导读:本文包含了表达载体的构建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:视神经脊髓炎,水通道蛋白4,真核表达载体,基因转染
表达载体的构建论文文献综述
许会静,刘晴,闫冰,刘微,张磊[1]（2019）在《AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达》一文中研究指出目的:构建水通道蛋白4 (AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的V79细胞)和转染组(转染重组质粒的V79细胞)。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎(NMO)患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果:成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高(P<0.05)。结论:成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年06期）
李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜[2]（2019）在《人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用》一文中研究指出目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年11期）
李惠华,曾碧玉,王伟,常强,苏明华[3]（2019）在《枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位》一文中研究指出枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环叁萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase, AS)是叁萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(p DONR207-AS)为模板,经PCR扩增获得AS基因的正向开放阅读框,经酶切及与载体的连接,成功构建表达载体p BWA(V)HS-AS-GFP-Tnos。以枇杷悬浮细胞(AS分离的同源系统)为受体材料,在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101的介导下进行瞬时表达,通过共转化的GFP在激光共聚焦显微镜下成像,分析AS蛋白的亚细胞定位;采用气相色谱-质谱联合分析AS催化产物。研究结果显示,AS在枇杷悬浮细胞中定位于内质网;枇杷悬浮细胞中AS的催化产物含α-香树素和β-香树素,AS属于多功能酶。本研究可为明确五环叁萜类化合物合成途径以及枇杷悬浮细胞的转基因应用提供参考依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
袁园,张愉,张丽华,范文胜,韦天超[4]（2019）在《鸡传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达载体的构建及其产物抗原性的鉴定》一文中研究指出以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)GX-YL5毒株为模板,PCR扩增其E基因并克隆至融合有His标签的杆状病毒转移载体pFastBac~(TM)/HBM-TOPO,构建重组转移载体pFastBac~(TM)/HBM-TOPO-E,转化DH10Bac~(TM)感受态,经同源重组后转染Sf9细胞,并应用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot进行鉴定。IFA结果表明融合了E蛋白的表达产物可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,在感染的细胞膜表面呈现强的黄绿色荧光;Western blot结果显示融合了E蛋白的表达产物既可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,也可被GX-YL5株的多抗血清特异性识别,且二者的目的条带大小均为16 ku。说明本研究已成功在Sf9细胞中表达了E蛋白,且表达产物抗原性良好,为进一步探讨IBV E蛋白的生物学功能和构建病毒样颗粒提供了基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年11期）
白蓓蓓,荆永琳,蔡秉宇,蓝丽,李倩[5]（2019）在《芒果MinSPP基因的克隆及表达载体构建》一文中研究指出磷酸蔗糖磷酸酶(sucrose phosphate phosphatase)是合成蔗糖的关键酶,为了研究其在芒果果实中蔗糖合成的作用机制,从芒果果肉中克隆得到1个与蔗糖合成相关的基因,将其命名为MinSPP,其cDNA全长序列为1 561 bp,开放阅读框为1 275 bp,编码424个氨基酸,蛋白质分子量为48.46 ku,等电点为5.34,对MinSPP基因编码的蛋白进行系统发育分析,发现其与克莱门柚具有较近的亲缘关系。采用qRT-PCR对该基因在后熟处理的贵妃芒果肉中的表达量进行分析,结果显示从青熟期到成熟期芒果果肉中该基因表达量逐渐上升,从成熟期到完熟期芒果果肉表达量逐渐降低,其中成熟期芒果果肉中表达量较高。本研究深入了解了芒果蔗糖合成的分子机制,进一步构建了pBI121-MinSPP过表达载体,为MinSPP的功能鉴定奠定了理论基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年20期）
李苗,陈晓军,马斯霜,白海波,郑国保[6]（2019）在《小麦淀粉分支酶CRISPR/Cas9基因敲除系统gRNA表达载体构建》一文中研究指出本研究以小麦淀粉分支酶(starch branching enzyme, SBEIIa)为研究对象,选取SBEIIa基因外显子5'端的第一及第二个外显子区域的4个SBEIIa-gRNA参试靶点进行靶位点活性检测,确定最佳基因敲除靶点。采用试剂盒法,以选定基因敲除靶点序列设计gRNA引物,通过oligo二聚体(Oligoduplex)合成、oligo二聚体插入载体、转化及鉴定等步骤,构建具有表达小麦淀粉分支酶gRNA (guide RNA)的CRISPR/Cas9基因敲除系统,获得小麦淀粉分支酶基因敲除载体。根据载体中插入序列,进行测序分析;测序结果能够确认gRNA已经完整准确地连入载体。研究构建的小麦淀粉分支酶基因敲除载体能对小麦SBEIIa基因表达量进行负向调控,对后续小麦淀粉分支酶基因及向其它相关基因编辑调控研究提供科学依据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年20期）
王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲[7]（2019）在《HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得》一文中研究指出为研究水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因在非生物胁迫中的生物学功能,根据OsPIP2;7基因序列设计特异性引物,以水稻品种中花11的叁叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板,克隆OsPIP2;7。采用嵌套PCR的方法,将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2;7基因序列的3′端,然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中,构建pHB-OsPIP2;7-3×HA载体。以中花11成熟胚愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化,获得阳性转化子。提取转基因植株的DNA,进行潮霉素阳性植株的筛选。将阳性植株进行RNA表达检测,获得OsPIP2;7基因表达量上升的转基因阳性植株。为了检测转基因植株中OsPIP2;7蛋白的表达情况,提取OsPIP2;7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后,用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示,OsPIP2;7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达。获得的过表达OsPIP2;7转基因新材料,将为研究OsPIP2;7基因的生物学新功能提供试验基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年05期）
