导读:本文包含了反式二羟环氧苯并芘论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘,microRNA,mir-493-5p,人支气管上皮细胞
反式二羟环氧苯并芘论文文献综述
赵垚[1]（2011）在《miR-493-5p在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导恶变细胞中的功能研究》一文中研究指出目的:探讨在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中低表达的mir-493-5p在化学致癌物致癌过程中的作用。方法:运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-493-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的表达水平。瞬时转染miRNA的模拟物,改变16HBE-T中miR-493-5p的表达,检测转染后16HBE-T细胞的增殖能力。结果:16HBE-N细胞中mir-493-5p的表达水平是16HBE-T的0.28倍,在16HBE-T组过表达mir-493-5p后实验组细胞增殖能力下降。结论:mir-493-5p表达水平的改变对细胞的增殖能力有影响,在anti-BPDE恶性转化细胞中低表达的mir-493-5p可能发挥着类抑癌基因的作用。(本文来源于《科技信息》期刊2011年29期）
赵垚,刘焕英,李远奇,蒋义国[2]（2011）在《miR-542-3p在反式二羟环氧苯并芘诱导支气管细胞癌变中的作用》一文中研究指出目的:探讨反式二羟环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导恶变的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中,miR-542-3p在细胞恶性转化中的作用。方法:运用实时荧光定量PCR法验证miR-542-3p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(本文来源于《中国毒理学会第叁届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集》期刊2011-05-17）
韩志远,杨巧媛,刘斌斌,李远奇,蒋义国[3]（2011）在《miR-622抑制反式二羟环氧苯并芘诱导的恶变细胞的生长》一文中研究指出目的:通过植物抗癌剂白藜芦醇的抑癌作用,探索肺细胞中具有抑癌作用的小分子RNA(microRNA,miRNA)及其作用机制,探讨miRNA在抗环境致癌中的意义。方法:反式二羟环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化(本文来源于《中国毒理学会第叁届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集》期刊2011-05-17）
吴延,吴建军,韩志远,赵垚,蒋义国[4]（2010）在《miR-106a和miR-17-5p在反式二羟环氧苯并芘诱导细胞恶变中的作用》一文中研究指出背景:苯并[a]芘(B[a]P)是广泛分布于环境中的环境化学致癌物,其经代谢激活产生最终致癌物anti-BPDE后才具有致癌性。miRNA是非编码小RNA分子,能够通过与靶基因的3'端非翻译区配对结合引起翻译抑制或mRNA的降解而起到癌基因或抑癌基因的作用。本研究利用anti-BPDE诱导的恶性转化人类支气管上皮细胞(16HBE-T)探讨miRNA在化学致癌中的可能机制。目的:探讨miR-106a和miR-17-5p在化学致癌(本文来源于《广东省环境诱变剂学会、广东省预防医学会卫生毒理专业委员会2010年学术会议资料汇编》期刊2010-12-10）
