达到0.01μg/ml时可以完全关闭目的基因的表达。结论:采用体外连接法成功构建了可?(本文来源于《胃肠病学》期刊2003年01期）
人食管平滑肌细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及鉴定目的:探索最简单、有效的原代食管胃结合部平滑肌细胞培养方法并鉴定平滑肌细胞特有表型。方法:选取2015年1月至2017年10月在河北医科大学第四医院因中高位食管癌行食管大部切除术患者食管胃结合部平滑肌组织共24例,分别以酶消化法(enzymatic digestion with tissue blocks,ED)和组织块法(explant culture with tissue blocks,EC-T)进行平滑肌细胞原代培养。ED组中,消化酶选择胶原酶Ⅱ(collagenaseⅡ)和胰酶/EDTA消化液(Trypsin/EDTA),并以不同消化酶浓度结合不同消化温度和消化时间探索最佳获取原代细胞方法,记录每200倍镜视野可见贴壁细胞个数(Cells/200×)和原代细胞生长至第一次传代所需时间(first passage day,FPD);EC-T组中,对比传统组织块贴壁法(explant culture with tissue blocks,T)与胰酶消化辅助法(explant culture with trypsin digested-tissue,TD-T)和直接利用酶消化法中组织块内注射胶原酶Ⅱ提取细胞后的剩余组织块(explant culture with enzyme injected-tissue,EI-T)叁种方法,记录初次见到细胞由组织块爬出时间(visibility of cells migration,VCM)、FPD、初次分瓶时已爬出细胞的组织块所占比例(Positive blocks(%)),选择效率最高的原代细胞培养方法;以CCK-8测定体外培养的细胞在平滑肌细胞培养基(smooth muscle cell medium,SMCM)和含10%新生牛血清的DMEM/F-12(10%-F12)培养基中的增殖的情况,并采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)、realtime RT-PCR、免疫荧光(immunofluore-scence,IF)、incellwestern方法检测平滑肌组织和所获得细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM22α)、波形蛋白(vimentin)、肌间线蛋白(desmin)、分化抗原簇90(cluster of differentiation 90,CD90)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况,以对细胞进行鉴定。结果:ED和EC-T两种方法均可获得原代细胞。ED组以Cells/200×比较无统计学差异(P=0.864),但以FPD进行比较,可见以低浓度(0.5mg/ml)胶原酶Ⅱ注射入组织块内并低温(4℃)、长时间(14~24h)消化所得细胞的时间最短(中位时间8.00d,P<0.05);EC-T组中,以EI-T法获得的原代细胞在VCM(中位时间6.00d,P<0.05)、FPD(中位时间15.50d,P<0.05)、Positive blocks(%)(中位比例86.00%,P<0.05)方面均优于其他两种方法;ED组和EC-T组总FDP比较显示ED组明显短于EC-T组(P=0.000)。所培养原代细胞以梭型和长梭形为主,大小不均,可自行沿一定方向生长,表现为峰谷样图案;在SMCM中增殖良好,但在10%-F12中增殖效果不佳。这些细胞在SMCM中可传代至第6~8代,但在10%-F12中仅可传至第3~4代;细胞会随着传代次数增加体积逐渐增大并丧失梭形结构。原代培养的细胞同相应平滑肌组织一样,均可检测到α-SMA、SM22α、Vimentin、Desmin、CD90和PCNA的mRNA和蛋白,但不同体外培养条件下其平滑肌标志物表达水平不同,以10%-F12培养的细胞平滑肌标志物表达水平均高于SMCM组。结论:以平滑肌标志物鉴定ED法和EC-T法所获得的细胞为平滑肌细胞,提取食管胃结合部平滑肌细胞进行体外培养是可行的;ED法获得的细胞培养周期短;以SMCM培养平滑肌细胞可有效扩大细胞种群,但以10%-F12培养的细胞具有更好的平滑肌细胞表型。