导读:本文包含了亲和富集论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:可逆加成断裂链转移聚合,富集与分离,温度敏感色谱材料
亲和富集论文文献综述
戴国鑫,王迪,王彦,曹之涵,戴荣继[1]（2019）在《用于富集磷酸化合物的温度敏感亲和色谱材料的制备及其应用》一文中研究指出基于可逆加成断裂链转移聚合(RAFT)法,通过快速引入官能团的方式合成了固定化金属离子温度敏感亲和色谱材料二氧化硅@聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-氨甲基膦酸)-钛离子(Ⅳ)(silica@p(NIPAAm-co-AMPA)-Ti~(4+)),并应用于HPLC中。采用红外光谱、X-射线光电子能谱、热失重和差示量热法对制备的材料进行表征,证明该材料被成功合成并具有较好的温度敏感性能。将该材料用于叁磷酸腺苷(ATP)标准品的富集与分离,实现了仅通过改变固定相温度的方式来达到富集与分离小分子磷酸化合物的目的,为富集分离磷酸化肽段奠定了基础。同时该材料还能以在线补充钛离子的方式延长使用寿命。(本文来源于《色谱》期刊2019年04期）
张丽媛,王立恒,王丽莉,董佩佩,刘和真[2]（2019）在《基于迭氮基-氰基点击化学的苯硼酸亲和硅胶的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用》一文中研究指出硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟。硼酸亲和材料的选择性,生物相容性,制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题。该研究立足硼酸亲和材料开发的关键问题,设计并开发了一种新型苯硼酸亲和硅胶(TCNBA)。该材料采用基于迭氮基-氰基的无铜催化点击化学方法进行合成,生物相容性好,制备方法简便。红外光谱和X射线光电子能谱图表征结果证明材料合成成功。TCNBA的糖肽富集选择性利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行评价,结果表明,TCNBA能够分别从辣根过氧化物酶(HRP)和免疫球蛋白G(IgG)酶解液中鉴定出13个和11个糖肽;以HRP和牛血清白蛋白(BSA)酶解液混合物(物质的量比1∶10)作为研究对象,富集后能够鉴定出5个糖肽。TCNBA的糖蛋白富集选择性利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)进行评价,以HRP、IgG、核糖核酸酶B(RNaseB)作为考察对象,结果表明,TCNBA对糖蛋白具有较好的富集选择性。以实际样品人血清为测试对象验证TCNBA在实际生物样品中的应用价值。结果显示,富集后非糖蛋白得到较大程度去除,糖蛋白得以富集。所制备的材料和方法具有大规模实际蛋白质样品分离处理的应用前景。(本文来源于《色谱》期刊2019年03期）
张君才,陈佑宁,卫引茂[3]（2018）在《高容量硼酸亲和磁性纳米粒子的制备及其在邻羟基生物分子富集中的应用》一文中研究指出硼亲和吸附法是分离富集邻羟基物质的重要方法。为提高吸附剂的吸附容量,本研究采用聚乙烯亚胺修饰磁性纳米粒子,增加粒子表面引发剂的密度,再通过表面引发原子转移自由基聚合法(SI-ATRP)将3-丙烯酰基苯硼酸原位聚合在纳米粒子表面,制备了一种高密度聚合物分子刷型的硼酸亲和磁性纳米粒子吸附剂。采用磁性分散固相萃取法对非邻羟基和邻羟基物质的混合液进行富集,发现此吸附剂对邻羟基小分子和生物大分子具有良好的吸附特异性;采用吸附等温线法测定了吸附剂的吸附容量,发现此吸附剂对邻苯二酚、腺苷和卵清蛋白的吸附容量分别为(151±32)μmol/g、(123±18)μmol/g和1.5μmol/g,远高于传统吸附剂的吸附容量。采用所制备的硼酸亲和磁性纳米粒子对尿液中4种核苷和蛋清中的糖蛋白进行萃取,结果表明,此吸附剂能够有效去除生物样品中的干扰物,且对核苷具有较高的萃取回收率(83.8%~108.7%,RSD<15%),对糖蛋白有特异性富集作用,说明此吸附剂在生物样品的选择性富集中具有良好应用潜能。(本文来源于《分析化学》期刊2018年09期）