吴延,蒋义国[5]（2010）在《miR-17-5p与反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导转化的人支气管上皮细胞生物学特性的关系研究》一文中研究指出目的探讨miR-17-5p对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)的生物学特性方面的影响。方法运用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的相对表达水平。通过瞬时转染miRNA模拟物及抑制剂,改变16HBE-T中miR-17-5p的表达,分析转染后16HBE-T的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡和软琼脂集落形成率等。结果转染前,16HBE-T中miR-17-5p表达水平是16HBE-N的2.35倍;转染后,转染miR-17-5p抑制剂组和转染miR-17-5p模拟物组中的miR-17-5p表达水平分别是16HBE-T的0.45和1.71倍。与抑制剂阴性对照组相比,转染了miR-17-5p抑制剂的试验组出现增殖能力下降、细胞周期阻滞和凋亡上升、克隆形成率下降。相反,转染了miR-17-5p模拟物的试验组与模拟物阴性对照组相比出现了增殖能力上调、凋亡减少,克隆形成率升高。结论 anti-BPDE恶性转化细胞中miR-17-5p成熟体表达水平改变能够影响16HBE-T的增殖能力、细胞周期和凋亡、克隆形成率,推断miR-17-5p在anti-BPDE致癌过程中发挥类癌基因作用。(本文来源于《环境与健康杂志》期刊2010年05期）
刘林华,蒋义国[6]（2010）在《反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导恶变细胞中miR-494和miR-22的功能及PTEN的表达》一文中研究指出目的分析反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化人支气管上皮细胞第30代(16HBE-T30)及其前期第15代细胞(16HBE-T15)miR-494及miR-22的表达水平,探讨其在化学致癌过程中的作用及对靶基因PTEN抑癌基因的调控。方法以16HBE-T30和16HBE-T15细胞为实验组,溶剂处理组分别为其相应的对照组细胞(16HBE-N30和16HBE-N15),用茎环结构逆转录引物定量RT-PCR检测四组细胞miR-494及miR-22成熟体表达水平。运用定量RT-PCR和Western blotting分别检测四组细胞PTEN mRNA和蛋白表达水平。运用miRNA前体及抑制剂对miNRA表达进行调控后,再检测PTEN的表达改变,并进行报告基因信号改变、细胞凋亡、软琼脂集落形成率等分析。结果 16HBE-T30中miR-494和miR-22表达水平分别是16HBE-N30的12.6和2.3倍,而16HBE-T15中miR-494、miR-22表达水平较16HBE-N15下降。16HBE-T30中PTEN蛋白表达量低于16HBE-N30。与前体阴性对照组相比,上调的miR-494和miR-22分别将PTEN蛋白的表达量降低至0.8和0.5倍,而降低的miR-494和miR-22分别将PTEN蛋白的表达量上调至1.3和1.5倍。在16HBE-T30细胞中,miR-494和miR-22表达下调均增强caspase-3/7活力,miR-494和miR-22表达上调则减弱其活力。miR-494和miR-22下调能够降低转化细胞的恶性程度。结论 anti-BPDE恶性转化细胞中miR-494和miR-22在转录后水平反向调控靶基因PTEN的表达,这两种miRNA在anti-BPDE致癌过程中发挥类癌基因作用。(本文来源于《环境与健康杂志》期刊2010年05期）
吴延[7]（2010）在《miR-106a和miR-17-5p在反式二羟环氧苯并芘诱导细胞恶变中的作用》一文中研究指出背景与目的苯并[a]芘(B[a]P)是第一个被发现的广泛分布于环境中的环境化学致癌物,其经代谢激活产生最终致癌物anti-BPDE后才具有致癌性。MiRNA是一类数量众多的非编码小RNA分子,能够通过与靶基因的3’端非翻译区配对结合引起翻译抑制或mRNA的降解而起到癌基因或抑癌基因的作用。本研究中,利用anti-BPDE诱导的恶性转化人类支气管上皮细胞(16HBE-T)探讨miRNA在化学致癌中的可能机制。使用qRT-PCR法测量miR-106a成熟体和miR-17-5p成熟体的表达水平,并进一步使用了特异的miRNA抑制剂和模拟物下调或上调恶性转化细胞里的miR-106a或miR-17-5p活性,以此来确定其表达高低对恶性转化细胞生物学特性的影响。结果显示,与对照细胞相比(16HBE-N),miR-106a和miR-17-5p在恶性转化细胞中存在过度表达。转染抑制剂沉默16HBE-T细胞的miR-106a或miR-17-5p后会抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡、抑制非依赖性生长。相反,转染模拟物上调16HBE-T细胞中的miR-106a或miR-17-5p水平后细胞表现出完全相反的特性。