第二部分乙酰胆碱对体外培养人食管胃结合部平滑肌细胞内钙离子浓度的影响目的:使用乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对体外培养的人食管胃结合部(esophagogastric junction,EGJ)平滑肌细胞内钙荧光变化的影响,明确各种平滑肌细胞内钙荧光变化特点,确定最佳体外人源性EGJ平滑肌细胞培养方式。方法:选取2016年11月至2017年10月因中高位食管癌行食管大部切除术患者共9例,以酶消化法和组织块法获取套索纤维、钩状纤维、食管环行肌、食管纵行肌、胃小弯侧环行肌和胃大弯侧环行肌6种人EGJ原代平滑肌细胞并分别以平滑肌培养基(smooth muscle cell medium,SMCM)和含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基(10%-F12)进行培养。以5μmol/L Fluo-3/am溶液负载体外培养的SMCM第3代和10%-F12第2代EGJ平滑肌细胞,在共聚焦显微镜下观察10~-66 mM Ach对有钙缓冲液和无钙缓冲液中平滑肌细胞内钙荧光的影响,记录荧光活动的起始值、峰值和结束值并记录相应时间长度,对比同种组织来源细胞钙荧光在有钙缓冲液和无钙缓冲液以及钙活动前后的差异。结果:不同培养基培养的EGJ平滑肌细胞存在不同的基础钙荧光。各组细胞加入Ach约2 s后即可见细胞内钙荧光变化。食管纵行肌细胞、胃大弯侧环形肌细胞和胃小弯侧环形肌细胞钙荧光活动相对于套索纤维细胞、钩状纤维细胞和食管环行肌细胞温和。在含钙缓冲液中,各种细胞的基础钙荧光强于无钙缓冲液,且钙活动总时间长,但荧光峰值不高。在无钙缓冲液中,酶消化法获得的细胞钙荧光更多见典型的细胞内存储钙离子释放,且仍可见较长时间钙活动。钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌和胃小弯侧环形肌以细胞内存储钙离子释放为主要特点,而食管纵行肌、胃大湾环形肌以细胞外钙离子内流为主要特点;以酶消化法获取并以10%-F12培养的钩状纤维细胞、套索纤维细胞、食管环行肌细胞和食管纵行肌细胞在有钙缓冲液和无钙缓冲液中的钙离子活动峰值荧光差均有统计学差异。组织块法获取的细胞中,仅胃大弯侧环行肌和以10%-F12培养的套索纤维细胞峰值荧光差存在统计学差异,且各组细胞钙活动特点不如酶消化法组细胞典型。结论:在Ach诱发体外培养的EGJ平滑肌细胞内钙荧光变化过程中,钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌、食管纵行肌、胃大弯侧环形肌和胃小弯侧环形肌均不单纯依赖于某种钙离子活动,而是将细胞内存储钙离子释放与细胞外钙离子内流相结合以有效维持较长时间的钙活动。以酶消化法获取细胞并以10%-F12进行培养是最佳体外人EGJ平滑肌细胞培养方式。第叁部分钙离子相关蛋白及一氧化氮合酶在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌中表达的初步研究目的:明确参与细胞内Ca~(2+)变化的相关钙离子蛋白和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)在贲门失弛缓症(achalasia of the cardia,AC)患者腹段食管段环行肌的表达。方法:收集河北医科大学第四医院胸外科AC患者共10例为实验组,选取因中高位食管癌行食管大部切除术患者共17例为对照组。手术中收集两组贲门水平以上2~5cm以内腹段食管环行肌组织。以L-型钙离子通道(L-type calcium channel,LTCC)、叁磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5-triphosphate recptors,IP_3Rs)、雷诺定受体(ryanodine receptors,RyRs)叁种大分子蛋白和NOS为研究对象,分别采用realtime RT-PCR和免疫组织化学(SP法)技术检测LTCC、RyRs、IP_3Rs和NOS各亚型在实验组与对照组表达的差异,同时以RT-PCR扩增各cDNA并进行碱基测序以明确判断相应mRNA是否表达。检验实验组各受体mRNA相对表达量与食管综合松驰压(integrated relaxation pressure,IRP)是否存在线性关系。结果:通过对实验组和对照组腹段食管环行肌(esophageal circular smooth muscle of control,EC)组织cDNA扩增显示,各蛋白亚型mRNA中i NOS、n NOS、Cav1.2、Cav1.3、RyR2、IP_3R1、IP_3R2和IP_3R3在两组中均为阳性表达,但eNOS、Cav1.1、RyR1、RyR3不表达;经统计分析,iNOS、n NOS、Cav1.3、IP_3R1和IP_3R2的mRNA在AC表达均增高;iNOS和Cav1.3相对mRNA表达量与IRP之间存在正相关关系。