龚小霞,李超,曹曦月,杨诚诚,黄超[8]（2019）在《人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响》一文中研究指出构建人叉头转录因子O亚型6(forkhead box class O6, FOXO6)基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增FOXO6基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-FOXO6重组质粒;将构建成功的重组质粒和空载体分别转染至U251细胞中进行表达,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’, 6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色法分别检测FOXO6对U251细胞中转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α, PGC-1α)转录水平的影响及其对U251细胞存活的影响。经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功;FOXO6转染组中的PGC-1α转录水平出现了明显的下降,并出现了明显的细胞凋亡现象。上述结果显示,pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功,体外实验暗示FOXO6可能通过抑制PGC-1α的表达来抑制U251细胞的能量代谢及抗氧化过程,进而诱导U251细胞的凋亡,这为后续深入研究FOXO6在胶质瘤上的作用机制和靶点奠定了基础。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2019年05期）
吴竞,何业华,谢桃,丁雅琦,栾爱萍[9]（2019）在《菠萝果眼发育相关基因AcCBL超表达载体构建及其转化的研究》一文中研究指出菠萝(Ananas comosus)果实是由50～200个小果呈螺旋状围绕着果序轴而成的聚花果,每个小果顶部有一个花腔发育而来的果眼。菠萝果眼是宿存的花萼、果托、子房顶部包围而成的一个空腔,中间有枯萎的花瓣、雄蕊和花柱,果眼大小会直接影响果实的外观、可食率和削皮难易等。在种质资源中,一般果眼深度0.8～1.5 mm不等,深浅性状遗传稳定,是其果实评价的重要指标。因此,研究果眼发育相关基因具有重要意义。CBL(钙调磷酸酶B亚基蛋白calcineurinB-like)转录因子作为特殊的钙感受器在植物生长发育和逆境胁迫等响应过程中发挥重要作用。本课题组前期研究表明,AcCBL在苞片、花萼中表达量高,与果眼发育相关。以‘神湾’菠萝花萼为材料,提取RNA,反转录成cDNA;根据菠萝基因组数据库中检索到的AcCBL序列设计一对特异性引物进行克隆;利用Gateway技术,先后用2×Gateway BP、LR克隆酶分别在25℃孵育不少于5 h,将AcCBL转入入门载体pDONR和最终载体pK7WG2D中,构建成超表达载体pAcCBL,在42℃热激转化至DH5α大肠杆菌;将pAcCBL转入农杆菌菌株GV3101感受态中,侵染菠萝胚性愈伤组织并进行共培养。将共培养的愈伤组织分别依次转入500 mg·mL-1 Carb+40 mg·mL-1 Km、400 mg·mL-1 Carb+50 mg·mL-1 Km和300 mg·mL-1 Carb+60 mg·mL-1 Km培养基(MS+2.0 mg·mL BA+1.0 mg·mL-1 NAA)中进行连续3次筛选。淘汰白化芽和白色愈伤组织团块,选择并切取再生的绿芽和绿愈伤组织进行下一轮的筛选培养直至生根。从‘神湾’菠萝花萼中克隆得到AcCBL,包含1个长度为1 227 bp的开放阅读框,可编码408个氨基酸。将构建的超表达载体pAcCBL转入DH5α大肠杆菌,挑取12个阳性克隆进行PCR鉴定,引物为载体上的正向引物TCGCGTTAACGCTAGCATGGATCTC和基因本身的反向引物AGAAAGCTGGGTTCTACTCATTGTATGTTCTT。对筛选得到的4个阳性质粒进行测序,其结果和AcCBL的序列完全一致,表明pAcCBL过表达载体构建成功。继而将其转入农杆菌,经过琼脂糖凝胶电泳检测,其条带大小结果和AcCBL的序列完全一致。对共培养的675块菠萝胚性愈伤组织经过浓度40 mg·mL-1 Km首轮筛选后共获得绿芽103个,绿芽率15.25%;第2、3轮筛选时逐渐将Km浓度提高50和60 mg·mL-1,以减少假阳性转化体,绿芽率分别为8.38%和2.75%。经3轮筛选后共获得2个绿苗,转化率为3.51%。对转化芽的分子检测进在进行中。(本文来源于《中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集》期刊2019-10-21）
朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯[10]（2019）在《鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建》一文中研究指出为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
表达载体的构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达载体的构建论文参考文献
[1].许会静,刘晴,闫冰,刘微,张磊.AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达[J].吉林大学学报(医学版).2019
[2].李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜.人IgEFc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用[J].中国皮肤性病学杂志.2019
[3].李惠华,曾碧玉,王伟,常强,苏明华.枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位[J].农业生物技术学报.2019
[4].袁园,张愉,张丽华,范文胜,韦天超.鸡传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达载体的构建及其产物抗原性的鉴定[J].畜牧与兽医.2019
[5].白蓓蓓,荆永琳,蔡秉宇,蓝丽,李倩.芒果MinSPP基因的克隆及表达载体构建[J].江苏农业科学.2019
[6].李苗,陈晓军,马斯霜,白海波,郑国保.小麦淀粉分支酶CRISPR/Cas9基因敲除系统gRNA表达载体构建[J].分子植物育种.2019
[7].王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲.HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得[J].华北农学报.2019
[8].龚小霞,李超,曹曦月,杨诚诚,黄超.人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2019
[9].吴竞,何业华,谢桃,丁雅琦,栾爱萍.菠萝果眼发育相关基因AcCBL超表达载体构建及其转化的研究[C].中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集.2019
[10].朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯.鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建[J].中国畜牧兽医.2019