导读:本文包含了无机焦磷酸酶基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:芒果,PPase,基因克隆,表达载体构建
无机焦磷酸酶基因论文文献综述
白蓓蓓,荆永琳,蔡秉宇,蓝丽,王佳[1]（2019）在《芒果无机焦磷酸酶基因的克隆及其表达载体构建》一文中研究指出无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)催化焦磷酸(PPi)水解为2个无机正磷酸(Pi),是蔗糖合成途径中的调控关键节点之一。本研究根据已经报道的PPase基因的序列设计兼并引物,采用3′RACE和5′RACE方法,从贵妃芒果的果实中克隆得到了一个芒果PPase基因,将其命名为MiPPase,其全长cDNA序列为1014 bp,开放阅读框为837bp,编码278个氨基酸,分子量为30.85ku,等电点为4.68。通过系统发育分析发现该基因编码的蛋白与红花烟草具有较近的亲缘关系。为深入探究MiPPase基因在蔗糖代谢过程中的作用,本研究成功构建出pGreenII62-SK-MiPPase基因过量表达载体,为后续研究MiPPase基因在芒果果实蔗糖合成的作用机理提供理论依据。(本文来源于《热带作物学报》期刊2019年02期）
刘东让,肖栋,侯喜林[2]（2018）在《普通白菜无机焦磷酸酶基因BcPPase的克隆及表达分析》一文中研究指出植物无机焦磷酸酶(pyrophosphatase,PPase)是一种以无机焦磷酸(pyrophosphate,PPi)为底物的水解酶。通过无机焦磷酸酶来改变PPi的含量可以实现糖代谢途径的调控,从而调控植物的生长发育。为研究普通白菜无机焦磷酸酶基因BcPPase(Brassicarapasubsp.chinensisinorganic pyrophosphatase)的结构和表达特征,通过RACE技术,从普通白菜品种‘苏州青’叶片克隆到BcPPase的全长cDNA序列;采用RT-qPCR分析该基因在植物不同组织中及在盐、低温和高温处理下的表达模式;用SDS-PAGE技术分析该基因的原核表达特征。BcPPase基因的克隆及表达分析,为下一步蛋白水平研究和转基因功能研究提供了条件,也将为高产、优质普通白菜新品种的选育提供重要的理论依据。以普通白菜‘苏州青’为试验材料。人工气候箱中培养,每日22℃光照培养16 h,16℃暗培养8 h,相对湿度85%±5%。待催芽28 d(5～6片真叶)后,分别用100 mmol·L~(-1) Na Cl、16℃/12℃(昼/夜)及32℃/28℃(昼/夜)对选出的植株进行处理。组织特异性表达分析使用的材料取自普通白菜植株苗期(催芽后28d)的根、茎、叶。胁迫处理表达分析分别在处理后2、6、12、24和48 h进行取样。每个样取3个重复。上述材料取样后立即在液氮中冰冻,保存在–70℃冰箱中。序列分析结果发现BcPPase的cDNA全长为1 062 bp,其中开放阅读框长度为636 bp,共编码212个氨基酸;预测其编码蛋白质化学式为C_(1109)H_(174)7)N_(297)O_(320)S_8,相对分子质量为24.6×10~3 Da,理论等电点pI是5.91,属于酸性蛋白,不稳定指数为47.97,属于不稳定蛋白,脂肪指数为92.83;该蛋白属于亲水性蛋白,总平均疏水指数(GRAVY)为–0.426;该蛋白无信号肽,并且不存在跨膜区域;该蛋白二级结构为α螺旋、延伸链和无规则卷曲,分别占28.77%和23.58%和47.64%;该基因在起始密码子ATG之前有A,符合Koza规律;在3′端有poly(A)尾,这些都符合有效翻译的基因全长cDNA的特征;氨基酸同源性的系统进化分析表明,普通白菜BcPPase基因与同科植物的进化关系相近。RT-qPCR表达分析表明,BcPPase在普通白菜根、茎、叶中均有表达,其中叶中表达量最高,茎中最少;盐、低温和高温处理均能诱导BcPPase的表达,且表达量在盐处理6 h后达到峰值,温度处理12 h后达到峰值。原核表达载体经1.0 mmol·L~(-1) IPTG诱导4、6、8 h后表达出相对分子质量约为24×10~3 D的融合蛋白。(本文来源于《中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集》期刊2018-10-17）
