导读:本文包含了转座子载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:过氧化物酶体生物合成因子2,Sleeping,Beauty转座子,水动力法尾静脉注射,小鼠
转座子载体论文文献综述
孙潇,蔡梦娇,张丹,韩苏夏[1]（2018）在《Sleeping Beauty转座子介导敲低PEX2转基因载体的构建》一文中研究指出目的借助Sleeping Beauty(SB)转座系统在小鼠肝脏中稳定过表达原癌基因MYC诱导小鼠肝癌形成,并在SB转座子pT3EF1α-c-Myc基础上构建可在小鼠体内敲低PEX2的重组转基因载体。方法借助水动力法尾静脉注射(Hydrodynamic tail vein injection,HTVI)和SB转座子系统向小鼠肝脏导入携带目的基因MYC的转座子质粒,诱导小鼠肝癌形成。以载体为模板,分别扩增U6-shNC、U6-shPEX2序列,通过T4连接获得目标载体pT3EF1α-c-MycshNC、pT3EF1α-c-Myc-shPEX2。结果 (1)实验组小鼠成功诱导出肝癌。(2)经酶切和测序等方法鉴定,构建质粒完全正确。(3)细胞瞬时转染实验质粒pT3EF1α-c-Myc-shPEX2及其对照质粒pT3EF1α-c-Myc-shNC,确定在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中实验组质粒可以降低PEX2的mRNA水平。结论借助HTVI技术和SB转座系统过表达c-Myc成功诱导小鼠肝癌形成,并在SB转座子质粒pT3EF1a-c-Myc基础上构建了可在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中敲低PEX2基因的重组转基因载体。(本文来源于《西部医学》期刊2018年09期）
胡广东,郝科兴,黄涛,曾维斌,谷新利[2]（2018）在《绵羊高效转基因通用型piggyBac转座子载体构建及功能验证》一文中研究指出piggy Bac(PB)是一种能在多种动物细胞中进行转座的DNA转座子,作为一种转基因工具已被广泛应用于各种哺乳动物转基因研究中。针对不同物种对PB转座子进行改造,是提升其通用性的必要手段。为构建基于绵羊细胞进行转基因操作的通用型PB转座子载体,本研究对PB转座酶(PBase)基因进行绵羊密码子偏好性优化并将其克隆到p BNW-TP1载体中,成功构建了PB转座子载体p BNW-TP2。将p BNW-TP2转染到绵羊成纤维细胞和乳腺上皮细胞中,利用G418筛选获取稳定转染细胞株;利用Tail-PCR检测稳定转染细胞株的PB转座位点,对细胞阳性克隆进行亚甲蓝染色;利用非配对t检验确认其转座效率。结果表明,p BNW-TP2成功介导了绵羊成纤维细胞和乳腺上皮细胞转基因阳性细胞株的生产;PB转座位点检测表明p BNW-TP2能特异性整合到绵羊基因组TTAA位点,其整合位点倾向于功能基因间;亚甲蓝染色统计分析结果提示p BNW-TP2介导的转基因效率显着提升。本研究成功构建了绵羊通用型PB转座子载体p BNW-TP2,并在绵羊体细胞中对其特性进行验证和分析,为PB转座子在绵羊体细胞中开展转基因相关研究提供了科学依据。(本文来源于《遗传》期刊2018年08期）
范伟[3]（2018）在《基于转座子载体高压注射的免疫缺陷小鼠体内多种人淋巴因子长期表达策略的研究》一文中研究指出研究目的:免疫系统人源化小鼠是研究最多应用最广的人源化小鼠之一,其特点是具有人的免疫系统,被认为是生物医药领域研究的理想小动物模型。经过几十年的研究和发展,该模型日趋成熟。但因缺乏某些人类细胞发育存活所必需的细胞因子,导致某些血系细胞重建效果不佳。有报道显示小鼠IL 4、GM-CSF、CSF、IL 3等细胞因子有种属特异性,与人类细胞无交叉反应。外源补充人IL15、EPO及IL 3给免疫系统人源化小鼠可增加人NK和红细胞的重建比例。