导读:本文包含了转基因分泌表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:家蚕,BmN细胞,转基因,piggyBac转座子
转基因分泌表达载体论文文献综述
潘兴亮[1]（2009）在《家蚕丝腺生物反应器表达hIGF-Ⅰ转基因分泌表达载体的构建及其应用研究》一文中研究指出家蚕(Bombyx mori),又名桑蚕,属鳞翅目家蚕蛾科。其幼虫丝腺具有强大的合成和分泌蛋白质的能力,利用家蚕丝腺生物反应器安全、高效地生产药用蛋白有很好的实用前景。近几年以转基因家蚕表达外源蛋白的技术体系正被逐步建立。人胰岛样生长因子(hIGF- I)具有多种生物学功能,本研究期望通过家蚕转基因实现hIGF- I在丝腺中分泌表达,开辟hIGF- I表达新途径,提高家蚕的利用价值。我们克隆了丝素蛋白重链基因(fibroin heavy chain, fib-H)启动子及其下游信号肽序列即fib-HS;构建了fib-HS控制红色荧光蛋白(DsRed)报告基因的瞬时分泌表达载体pSK- FibHS- DsRed -PolyA;转染细胞实验显示,该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed;家蚕注射该载体后,可在丝腺腔中检测到红色荧光,表明瞬时表达的DsRed分泌到丝腺腔,推测所克隆的序列具有信号肽的功能。以fib-HS控制hIGF- I、家蚕杆状病毒ie-1启动子驱动新霉素抗性基因(neor)构建了基于piggyBac转座子的转基因分泌表达载体pigA3GFP-FibHS-IGF-PolyA-IE-Neo,在辅助质粒的存在下,pigA3GFP-FibHS-IGF-PolyA-IE-Neo转染家蚕BmN细胞,通过G418(终浓度800μg/mL)的压力筛选,获得了稳定表达hIGF-I的转化细胞系,ELISA检测结果显示,hIGF- I在转化细胞中的表达水平约为29.5ng/105cells。采用精子介导法及基因枪法将pigA3GFP-FibHS-IGF-PolyA-IE-Neo转基因分泌表达载体导入家蚕,通过G418和荧光报告基因(GFP)的双重筛选,在G0代获得3头具有明显绿色荧光的家蚕;用gfp基因的特异性引物可从呈绿色荧光的家蚕基因组中特异性地扩增出gfp基因,表明所获得的荧光蚕为转基因家蚕;反向PCR分析插入位点结果显示,未发现piggyBac转座子特异性插入位点;ELISA检测结果显示,在G0代转基因家蚕的蚕茧中hIGF- I的表达量约756ng/g(本文来源于《苏州大学》期刊2009-05-01）
丁轲,程安春,汪铭书,朱德康,韩新锋[2]（2008）在《鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2c基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中的表达》一文中研究指出首先通过酶切连接和 PCR 方法将信号肽 SP 基因与鹅细小病毒 VP3基因连接,然后再利用酶切连接的方法通过在引物上加上一个由 GGSGGSG 7个氨基酸组成的短肽将 SP-VP3基因与鹅白细胞介素-2成熟蛋白基因 IL-2c 连接,从而构建成了 SP-VP3-IL2c 的分泌性融合蛋白基因.将该融合基因连接到乳酸杆菌表达载体 pMJ67中,获得了重组的分泌性表达载体 pMJ-SP-VP3-IL2c,通过电转化方法, 将其转化到乳酸杆菌 L.casei。SDS-PAGE、Western-blotting 和 MTT 试验表明融合蛋白在该体系中成功分泌性表达,所表达的融合蛋白对 GPV 具有较好的反应原性,IL-2c 蛋白具有生物学活性。(本文来源于《第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）》期刊2008-04-01）