赵爽,董栩,许燕,李国栋[3]（2017）在《滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究》一文中研究指出目的为了研究可溶性无机焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase)基因在滇重楼生长发育中的功能,对滇重楼的s PPase基因进行了克隆、序列分析和原核表达研究。方法根据滇重楼c DNA文库中筛选到的s PPase的EST序列,克隆了滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase的c DNA全长序列;运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析;将Pps PPase插入到原核表达载体p EASY-E1上,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行诱导表达。结果滇重楼中Pps PPase的开放阅读框ORF为621bp,编码206个氨基酸,与高粱中s PPase的氨基酸序列相似性最高为94%;Pps PPase编码的蛋白相对分子质量是23.4k Da,理论等电点p I为5.6,特异识别区域即位于98-104位之间即DNDPMDV。成功构建了原核表达载体p EASY-E1-Pps PPase,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经SDS-PAGE分析表明Pps PPase在大肠杆菌中能够表达,当IPTG诱导2h时表达量较高。结论首次从滇重楼中克隆得到可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase,为滇重楼生长发育分子机制的研究提供参考。(本文来源于《时珍国医国药》期刊2017年01期）
秦新民,万珊,李惠敏,覃屏生,张渝[4]（2015）在《沙田柚无机焦磷酸酶基因的cDNA克隆及序列分析》一文中研究指出植物自交不亲和性是植物生殖过程中普遍存在的一种现象,是植物特异性识别并拒绝自身花粉或亲缘关系很相近的花粉的一种遗传机制。无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,IPPase)在植物生长发育方面起重要作用。该研究根据沙田柚花柱消减文库中EST序列(无机焦磷酸酶基因内部片段),设计了2对特异引物5'-GSP1,5'-n GSP1,3'-GSP2 and 3'-n GSP2,通过SMART-RACE PCR技术从所构建的沙田柚花柱抑制性消减文库中克隆了沙田柚无机焦磷酸酶基因的c DNA全长序列,利用Blastn、DNAman和Expasy软件对所克隆的基因进行同源性分析,以及基因编码的氨基酸的分子量、等电点、疏水性等理化性质分析。结果表明:IPPase基因c DNA全长为1 136 bp(Gen Bank登录号为KF990474),开放阅读框(ORF)全长为654 bp,共编码217个氨基酸,包括170 bp 5'UTR和312 bp的3'UTR;编码的蛋白质的分子量为24.4 k Da,等电点为5.96;蛋白结构域分析显示沙田柚IPPase与焦磷酸酶具有相同的保守结构域;对沙田柚IPPase蛋白质序列进行疏水性分析,结果表明沙田柚IPPase基因编码的肽链中疏水性最大值约为3.21,最小值约为-2.98,属于亲水性蛋白,无跨膜区域;Blastn搜索的结果显示,沙田柚IPPase基因序列与多种植物的IPP基因高度同源;序列分析表明,沙田柚IPPase基因核苷酸的同源性与毛果杨(Populus trichocarpa)和橡胶树(Hevea brasiliensis)IPPase基因均为87%;氨基酸序列与克莱门柚(Citrus clementina)无机焦磷酸酶完全一致。该研究结果可为深入研究无机焦磷酸酶在沙田柚自交不亲和中的作用机理提供基础。(本文来源于《广西植物》期刊2015年06期）