因此,补充合适的细胞因子可弥补当前人源化小鼠模型髓系和红系细胞重建不佳的缺陷,使该模型得到更广泛的应用。因此本课题通过构建含有人IL 6、IL 3、IL 15、SCF、GM-CSF五种细胞因子的表达质粒,利用PiggyBac(PB)转座子体系将目的基因整合到宿主小鼠细胞基因组中实现长期表达,以此优化免疫系统人源化小鼠模型。研究方法:利用分子生物学手段构建含有人IL 6、IL 3、IL 15、SCF、GM-CSF五种细胞因子的表达质粒(PB-5F);经氨苄青霉素培养基筛选,挑取单克隆进行NheI和BamHI双酶切以及琼脂糖电泳筛选出含有目的基因大小的阳性克隆;阳性克隆送库美生物科技有限公司测序;采用细胞转染技术将含有绿色荧光蛋白基因的转座子质粒(PB-GFP)和PB转座酶质粒(Super PB)按2.5:1的比例共转染进入293T细胞系,利用倒置荧光显微镜和流式细胞术检测绿色荧光蛋白的表达;将目的质粒(PB-5F)(50μg/只)和Super PB(20μg/只)混合后高压注射入NCG免疫缺陷小鼠体内,在确定的时间点取小鼠血清,应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测5种细胞因子的表达、含量及持续时间。研究结果:PB-5F质粒经过双酶切和琼脂糖凝胶电泳证明,插入片段与目的基因5F片段大小相符,测序结果证明插入序列与5F基因序列一致。体外细胞转染实验显示,在细胞转染7天内瞬时转染组GFP阳性率与稳定转染组没有明显差异;随后瞬时转染组几乎检测不到GFP的表达,而稳定转染组可以维持30天以上的表达。小鼠血清中人的细胞因子在注射后第5天瞬时转染组和稳定转染组各细胞因子之间无统计学差异,与体外转染实验结果一致;2个月后稳定转染组依然能检测到人细胞因子的表达。研究结论:(1)成功构建了含有人IL 6、IL 3、IL 15、SCF、GM-CSF基因的PB转座子质粒PB-5F;(2)PB转座子体系可维持人类细胞因子在小鼠体内的长期表达。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-05-01）
沈丹,谢雨琇,李庆平,薛松磊,史云强[4]（2015）在《多转座子载体的构建及转座特性比较研究》一文中研究指出【目的】转座子(transposon,Tn)是染色体上可自主复制和移位的基本单位,普遍存在生物体基因组内,Sleeping beauty(SB)、piggy Bac(PB)和Tol2分别来源于鲑鱼、甘蓝尺蠖蛾和青鳉鱼,是目前脊椎动物中活性较高的转座子。比较了这3种转座子在哺乳动物细胞的转染、插入和剪切效率,从而获得细胞水平上的高活性转座子系统。【方法】通过高保真PCR法分别从SB、PB和Tol23种转座子载体克隆3种转座子3′和5′端的转座元件,测序正确后,将各转座元件依次亚克隆至p T2-HB载体框架,构建成包含这3种转座子的多转座子载体pT3-PST。将绿色荧光蛋白表达框CAG-GFP和新霉素表达框PGK-NEO分别克隆至p T3-PST载体,获得两个表达载体pT3-PST-CAG-GFP和pT3-PGK-NEO。将这两个表达载体分别和转座酶表达质粒pCMV-SB100X、p CMV-HAhy PBase、p CMV-Tol2以1﹕1质量比混合,经多聚阳离子PEI包裹,共转染小鼠胚胎成纤维细胞(3T3),同时以突变失活的转座酶质粒SB△DD与转座子载体共转染作为阴性对照组。转染GFP 36 h后,用荧光显微镜进行检测GFP表达率,提取细胞基因组,以Amp基因作为内参,进行实时荧光定量PCR,检测GFP插入拷贝数;根据被剪切位置上下游序列设计引物,进行实时荧光定量PCR,检测3种转座子的剪切效率。细胞转染NEO 48 h后,用浓度为500μg·m L-1的G418进行耐药性筛选,至正常细胞基本全部死亡(10 d),将细胞进行吉姆萨染液染色,统计耐药细胞数,从而比较各组转座活性。