丁轲[3]（2006）在《鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中表达的研究》一文中研究指出随着养殖业向集约化和管理向人性化发展，口服疫苗逐渐成为研究的热点和重点，乳酸杆菌是肠道正常的益生菌，具有天然的抗菌、抗病毒和抗肿瘤的作用。利用基因工程手段，将乳酸杆菌开发成为具有特定功能的基因工程菌，使其在肠道分泌抗原蛋白以达到免疫的目的。本研究以较为保守的鹅细小病毒(Goose Parvovirus，GPV)VP3基因为抗原基因，同时为了更好地提高免疫效果，将鹅白细胞介素-2(Intedeukin-2，IL-2)成熟蛋白基因IL2c与VP3基因融合，并使其在乳酸杆菌中得到良好表达，为研制鹅IL-2增强鹅细小病毒VP3乳酸杆菌口服基因工程疫苗准备了材料。1．为了探索乳酸杆菌在鹅养殖业中的应用，首先本研究对鹅肠道乳酸杆菌进行了调查，结果表明雏鹅在20日龄时肠道的乳酸杆菌已达到较高的水平，最高可达10~8CFU／g。分离鉴定了15株乳酸杆菌，分别属于旧金山乳杆菌、发酵乳杆菌、弯曲乳杆菌、类高加索乳杆菌、瑞士乳杆菌、双发酵乳杆菌、小鼠乳杆菌、嗜淀粉乳杆菌和棒状乳杆菌棒状亚种。通过耐酸和耐胆盐试验表明L2和L8两株乳酸杆菌具有较强的耐受性，质粒检测均没有发现有质粒存在。2．根据GenBank上注册的短小乳酸杆菌(L．brevis)S-层蛋白基因序列设计一对引物，采用PCR法获得了S-层蛋白信号肽基因，将其克隆到pMD18-T载体并测序。序列分析表明序列全长为352bp，其中编码信号肽部分的90bp的碱基与GenBank中Z14250的完全相同，生物信息学分析也表明这是一段信号肽基因，氨基酸序列分析也表明它具备信号肽的典型特征，结果表明本试验克隆得到了短小乳酸杆菌S-层蛋白信号肽基因。3．根据GenBank中的鹅细小病毒B株全基因序列，设计合成一对引物，应用PCR技术扩增了鹅细小病毒强毒CHv株的VP3基因片段，将扩增后的VP3基因重组到pUC57载体上，并对插入片段进行序列测定，将测序结果及由该结果推导的氨基酸序列与国内外分离的GPV、MDPV、PPV和CPV等不同宿主来源的细小病毒的VP3进行生物信息学比较及分析。结果表明，我国四川分离的GPV CHv株VP3基因长1605bp，编码534个氨基酸，与国内外10株GPV的VP3基因进行比较，核苷酸同源性为93.4％-99.8％，氨基酸同源性为96.5％～99.3％，变异较小，是GPV保持一个血清型的分子基础。与番鸭细小病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别为79.6％和89.9％，而与其它种属的细小病毒同源性均在30％以下，表明它们与GPV CHv株亲缘关系较远。生物信息学分析表明它是一种疏水性的、稳定的、有强抗原性的膜外蛋白，有3个潜在的糖基化位点。4．参照GenBank中发表的鸭IL-2基因保守序列，设计了一对引物，采用RT-PCR技术从ConA刺激的四川白鹅外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出了鹅IL-2基因，并进行了克隆和测序。结果显示鹅IL-2基因全长468bp，含有一个441bp的ORF区，编码146个氨基酸。生物学软件分析表明该序列编码的氨基酸序列中有4个磷酸化位点，1个糖基化位点，含有21个氨基酸残基组成的信号肽。同源性分析表明四川白鹅IL-2基因与浙江白鹅的同源性极高，核苷酸和氨基酸同源性分别为99.8％和100％，与鸭、鸡和火鸡IL-2核苷酸及氨基酸序列同源性分别为92.2％、77.5％、78.2％和85.8％、65.5％、64.1％，而与其它种属的哺乳动物及啮齿类动物(如人、猴、大鼠、牛、马、猪、猫、小鼠、兔和鹿)的IL-2基因的核苷酸和氨基酸同源性分别低于45％和28％，进化树分析也表明四川白鹅IL-2基因与鸭和鸡具有较近的亲源关系。成熟蛋白IL2c基因全长为407bp，含有一个378bp的编码区，编码126个氨基酸。5．首先通过酶切连接和PCR方法将SP基因与VP3基因连接，然后再利用酶切连接的方法通过在引物上加上一个由GSGGSGG 7个氨基酸组成的短肽将VP3基因与IL2c基因连接，从而构建成了VP3-IL2c的融合蛋白基因。