导读:本文包含了褶皱假丝酵母论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:CRL,固定化,丁酸香叶酯,CFBR
褶皱假丝酵母论文文献综述
王璐[1]（2018）在《非水相体系中褶皱假丝酵母脂肪酶催化合成丁酸香叶酯的研究》一文中研究指出丁酸香叶酯作为应用最频繁的萜类香料之一,被广泛用于食品、药物、香水和化妆品调配中。工业上目前应用的丁酸香叶酯化学合成法有明显缺点,酶法合成具备反应专一、反应条件温和以及产物分离容易等特点,具有诱人的应用前景。本文研究用褶皱假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa Lipase,CRL)在有机溶剂中催化合成丁酸香叶酯。首先用液相色谱分离合成的反应产物,通过FT-IR,NMR进行结构表征,确定产物为丁酸香叶酯,并建立了用GC测定产物浓度的分析方法。接着,通过单因素实验对游离酶的催化反应条件进行了优化,确定最佳反应条件为:溶剂正庚烷,加酶量9 mg/m L,分子筛添加量10 mg/mL,底物酸醇摩尔比1:1.5,反应时间3.5 h。在以上条件下,游离CRL催化丁酸香叶酯的酯化率达到90.7%。为深入理解CRL在有机相中催化合成丁酸香叶酯的反应机理,进行了动力学研究,明确该反应机理符合Ping-Pong Bi-Bi机制,香叶醇与丁酸都对CRL有竞争性抑制作用。根据非线性模拟得到动力学参数,进一步描述了反应机理。从实际应用考虑,对CRL进行固定化。选择阳离子交换树脂D151作为固定化载体,最优固定化条件为:酶液浓度15 mg/mL,磷酸盐缓冲液pH 6.5,固定化温度45℃条件下,固定化8 h。蛋白质固定化率为88.5%,酶蛋白比活最高为195.6×10~4 U/g,酶活回收率为83.5%,固定化CRL具有较高的催化性能,丁酸香叶酯的酯化率可达到84.3%。对固定化酶的酶学性质研究发现,CRL经过固定化后最适温度没有变化,仍为40℃;热稳定性大大提高,在80℃下保温2 h后,固定化CRL催化丁酸香叶酯的酯化率仍能保持60%以上,而游离酶已经下降到16.4%;将固定化CRL进行7批次反应,其催化酯化率仍保持在75%以上,表明该固定化脂肪酶具有良好的重复使用稳定性。自制了实验室用小型循环流化床反应器(CFBR),用固定化CRL催化连续合成丁酸香叶酯,经优化的操作条件为:床层膨胀比1.6,进料流量0.07 m L/min(对应的平均停留时间4.7 h),丁酸浓度75 mmol/L,酸醇摩尔比1:1.5。在此条件下,连续反应12 h,酯化率稳定在77%。以上工作为此工艺的放大和工业应用提供了基础。最后利用ASPEN PLUS软件计算气液平衡,证明香叶醇与丁酸香叶酯之间的相对挥发度很高,可以通过常规蒸馏方法分离。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
张义芹,李青云,唐爱星,刘幽燕[2]（2015）在《氨基酸膨润土固定化褶皱假丝酵母脂肪酶的研究》一文中研究指出碱性钙基膨润土是一种新型的阴离子型层状黏土材料,由于其特殊的阴离子交换性能,具有广阔的应用开发前景。为了进一步认识碱性钙基膨润土,拓宽其应用范围,本课题研究用氨基酸对其进行改性来制备氨基酸膨润土,并初步探索氨基酸膨润土为载体应用于脂肪酶的固定化。结果表明氨基酸膨润土是一种较好的固定化材料,酶与载体之间"柔性链"的长度对其酶活及重复使用性都有影响,以谷氨酸改性最好,用XRD及FTIR对谷氨酸膨润土固定化酶前后分别进行了表征,蛋白固载量及固定化酶的活力分别为6.3mg/g土和391.2U/g,重复使用六次可保持约68%的活力;非离子型表面活性剂可以激活酶,如曲拉通X-100和X-114,可使固定化酶活性提高约2倍,对固定化酶的最佳处理时间为1h。(本文来源于《2015年中国化工学会年会论文集》期刊2015-10-17）
张玉芳,单守水[3]（2014）在《褶皱假丝酵母产脂肪酶条件及酶学性质研究》一文中研究指出对一株来源于海洋有产脂肪酶能力的褶皱假丝酵母产酶条件进行研究,探讨了碳源、氮源、pH、培养温度对该菌产脂肪酶的影响。结果显示:在摇瓶培养条件下,其最适产酶条件为:蔗糖5 g/L,橄榄油5 g/L,MgSO4·7H2O1 g/L,K2HPO41 g/L,(NH4)2SO410 g/L,起始pH为7.0,接种量10%,在30℃、200 r/min下培养36 h,产酶能力达到4 351.6 U/mL。该菌所产脂肪酶的最适反应pH为7.0,最适反应温度为37℃,Ca2+、Mg2+对酶活有一定的促进作用。(本文来源于《食品研究与开发》期刊2014年05期）