【结果】成功构建了多转座子载体PT3-PST、pT3-PST-CAG-GFP和pT3-PGK-NEO。实验组转染细胞效率均大于50%,且差异不显着(P>0.05)。SB组GFP相对拷贝数高于Tol2和PB组,但差异不显着(P>0.05),均显着高于对照组(P<0.05)。SB和PB组剪切效率显着高于Tol2组(P<0.05),但SB和PB组之间差异不显着(P>0.05)。pT3-PGK-NEO与转座酶共转染3T3细胞,G418抗性筛选结果表明,SB组耐药细胞数显着高于PB和Tol2组(P<0.05),但PB和Tol2两组差异不显着(P>0.05),此3组均极显着高于阴性对照组(P<0.01)。【结论】SB转座子系统在细胞水平的转座效率优于PB和Tol2,为细胞水平的转基因研究提供有效基因转移工具。(本文来源于《中国农业科学》期刊2015年11期）
黄惠,胡广东,康健,卿素珠,张涌[5]（2014）在《一种通用型piggyBac转座子诱导细胞永生化载体的构建及其基本功能验证》一文中研究指出为了构建一种高效、通用的细胞永生化载体pTP-hTERT,通过人工合成、PCR、酶切连接等方法,对传统piggyBac(PB)转座子系统进行改造。改造后的载体含有转座必需元件、PB转座酶(PBase)表达框、共表达筛选元件和人端粒逆转录酶(hTERT)基因表达框。其中筛选元件中绿色荧光蛋白(EGFP)基因和嘌呤霉素抗性(Puror)基因以猪捷申病毒2A自我剪切肽相连,以实现共表达。为验证载体元件功能,使用该载体转染HEK 293细胞,并对筛选出的阳性细胞进行RT-PCR、Western blotting(WB)、热不对称PCR(Tail-PCR)和细胞克隆亚甲蓝染色与统计分析。载体测序鉴定与细胞培养结果表明,通用型永生化载体pTP-hTERT构建成功,转染HEK293细胞后能筛选出抗嘌呤霉素细胞单克隆;WB结果显示P2A可高效切割EGFP和Puror融合蛋白,证明筛选标记基因功能正常;Tail-PCR结果表明该载体以转座整合插入宿主基因组;亚甲蓝染色统计结果显示由pTP-hTERT引发的细胞阳性克隆数与对照组相比显着提高(P<0.01)。PB转座子永生化载体pTP-hTERT的构建为永生化细胞系的建立提供了工具,同时也为其他真核载体的构建和改造提供了参考。(本文来源于《生物工程学报》期刊2014年08期）
何姗[6]（2014）在《表达猪端粒酶反转录酶转座子载体的构建及其在猪细胞永生化中的应用》一文中研究指出细胞培养技术是细胞生物学研究、医学、病毒分离培养与疫苗研发等研究领域不可欠缺的常用工具。细胞系具有一定的体外增殖能力,主要包括自发永生化细胞系和癌基因转化细胞系,前者为正常细胞,但自然发生几率很低；后者的建立相对容易,但细胞的核型、表型、分化等具有不同程度的改变,而且因含癌基因、抗性基因、病毒序列等安全隐患。因此,建立不含癌基因、抗性基因和病毒序列的永生化细胞系具有很好的应用价值。端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的特殊结构,与细胞分裂和衰老密切相关。端粒酶负责端粒的复制,由端粒RNA、端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)与端粒酶相关蛋白组成。研究实验资料显示,导入外源TERT基因不仅可使原代细胞永生化,而且建立的永生化细胞系为正常细胞。基因导入方法主要有重组载体转染法和病毒载体转化法,前者基因转染效率较低,通常需用抗性筛选来获得稳定的细胞克隆；后者转导效率较高,但存在病毒序列等安全隐患。转座子(transposon)是细胞基因组内可移动序列,不仅可作为基因转移载体,而且基因转移效率较高,不需通过抗性筛选即可获得稳定表达的细胞克隆。本研究将转座子的基因转移高效性与TERT的细胞永生化相结合,先以猪蛋白翻译延伸因子1a(elongation factor1a, EF-1a)启动子和生长激素polyA信号,构建SB转座子载体。