朱家红[5]（2013）在《橡胶树可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及表达调控》一文中研究指出天然橡胶是一种以聚异戊二烯为主要成分的天然高分子化合物,它的生物合成包括聚异戊二烯链的起始、延伸和终止叁个不同的生化过程。在延伸过程中,每延伸1个异戊二烯基,就要释放1分子焦磷酸(PPi),PPi的累积会抑制橡胶的生物合成,焦磷酸酶对PPi的及时水解,对橡胶的生物合成和橡胶产量具有重要的调控作用。本研究克隆了3个橡胶树可溶性无机焦磷酸酶基因,并对它们的分子特征和表达调控进行了相关的研究,旨在更深入的揭示橡胶树中可溶性无机焦磷酸酶的功能和作用机制。主要研究结果如下：克隆了3个橡胶树可溶性无机焦磷酸酶基因HbSIP1、HbSIP2和HbSIP3,分别编码216、215和216个氨基酸。3个基因编码区均包含8个外显子和7个内含子,内含子的剪接符合GT-AG原则。生物信息学分析表明,HbSIP1、HbSIP2和HbSIP3与其他植物中的可溶性无机焦磷酸酶均具有较高的同源性,具有典型的植物可溶性无机焦磷酸酶结构特征,含有24个特别保守的氨基酸残基(其中15个与蛋白的活性密切相关)和一个二价金属离子结合序列。构建了3个基因的原核表达载体pGEX-HbSIP1/2/3,并在大肠杆菌中表达获得了融合蛋白GST-HbSIP21/2/3。对3个融合蛋白GST-HbSIP1/2/3进行了纯化,纯化的蛋白都具有水解PPi的活性,且活性明显依赖Mg2+的存在；GST-HbSIP1/2/3的最适PH值分别为7.5、8.0和7.5；Km值分别为98.4μM、194.7μM和138.6μM。荧光定量PCR结果显示,HbSIP1/2/3在橡胶树叶、皮、花和胶乳中均有表达,其中HbSIP1和HbSIP3在胶乳中表达量显着高于其他组织。乙烯(ET)、茉莉酸(JA)、高温、低温、聚乙二醇(PEG)和H2O2等处理均能上调HbSIP1的表达,而水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)则下调HbSIP1的表达；HbSIP2在ET、JA、SA、PEG和H2O2等处理下表达上调,在高温处理下表达下调,而在ABA和低温处理下表达无明显变化；JA/SA、PEG和H202能上调HbSIP3的表达,高温和低温都能下调HbSIP3的表达,而ET处理后HbSIP3表达基本稳定。分别分离了HbSIPl/2/3的起始密码子ATG上游2297bp/1482bp和844bp的启动子序列,其中HbSIP15'端非编码区中存在一个1499bp的内含子。3个基因的启动子序列中均存在多个典型的真核生物启动子基本元件、应答激素和胁迫信号元件及转录因子结合元件。构建了分别含HbSIP1/2/3启动子序列1196bp、791bp和844bp的植物表达载体pCAMBI1381-P1/P2/P3,转基因植株的GUS活性检测表明P2和P3可以驱动GUS的表达。通过酵母单杂交初步筛选获得调控HbSIP1的转录因子1个(HbZF-HD)、调控HbSIP2的转录因子3个(HbGATA、HbWRKY和HbbHLH)、调控HbSIP3的转录因子2个(HbZF和HbMyb2)。荧光定量PCR结果表明6个转录因子在橡胶树叶、皮、花和胶乳中均有表达。通过酵母双杂交初步筛选获得与HbSIP1/2/3互作的蛋白41个,这些蛋白涉及蛋白合成、蛋白修饰与活性调节、胶乳基础代谢、橡胶生物合成、物质转运及信号转导等过程。双分子荧光互补实验进一步证HbSIP1/2/3均能与橡胶延伸因子互作。(本文来源于《海南大学》期刊2013-11-01）