陈贵佺,郑二丽[4]（2013）在《褶皱假丝酵母脂肪酶催化反应条件的研究》一文中研究指出本文研究了褶皱假丝酵母脂肪酶的催化反应条件。通过单因素试验研究了温度、缓冲液pH值、酶的浓度对酶活性的影响,并通过正交设计实验对单因素得到的结果进行优化,得到了褶皱假丝酵母脂肪酶的最适反应条件,即温度55℃、缓冲液pH值6.0、酶的浓度100mg/mL,在此条件下,获得的100mg/mLCRL酶的活力为39.78mU,CRL酶适合在60℃以下温度环境中进行反应,并且适合保藏在pH值5.0~7.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中。(本文来源于《现代食品科技》期刊2013年04期）
高楠[5]（2011）在《褶皱假丝酵母脂肪酶热稳定性改造的设计与抗氧化酶的人工模拟》一文中研究指出酶以其高效、专一和环境友好等特点,越来越广泛的被应用于人类生活的各个领域。但同传统的化学催化剂相比,酶分子的稳定性作为一项重要性质,对酶催化功能的发挥有着重要的影响。可是,由于酶的稳定性往往受到诸多因素的共同影响而决定,因此对于酶稳定性的改造一直是生物学和化学领域的难点。随着分子生物学和结构生物学等学科的不断进步,对于酶稳定性的定向进化和合理设计以及人工模拟酶的设计和构建已经逐步发展为酶工程领域针对酶稳定性研究的两个重要前沿方向。本论文将从以上两方面入手分别进行褶皱假丝酵母脂肪酶的热稳定性改造和抗氧化酶的人工模拟的研究。论文第一部分选取来源于褶皱假丝酵母的脂肪酶1 (Candida Rugosa lipase 1, CRL1)作为研究对象,利用分子生物学手段对其进行了热稳定性的改造。作为目前在国际酶制剂市场中占有较大份额的商业脂肪酶CRL的主要成分之一,CRL1具有非常广泛的应用性和市场前景。但由于来源于常温微生物,其最适反应温度仅为40℃,热稳定性很差,50℃条件下的半衰期不超过一个小时,80℃条件下几乎立即失活。较差的热稳定性已经阻碍了CRL1在工业生产中的进一步应用。由于Candida rugosa遵循一套非通用的密码子系统：即将密码子CTG编码为丝氨酸,而在通用密码子系统中是编码为亮氨酸的,这其中还包括Lip1的催化中心209位的丝氨酸,所以在前期研究中,需要将基因中的19处CTG突变为TCT.随后利用毕赤酵母工程菌GS-115异源表达Lip1,纯化之后经SDS-PAGE检测得到了分子量与天然Lip1一致的纯化重组蛋白。对重组Lip1的酶学性质进行了测定,结果显示重组的Lipl的最适温度(40℃),45℃时的活力降为最适温度时的70%,最适pH (pH7.5)和动力学参数(kcat、Km)均与天然酶一致,证实了异源重组表达Lip1的正确性。传统的热稳定性改造主要有“定点突变”和“定向进化”两种手段,“定点突变”的工作量小,但是它的难点在于突变位点的准确预测；而“定向进化”虽然无需对突变位点进行准确预测,但是它需要构建一个很大的突变库,进行多轮的筛选,工作量很大。为了解决上述问题,在这部分实验设计中,我们引入了一个晶体学中的参数B因子(B-factor),它表示了原子电子密度的可散播性,并且可以影响晶体中蛋白质分子的结构特征。B值越大的原子就拥有越大的灵活性。针对前人的研究成果,我们提出了本实验突变位点的选择标准。首先,为了保证突变体的最适温度上升,所选的突变位点需要位于蛋白的内部,所以所选突变位点与催化中心氨基酸的距离要小于10A；其次,根据Kazlauzkas规则,改变与催化中心的距离小于5A的氨基酸,会对酶的催化行为产生明显的影响。而由于野生型酶的催化性质已经非常优秀,在改造的时候需要尽量保留野生型的催化性质,所以所选突变位点与催化中心氨基酸距离又需要大于5A：最后,由于蛋白质内部氨基酸的B因子值一般会比较小,但是根据现有文献,B因子需要≥(蛋白中最大的3个B因子的平均值)/2才具备改造的意义。本着上述原则,我们预测出GLU 126与LEU 302可能是提升CRL1稳定性的关键突变位点。下一步的工作将利用定点饱和突变的方法对这两个位点分别进行了突变,筛选得到了热稳定性上升的突变体。