经用绿色荧光蛋白报告基因细胞转染试验证明,猪源EF-1a启动子能在猪细胞中有效驱动目的基因表达,其转录活性与人巨细胞病毒的强早期启动子相当；用重组转座子载体与转座酶载体共转染猪成纤维细胞,反复传代后计数荧光阳性细胞克隆,结果显示SB转座子系统能有效介导报告基因整合。然后,用RT-PCR从猪源细胞克隆TERT cDNA,插入SB转座子载体,将重组载体pTEG-TERT与转座酶载体共转染猪肾原代成纤维细胞,培养后进行细胞克隆化,利用PCR检测从10个细胞克隆中筛选到不含抗性基因等载体序列的细胞克隆,在体外已传50代以上。细胞形态学观察结果显示,永生化细胞保持原代成纤维细胞的典型形态,并有相似的生长曲线；与原代成纤维细胞相比,永生化细胞的倍增时间随传代次数增加呈变短趋势,而克隆效率呈上升趋势；细胞周期检测结果显示,永生化细胞具有正常细胞的细胞周期,但细胞增殖能力明显增强；细胞表面标志检测结果显示,永生化细胞具有成纤维细胞的典型表面标志；细胞移植试验结果显示,永生化细胞在小鼠体内不具有肿瘤细胞的克隆形成能力：病毒感染与检测试验结果显示,永生化细胞保持原代成纤维细胞对猪伪狂犬病等病毒的易感性；支原体检测结果显示,永生化细胞系无支原体污染。这些研究结果表明,本研究构建的表达猪TERT的转座子载体可用于猪细胞永生化研究,建立的猪成纤维细胞系可用于猪病毒的分离培养和疫苗制备。(本文来源于《扬州大学》期刊2014-06-01）
李庆平[7]（2014）在《多转座子基因捕获载体的构建及捕获效率比较》一文中研究指出基因捕获技术,是目前应用前景很好的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变体库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知和已知功能的活化基因。转座子(Transposon,Tn)是基因组DNA上一段可移动序列,可通过自主切割从染色体一个位点转移至另一个位点。本研究结合基因捕获技术和转座子技术,构建了由Sleeping beauty (SB)、 piggyBack(PB)和Tol23转座子介导的启动子捕获载体,将此载体体外转染哺乳动物细胞及显微注射斑马鱼胚胎,在报告基因表达水平上系统比较了3种转座子的捕获效率。主要研究结果如下：1.通过高保真PCR法从人基因组克隆BCL2基因(B-cell CLL/lymphoma2)剪接受体(SA),序列测定和比对结果表明与目标序列同源性达到100%。将SA插入商品化质粒pIRES-GFP,获得包含SA-IRES-GFP-SV40polyA4个元件的启动子捕获框,经克隆测序表明所获序列与原序列同源性达100%。将此捕获框亚克隆至自行构建的多转座子载体pT3-PST,获得转座子介导的启动子捕获载体pT3-PST-Pro-Trap。将pT3-PST-Pro-Trap和3种转座酶表达质粒pCMV-SB100X、pCMV-HAhyPBase、pCMV-Tol2以1：1质量比分别共转染小鼠胚胎成纤维细胞3T3,同时以突变失活的转座酶质粒SB△DD与转座子载体共转染为阴性对照组。结果表明,实验组基因捕获效率均高于对照组,且PB组高于SB和Tol2组。2.用高保真PCR法从质粒PB-SB-PGK-NEO-bpA克隆新霉素抗性基因编码区(NEO),序列测定和比对表明克隆序列与原基因同源性100%。将NEO基因通过EcoRI和KpnI内切酶位点插入pcDNA3载体中,形成pcDNA3-NEO-bpA,然后将SA通过XmaI和BamHI位点插入pcDNA33-NEO-bpA,形成pcDNA3-SA-NEO-bpA。最后将SA-NEO-bpA通过XmaI和EcoRI位点插入pT3-PST载体,获得多转座子介导的启动子捕获载体pT3-NEO-Trap。将pT3-NEO-Trap与3种转座酶按照50：1、10：1、2：1、1：1、1：2的质量比共转染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和人宫颈癌细胞(HELA),经G418选择培养基筛选培养10-15d后,对细胞进行吉姆萨染色和计数。