王祥宇[4]（2018）在《特异性小肽亲和整体柱对单抗药的富集纯化策略研究》一文中研究指出随着单克隆抗体药物在药学、治疗学和诊断学上的迅猛发展,发展单克隆抗体药物的富集纯化技术变得十分重要。目前使用最为广泛的是以蛋白质A为亲和配基的琼脂糖亲和色谱,虽然该方法特异性强,但是配基存在成本高、稳定性差、配基易脱落、易降解、对pH敏感、寿命短等缺点,同时,琼脂糖基质导致的非特异性吸附也为后续的纯化分析带来极大的困难。小肽配基价格低廉、化学性质稳定、生物相容性好、洗脱条件非常温和、使用寿命长,是替代蛋白质A的最佳候选者之一。另一方面,有机聚合物整体色谱柱的基质是由原位聚合得到的聚合物,具有孔隙度高、比表面积大、表面易修饰、耐酸碱性好等优点,更重要的是通过改变交联剂的种类可以显着降低材料表面的非特异性吸附。本文的研究重点就是将小肽配基与有机聚合物整体材料相互结合,使用不同的制备方案,充分利用两者各自的优势,将其用于单克隆抗体药物的富集纯化。同时结合小肽配基的研究现状,对小肽亲和整体柱在单抗药物富集纯化方面的应用潜力、发展方向进行了展望。第一章,系统介绍了蛋白纯化技术的分类及发展现状和小肽配基亲和纯化策略研究概况,并对其在单抗药物富集纯化中的应用研究进行了详细研讨,探讨了小肽配基与整体材料相结合的优势。同时总结了常见的两大类制备方法对整体柱色谱性能的影响及各自带来的优缺点,并在此基础上提出了本论文的研究思路、实验方案及创新点。第二章,His-tag-DAAG被设计作为亲和配基,首次利用金属螯合多步法制备取得DAAG功能化亲和整体柱,该制备方法首先以甲基丙烯酸缩甘油酯(GMA)作为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)作为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,水、异丙醇和1,4-丁二醇作为叁元生孔体系,制备取得基质整体柱poly(GMA-co-EDMA);然后,利用开环反应,将螯合剂N,N-双(羧甲基)-L-赖氨酸(ANTA)固定于材料表面;接着,硫酸镍灌柱获得固定化镍离子亲和整体柱;最后,将修饰后的小肽配基His-tag-DAAG以金属螯合的方式固定于整体柱,获得DAAG功能化亲和整体柱。扫描电镜(SEM)、元素分析、X射线冷谱(EDS)、荧光显微镜、热重分析(TGA)、傅里叶红外光谱(FT-IR)、压汞法、氮气吸附法和液相色谱等手段被运用进行材料表征。第叁章,对金属螯合多步法制备获得的DAAG功能化亲和整体柱的亲和能力进行了系统考察。通过对七种不同蛋白的色谱保留行为的研究,发现DAAG功能化亲和整体柱比传统的固定化金属亲和整体柱特异性更强;通过前沿色谱分析技术,在hIgG和牛血清蛋白不同浓度或不同测试流速条件下,获得了DAAG功能化亲和整体柱和固定化镍离子亲和整体柱各自的动态吸附容量,以此绘制吸附等温线,拟合得到亲和参数,并进行详细比较,所有结果都表明DAAG功能化亲和整体柱具有更强的特异性、选择性和吸附能力;经过20次的重生循环使用,前10次的动态吸附量保持稳定,说明该柱稳定性较好;为了考察其对实际样品的应用潜力,该整体柱被用于赫赛汀细胞培养液中赫赛汀和人类血清中IgG的富集纯化,并将各组分进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)验证。