论文的第二部分针对生物酶分子稳定性低、来源有限等特点,着重应用化学方法以小分子有机化合物作为模拟物,人工模拟具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、超氧化物歧化酶(SOD)与过氧化氢酶(CAT)等天然抗氧化酶活性的有机小分子模拟酶。本研究首先对天然GPX的稳态和预稳态的动力学行为进行了研究,得出了模拟物对过氧化氢的结合能力才是影响模拟物活力的最主要因素。并以此为基础,以对底物过氧化氢的结合能力最好的小分子模拟物为母体,用化学合成的方法获得一种新型的GPX模拟物Mn(III)2(L-Se-SO3Na),并利用质谱、红外光谱、核磁共振及元素分析等手段证明了模拟物结构的正确性。通过测定我们发现,模拟物的GPX活力为5.6±0.3 U/μmol,已经达到经典小分子模拟物PZ51 (Ebselen)活力的5.66倍。Mn(III) 2(L-Se-SO3Na)的SOD和CAT活力分别为138.9±1.2 U/μmol、75.0±2.3 U/μmol,实现了将生物体内叁种最重要的抗氧化酶活力统一于同一个小分子模拟物中。模拟物Mn(III) 2 (L-Se-SO3Na)的稳态动力学结果显示Mn(III) 2 (L-Se-SO3Na)的表观二级速率常数kcat/KmH2O2和kcat/KmGSH分别为1.14E+07M-1min-1和1.00E+06M-1min-1,明显高于一般的小分子模拟物,成功实现了模拟物对H202的结合能力大于对GSH的结合能力的设计目标。而且Mn(III) 2 (L-Se-SO3Na)的kcat/KmH2O2与kcat/KmGSH之间的比值已经非常接近天然GPX的比值,进一步证实了模拟物拥有与天然酶相类似的动力学行为。牛心线粒体构建的氧化损伤模型进一步证实了模拟物Mn(III)2(L-Se-SO3Na)具备良好的抗氧化损伤的能力。以上结果表明,我们成功建立了一种新型的谷胱甘肽过氧化物酶模拟物的设计策略,设计并合成了一种同时具备GPX、SOD和CAT叁种抗氧化酶活力的新型小分子模拟物Mn(III)2(L-Se-SO3Na)。这些研究为多功能模拟酶的设计和合成奠定了理论基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-05-01）
方梅[6]（2011）在《介孔分子筛固定褶皱假丝酵母脂肪酶及其催化性能研究》一文中研究指出共轭亚油酸乙酯(Conjugated Linoleic Acid Ethy1 Ester,简写CLAEE)具有优异的亲脂性,性质稳定,在食品、药品、化妆品及饲料添加剂中具有广阔的应用前景,是共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid,简写CLA))良好的替代品。以脂肪酶催化合成CLAEE代替其传统的酸碱催化合成,具有反应条件温和、产品质量好等优点;此外,研究酶法合成CLAEE对分离两种具有重要生理活性的共轭亚油酸异构体9c,1 1t-CLA和10t,12c-CLA有很高的应用价值。本研究将褶皱假丝酵母脂肪酶(Candida Rugosa Lipase,简写CRL)固定到介孔分子筛上,以制备活性高、操作稳定性好的固定化CRL为主要目的,使其在共轭亚油酸和乙醇的酯化反应中具有较高的催化活性,实验主要内容包括:第一部分包括第叁章和第四章,主要考察固定化载体对固定化CRL的影响。首先,采用叁种不同结构的介孔分子筛HMS、SBA-15和MSU-H(7.2)为载体,采用物理吸附的方法制备固定化CRL。固定化CRL的活性与介孔分子筛的孔径、形貌有关。以MSU-H(7.2)为载体制备的固定化CRL的酶蛋白载量、酶活力和活力回收率最高,分别为1978.1U/g,46.8mg/g和28.1%,在催化CLA和乙醇的酯化反应中总的酯化率最大,为32.4%,两种异构体9c,11t-CLA的酯化率为67.2%,10t,12c-CLA的酯化率为17.3%。其次,研究了不同孔径的MSU-H为载体采用物理吸附法和吸附交联法制备固定化脂肪酶。结果表明,载体孔径的大小影响固定化CRL的活力。物理吸附制得的固定化CRL的酶活力和酶蛋白负载量随着载体BJH孔径(孔径分别为6、7.2、13.3nm)的增大而增加,其中孔径为13.3nm的样品MSU-H(13.3)为载体固定CRL时,固定化酶的活力、酶蛋白载量和酶活力回收率最高,分别为2104.3U/g、47.7mg/g和29.9%;在CLA和乙醇的酯化反应中,总酯化率为34.8%,其中9c,11t-CLA的酯化率为72.9%,10t,12c-CLA的酯化率为19.6%。