结果表明,SB、PB和Tol23组在MEF和HELA细胞的捕获效率显着高于对照组,PB组显着高于SB和Tol2组(P<0.05)；各比例之间存在明显差异,其中转座子和转座酶质量比为2：1时捕获效率最高。3.将pT3-PST-Pro-Trap质粒DNA和SB、PB、Tol2转座酶mRNA以1：1.5的质量比注射斑马鱼一细胞期胚胎,以未注射胚胎为对照组。每组重复叁次,每次注射胚胎数均在30枚以上。注射后分别于36h和60h在荧光显微镜下观察荧光表达情况,并记录这两个时期的胚胎成活率及阳性表达率。结果表明PB、SB和Tol23组胚胎在36hpf和60hpf均有GFP表达,36hpf期胚胎的SB、PB和Tol2捕获效率分别为24.32%、30.70%和18.87%,差异显着(P<0.05)；60hpf,PB捕获效率显着高于SB和Tol2(P<0.05),SB和Tol2差异不显着(P>0.05)。3种转座子在60hpf的捕获效率均高于36hpf,其中SB和Tol2组差异均达显着水平(P<0.05),而PB组差异不显着(P>0.05)。4.为了比较DNA转座酶和mRNA转座酶基因捕获效率,将商品化Tol2转座子介导的基因捕获载体pGBT-RP2-1分别和Tol2DNA转座酶及mRNA转座酶以1：1.5的质量比注射斑马鱼一细胞期胚胎,同时以未注射胚胎为对照组。每组重复至少3次,每次注射胚胎数均在30枚以上。注射后分别于36h和60h在荧光显微镜下观察荧光表达情况,并记录这两个时期的胚胎成活率、阳性表达率。结果表明：转座子载体pGBT-RP2-1在Tol2转座酶DNA、mRNA的介导下均能发生基因捕获。注射转座酶mRNA组的捕获效率显着高于注射DNA转座酶组(P<0.05)。综上所述,本研究成功构建了SB, PB和Tol2种转座子基因捕获载体；该捕获载体在哺乳动物细胞和斑马鱼胚胎可高效捕获内源活性基因3,且PB转座子系统在细胞和胚胎水平的基因捕获效率优于SB和Tol2;转座酶以mRNA形式提供可显着提高基因捕获效率。本研究为高等动物功能基因研究提供有效参考方法。(本文来源于《扬州大学》期刊2014-05-01）
黄惠[8]（2014）在《PiggyBac(PB)转座子细胞永生化载体的构建及其在BMECs中的初步验证》一文中研究指出转座子(transposon)是宿主基因组DNA中一类具有移动性的特殊序列，作为遗传重组因子广泛存在于生物基因组中。piggyBac(PB)转座子是一种依赖于PB转座酶的DNA转座子，大量研究表明PB转座子能识别哺乳动物细胞基因组中TTAA四碱基位点进行高效转座，作为一种安全高效的工具载体广泛应于转基因研究。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)存在于大部分干细胞和癌细胞中，以其自带的RNA为模板延长细胞染色体端粒长度。hTERT的表达和激活被认为是细胞永生化发生的重要事件。为了构建一种通用的细胞永生化载体，本研究将传统的PB转座子二元质粒系统整合为单质粒系统，引入优化的双报告基因筛选元件和hTERT表达框，提高了细胞永生化载体的转座效率、可操作性和安全性，在细胞永生化载体构建上进行了初步探索，也为其他真核载体的构建和改造提供了参考。同时，本研究选用牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells, BMECs)进行永生化载体的初步细胞验证，以期得到具有hTERT活性的牛乳腺上皮细胞，进而为牛乳腺上皮永生化细胞系的建立奠定基础。主要研究内容如下：1.