本文主要研究内容
作者么帅（2019）在《禽圆环病毒2型分子生物学特性及基因功能研究》一文中研究指出：禽圆环病毒2型(AGV2)是在2011被报道发现的指环病毒属的第二个成员,于2015年首次在我国被检测报道。AGV2不仅仅感染禽类,而且还有若干关于AGV2在健康人类、器官移植病人和艾滋病病毒(HIV)阳性病人血液中的检测报道。而对于该病毒的其他方面我们却知之甚少。AGV2在全球范围内的传播和感染,使其对养禽业和公共卫生安全都表现出了巨大的潜在威胁。本研究组在2015年4月到2016年4月间,进行了覆盖中国大部分地区养禽业中AGV2的流行病学调查。在来自15个不同的省(市)的总计448份禽类病料(2015年282份,2016年166份)中,共检测到了 55个阳性结果,其中2015年有45个,2016年有10个,总阳性率为12.28%,这些阳性结果分布在11个省(市)中。在阳性结果中,只有10个(18.19%)是单独感染,其余的(81.82%)都为混合感染。对AGV2阳性结果的地理和时间分布的分析显示,85.45%的阳性病料收集自我国的北方,并且在秋天获得了更多的阳性病料。此外,我们检测了我国北方在售的商用禽类疫苗中AGV2基因组的混入情况。结果显示,来自11个不同生产商的23个疫苗为AGV2阳性,阳性比例为27.71%,而在所有23个阳性结果中,有17个疫苗(73.91%)为NDV和IBV相关疫苗。部分序列的测序结果显示,多株AGV2毒株混入在疫苗中。本研究的结果对疫苗的安全性提出了挑战,同时也提高了 AGV2的威胁性。利用三段部分重叠的PCR测序结果进行AGV2全基因组序列的拼接,然后参考GenBank中的所有已知核酸序列分析了不同宿主来源AGV2的遗传进化关系,又进一步分析了不同进化分枝中病毒蛋白的特点,比较了中国毒株和国外毒株病毒蛋白的变化趋势。实验中,从2015年至2016年国内不同地区的病料中一共获得了 17株禽源AGV2全基因组序列,经序列分析比对,所有不同宿主来源的AGV2被分成了 A-D四个组;在VP1的第288-314位氨基酸发现疑似高变区;找到了 VP2与VP3不同分组的氨基酸变化规律;在AGV2的5’-UTR发现了3个重复序列的新基序,并对DR区进行了分类和统计分析。根据AGV2的保守序列建立了对于AGV2有高灵敏性的荧光定量PCR检测方法。此方法的灵敏度为100个病毒基因组拷贝,是常规PCR灵敏度的10倍;此方法重复性良好,组内和组间检测的变异系数都小于1%。利用其高灵敏性,从临床病料中检测到了更多的阳性结果,其中15/82(17.24%)个鸡源和8/29(27.58%)人源AGV2阳性结果,与常规PCR的结果(12.20%和18.29%)有显著的差异(P<0.01)。应用此定量方法,我们研究了 AGV2在临床感染鸡只中不同器官和组织的病毒载量。结果显示,AGV2在鸡体内有广泛的分布;在肺脏和血液中有很高的病毒载量。通过1日龄SPF鸡的体内实验,对AGV2进行了病毒分离,并通过PCR与负染色电镜对AGV2进行了鉴定。而后,初步探索了 AGV2的致病性。选取垂直传播感染非致病性CAV的1日龄雏鸡,通过肌肉注射感染AGV2HLJ1508毒株。结果显示,混合感染造成了 56.67%的致死率,并伴随严重的出血-再生障碍性贫血症。混合感染引起了显著的肝脾肿大,胸腺萎缩,明显的腺胃出血和骨髓黄化。除此之外,血常规检测也证明了混合感染造成的贫血症和免疫抑制。对AGV2的基因功能进行了研究,包括5’-UTR与病毒蛋白两部分。其一,找到了 AGV2的启动子序列,并通过一系列双荧光报告系统证明了其起始转录的功能,此外,证明了 5’-UTR中DR区有着增强子的功能。更有趣的是,在蛋白水平和核酸水平证实了不同DR组合的转录能力存在着差异,这可能是影响AGV2分离株致病性的原因之一。其二,探索了 AGV2 VP2和VP3在癌症细胞中的功能。首先,这两个病毒蛋白有着相似的亚细胞定位,都定位于Hela细胞的细胞核中。通过流式细胞术检测到这两种病毒蛋白可以诱导约50%的Hela细胞发生凋亡,但它们引起线粒体释放细胞色素C的能力却不同,提示此两种蛋白诱导凋亡的通路可能不同。此外,这两种蛋白都可以上调DNA损伤标志分子γH2AX的表达量,而同时上调表达的Chk2暗示此两种蛋白可能涉及ATM-Chk2细胞周期信号通路。在本研究中获得的结果建立了对AGV2分子生物学特性和基因功能的初步认识,为进一步揭开AGV2和指环病毒生物学特性的神秘面纱提供了丰富的研究材料。
Abstract
qin yuan huan bing du 2xing (AGV2)shi zai 2011bei bao dao fa xian de zhi huan bing du shu de di er ge cheng yuan ,yu 2015nian shou ci zai wo guo bei jian ce bao dao 。AGV2bu jin jin gan ran qin lei ,er ju hai you re gan guan yu AGV2zai jian kang ren lei 、qi guan yi zhi bing ren he ai zi bing bing du (HIV)yang xing bing ren xie ye zhong de jian ce bao dao 。er dui yu gai bing du de ji ta fang mian wo men que zhi zhi shen shao 。