导读:本文包含了酵母表面展示技术论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:酿酒酵母表面展示技术,Envelope基因,口服疫苗,免疫活性
酵母表面展示技术论文文献综述
黄子恩,张炜,岑黔鸿,耿耘,雷涵[1]（2018）在《基于酿酒酵母表面展示技术构建寨卡口服疫苗及其免疫活性初探》一文中研究指出目的:基于酿酒酵母表面展示技术构建具有免疫活性的寨卡病毒(ZIKV)口服疫苗。方法:以Zika/SZ01/2016的包膜(Envelope)基因作为研究对象,以酿酒酵母表面展示质粒p YD1为骨架,构建EBY100/p YD1-Envelope。通过蛋白质印迹法(western blot)、免疫荧光分析和流式细胞仪分析,对Envelope蛋白进行定性分析,通过BCA蛋白测定试剂盒对Envelope蛋白进行定量分析。以SPF级的BALB/c小鼠作为动物模型,考察3种免疫方案(给药方案A:50 OD_(600 nm)·d~(-1)×3 d,给药方案B:75 OD600 nm·d~(-1)×2 d,给药方案C:150 OD_(600 nm)·d~(-1)×1 d)的口服免疫效果。结果:3种免疫方案均能诱发产生较高水平的体液免疫应答和黏膜免疫应答。给药方案C的免疫效果最佳。结论:本研究首次探讨了ZIKV口服疫苗的免疫效果,为有效预防ZIKV感染提供了一种可供参考的解决方案。(本文来源于《中国医药导刊》期刊2018年04期）
吴文君[2]（2017）在《PD-1/L1抗体药平台较量》一文中研究指出12月13日，信达生物提交的PD-1单抗信迪单抗的上市申请获得CDE受理，成为首个提交上市申请的国产PD-1抗体。此前的11月2日，百时美施贵宝提交PD-1抗体Nivolumab的上市申请，为首个国内申请上市的PD-1抗体。滚动申报“超车”？$(本文来源于《医药经济报》期刊2017-12-18）
王林丽[3]（2016）在《应用酵母表面展示技术筛选可诱导HIV-1广谱中和抗体的膜蛋白抗原的研究》一文中研究指出HIV-1疫苗是当今人类面临最难攻克的疫苗之一。现有的疫苗抗原无法诱导出广谱的中和抗体,成为目前有效疫苗设计的一个主要障碍。HIV-1完整膜蛋白、重组蛋白以及病毒样颗粒,存在抗原表位暴露程度低、非特异表位竞争、表位暴露存在时效性等缺点,不能成为理想的疫苗候选抗原。HIV-1病毒的包膜蛋白gp41的MPER区是能够引起多种广泛中和抗体(2F5,4E10和10E8等)的重要靶点,MPER区在病毒与细胞膜融合的过程中起到重要的作用,在gp120-CD4结合后,MPER区发生了一系列构象的变化,中和抗原表位也发生了短暂的暴露,被机体免疫系统识别,从而产生广谱中和抗体应答。但是MPER区复杂且多变的构象导致我们无法获得其构象的详细信息,因此为了获得强的针对MPER区的广谱中和抗体反应,我们做了如下的设计:一、利用随机突变PCR技术,构建一个gp41-MPER突变文库,为使文库产生足够程度的突变,即让蛋白结构发生一定的改变但又不发生太大的变化,Error-Prone PCR设定条件时将采用0.2%~5%的突变率,然后将突变文库构建到酿酒酵母表达载体p CTCON2上,形成一个p CTCON2-MPER突变库。二、利用酵母表面展示系统,将突变文库电转导入酵母细胞,半乳糖诱导表达,从而将突变蛋白库展示到酵母表面。叁、利用流式细胞筛选技术,筛选出与广谱中和抗体2F5、4E10结合力强的突变株,将筛选出的细胞重新放入培养基培养,按上述步骤,进行二次筛选,重复四次,经四次筛选后,认为所获得的展示酵母应与相对应的抗体结合能力最强。