此外,对miR-106a还进行了裸鼠实验,结果发现,注射了转染miR-106a抑制剂的细胞的肿瘤组生长速度明显减缓,而注射了转染miR-106a模拟物的细胞的肿瘤组生长速度显着增快。这些结果表明miR-106a和miR-17-5p在化学致癌剂诱导的转化中可能起到癌基因的作用。因此,敲除恶变细胞中的miR-106a和miR-17-5p可能是一种潜在的治疗方法。方法1.检测miRNA的表达使用TaqMan MicroRNA assays试剂盒鉴定16HBE-N和16HBE-T细胞中miRNA的表达水平。2.瞬时转染miRNA模拟物和抑制剂按照Lipofectamine 2000说明书进行瞬时转染。模拟物转染组设试验组(miR-106a mimic和miR-17-5p mimic)和阴性对照组(mimic NC),抑制剂转染组设试验组(anti-miR-106a和anti-miR-17-5p)和阴性对照组(inhibitor NC),此外,还设置了转染试剂Lipofectamine 2000阴性对照组(Lipo-2000 NC)。转染5小时后评价转染效率,72小时后检测miRNA表达水平改变情况。3.细胞周期实验转染72小时后,用PI和RNase A着色,以流式细胞仪分析细胞周期。4.细胞增殖实验在96孔板里接种相同数量的16HBE-T细胞后,培养24小时,再分组进行转染。在转染后第五天用CCK-8试剂和酶标仪检测细胞的增殖能力。5.凋亡实验转染72小时后,使用Annexin V/PI试剂盒和流式细胞仪检测转染和非转染细胞的凋亡率。6.软琼脂实验将500个细胞重悬于1ml 0.3%低熔点琼脂糖,然后铺到已含1ml 0.6%半固体低熔点琼脂糖的12孔板里。低熔点琼脂糖用含10%血清的培养基配置。放置培养箱中培养3周后,计算克隆数。7.裸鼠试验转染24小时后,收集转染或未转染组细胞,用PBS重悬细胞使细胞密度为1×107个/ml,取0.2 ml皮下注射入5周龄的BALB/c裸鼠后腿内侧。成瘤后每五天测量肿瘤体积绘制生长曲线,饲养42天后,处死裸鼠,取出肿瘤称重、4%甲醛固定后进行病理鉴定。8.统计分析各实验组数据均以均数±标准差表示,采用SPSS17.0统计软件分析。满足正态分布且方差齐同的两组间miRNA表达差异的比较,采用两组独立样本的t检验;叁组以上的比较采用方差分析,组间两两比较方差齐同时采用LSD-t检验。不满足正态分布时采用非参数检验。显着性水平a=0.05。结果1. 16HBE-T细胞中miR-106a和miR-17-5p过表达16HBE-T细胞中的miR-106a成熟体和miR-17-5p成熟体表达水平分别是16HBE-N的2.9±0.2倍和2.3±0.1倍(P<0.05)。2. 16HBE-T细胞转染后miRNA表达改变与16HBE-T相比,转染miR-106a抑制剂或模拟物后miR-106a表达水平分别为0.3±0.1和1.9±0.3倍(P<0.05),转染miR-17-5p抑制剂或模拟物后miR-17-5p表达水平分别为0.4±0.1和1.7±0.2倍(P<0.05)。3.转染后细胞周期分布改变与inhibitor NC组比较,anti-miR-106a组和anti-miR-17-5p组均出现G0/G1期细胞比例增多、S期细胞比例减少(P<0.05)。与mimic NC组比较,转染miR-106a mimic后G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增多(P<0.05)。4.转染后细胞增殖能力改变与对照组相比,转染miR-106a抑制剂或模拟物后细胞的增殖能力分别降低了0.37±0.01和升高了0.45±0.07倍(P<0.05),转染miR-17-5p抑制剂或模拟物后细胞增殖能力分别降低了0.29±0.03倍和升高了0.34±0.02倍(P<0.05)。5.转染后细胞凋亡率改变抑制剂试验组比抑制剂对照组出现更高的凋亡率(P<0.05),而各阴性对照组与未转染组相比,凋亡率差别。同时,模拟物试验组与模拟物对照组相比凋亡率大幅下降(P<0.05)。6.转染后细胞集落形成率改变抑制剂试验组比抑制剂对照组和未处理组细胞出现更少的克隆数(P<0.05)。而模拟物试验组与模拟物对照组相比克隆数增多(P<0.05)。7.裸鼠实验在6种处理组中,anti-miR-106a组的肿瘤生长速度最慢(P<0.05),miR-106a mimic组的肿瘤生长速度最快(P<0.05),而16HBE-T组、Lipo-2000 NC组、inhibitor NC组、mimic NC组的肿瘤生长速度无明显差别。