AGV2zai quan qiu fan wei nei de chuan bo he gan ran ,shi ji dui yang qin ye he gong gong wei sheng an quan dou biao xian chu le ju da de qian zai wei xie 。ben yan jiu zu zai 2015nian 4yue dao 2016nian 4yue jian ,jin hang le fu gai zhong guo da bu fen de ou yang qin ye zhong AGV2de liu hang bing xue diao cha 。zai lai zi 15ge bu tong de sheng (shi )de zong ji 448fen qin lei bing liao (2015nian 282fen ,2016nian 166fen )zhong ,gong jian ce dao le 55ge yang xing jie guo ,ji zhong 2015nian you 45ge ,2016nian you 10ge ,zong yang xing lv wei 12.28%,zhe xie yang xing jie guo fen bu zai 11ge sheng (shi )zhong 。zai yang xing jie guo zhong ,zhi you 10ge (18.19%)shi chan du gan ran ,ji yu de (81.82%)dou wei hun ge gan ran 。dui AGV2yang xing jie guo de de li he shi jian fen bu de fen xi xian shi ,85.45%de yang xing bing liao shou ji zi wo guo de bei fang ,bing ju zai qiu tian huo de le geng duo de yang xing bing liao 。ci wai ,wo men jian ce le wo guo bei fang zai shou de shang yong qin lei yi miao zhong AGV2ji yin zu de hun ru qing kuang 。jie guo xian shi ,lai zi 11ge bu tong sheng chan shang de 23ge yi miao wei AGV2yang xing ,yang xing bi li wei 27.71%,er zai suo you 23ge yang xing jie guo zhong ,you 17ge yi miao (73.91%)wei NDVhe IBVxiang guan yi miao 。bu fen xu lie de ce xu jie guo xian shi ,duo zhu AGV2du zhu hun ru zai yi miao zhong 。ben yan jiu de jie guo dui yi miao de an quan xing di chu le tiao zhan ,tong shi ye di gao le AGV2de wei xie xing 。li yong san duan bu fen chong die de PCRce xu jie guo jin hang AGV2quan ji yin zu xu lie de pin jie ,ran hou can kao GenBankzhong de suo you yi zhi he suan xu lie fen xi le bu tong su zhu lai yuan AGV2de wei chuan jin hua guan ji ,you jin yi bu fen xi le bu tong jin hua fen zhi zhong bing du dan bai de te dian ,bi jiao le zhong guo du zhu he guo wai du zhu bing du dan bai de bian hua qu shi 。shi yan zhong ,cong 2015nian zhi 2016nian guo nei bu tong de ou de bing liao zhong yi gong huo de le 17zhu qin yuan AGV2quan ji yin zu xu lie ,jing xu lie fen xi bi dui ,suo you bu tong su zhu lai yuan de AGV2bei fen cheng le A-Dsi ge zu ;zai VP1de di 288-314wei an ji suan fa xian yi shi gao bian ou ;zhao dao le VP2yu VP3bu tong fen zu de an ji suan bian hua gui lv ;zai AGV2de 5’-UTRfa xian le 3ge chong fu xu lie de xin ji xu ,bing dui DRou jin hang le fen lei he tong ji fen xi 。