所有结果都表明DAAG功能化亲和整体柱对单克隆抗体药物具有较好的亲和富集能力。第四章,鉴于金属螯合多步法制备DAAG功能化亲和整体柱的过程较为繁琐,本章尝试探索一步法和简化制备步骤的多步法。以甲基丙烯酰修饰的EDPW小肽作为功能性单体,更为亲水的N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)作为交联剂,甲醇和四氢呋喃作为生孔剂,通过一步法来制备EDPW功能化亲和整体柱。通过对聚合物中各组成分的比例优化,最终得到了通透性好、柱压低、机械强度高的整体柱。但是,特异性测试发现一步法制备的亲和整体柱存在配基包裹的问题。对于简化制备步骤后的多步法,首先由1-乙烯基咪唑(VIM)为单体,MBA作为交联剂,甲醇和四氢呋喃作为生孔剂,制备poly(VIM-co-MBA)基质柱,通过对聚合物中各组成分的比例优化,得到了柱压低、通透性好、机械强度高的基质柱;然后将硫酸镍灌柱,制备获得功能化镍离子亲和整体柱,最后His-tag-DAAG小肽配基以螯合的方式固定,获得DAAG功能化亲和整体柱。通过特异性测试,该方法固定的小肽配基表现出较好的亲和能力。可见,这种以单体自身为螯合剂来简化金属螯合多步法制备整体柱的策略是可行的。第五章,对本论文的研究成果及不足进行了分析讨论,并对小肽亲和整体柱的制备与改性及其在单克隆抗体药物富集纯化中应用前景进行展望。(本文来源于《暨南大学》期刊2018-06-30）
尚骏[5]（2018）在《基于亲和富集质谱分析的宿主抗病毒蛋白质组学研究》一文中研究指出基于质谱的定量蛋白质组学技术是当今生命科学领域的一项重要研究手段。在本研究中,我们利用亲和富集并结合高性能质谱分析分别对病毒刺激后宿主细胞的蛋白相互作用组及泛素化修饰组的变化进行了定量蛋白质组学研究。TBK1,STING和MDA5是叁种在宿主细胞抗病毒天然免疫反应中起重要作用的蛋白,系统性地寻找宿主细胞中与这叁者相互作用的蛋白有望扩展对抗病毒天然免疫应答的认识。在本论文的第二章,我们通过免疫亲和串联质谱研究了病毒刺激或未刺激的THP-1细胞中内源性表达的TBK1,STING和MDA5的蛋白相互作用。为了更全面地分析不同类型病毒激活的细胞抗病毒天然免疫反应,我们采用了 SeV(一种RNA病毒)和HSV(一种DNA病毒)分别刺激细胞;为了尽量保持细胞正常的生理状态,我们选择以内源性表达的蛋白作为诱饵分子;为了保证实验数据质量,针对不同的病毒刺激和诱饵分子实验组合,我们各进行了叁次生物学重复实验。本项研究一共进行了 33组独立的免疫亲和富集串联质谱分析实验,获得了 2000多个宿主蛋白的准确定量数据。经过严格的统计学分析,我们分别找到了 TBK1的相互作用蛋白13个,STING的相互作用蛋白31个,MDA5的相互作用蛋白16个。数据显示病毒感染前后TBK1和MDA5的相互作用蛋白变化不大,而STING的相互作用蛋白变化很大,揭示后者在抗病毒过程中启动了新的蛋白网络。我们对17个鉴定到的相互作用蛋白进行了功能验证,确认其中6个蛋白在天然免疫反应中的能够发挥功能,其中TTC4被鉴定为TBK1是相互作用蛋白及仙台病毒诱导的天然免疫反应的正调控因子。泛素化是最常见的蛋白翻译后修饰之一,研究表明泛素化修饰在细胞中许多抗病毒天然免疫信号通路中都发挥着重要作用。在本论文的第叁章,我们通过一种细胞体内稳定同位素标记细胞培养技术(SILAC)配合泛素残基免疫亲和富集技术以及质谱分析对病毒刺激或未刺激的THP-1细胞的泛素化进行了比较蛋白质组学研究。我们分别以HSV或SeV刺激细胞,与无病毒刺激的细胞进行对比,从而分析DNA或RNA病毒刺激前后宿主细胞泛素化修饰的变化。