朱家红,徐靖,于晓惠,畅文军,张治礼[6]（2013）在《橡胶树3个可溶性无机焦磷酸酶基因的原核表达》一文中研究指出焦磷酸酶对橡胶的生物合成具有重要的调控作用。将已克隆的3个可溶性无机焦磷酸酶基因的编码区插入到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建3个焦磷酸酶基因表达载体(pGEX-HbSIP1、pGEX-HbSIP2和pGEX-HbSIP3),再将表达载体转入大肠杆菌表达菌株进行诱导表达。结果表明:pGEX-HbSIP1、pGEX-HbSIP2表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,pGEX-HbSIP3只在补充稀有密码子的大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,表达率分别为35.4%、43.7%和18.5%。对原核表达的蛋白质进行纯化,获得3种可溶性重组蛋白GST-HbSIP1、GST-HbSIP2和GST-HbSIP3,总回收率分别约为7%、8%、3%。该结果为进一步研究这3种焦磷酸酶蛋白的分子特性、抗体制备及功能研究奠定基础。(本文来源于《热带作物学报》期刊2013年01期）
刘朝莹[7]（2012）在《鱼腥藻FACHB 709碱性磷酸酶基因无机磷饥饿应答调控反应》一文中研究指出蓝藻(蓝细菌)是一类古老的具有放氧光合作用的革兰氏阴性细菌,在漫长的自然选择过程中进化出独特的环境适应能力,广泛分布于不同的生境中。由于水体的富营养化,蓝藻常常爆发形成水华,甚至释放毒素,成为世界性的环境问题,引起公众的关注。对磷极高的生物利用率是蓝藻获得生态竞争优势、导致蓝藻水华发生的关键因素。虽然富营养化水体中磷源非常丰富,但蓝藻等微生物能直接利用的无机磷却很缺乏。因此,阐明蓝藻细胞利用不同形式磷源的代谢调控,对揭示蓝藻水华发生的分子机制、监测蓝藻水华发生具有重要的意义。鱼腥藻(Anabaena sp.)FACHB 709是来源于淡水湖泊(中国,武汉东湖)的一种丝状固氮蓝藻。该藻与模式生物鱼腥藻(Anabaena sp.)PCC 7120高度同源,具有遗传操作系统,可通过接合转移将重组基因导入细胞。本论文利用微生物学、生物信息学、生物化学和分子生物学技术,研究了不同磷源对鱼腥藻FACHB 709生长的影响、发现并鉴定了在藻细胞的磷代谢调控过程中具有关键作用的碱性磷酸酶基因,并通过分析多个碱性磷酸酶基因对不同磷源的表达调控及其生理功能,以期揭示鱼腥藻FACHB 709碱性磷酸酶基因在磷代谢调控中的作用机制。本论文包括以下主要研究内容和结果：(1)研究了不同种类、不同浓度磷源对鱼腥藻FACHB 709生长和碱性磷酸酶活性的影响,结果表明磷缺乏诱导藻细胞生长抑制而不是死亡；鱼腥藻细胞通过上调碱性磷酸酶活性应对磷饥饿。磷饥饿细胞在无机磷不存在的条件下,能利用有机磷G-6-P和pNPP获得部分生长。同时,有机磷的利用可在一定程度上导致细胞总碱性磷酸酶活性下降。(2)分析鱼腥藻FACHB 709和其它几种蓝藻的亲缘关系,发现鱼腥藻FACHB709是鱼腥藻PCC 7120和产水华蓝藻—多变鱼腥藻(Anabaena variabilis)ATCC29413的近源种。利用近缘种中公认的碱性磷酸酶基因序列,扩增并克隆了鱼腥藻FACHB 709中可能的碱性磷酸酶基因,对克隆的全基因DNA片段测序和分析,发现鱼腥藻FACHB 709中存在四个碱性磷酸酶基因,分别为phoA-709、phoDl-709、phoD2-709和phoS-709.(3)构建了鱼腥藻FACHB 709碱性磷酸酶基因启动子和β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的转录融合重组质粒,并将重组质粒接合转移到鱼腥藻FACHB 709,通过测定所得鱼腥藻调控报告菌株的β-半乳糖苷酶活性,分析四个碱性磷酸酶基因在不同浓度无机磷存在条件下的表达调控。