gen ju AGV2de bao shou xu lie jian li le dui yu AGV2you gao ling min xing de ying guang ding liang PCRjian ce fang fa 。ci fang fa de ling min du wei 100ge bing du ji yin zu kao bei ,shi chang gui PCRling min du de 10bei ;ci fang fa chong fu xing liang hao ,zu nei he zu jian jian ce de bian yi ji shu dou xiao yu 1%。li yong ji gao ling min xing ,cong lin chuang bing liao zhong jian ce dao le geng duo de yang xing jie guo ,ji zhong 15/82(17.24%)ge ji yuan he 8/29(27.58%)ren yuan AGV2yang xing jie guo ,yu chang gui PCRde jie guo (12.20%he 18.29%)you xian zhe de cha yi (P<0.01)。ying yong ci ding liang fang fa ,wo men yan jiu le AGV2zai lin chuang gan ran ji zhi zhong bu tong qi guan he zu zhi de bing du zai liang 。jie guo xian shi ,AGV2zai ji ti nei you an fan de fen bu ;zai fei zang he xie ye zhong you hen gao de bing du zai liang 。tong guo 1ri ling SPFji de ti nei shi yan ,dui AGV2jin hang le bing du fen li ,bing tong guo PCRyu fu ran se dian jing dui AGV2jin hang le jian ding 。er hou ,chu bu tan suo le AGV2de zhi bing xing 。shua qu chui zhi chuan bo gan ran fei zhi bing xing CAVde 1ri ling chu ji ,tong guo ji rou zhu she gan ran AGV2HLJ1508du zhu 。jie guo xian shi ,hun ge gan ran zao cheng le 56.67%de zhi si lv 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,dou ding wei yu Helaxi bao de xi bao he zhong 。tong guo liu shi xi bao shu jian ce dao zhe liang chong bing du dan bai ke yi you dao yao 50%de Helaxi bao fa sheng diao wang ,dan ta men yin qi xian li ti shi fang xi bao se su Cde neng li que bu tong ,di shi ci liang chong dan bai you dao diao wang de tong lu ke neng bu tong 。ci wai ,zhe liang chong dan bai dou ke yi shang diao DNAsun shang biao zhi fen zi γH2AXde biao da liang ,er tong shi shang diao biao da de Chk2an shi ci liang chong dan bai ke neng she ji ATM-Chk2xi bao zhou ji xin hao tong lu 。zai ben yan jiu zhong huo de de jie guo jian li le dui AGV2fen zi sheng wu xue te xing he ji yin gong neng de chu bu ren shi ,wei jin yi bu jie kai AGV2he zhi huan bing du sheng wu xue te xing de shen bi mian sha di gong le feng fu de yan jiu cai liao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自东北农业大学的么帅，发表于刊物东北农业大学2019-08-27论文，是一篇关于流行病学论文,荧光定量论文,基因组特征论文,致病性论文,病毒基因功能论文,东北农业大学2019-08-27论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自东北农业大学2019-08-27论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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