将该融合基因连接到乳酸杆菌表达载体pMJ67中，获得了重组的分泌性表达载体pMJ-SP-VP3-IL2c，通过电转化方法，将其转化到乳酸杆菌L．casei，通过乳糖诱导，成功表达了融合蛋白，SDS-PAGE结果显示在约76kD处有一特异性条带，其分子量与融合蛋白基因所推导的蛋白质分子量相符。并对表达条件进行了优化，结果表明在诱导剂的浓度为0.5％，诱导剂加入时间为OD_(600)=0.5，诱导时间为20h时，可得到最高表达量。用兔抗GPV阳性血清进行West-blotting试验表明该重组表达的融合蛋白对GPV具有较好的免疫原性。采用Sepharose 4B琼脂糖凝胶为填料对重组表达蛋白进行分子筛层析，得到了纯度较高的重组蛋白。采用MTT法测定IL2c蛋白的活性，试验结果表明表达后的VP3-IL2c融合蛋白的淋巴细胞增殖系数可达3.84，表明IL2c蛋白具有生物学活性。(本文来源于《四川农业大学》期刊2006-11-01）
朱靖,金东庆,李志彦,窦如海,杨娜娜[4]（2006）在《小鼠LIF基因分泌型真核表达载体的构建及其应用研究》一文中研究指出目的构建小鼠白血病抑制因子的真核表达载体,有助于开展高其他实验动物的胚胎干细胞的定向分化研究。方法运用RT-PCR技术,克隆含信号肽和不含信号肽的小鼠分泌型白血病抑制因子,通过pMD18-Tsimple载体和pBS-T载体过渡,酶切进行初步鉴定。结果分别经过酶切鉴定,成功构建了小鼠LIF基因真核表达载体pSecTag-LIF(sp+)和pSecTag-LIF(sp-)。结论构建小鼠白血病抑制因子的真核表达载体有效可行,不仅为进一步研究LIF细胞因子所诱导的维持胚胎干细胞未分化状态的分子机制奠定了基础,而且为各种转基因实验动物的研究提供了一种新的方法。(本文来源于《实验动物与比较医学》期刊2006年03期）
朱靖,金东庆,窦如海,杨娜娜[5]（2006）在《小鼠LIF基因分泌型真核表达载体的构建及其应用研究》一文中研究指出目的构建小鼠白血病抑制因子的真核表达载体,有助于提高其他实验动物的胚胎干细胞的定向分化研究。方法运用RT-PCR技术,克降含信号肽和不含信号肽的小鼠分泌型白血病抑制因子,通过pMD18-Tsimple载体和pBS-T载体过渡,酶切进行初步鉴定。结果分别经过酶切鉴定,成功构建了小鼠LIF基因真核表达载体pSecTag-LIF(sp+)和 pSecTag-LIF(sp-)。结论构建小鼠白血病抑制因子的真核表达载体有效可行,不仅为进一步研究LIF细胞因子所诱导的维持胚胎干细胞未分化状态的分子机制奠定了基础,而且为各种转基因实验动物的研究提供了一种新的方法。(本文来源于《中国实验动物学会第七届学术年会论文集》期刊2006-09-01）
王强,喻富根[6]（2005）在《霍乱毒素B亚单位基因分泌型表达载体的构建及转化烟草的研究》一文中研究指出为了探索利用植物分泌特性来表达重组蛋白的可行性,先构建了含钙网蛋白信号肽的植物双元载体pBI-cal,再向该载体中插入霍乱毒素B亚单位编码基因,最后得到表达载体pBIcal-ctb。通过根癌农杆菌介导,该表达载体转化烟草,在卡那霉素抗性培养基上筛选,得到30棵抗性植株。经PCR鉴定,霍乱毒素B亚单位基因已经整合到烟草基因组中。初步表达分析表明,转基因烟草中含有具生物活性的霍乱毒素B亚单位蛋白。(本文来源于《西北植物学报》期刊2005年07期）
王义生,李月白,王秀利,姜国忠,李晓林[7]（2005）在《人降钙素基因分泌性真核表达载体的构建》一文中研究指出目的:构建含人胰岛素分泌信号的人降钙素(human calcitonin,hCT)基因的分泌性真核表达载体。方法:采用人工化学合的方法合成胰岛素分泌信号和人降钙素(hCT)基因的DNA,将此段DNA插入到克隆载体pMD18—T载体筛选出阳(本文来源于《第五届国际骨质疏松研讨会暨第叁届国际骨矿研究会议会议文集》期刊2005-05-24）
张丽华,程智慧,李霞[8]（2004）在《GUS基因分泌型植物表达载体的构建及对烟草的转化》一文中研究指出为了验证PR1B分泌肽对谜底蛋白的分泌和增强功能,以GUS基因为靶基因,成功构建了PR1B 和GUS融合基因的植物表达载体,通过叁亲融合法转入LBA4404农杆菌,并对烟草进行了转化,在216株卡那抗 性植株中共获得2株GUS染色阳性植株。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2004年S1期）