接种42天后收获肿瘤,结果发现,anti-miR-106a组的肿瘤平均重量(35.7±9.6 mg)明显低于inhibitor NC组的肿瘤平均重量(110.8±15.3 mg) (P <0.05)。miR-106a mimic组的肿瘤平均重量(340.4±23.1 mg)明显高于mimic NC组的肿瘤平均重量(127.6±21.9 mg) (P <0.05)。经病理学鉴定发现,注射此6种细胞的小鼠均生长出鳞状细胞癌。结论1.anti-BPDE诱导恶性转化的人支气管上皮细胞16HBE-T存在miR-106a和miR-17-5p成熟体表达上调。2.miR-106a和miR-17-5p成熟体表达水平改变能够影响16HBE-T细胞生物学特性。3.miR-106a和miR-17-5p在环境化学致癌剂诱导的细胞恶变中具有重要作用,是两个小分子癌基因,能抑制细胞凋亡,增加细胞恶性程度。本项目创新性:首次探讨了miR-106a和miR-17-5p在毒理学尤其是化学致癌领域中的功能,为癌症的机制研究提供了新依据。(本文来源于《广州医学院》期刊2010-05-01）
张丽娟,李觉[8]（2009）在《反式二羟环氧苯并芘诱导人支气管上皮细胞p53表达分析》一文中研究指出多环芳烃化合物(polycyc lic arom atic hydrocarbons,PAHs)是全球性有机污染物,在各种环境介质如空气、水、土壤、沉积物等中都广泛存在。PAHs中有相当一部分是致癌物,其中以苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,B(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2009年11期）
刘林华[9]（2009）在《反式二羟环氧苯并芘诱导恶变细胞中miR-494和miR-22对PTEN基因调控及其功能研究》一文中研究指出背景与目的苯并(a)芘(Benzo[a]pyrene, B[a]P)是一种常见的环境污染物,广泛存在于燃煤和吸烟过程中,是一种间接致癌物。流行病学和实验研究提示B[a]P暴露与人类肺癌的发生密切相关。PTEN抑癌基因的失活与人类多种肿瘤的发生发展相关。microRNA (miRNA)是最近发现的一类在多物种间高度保守、对基因具有负调控作用的非编码小分子RNA。最近研究发现,人类肿瘤中miRNA的异常表达常伴随着基因表达的异常改变。本研究利用B[a]P的代谢衍生物反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-benzo[a]pyrene-trans-7,8-diol-9,10-epoxide, anti-BPDE)诱导的恶性转化第30代人支气管上皮细胞(16HBE-T30)及其前期第15代细胞(16HBE-T15)为模型,分析microRNA-494(miR-494)和microRNA-22(miR-22)的表达,并利用生物信息学软件预测得到其共同的靶基因PTEN。通过miRNA过表达和抑制表达处理模型细胞,检测PTEN相应的表达改变,并利用报告基因证实作用靶序列。同时进一步研究了miRNA在致癌过程中的功能。本研究阐明了miRNA在B[a]P诱导细胞恶性转化过程中的作用及其对PTEN基因的调控行为,为肺癌的基因治疗和预防提供了进一步的理论依据。方法1.生物信息学预测利用TargetScan、Pictar和RNAhybrid等miRNA靶基因预测软件和网站,对可能作用于PTEN 3’端非翻译区(3’UTR)的miRNA进行预测分析。2. miRNA和PTEN表达水平的检测用SYBR Green定量RT-PCR检测经anti-BPDE恶性转化人支气管上皮细胞(16HBE-T30)及其前期第15代细胞(16HBE-T15),以及相应的对照细胞(16HBE-N30和16HBE-N15)中miR-494、miR-22成熟体和PTEN基因在mRNA水平的表达改变。对PTEN基因在蛋白水平的表达改变则利用Western blot检测。3. miRNA前体分子和抑制剂瞬时转染按照siPORT? NeoFX?说明书进行转染。前体转染组设实验组(pre-miR-494和pre-miR-22)和阴性对照组(pre-miR-nc),抑制剂组设实验组(anti-miR-494和anti-miR-22)和阴性对照组(anti-miR-nc)。24h后检测转染效率,72h后检测miRNA和PTEN表达改变情况。4.