宋茧：重组人PDGF-Fc融合蛋白的表达纯化及其活性测定论文

本文主要研究内容

作者宋茧（2019）在《重组人PDGF-Fc融合蛋白的表达纯化及其活性测定》一文中研究指出：背景和目的:人血小板衍生因子-BB(PDGF-BB)能够促进多种细胞增殖,参与新生血管的生成及抗凋亡等作用,临床用来治疗皮肤烧伤和重度糖尿病患者的皮肤创伤。构建PDGF-BB优化酶切位点后的表达载体,筛选出稳定遗传和高表达的PDGF-BB的X33毕赤酵母菌株,摸索PDGF-BB重组蛋白的纯化条件,进行蛋白定量和活性测定。方法:通过查询基因组文库并设计目的序列,构建pPICZαA-PDGF-BB-Fc表达载体,利用BTX方波电穿孔仪电击转化到X33毕赤酵母工程菌中表达PDGF-BB蛋白,通过含有博来霉素的YPD固体培养基筛选稳定的PDGF-BB表达菌株。通过对不同诱导表达时间和诱导表达的甲醇浓度条件的优化。然后表达的蛋白经过盐析初步纯化,DEAE阴离子交换层析,Superdex75凝胶过滤层析进一步纯化目的蛋白,为后续的大规模的发酵提供可参考的方案和工艺。结果:成功地构建了PDGF-BB重组蛋白的表达载体,获得了稳定遗传且表达量相对高的重组蛋白菌株。初步建立了完整的PDGF-BB重组蛋白分离纯化体系,纯化的重组蛋白经SDS-PAGE电泳检测纯度达90%,经过活性测定结果显示,重组的PDGF-BB蛋白具有生物学活性能够刺激成纤维细胞增殖。结论:通过构建PDGF-BB重组蛋白的表达载体,优化了重组蛋白的表达和纯化条件,获得了高纯度的PDGF-BB重组蛋白,纯度达90%,并具有良好的生物学活性。

Abstract

bei jing he mu de :ren xie xiao ban yan sheng yin zi -BB(PDGF-BB)neng gou cu jin duo chong xi bao zeng shi ,can yu xin sheng xie guan de sheng cheng ji kang diao wang deng zuo yong ,lin chuang yong lai zhi liao pi fu shao shang he chong du tang niao bing huan zhe de pi fu chuang shang 。gou jian PDGF-BByou hua mei qie wei dian hou de biao da zai ti ,shai shua chu wen ding wei chuan he gao biao da de PDGF-BBde X33bi chi jiao mu jun zhu ,mo suo PDGF-BBchong zu dan bai de chun hua tiao jian ,jin hang dan bai ding liang he huo xing ce ding 。fang fa :tong guo cha xun ji yin zu wen ku bing she ji mu de xu lie ,gou jian pPICZαA-PDGF-BB-Fcbiao da zai ti ,li yong BTXfang bo dian chuan kong yi dian ji zhuai hua dao X33bi chi jiao mu gong cheng jun zhong biao da PDGF-BBdan bai ,tong guo han you bo lai mei su de YPDgu ti pei yang ji shai shua wen ding de PDGF-BBbiao da jun zhu 。tong guo dui bu tong you dao biao da shi jian he you dao biao da de jia chun nong du tiao jian de you hua 。ran hou biao da de dan bai jing guo yan xi chu bu chun hua ,DEAEyin li zi jiao huan ceng xi ,Superdex75ning jiao guo lv ceng xi jin yi bu chun hua mu de dan bai ,wei hou xu de da gui mo de fa jiao di gong ke can kao de fang an he gong yi 。jie guo :cheng gong de gou jian le PDGF-BBchong zu dan bai de biao da zai ti ,huo de le wen ding wei chuan ju biao da liang xiang dui gao de chong zu dan bai jun zhu 。chu bu jian li le wan zheng de PDGF-BBchong zu dan bai fen li chun hua ti ji ,chun hua de chong zu dan bai jing SDS-PAGEdian yong jian ce chun du da 90%,jing guo huo xing ce ding jie guo xian shi ,chong zu de PDGF-BBdan bai ju you sheng wu xue huo xing neng gou ci ji cheng qian wei xi bao zeng shi 。jie lun :tong guo gou jian PDGF-BBchong zu dan bai de biao da zai ti ,you hua le chong zu dan bai de biao da he chun hua tiao jian ,huo de le gao chun du de PDGF-BBchong zu dan bai ,chun du da 90%,bing ju you liang hao de sheng wu xue huo xing 。

论文参考文献

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论文详细介绍

论文作者分别是来自吉林大学的宋茧，发表于刊物吉林大学2019-06-25论文，是一篇关于血小板衍生因子论文,毕赤酵母论文,蛋白纯化论文,活性测定论文,吉林大学2019-06-25论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自吉林大学2019-06-25论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。

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