结果表明,无机磷充足条件下,除了phoD2-709没有转录活性外,其余叁个碱性磷酸酶编码基因phoA-709、phoD1-709和phoS-709都有转录活性；无机磷缺乏条件下,四个碱性磷酸酶基因通过上调转录水平,参与鱼腥藻FACHB 709的磷代谢调控反应,其中以phoA-709的作用最为显着。(4)利用免疫学方法,研究了鱼腥藻FACHB 709中四个碱性磷酸酶基因在蛋白水平的表达和分布。结果显示无机磷缺乏条件下,四个碱性磷酸酶基因的表达水平全部升高,且它们的表达产物分泌到了细胞外培养基中。(5)构建碱性磷酸酶基因缺失突变株DRTH65 (敲除phoA-709)和DRTH61(敲除phoS-709),检查突变株的生长和生理表型,结果表明在实验条件下,突变株DRTH65和DRTH61的生长和碱性磷酸酶活性与野生型鱼腥藻的没有差异。通过分析单个碱性磷酸酶基因缺失后,其余APase基因的表达调控,发现在含磷和缺磷条件下,phoD1-709和phoS-709转录水平的上调一定程度上可弥补phoA-709的失活；而phoD1-709和phoA-709转录水平的上调则一定程度上弥补了phoS-709的失活。本论文得到以下主要结论：(1)无机磷是鱼腥藻FACHB 709细胞吸收和利用的主要磷源形式和关键生长因子；藻细胞通过调控碱性磷酸酶活性应对无机磷饥饿诱导的细胞生长抑制。(2)鱼腥藻FACHB 709是鱼腥藻PCC 7120的近缘种,并且具有与之相同的碱性磷酸酶基因组成和序列高度同源的碱性磷酸酶PhoA-709、PhoD1-709、PhoD2-709和PhoS-709.(3)磷饥饿诱导鱼腥藻FACHB 709中四个碱性磷酸酶基因phoA-709、phoD1-709、phoD2-709和phoS-709转录水平和翻译水平的上调,但转录水平上调的程度存在差异。其中,phoA-709在藻细胞磷源代谢调控中具有关键作用。(4)鱼腥藻FACHB 709中四个碱性磷酸酶PhoA-709、PhoD1-709、PhoD2-709和PhoS-709都是分泌型蛋白,缺磷诱导后分泌到细胞外培养基中。(5)phoA-709和phoS-709在鱼腥藻FACHB 709细胞磷代谢中具有重要作用但并非必需基因；phoA-709、phoD1-709和phoS-709编码的碱性磷酸酶可能在功能上重迭或互补。(本文来源于《江苏大学》期刊2012-04-01）
姬长合,王靖[8]（2012）在《酿酒酵母无机焦磷酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其意义》一文中研究指出目的:利用大肠杆菌表达酿酒酵母无机焦磷酸酶(Y-IPPA),获得具有活性的酿酒Y-IPPA。方法:以酿酒酵母基因组为模版,通过查询NCBI获得酿酒酵母无机焦磷酸酶序列,设计引物,用PCR方法获得酿酒Y-IPPA基因序列,插入克隆性载体pMD○R 19-T Simple Vector中,并转化至大肠杆菌DH5α扩增,获得重组质粒,经酶切及测序验证正确后,将酶切的目的片段插入到原核表达载体p ET28(a)中,再转化大肠杆菌DH5α扩增,经酶切及测序验证正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达蛋白,通过IPTG诱导表达出Y-IPPA,以金属离子亲和层析蛋白纯化系统纯化蛋白,并测定其比活和酶学性质。结果:获得与pMD○R 19-T SimpleVector一致的Y-IPPA碱基序列,构建了重组表达质粒pET28(a)-Y-IPPA,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导并进行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量为32 000处可见Y-IPPA蛋白条带;镍柱亲和层析纯化目的蛋白,其中一组的蛋白浓度、活性和比活分别为0.312g.L-1、31.13units.mL-1和99.73uints.mg-1。结论:成功制备Y-IPPA蛋白,为进一步研究其酶学性质奠定了基础。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2012年01期）