朱宝利,黄涛,贾锋,周顺伍,齐顺章[9]（1993）在《猪生长激素基因分泌型表达载体的构建及表达》一文中研究指出为了使猪生长激素cDNA基因在大肠杆菌中的表达产物分泌到细胞周质中,本文采用了Kunkel报道的寡聚核苷酸指导的定点突变法,将猪生长激素cDNA基因与大肠杆菌外膜蛋白基因(ompA)的信号序列组装成嵌合基因,并在PL-PR双启动子的控制下进行诱导表达。结果表明表达产物占细菌总蛋白的20％左右;经western blot法证实有少量游离的猪生长激素被分泌到细胞周质中。透射电镜观察结果证明表达产物的大部分是以包涵体的形式存在,N-末端氨基酸分析结果表明表达产物的信号肽已被切除,但尚未证实表达产物形成的包涵体是在细胞的周质中,还是在胞液中。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊1993年01期）
转基因分泌表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
首先通过酶切连接和 PCR 方法将信号肽 SP 基因与鹅细小病毒 VP3基因连接,然后再利用酶切连接的方法通过在引物上加上一个由 GGSGGSG 7个氨基酸组成的短肽将 SP-VP3基因与鹅白细胞介素-2成熟蛋白基因 IL-2c 连接,从而构建成了 SP-VP3-IL2c 的分泌性融合蛋白基因.将该融合基因连接到乳酸杆菌表达载体 pMJ67中,获得了重组的分泌性表达载体 pMJ-SP-VP3-IL2c,通过电转化方法, 将其转化到乳酸杆菌 L.casei。SDS-PAGE、Western-blotting 和 MTT 试验表明融合蛋白在该体系中成功分泌性表达,所表达的融合蛋白对 GPV 具有较好的反应原性,IL-2c 蛋白具有生物学活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转基因分泌表达载体论文参考文献
[1].潘兴亮.家蚕丝腺生物反应器表达hIGF-Ⅰ转基因分泌表达载体的构建及其应用研究[D].苏州大学.2009
[2].丁轲,程安春,汪铭书,朱德康,韩新锋.鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2c基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中的表达[C].第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）.2008
[3].丁轲.鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中表达的研究[D].四川农业大学.2006
[4].朱靖,金东庆,李志彦,窦如海,杨娜娜.小鼠LIF基因分泌型真核表达载体的构建及其应用研究[J].实验动物与比较医学.2006
[5].朱靖,金东庆,窦如海,杨娜娜.小鼠LIF基因分泌型真核表达载体的构建及其应用研究[C].中国实验动物学会第七届学术年会论文集.2006
[6].王强,喻富根.霍乱毒素B亚单位基因分泌型表达载体的构建及转化烟草的研究[J].西北植物学报.2005
[7].王义生,李月白,王秀利,姜国忠,李晓林.人降钙素基因分泌性真核表达载体的构建[C].第五届国际骨质疏松研讨会暨第叁届国际骨矿研究会议会议文集.2005
[8].张丽华,程智慧,李霞.GUS基因分泌型植物表达载体的构建及对烟草的转化[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2004
[9].朱宝利,黄涛,贾锋,周顺伍,齐顺章.猪生长激素基因分泌型表达载体的构建及表达[J].农业生物技术学报.1993
标签：家蚕; BmN细胞; 转基因; piggyBac转座子;