报告基因构建及双萤光素酶活力检测将含有野生型或突变型miRNA作用靶点的片段分别插入到pLG3载体的萤光素酶下游3’UTR中,重组后的载体分别命名为WT和MT,经EcoR I酶切鉴定并测序验证。用双萤光报告检测试剂盒进行萤光素酶活力检测,WT和MT均设有抑制剂处理组和阴性对照组(anti-miR-494、anti-miR-22和anti-miR-nc)及前体处理组和阴性对照组(pre-miR-494、pre-miR-22和pre-miR-nc)。采用Lipofectamin2000将RNA寡核苷酸与质粒DNA共转染,用pRL-TK海肾萤光素酶对转染效率进行标准化。5.细胞凋亡检测96孔板中进行细胞转染48h后,用ApoONE Homogeneous Caspase-3/7试剂盒,按说明操作,对各处理组细胞中Caspase-3/7活力进行检测,以阴性对照组进行标准化处理。Hoechst 33258细胞核DNA片段染色,6孔板中转染细胞60h后,无血清培养12h诱导细胞凋亡,4%福尔马林室温固定,PBS冲洗后进行Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察并计数凋亡细胞。6.软琼脂实验检测细胞集落形成率在6孔板中,每孔中加入底层琼脂,冷却30min后,再加入含1000个细胞的2ml顶层琼脂,待其凝固后,置于37℃CO2温箱中培养14d,观察并计数集落形成率。7.细胞划痕实验细胞转染24h后接种到24孔板,待其长至完全融合。用小吸头在平板上进行划线,再以无血清培养基将脱落的细胞冲洗干净,37℃培养24h后,显微镜下拍照。8.统计分析各实验组数据按均数±标注差(±s)表示,并根据资料的性质利用SPSS13.0统计软件分别进行方差分析和t检验。P <0.05为有显着性差异。结果1.生物信息学分析运用生物信息学软件分析表明,在PTEN 3’UTR中存在miR-494和miR-22的3个潜在作用靶点,miRNA与靶点之间的自由能绝对值较高,且靶序列在多物种间高度保守。2. 16HBE-T15和16HBE-T30细胞中miRNA和PTEN的表达16HBE-T30细胞中,miR-494、miR-22表达水平分别是16HBE-N30的12.6±1.7倍和2.3±0.1倍(P<0.05);而在16HBE-T15细胞中,miR-494和miR-22表达水平分别是16HBE-N15的0.34±0.1倍和0.62±0.1倍(P<0.05)。定量RT-PCR检测PTEN mRNA的表达改变没有统计学差异(P>0.05),而Western blot分析16HBE-T30中PTEN蛋白表达是16HBE-N30的0.60±0.1倍(P<0.05),但16HBE-T15细胞的PTEN蛋白表达与16HBE-N15的比较无统计学差异(P>0.05)。miRNA表达与PTEN蛋白表达之间呈负相关关系。3. miRNA干扰后PTEN蛋白的表达改变转染抑制剂或miRNA前体72h后,抑制剂组的miRNA表达均呈下降趋势,而前体组呈上升趋势。相反,在miR-494和miR-22抑制剂处理组细胞中,PTEN蛋白分别上升0.27±0.1倍和0.48±0.02倍(P<0.05);在miR-494和miR-22前体处理组细胞中,PTEN蛋白分别下降0.16±0.09倍和0.48±0.1倍(P<0.05)。4.双报告基因检测确认miRNA靶基因重组载体经酶切和测序鉴定验证后,确认为目的重组载体(。1)不对miRNA进行干扰,转染WT载体的16HBE-T30组的标化萤光素酶值比16HBE-N30的低,同时也比转染MT载体组的低(P<0.05)。(2)对miRNA进行干扰,转染WT载体的抑制剂干扰组中,anti-miR-494组、anti-miR-22组和anti-miR-nc组的标化萤光素酶值分别为18.3%±1.1%、20.4%±0.9%和12.8%±0.5%,前二者均比后者高(P<0.05);转染MT载体的抑制组中3组间的标化萤光素酶值无统计学差异(P>0.05),但3组的标化萤光素酶值均比转染WT载体组中anti-miR-nc组的值高(P<0.05)。WT载体的前体干扰组中,pre-miR-494组、pre-miR-22组和pre-miR-nc组的标化萤光素酶值分别为6.4%±0.3%、5.8%±0.8%和10.8%±0.6%,前二者均比后者低(P<0.05);转染MT载体的前体组中3组间的标化萤光素酶值无统计学差异(P<0.05),而3组的萤光素值均比转染WT组中的pre-miR-nc的值高(P>0.05)。说明miR-494和miR-22对PTEN的调控作用是通过其靶点来实现的,作用靶点种子序列的突变可以使PTEN逃避miR-494和miR-22的调控。