吸附交联法制得的固定化CRL的酶活力和催化活性要低于物理吸附制得的固定化CRL,而操作稳定性相对较高。综合考虑固定化CRL的催化活性和稳定性,孔径为7.2nm的MSU-H适合作为载体制备固定化CRL。第二部分为第五章内容,主要研究氨基修饰的介孔分子筛MSU-H作为载体制备固定化CRL,考察不同的氨基负载量对固定化CRL活力和催化活性的影响。采用共缩聚的方法制备了理论氨基负载量为7.0～18.0%的NH2-MSU-H。以氨基负载量为15.0%的NH2-MSU-H为载体,采用物理吸附制备的固定化CRL的酶活力较高,为2496.6U/g,酶蛋白载量为34.4mg/g,活力回收率为35.5%,在CLA的酯化反应中酯化率最大,为27.8%。载体的理论氨基负载量影响固定化CRL的活力和催化活性,在实验的反应条件下,MSU-H表面氨基功能化不利于提高CLA的酯化率。第叁部分为第六章内容,主要研究MSU-H载体中表面活性剂含量对固定化CRL的影响。以表面活性剂含量为38 wt.%的MSU-H为载体,采用吸附交联法制备的固定化CRL在酯化反应中的催化活性最好,总酯化率最高,为56.7%,其中,9c,11t-CLA的酯化率达到96.5%,而10t,12c-CLA的酯化率为40%,在反应中重复使用4次后,总酯化率从56.7%降至46.7%,剩余活力保持在82.4%,表现出良好的操作稳定性。以上涉及的载体介孔分子筛和制备的固定化脂肪酶的结构和化学性质采用X射线粉末衍射(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、N2吸附-脱附等温线、扫描电镜分析(SEM)和热重-差热分析(TG-DTA)。(本文来源于《浙江工业大学》期刊2011-04-01）
贝锦龙,王瑾雯,王珣章,龙綮新,杨林[7]（2003）在《人工合成CRL(褶皱假丝酵母脂肪酶)基因》一文中研究指出通过序列设计、合成策略设计等方法 ,由CRL中最重要的同工酶LIP1的成熟多肽序列 ,生成适合在毕赤酵母中表达的基因序列sculipⅠ。通过链延伸反应及PCR反应将DNA单链人工合成为一段长为 16 35bp的DNA双链 ;并将其克隆入质粒pBluescriptⅡSK ( +)。PCR鉴定及测序结果表明sculipⅠ得到了正确的合成与克隆。还就若干长片段基因人工合成应该注意的问题进行讨论。(本文来源于《中山大学学报(自然科学版)》期刊2003年01期）
褶皱假丝酵母论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
碱性钙基膨润土是一种新型的阴离子型层状黏土材料,由于其特殊的阴离子交换性能,具有广阔的应用开发前景。为了进一步认识碱性钙基膨润土,拓宽其应用范围,本课题研究用氨基酸对其进行改性来制备氨基酸膨润土,并初步探索氨基酸膨润土为载体应用于脂肪酶的固定化。结果表明氨基酸膨润土是一种较好的固定化材料,酶与载体之间"柔性链"的长度对其酶活及重复使用性都有影响,以谷氨酸改性最好,用XRD及FTIR对谷氨酸膨润土固定化酶前后分别进行了表征,蛋白固载量及固定化酶的活力分别为6.3mg/g土和391.2U/g,重复使用六次可保持约68%的活力;非离子型表面活性剂可以激活酶,如曲拉通X-100和X-114,可使固定化酶活性提高约2倍,对固定化酶的最佳处理时间为1h。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
褶皱假丝酵母论文参考文献
[1].王璐.非水相体系中褶皱假丝酵母脂肪酶催化合成丁酸香叶酯的研究[D].江南大学.2018
[2].张义芹,李青云,唐爱星,刘幽燕.氨基酸膨润土固定化褶皱假丝酵母脂肪酶的研究[C].2015年中国化工学会年会论文集.2015
[3].张玉芳,单守水.褶皱假丝酵母产脂肪酶条件及酶学性质研究[J].食品研究与开发.2014
[4].陈贵佺,郑二丽.褶皱假丝酵母脂肪酶催化反应条件的研究[J].现代食品科技.2013
[5].高楠.褶皱假丝酵母脂肪酶热稳定性改造的设计与抗氧化酶的人工模拟[D].吉林大学.2011
[6].方梅.介孔分子筛固定褶皱假丝酵母脂肪酶及其催化性能研究[D].浙江工业大学.2011
[7].贝锦龙,王瑾雯,王珣章,龙綮新,杨林.人工合成CRL(褶皱假丝酵母脂肪酶)基因[J].中山大学学报(自然科学版).2003