哈药集团制药总厂黑龙江哈尔滨150086
摘要：建立注射用赖氨匹林中赖氨酸的检验方法，采用高效液相色谱法，样品中的赖氨酸用十八烷基键合硅胶色谱柱分离，液相色谱-紫外检测器测定，内标法定量，待测物的回收率＞96%，相对标准标准偏差＜2%。该方法简便，准确，重现性好，适用于赖氨匹林中赖氨酸含量的测定。降低了检验成本。
关键词：高效液相色谱仪；赖氨酸；十八烷基键合硅胶色谱柱；检验成本
本品为DL-赖氨酸乙酰水杨酸盐。类别为解热镇痛、非甾体抗炎药。用于控制发热及轻、中度疼痛等症状。贮藏条件为密闭，在阴凉干燥处保存。中国药典中赖氨匹林含量测定的方法需分别测定阿司匹林及赖氨酸的含量；其中赖氨酸的检测方法原料药为电位滴定法，注射剂的测定方法为氨基酸分析仪或高效液相色谱仪进行分离测定。采用高效液相色谱仪进行测定通常我们需要购买特定的氨基酸分析柱，以及OPA衍生试剂包来测定赖氨酸的含量；检验成本较高，经研究改进，采用1mol/L三乙胺乙腈溶液、0.1mmol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液进行柱前衍生以及丙氨酸为内标溶液测定赖氨酸的含量，待测物的回收率＞96%，相对标准标准偏差＜2%。
1实验部分
1.1仪器、试剂、对照品及用具
高效液相色谱仪、电子天平（感量0.00001g）、超声波清洗仪、容量瓶、移液管、量筒、烧杯、抽滤装置、移液枪、无水乙酸钠、冰醋酸、乙腈、盐酸、三乙胺、异硫氰酸苯酯、正己烷、丙氨酸对照品、盐酸赖氨酸对照品
1.2色谱条件、溶液配制及测定法
色谱柱DurashellAAC183μm4.6×150mm、检测波长254nm、流速1.0ml/min、柱温40℃、进样量2µl
流动相Ａ：称取无水醋酸钠15.19g，加水1850ml溶解，用冰醋酸调节PH值至6.5，再加乙腈140ml，混合脱气后备用。
流动相B：乙腈800ml，加水200ml溶解，脱气，备用。
0.02mol/L盐酸溶液的配制取盐酸1.8ml，加水至1000ml溶解，脱气。
1mol/L三乙胺乙腈溶液的配制取三乙胺1.4ml，加乙腈8.6ml溶解。
0.1mmol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液配制取异硫氰酸苯酯25μl，加乙腈2ml溶解。
内标溶液的配制称丙氨酸对照品25mg，置于25ml量瓶中，加0.02mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释至刻度。
供试品溶液的制备精密称取本品约46mg，置25ml量瓶中，加0.02mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释至刻度。
对照溶液的制备精密称取盐酸赖氨酸对照品约24mg，置25ml量瓶中，加0.02mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释至刻度。
测定法精密量取对照溶液和供试品溶液1ml分别置于10ml西林瓶中，每个西林瓶中分别加入内标溶液1ml，加入三乙胺乙腈溶液1ml，加入异硫氰酸苯酯乙腈溶液1ml，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷4ml，振摇后放置10分钟，取下层溶液分别注入液相色谱仪。供试品溶液以流动相A，流动相B按下表进行线性梯度洗脱，记录色谱图。（典型图谱见表1）
1.3精密度试验
精密吸取对照溶液2µl注入液相色谱仪，连续进样5次，以内标法按峰面积比值计算，结果RSD=0.47%
1.4重现性试验
取同一批号供试品5份，按其制备方法进行测定，结果RSD=0.97%
1.5回收率试验
精密称取已知赖氨酸含量（44.8%）的赖氨匹林供试品40.23mg置25ml量瓶中，加0.02mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释至刻度；精密盐酸赖氨酸对照品（含赖氨酸79.2%），24.31mg置25ml量瓶中，加0.02mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释至刻度；精密量取供试品及对照品溶液混合为1ml加入内标液1ml，按测定法依法测定，结果见表2。
表1典型图谱
表3使用特定的色谱柱及OPA衍生试剂包测定的图谱
2．结果与讨论
由表1与表3图中可以看出：通过优化色谱条件，十八烷基硅烷键合硅胶柱可以替代氨基酸专用柱进行赖氨酸的分离，常规的试剂及标准品替代OPA衍生试剂专用包，降低了检验成本。
本方法经方法学确认和与使用专用色谱柱及衍生试剂专用包的数据对比，结果可靠，专属性强，适用于注射用赖氨匹林中赖氨酸的含量测定。
参考文献：
[1]林玲.色谱通讯，1994，（12）：4-6
[2]刘慧文.氨基酸和生物资源，1995，17（2）：50-55
[3]Waters液相色谱通讯增刊AccQ.Tag专集北京：Waters中国有限公司.1997.6-8