四、对筛选出的抗原进行序列分析确定目的抗原,提取基因组,测序,确定突变位置。五、分析筛选出的抗原诱导相应中和抗体的能力,将展示抗原的酵母突变株免疫实验动物,叁次免疫,免疫后取血清,利用间接ELISA检测法,检测突变抗原蛋白的免疫原性,即豚鼠血清中4E10、2F5样抗体的滴度。本研究的意义:(1)本课题利用酵母展示技术筛选出与广谱中和抗体具有高亲和力的抗原。(2)对筛选出的抗原进行序列分析可知哪些位点能够影响抗原抗体的结合。(3)对筛选出的理想抗原可以进行结构分析,分析所获得的突变抗原在结构及抗原位点上与原始抗原有何异同,从而希望获得有利于疫苗抗原设计的大量数据信息,以指导其作为疫苗候选抗原表位。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-06-01）
李梦悦[4]（2016）在《毕赤酵母表面展示海藻糖合酶技术的研究》一文中研究指出海藻糖合酶是一种能够一步法转化麦芽糖生成海藻糖的酶制剂,其底物专一性较高,使用该酶生产海藻糖工艺简单,不受底物麦芽糖浓度的影响,是工业生产海藻糖的首选。为获得具有生产海藻唐合酶能力的毕赤酵母表面展示载体,以实验室筛选的恶臭假单胞杆菌Pseudomonas putide P06海藻糖合酶基因为模板,PCR扩增得到海澡糖合酶基因(tres,2064 bp),连接至pPICZαA质粒中,获得重组质粒pPICZαA-tres。以来自pEGFP-N1质粒的增强型绿色荧光蛋白的基因(egfp,720bp)为外源展示蛋白编码基因,以来源于酿酒酵母的共价连接酵母细胞壁的Pir系列蛋白的Pir1p成熟肽作为毕赤酵母表面展示的锚定蛋白,利用PCR技术扩增得到pir1p(847 bp),连接至重组质粒pPICZαA-tres中,构建成pPICZαA–tresegfp-pir1p重组质粒。将重组质粒pPICZαA–tres-egfp-pir1p利用电转技术转化进毕赤酵母GS115中,外源蛋白在α-factor信号肽的引导下分泌表达并锚定到细胞壁上,展示在细胞壁表面。经流式细胞仪检测到荧光强度,说明外源蛋白成功展示到毕赤酵母,并以此为判断依据优化出外源蛋白表达量较高的发酵条件。继续将pir1p(847 bp)连接至重组质粒pPICZαA-tres中,重新构建重组质粒pPICZαA–tres-pir1p,转化至毕赤酵母GS115,筛选出阳性克隆子,进行发酵试验。发酵产物经离心、破碎并使用昆布多糖酶水解、洗脱,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析可见明显融合蛋白条带,说明海藻糖合酶已成功锚定在毕赤酵母表面。将重组毕赤酵母使用pH 7.5的缓冲液清洗并重悬,与底物浓度为300g/L的麦芽糖在30℃-60℃水浴条件下作用2 h,反应产物藻利用HPLC检测,能够检测到海藻糖合酶学活性300.65 U/g。在优化后的酶促反应条件pH 7.5,50℃表面展示海藻糖合酶的酶活达到600.65 U/g。40℃-50℃之间酶活较稳定,保温60 min后残留酶活的相对活力达75%以上;最适的反应pH值为7.5,并在偏碱性环境下稳定。(本文来源于《齐鲁工业大学》期刊2016-05-28）
王洁,余磊,杨东,李婕,王洪钟[5]（2016）在《基于酵母表面展示技术的胸苷磷酸化酶全细胞催化剂的构建》一文中研究指出胸苷磷酸化酶(TP)在核苷类代谢通路中发挥重要作用,可催化生成多种核苷类似物。构建了TP的酵母表面展示系统作为全细胞催化剂。从大肠杆菌K12菌株中克隆编码TP的deo A基因,利用酵母表达质粒p KFS构建重组质粒,电击转化毕赤酵母GS115菌株。高拷贝阳性转化子经甲醇诱导96 h后,免疫荧光结果显示TP在酵母细胞表面成功展示。利用β-胸苷为底物,重组酵母细胞作为全细胞催化剂,经HPLC检测,结果表明展示在酵母表面的TP有催化活性,可以催化β-胸苷生成产物胸腺嘧啶。(本文来源于《生物技术通报》期刊2016年01期）