设计合成一个一元piggyBac(PB)转座子为载体骨架，包含转座必须元件的5’TR和3’TR DNA序列、绝缘子核心序列CHS4、一个由TK启动子介导的PB转座酶(PBase)表达框和一个含有10个稀有酶切位点的多克隆位点(MCS)；引入由P2A连接绿色荧光蛋白(EGFP)和嘌呤霉素基因(Puro)的筛选元件和人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达框，在筛选元件两端引入两个方向相同的loxP序列，并对构建好的载体pTP-hTERT进行酶切和测序鉴定以及Cre–loxP剪切功能验证，结果表明，通用型永生化载体pTP-hTERT构建成功。2.使用pTP-hTERT转染HEK293细胞，进行阳性克隆筛选，通过RT-PCR、Westernblotting和热不对称PCR(Tail-PCR)检测hTERT基因表达、筛选元件P2A功能和转座整合位点侧翼序列；通过细胞克隆亚甲蓝染色和非配对t检验(student’s T-test)分析，比对染随机整合载体和pTP-hTERT整合效率。结果表明，转染后能筛选出表达EGFP的抗嘌呤霉素单克隆细胞，目的基因hTERT能正常转录，筛选片段P2A高效切割EGFP和Puro融合蛋白，载体以转座形式整合入宿主基因组，且PB转座整合效率显着高于随机整合效率(P<0.01)。3. pTP-hTERT转染牛乳腺上皮细胞，筛选阳性单克隆并进行hTERT表达检测，结果显示能够获得表达绿色荧光蛋白EGFP的抗嘌呤霉素单克隆细胞，获得的hTERTBMECs能够表达hTERT蛋白，并且该蛋白具有正常的端粒酶活性，初步验证结果证明pTP-hTERT能够应用于乳腺上皮永生化细胞系的建立。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2014-05-01）
谢雨琇[9]（2013）在《多转座子载体的构建及其在哺乳动物细胞和胚胎中转座活性研究》一文中研究指出转座子(Transposon, Tn),是染色体上可自主复制和移位的基本单位,普遍存在生物体基因组内,转座子从一个基因位点插入到另一个基因位点的过程称为转座。Sleeping beauty (SB)、piggyBac(PB)、Tol2是目前研究应用较多的3种DNA转座子。本实验主要包括：1.通过高保真PCR法从SB、PB、Tol2叁种转座子载体中获得叁种转座子5’和3’端的转座元件,将5个转座元件分别克隆至pMD19-T载体,序列测定和比对结果表明与发表的转座元件序列同源性为100%。将转座元件依次亚克隆至质粒载体pT2-HB,构建成多转座子载体pT3-PST。2.用限制性内切酶ScaI和PsiI将CAG-GFP表达框从载体pCAG-GFP中切出,通过MscI位点克隆至pT3-PST,获得pT3-PST-CAG-GFP。pT3-PST-CAG-GFP经多聚阳离子PEI包裹转染3T3细胞,荧光观察结果表明转染效率大于50%。将pT3-PST-CAG-GFP和叁种转座酶表达质粒pCMV-SB100X、pCMV-HAhyPBase、pCMV-Tol2以1：1质量比分别共转染3T3细胞,同时以突变失活的转座酶质粒SB△DD与转座子载体共转染为阴性对照组。细胞转染后48h绿色荧光蛋白观察结果表明转效率均大于50%,实验组转染效率高于对照组。以各组细胞基因组为模板,单拷贝基因Amp作为内参,荧光定量PCR法检测GFP相对插入拷贝数和转座酶剪切效率。结果表明SB组GFP相对拷贝数高于To12和PB组,且均高于对照组,SPSS分析差异显着性,结果显示,各组差异不显着p>0.05；SB、Tol2和PB叁组转座酶剪切效率比较中,SB组高于PB组,PB组高于Tol2组,SPSS分析差异显着性,结果显示,各组差异不显着p>0.05。3用高保真DNA聚合酶从质粒PB-SB-PGK-NEO-bpA中扩增获得约1700bp新霉素抗性基因(Neo),与pMD19-T载体连接,序列测定和比对表明克隆序列与原基因同源性100%,可用于后续实验。将NEO基因通过EcoRI和XmaI内切酶位点插入pT3-PST多转座子载体,连接后经PCR扩增及酶切鉴定,获得表达载体PT3-PKG-NEO.