张宁,司怀军,柳娜,李有忠,刘海英[9]（2008）在《马铃薯无机焦磷酸酶基因cDNA在大肠杆菌中的表达及蛋白质特征分析》一文中研究指出通过调节蔗糖代谢途径中的协同因子无机焦磷酸(PPi)可以调控马铃薯块茎的休眠和发芽特性。本研究将马铃薯无机焦磷酸酶(PPase)基因(GenBank Accession No.:EF091820)与载体pET-28a融合,构建了原核表达载体pET-PPA,然后导入大肠杆菌BL21(DE3)中,经SDS-PAGE分析表明PPase基因在大肠杆菌中能够表达。用生物学软件对PPase基因及其编码的蛋白质分析表明,该PPase基因与与茄属的同源性高达89%~97%,与其他物种PPase基因的同源性在77%~80%之间;系统进化树分析表明PPase与茄科茄属和藜科甜菜属的进化类群最接近;其编码的蛋白质具有多个磷酸化位点,没有跨膜区;蛋白质二级结构预测显示,有63个氨基酸可能形成α-螺旋结构,38个氨基酸可形成延长链;通过亚细胞定位可知,它主要是一种细胞质和线粒体基质蛋白。(本文来源于《分子植物育种》期刊2008年06期）
司怀军,张宁,刘海英,李有忠,柳娜[10]（2008）在《马铃薯无机焦磷酸酶基因克隆及其遗传转化研究》一文中研究指出无机焦磷酸酶(pyrophosphatase,PPase)是以无机焦磷酸(pyrophosphate,PPi) 为底物的水解酶。通过无机焦磷酸酶米改变 PPi 的含量可以实现糖代谢途径的调控,从而调控马铃薯块茎的休眠与发芽特性。本研究从马铃薯栽培品种大西洋(Atlantic)叶片中提取总 RNA,用 RT-PCR 方法扩增到马铃薯 PPase 基因 cDNA,序列分析结果表明该 cDNA 全长673 bp, 开放阅读框架636 bp,编码211个氨基酸。该 PPase 基因已在 GenBank 中登记,登记号为 EF091820。用生物学软件对 PPase 基因及其编码的蛋白质分析表明,该 PPase 基因与茄属的同源性高达89%～97%,与其他物种 PPase 基因的同源性在77～80%之间:系统进化树分析表明 PPase 与茄科茄属和藜科甜菜属的进化类群最接近;其编码的蛋白质具有多个磷酸化位点, 没有跨膜区;蛋白质二级结构预测显示,有63个氨基酸可能形成α-螺旋结构,38个氨基酸可形成延长链;通过亚细胞定位可知,它主要是一种细胞质和线粒体基质蛋白。将该 PPase 基因与载体 pET-28a 融合,构建了原核表达载体 pET-PPA,然后导入大肠杆菌 BL21(DE3)中, 经 SDS-PAGE 分析表明 PPase 基因在大肠杆菌中能够表达。采用酶切和连接的方法,分别构建了强组成型启动子 CaMV 35S、块茎特异性表达启动子 CIPP 和低温诱导表达启动子 rd29A 驱动的正义和反义 PPase 基因植物表达载体,然后采用农杆菌介导法转化优良马铃薯栽培品种费乌瑞它(Favorita)和甘农薯2号,获得了转基因植株,目前正在进行转基因植株块茎休眠和发芽特性的评价。(本文来源于《中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）》期刊2008-10-01）
无机焦磷酸酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
植物无机焦磷酸酶(pyrophosphatase,PPase)是一种以无机焦磷酸(pyrophosphate,PPi)为底物的水解酶。通过无机焦磷酸酶来改变PPi的含量可以实现糖代谢途径的调控,从而调控植物的生长发育。为研究普通白菜无机焦磷酸酶基因BcPPase(Brassicarapasubsp.chinensisinorganic pyrophosphatase)的结构和表达特征,通过RACE技术,从普通白菜品种‘苏州青’叶片克隆到BcPPase的全长cDNA序列;采用RT-qPCR分析该基因在植物不同组织中及在盐、低温和高温处理下的表达模式;用SDS-PAGE技术分析该基因的原核表达特征。