王高玲[6]（2015）在《利用酵母表面展示技术对肠炎沙门氏菌FliC蛋白在鸡体内抗原特性的研究》一文中研究指出肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)是一类泛嗜性沙门氏菌,其不仅是危害养禽业发展最为严重的病原之一,而且经常以污染的家禽产品为载体危害人类健康。由fliC基因编码的鞭毛蛋白是沙门氏菌重要的保护性抗原之一,可引起机体强烈的免疫应答反应。研究Fli C蛋白的优势抗原区对沙门氏菌新型疫苗的研发,进而减少人类食源性肠炎沙门氏菌的感染具有重要意义。本研究利用DNaseⅠ将SE的fliC基因随机酶切成100-500 bp的DNA小片段,将这些片段插入到酵母表面展示载体pCTCON-2中,并将其转入大肠杆菌中构建酵母随机展示文库pCTCON-fliC-Lib,其库容量大小约为2.7×105。通过基因测序确定文库p CTCON-fliC-Lib的随机性和插入片段的大小,结果显示随机挑取的50个克隆中的所有片段插入方向都是随机的,这些片段的大小在100-500 bp范围内,其分布能够覆盖整个fliC基因。将酵母展示文库pCTCON-fliC-Lib电击转入酿酒酵母EBY-100菌株中诱导表达。用SM6阳性血清染诱导表达的FliC文库p CTCON-fliC-Lib,通过流式细胞仪分选阳性酵母,经两轮分选后,提取阳性酵母的质粒进行基因测序分析。结果显示SM6的FliC蛋白的抗原区位于D1区(1-201位氨基酸)、D2区(202-352位氨基酸)和D4区(394-505位氨基酸),非抗原区位于D3区(353-393位氨基酸)。将Fli C蛋白的4个区域进行酵母表面展示表达并通过流式分析4个区域的抗原特性;同时4个区域进行原核表达并通过ELISA分析其抗原特性。流式分析和ELISA分析结果显示Fli C蛋白的4个区域中,D1区和D2区为主抗原区,D4区为次抗原区,D3区为非抗原区。通过鸡群免疫FliC蛋白的各个抗原区分析各抗原区在鸡体内的功能,结果表明FliC蛋白的D1区、D2区、D4区均能降低SM6在鸡体内的定植。本研究利用酵母表面展示技术将构建的肠炎沙门氏菌SM6菌株的Fli C蛋白抗原文库展示于酵母表面,筛选并鉴定了Fli C蛋白的主抗原区,为抗肠炎沙门氏菌新型疫苗的研发提供理论基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2015-05-01）
杨非,曹萌,金怡,杨秀山,田沈[7]（2012）在《酿酒酵母细胞表面展示技术在燃料乙醇生产中的应用及研究进展》一文中研究指出酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae细胞表面展示表达系统是一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统,具有糖基化作用及蛋白翻译后折迭等优势,更利于基因工程操作。近年来,酵母细胞表面工程作为一种新兴策略来固定化淀粉水解酶、纤维素水解酶以及木聚糖降解酶,从而应用于燃料乙醇的生产。文中着重介绍了酵母细胞表面展示系统的基本原理、研究现状以及在生物乙醇生产中的应用前景及所面临的挑战。(本文来源于《生物工程学报》期刊2012年08期）