按上述细胞转染方法,将pT3-PKG-NEO与转座酶共转染3T3细胞,经G418选择培养基培养筛选5d后,经吉姆萨染色比较不同实验组阳性细胞数。单因素方差分析结果表明,SB组耐药细胞数显着高于PB和Tol2组(p<0.05),PB和T012两组差异不显着。此叁组均极显着高于阴性对照组(p<0.01)。4.将pT3-PST-CAG-GFP和叁种转座酶表达质粒pCMV-SB100X、pCMV-HAhyPBase、 pCMV-Tol2分别以1：1质量比混和,进行小鼠受精卵细胞质注射。注射后4d,待受精卵发育至囊胚期时荧光显微镜观察胚胎发育及荧光表达状况,结果表明叁组均可获得较高胚胎阳性率(54.67%、48.89%、38.89%)。其中SB和PB组显着高于Tol2组。综上所述,本研究成功构建了SB、PB、TOL2叁转座子载体；该多转座子介导的EGFP和NEO表达载体可在3T3细胞高效转座和表达,并可通过小鼠受精卵细胞质注射高效获得转基因阳性胚胎。研究结果提示SB转座子系统在细胞和胚胎水平的转座效率优于PB和Tol2。转座子介导法可显着提高细胞质显微注射效率。(本文来源于《扬州大学》期刊2013-10-01）
杨宁,昝林森,成功,付常振,李耀坤[10]（2013）在《piggyBac转座子介导的牛A-FABP表达载体的构建与鉴定》一文中研究指出【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨架序列、NEO-EGFP、α-actin启动子以及A-FABP基因序列,并将各个序列连接构建成转基因载体pPB-AFABP;用脂质体法将供体质粒pPB-AFABP和辅助质粒pCAG-PBase组成的PB二元系统及质粒pPB-AFABP分别转染牛成纤维细胞,通过G418筛选得到转基因细胞。【结果】经过酶切和测序鉴定,载体pPB-AFABP构建正确;PB二元系统的阳性克隆数明显多于转座子载体pPB-AFABP的克隆数;PCR鉴定结果表明,牛成纤维细胞中存在目的基因A-FABP。【结论】成功构建了转基因表达载体pPB-AFABP,且证实PB转座子在牛成纤维细胞中具有较高的转座活性。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2013年09期）
转座子载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
piggy Bac(PB)是一种能在多种动物细胞中进行转座的DNA转座子,作为一种转基因工具已被广泛应用于各种哺乳动物转基因研究中。针对不同物种对PB转座子进行改造,是提升其通用性的必要手段。为构建基于绵羊细胞进行转基因操作的通用型PB转座子载体,本研究对PB转座酶(PBase)基因进行绵羊密码子偏好性优化并将其克隆到p BNW-TP1载体中,成功构建了PB转座子载体p BNW-TP2。将p BNW-TP2转染到绵羊成纤维细胞和乳腺上皮细胞中,利用G418筛选获取稳定转染细胞株;利用Tail-PCR检测稳定转染细胞株的PB转座位点,对细胞阳性克隆进行亚甲蓝染色;利用非配对t检验确认其转座效率。结果表明,p BNW-TP2成功介导了绵羊成纤维细胞和乳腺上皮细胞转基因阳性细胞株的生产;PB转座位点检测表明p BNW-TP2能特异性整合到绵羊基因组TTAA位点,其整合位点倾向于功能基因间;亚甲蓝染色统计分析结果提示p BNW-TP2介导的转基因效率显着提升。本研究成功构建了绵羊通用型PB转座子载体p BNW-TP2,并在绵羊体细胞中对其特性进行验证和分析,为PB转座子在绵羊体细胞中开展转基因相关研究提供了科学依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转座子载体论文参考文献
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