5. miR-494和miR-22参与细胞凋亡过程在16HBE-T30细胞中,抑制剂处理显示,转染anti-miR-494和anti-miR-22细胞的Caspase-3/7的活力比anti-miR-nc组的高,分别上升0.6±0.2和0.5±0.1倍(P<0.05)。前体组显示,转染pre-miR-494和pre-miR-22细胞的Caspase-3/7的活力分别是pre-miR-nc的0.82±0.03倍和0.84±0.05倍(P<0.05)。在16HBE-N30细胞中,pre-miR-494组(0.73±0.10倍)与pre-miR-22组(0.87±0.02倍)低于pre-miR-nc组(P<0.05)。Hoechst 33258 DNA片段染色显示,在16HBE-T30细胞中抑制miR-494和miR-22的表达能增加细胞凋亡比例。6. miRNA干扰后细胞集落形成率的改变anti-miR-494(5.9%±0.9%)和anti-miR-22(6.2%±1.1%)处理的16HBE-T30细胞与其阴性对照处理细胞(11.6%±0.9%)比较,集落形成率均明显降低(P<0.05)。7.细胞划痕实验anti-miR-494(50.6%±1.5%)和anti-miR -22(74.8%±2.5%)处理的16HBE-T30(93.9%±4.4%)细胞与其阴性对照处理细胞比较,生长细胞覆盖率均明显减少(P<0.05),说明细胞泳动能力明显降低。结论1. anti-BPDE诱导人支气管上皮细胞恶性转化存在早期阶段miR-494和miR-22成熟体表达下调,而晚期阶段表达明显上调的现象;而这两个阶段PTEN蛋白的表达与miRNA表达成相反的趋势,晚期明显下调。2. PTEN基因是miR-494和miR-22的靶基因,后二者通过前者的3个靶序列而发挥它们的调控作用,miR-494和miR-22的表达沉默或PTEN靶序列的突变可以终止它们对PTEN的调控作用。3. miR-494和miR-22在细胞恶变中具有重要作用,是两个小分子原癌基因,能抑制细胞凋亡,增加细胞恶性程度。本项目创新性:发现了miR-494和miR-22的肿瘤学意义,并揭示了这两个miRNA对PTEN基因的调控作用。(本文来源于《广州医学院》期刊2009-05-01）
傅娟,蒋义国,邹云锋,沈月兰,周兰兰[10]（2007）在《反式二羟环氧苯并芘对人支气管上皮细胞中HER2/neu基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨环境致癌物苯并(a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞HER2/neu基因表达的影响。方法利用半定量RT-PCR、SYBR GreenI实时定量RT-PCR(QRT-PCR)、Western blot及免疫细胞化学方法分别检测经2.0μmol/L反式BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化细胞(16HBE-T)与对照DMSO溶剂组未恶性转化细胞(16HBE-N)之间HER2/neu基因mRNA和蛋白表达水平的差异,及两组细胞内HER2/neu蛋白表达定位分析。结果经几种不同方法检测反式BPDE恶性转化人支气管上皮细胞中HER2/neu基因mRNA和蛋白水平都比对照溶剂组细胞(16HBE-N)表达显着升高(P<0.05)。HER2/neu蛋白定位在胞膜。结论反式BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化存在HER2/neu表达增高,其可能与原癌基因HER2/neu被激活作用有关。(本文来源于《卫生研究》期刊2007年06期）
反式二羟环氧苯并芘论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨反式二羟环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导恶变的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中,miR-542-3p在细胞恶性转化中的作用。方法:运用实时荧光定量PCR法验证miR-542-3p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反式二羟环氧苯并芘论文参考文献
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