王佳堃,孙中远,刘建新[8]（2011）在《酵母细胞表面展示技术》一文中研究指出酵母细胞表达体系具备较为完善的蛋白质翻译后修饰和分泌的机制。以酵母为基础的细胞表面展示技术是一项新兴的真核蛋白展示技术,已成功应用于蛋白质识别、蛋白质的固定化和定向进化研究,成为了蛋白质工程研究的重要工具。根据与酵母细胞壁的外源目的蛋白融合部位的不同,酿酒酵母表面展示系统主要分为凝集素系统和絮凝素系统2大系统。将该技术引入动物营养研究领域,有望通过诱导宿主产生原虫或甲烷菌的抗体,对瘤胃微生态进行调控,从而以减少甲烷排放;生产高活性的全细胞催化剂,以提高反刍动物和单胃动物对纤维物质的利用效率。为此,本文就该技术的原理、特点和应用领域进行了综述。(本文来源于《动物营养学报》期刊2011年11期）
陶站华,王凤芝[9]（2010）在《酵母表面展示酶技术》一文中研究指出酵母表面工程是利用载体蛋白将外源蛋白以活性形式锚定于酵母细胞外表面,免去了外源蛋白的纯化和固定,并且对其有稳定作用。本文综述了酵母表面展示技术的原理、步骤、优点以及目前常见的酵母表面展示酶,如淀粉水解酶、纤维素水解酶、与木糖利用相关的酶、脂肪酶、有机磷水解酶的构建及应用。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2010年03期）
韩双艳,李华珍,金子,黄登峰,任昌琼[10]（2009）在《酵母细胞表面展示技术及其在非水相酶催化合成中的应用》一文中研究指出酵母展示技术是将外源蛋白与酵母细胞壁蛋白融合,并将外源蛋白表达在酵母细胞表面。酵母展示技术已广泛应用于各种功能蛋白的表达及筛选。以下重点介绍酵母展示技术在脂肪酶展示体系构建及其在脂肪酸甲酯、短链芳香酯及糖酯生物合成中的应用。(本文来源于《生物工程学报》期刊2009年12期）
酵母表面展示技术论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
12月13日，信达生物提交的PD-1单抗信迪单抗的上市申请获得CDE受理，成为首个提交上市申请的国产PD-1抗体。此前的11月2日，百时美施贵宝提交PD-1抗体Nivolumab的上市申请，为首个国内申请上市的PD-1抗体。滚动申报“超车”？$
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母表面展示技术论文参考文献
[1].黄子恩,张炜,岑黔鸿,耿耘,雷涵.基于酿酒酵母表面展示技术构建寨卡口服疫苗及其免疫活性初探[J].中国医药导刊.2018
[2].吴文君.PD-1/L1抗体药平台较量[N].医药经济报.2017
[3].王林丽.应用酵母表面展示技术筛选可诱导HIV-1广谱中和抗体的膜蛋白抗原的研究[D].吉林大学.2016
[4].李梦悦.毕赤酵母表面展示海藻糖合酶技术的研究[D].齐鲁工业大学.2016
[5].王洁,余磊,杨东,李婕,王洪钟.基于酵母表面展示技术的胸苷磷酸化酶全细胞催化剂的构建[J].生物技术通报.2016
[6].王高玲.利用酵母表面展示技术对肠炎沙门氏菌FliC蛋白在鸡体内抗原特性的研究[D].中国农业科学院.2015
[7].杨非,曹萌,金怡,杨秀山,田沈.酿酒酵母细胞表面展示技术在燃料乙醇生产中的应用及研究进展[J].生物工程学报.2012
[8].王佳堃,孙中远,刘建新.酵母细胞表面展示技术[J].动物营养学报.2011
[9].陶站华,王凤芝.酵母表面展示酶技术[J].现代生物医学进展.2010
[10].韩双艳,李华珍,金子,黄登峰,任昌琼.酵母细胞表面展示技术及其在非水相酶催化合成中的应用[J].生物工程学报.2009
标签：酿酒酵母表面展示技术; Envelope基因; 口服疫苗; 免疫活性;