通过免疫组织化学技术检测,在实验组和对照组平滑肌组织中n NOS、Cav1.2、Cav1.3、IP_3R1、IP_3R2、IP_3R3和RyR2 7种蛋白均表达,其中n NOS局限分布于AC平滑肌组织中的神经纤维并呈强阳性染色,但平滑肌细胞质染色较对照组明显浅淡。经统计分析仅IP_3R2在AC表达升高且与mRNA表达情况一致,两组中其余蛋白表达无统计学差异。结论:在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌病理变化中,NOSs依然参与食管平滑肌病理状态的调节,但iNOS mRNA异常增高且n NOS在平滑肌细胞的表达明显减少;钙离子相关蛋白表达异常的肌源性因素也许在贲门失弛缓症病理生理机制中扮演着重要角色。结论:1.以平滑肌标志物鉴定酶消化法和组织块法所获得的食管胃结合部平滑肌组织来源的细胞为平滑肌细胞,提取食管胃结合部平滑肌细胞进行体外培养是可行的。在酶消化法中,以低浓度(0.5mg/ml)胶原酶Ⅱ注射于组织块并在低温(4℃)、长时间(14~24h)条件下消化的方法获取平滑肌细胞效率最佳且细胞培养周期短;以此残余组织块直接用于组织块培养法,其获取平滑肌细胞的效率最佳。体外培养的平滑肌细胞以合成型为主,形态学表现多为梭型和长梭形;在不同培养条件下其平滑肌特异性标志物的表达水平不同;以专业培养基培养平滑肌细胞可有效扩大细胞种群,但以含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基培养的平滑肌细胞拥有更好的平滑肌细胞表型。2.在Ach诱发体外培养的食管胃结合部平滑肌细胞内钙荧光变化过程中,体外培养的钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌和胃小弯侧环形肌细胞以细胞内存储钙离子释放为主要特点;食管纵行肌、胃大弯侧环形肌细胞以细胞外钙离子内流为主要特点。但以上细胞均不单纯依赖于某种钙离子活动,而是将细胞内存储钙离子释放与细胞外钙离子内流相结合以有效维持较长时间的钙活动,尤以酶消化法获取并以含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基进行培养的平滑肌细胞在乙酰胆碱介导的细胞内钙离子浓度变化中表现最佳,可作为最佳人EGJ平滑肌细胞体外培养方式。3.在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌病理变化中,一氧化氮合酶依然参与食管平滑肌病理状态的调节,但诱生型一氧化氮合酶mRNA异常增高且神经元型一氧化氮合酶在平滑肌细胞的表达明显减少。钙离子相关蛋白表达异常的肌源性因素也许在贲门失弛缓症病理生理机制中扮演着重要角色,其与一氧化氮合酶的相应变化在贲门失弛缓症病理生理过程中的作用应受到关注。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人食管平滑肌细胞论文参考文献
[1].黄棪,鲁军,王霞,杨东升,张俊杰.旋覆代赭汤含药血清对食管平滑肌细胞5-羟色胺4受体、环磷酸腺苷及钙离子浓度的影响[J].中医杂志.2019
[2].高杨.人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究[D].河北医科大学.2018
[3].张盈盈,齐元富.食管平滑肌肉瘤合并小细胞神经内分泌癌一例报告并文献复习[J].中华肿瘤防治杂志.2015
[4].卢强,黄立军,张志培,刘同刚,李小飞.人食管平滑肌细胞Kir3亚型表达的实验观察[J].中华肿瘤防治杂志.2012
[5].卢强.RNA干扰人食管平滑肌细胞GIRK4基因表达的实验研究[D].第四军医大学.2009
[6].刘晓霓,金秀东,李月珍,刘桂莲,孙卫.半夏泻心汤对食管炎大鼠食管平滑肌收缩调控蛋白基因和细胞内游离钙的影响[J].中国实验方剂学杂志.2008
[7].聂祥碧,续华,卜一夫.小细胞肺癌并食管平滑肌肉瘤1例[J].新医学.2008
[8].平静,黄炳臣,卢运龙,唐习强,陈宏明.食管低分化鳞状细胞癌合并食管平滑肌瘤1例[J].右江民族医学院学报.2008
[9].徐恩斌,张忠兵,谢渭芬,宁守斌,林勇.乙酰胆碱酯酶基因重组腺病毒的构建及其对猫食管平滑肌细胞的影响[J].世界华人消化杂志.2004
[10].宁守斌,张忠兵,谢渭芬,杨秀疆,邱镇.内皮型一氧化氮合酶重组腺病毒表达载体的构建及其在食管平滑肌细胞中的表达和调控[J].胃肠病学.2003