BcPPase基因的克隆及表达分析,为下一步蛋白水平研究和转基因功能研究提供了条件,也将为高产、优质普通白菜新品种的选育提供重要的理论依据。以普通白菜‘苏州青’为试验材料。人工气候箱中培养,每日22℃光照培养16 h,16℃暗培养8 h,相对湿度85%±5%。待催芽28 d(5～6片真叶)后,分别用100 mmol·L~(-1) Na Cl、16℃/12℃(昼/夜)及32℃/28℃(昼/夜)对选出的植株进行处理。组织特异性表达分析使用的材料取自普通白菜植株苗期(催芽后28d)的根、茎、叶。胁迫处理表达分析分别在处理后2、6、12、24和48 h进行取样。每个样取3个重复。上述材料取样后立即在液氮中冰冻,保存在–70℃冰箱中。序列分析结果发现BcPPase的cDNA全长为1 062 bp,其中开放阅读框长度为636 bp,共编码212个氨基酸;预测其编码蛋白质化学式为C_(1109)H_(174)7)N_(297)O_(320)S_8,相对分子质量为24.6×10~3 Da,理论等电点pI是5.91,属于酸性蛋白,不稳定指数为47.97,属于不稳定蛋白,脂肪指数为92.83;该蛋白属于亲水性蛋白,总平均疏水指数(GRAVY)为–0.426;该蛋白无信号肽,并且不存在跨膜区域;该蛋白二级结构为α螺旋、延伸链和无规则卷曲,分别占28.77%和23.58%和47.64%;该基因在起始密码子ATG之前有A,符合Koza规律;在3′端有poly(A)尾,这些都符合有效翻译的基因全长cDNA的特征;氨基酸同源性的系统进化分析表明,普通白菜BcPPase基因与同科植物的进化关系相近。RT-qPCR表达分析表明,BcPPase在普通白菜根、茎、叶中均有表达,其中叶中表达量最高,茎中最少;盐、低温和高温处理均能诱导BcPPase的表达,且表达量在盐处理6 h后达到峰值,温度处理12 h后达到峰值。原核表达载体经1.0 mmol·L~(-1) IPTG诱导4、6、8 h后表达出相对分子质量约为24×10~3 D的融合蛋白。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
无机焦磷酸酶基因论文参考文献
[1].白蓓蓓,荆永琳,蔡秉宇,蓝丽,王佳.芒果无机焦磷酸酶基因的克隆及其表达载体构建[J].热带作物学报.2019
[2].刘东让,肖栋,侯喜林.普通白菜无机焦磷酸酶基因BcPPase的克隆及表达分析[C].中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集.2018
[3].赵爽,董栩,许燕,李国栋.滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究[J].时珍国医国药.2017
[4].秦新民,万珊,李惠敏,覃屏生,张渝.沙田柚无机焦磷酸酶基因的cDNA克隆及序列分析[J].广西植物.2015
[5].朱家红.橡胶树可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及表达调控[D].海南大学.2013
[6].朱家红,徐靖,于晓惠,畅文军,张治礼.橡胶树3个可溶性无机焦磷酸酶基因的原核表达[J].热带作物学报.2013
[7].刘朝莹.鱼腥藻FACHB709碱性磷酸酶基因无机磷饥饿应答调控反应[D].江苏大学.2012
[8].姬长合,王靖.酿酒酵母无机焦磷酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其意义[J].吉林大学学报(医学版).2012
[9].张宁,司怀军,柳娜,李有忠,刘海英.马铃薯无机焦磷酸酶基因cDNA在大肠杆菌中的表达及蛋白质特征分析[J].分子植物育种.2008
[10].司怀军,张宁,刘海英,李有忠,柳娜.马铃薯无机焦磷酸酶基因克隆及其遗传转化研究[C].中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）.2008