我们一共鉴定同时定量到了 3600多个宿主泛素化位点,通过拟合正态分布并选择95%的置信区间,我们筛选出了 276个病毒刺激后定量显着变化的泛素化位点,分别对应187个不同的宿主蛋白。我们的数据显示,病毒刺激导致泛素化位点升高的数量明显高于降低的位点数量;比较不同病毒刺激所获取的数据,我们发现泛素化升高的位点大多数在不同的刺激条件下具有特异性而泛素化降低的位点则具有一定的共性。我们对其中11个病毒刺激后泛素化显着变化的蛋白进行了功能验证,其中8个蛋白都显示出来对抗病毒天然免疫反应具有显着影响。(本文来源于《武汉大学》期刊2018-05-01）
申惠莲,卡哈尔·阿里木[6]（2018）在《基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集》一文中研究指出采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。(本文来源于《色谱》期刊2018年04期）
龙星宇[7]（2017）在《新型磁性亲和纳米探针的制备及其在磷酸化蛋白/多肽分离富集中的应用》一文中研究指出蛋白质的磷酸化是最重要的蛋白质翻译后修饰形式之一。在生物体液或组织中,许多低丰度内源性的磷酸化蛋白/多肽是具有高度特异性和临床灵敏性的生物标志物,这些生物分子对多种疾病的诊断及其病理的阐释可能提供有价值的信息。由于蛋白质磷酸化过程动态可逆且丰度低,从复杂的生物样品中通过质谱直接来检测磷酸化蛋白/多肽仍然是一个巨大的挑战。亲和纳米材料因具有大的比表面积、丰富的活性亲和位点及其独特的理化结构,在磷酸化蛋白/多肽的分离和富集方面已经引起了广泛的关注,并成为目前磷酸化蛋白质组学分离、富集和鉴定方面的研究热点。因此,本论文针对低丰度的磷酸化蛋白质/多肽在质谱分析中所面临的化学计量低、离子化效率低以及信号易受高丰度非磷酸化蛋白/多肽抑制等难点问题,开展了一系列的研究工作。通过设计和发展新型的磁性亲和纳米探针,选择性地富集磷酸化蛋白/多肽,建立高效、简单、快速和方便的磁分离过程,并将磁性亲和纳米探针应用于实际生物样品中磷酸化蛋白/多肽的分离富集,取得了令人满意的分离富集效果。本论文由绪论(第一章)和研究工作(第二～六章)组成,研究工作主要涉及两类新型亲和探针,即磁性尖晶石类(第二、叁和四章)和稀土基类的亲和探针(第五和六章),面向应用于对磷酸化蛋白/肽进行选择性富集而展开研究,具体内容如下:(1)简述了生物质谱技术的发展史,包括质谱仪的基本构造和工作原理,着重介绍基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)及其基质的选择,并对蛋白质/多肽组学研究及其引申出的磷酸化蛋白质/多肽组学的研究意义进行阐述,重点对磁性亲和纳米探针在磷酸化蛋白/多肽富集中的应用作了概述,归纳了近年来磷酸化蛋白/多肽富集新技术、新方法的应用,并对富集过程采用的磁性材料进行分类总结。最后,简要地介绍了本论文的研究思路。(2)可逆的蛋白质磷酸化作用在各种生物过程中起着非常重要的作用,特别是异常的磷酸化作用是导致人类疾病的原因或结果。我们通过合成简单、低廉的磁性Fe3O4纳米簇(Fe3O4MNCs)亲和探针,从人唾液样中成功地选择性富集和萃取内源性磷酸化肽段,并通过MALDI-TOFMS或二级质谱(MS/MS)来进一步说明和鉴定。制备的磁性纳米簇材料的物化性质通过SEM、TEM、XRD、EDX和SQUID等技术来表征。基于材料的高亲和性、快速分离、良好的生物相容性、优异的分散性以及特异性吸附磷酸化肽等特性,Fe3O4 MNCs可以从标准磷酸化蛋白和脱脂牛奶的胰蛋白酶酶解液,以及人唾液样中有选择性地和有效地萃取磷酸化肽。此外,我们还将该探针应用于磷酸化蛋白快速和有效的纯化和富集过程。Fe3O4 MNCs亲和探针整合了固体路易斯酸的功能和自身固有的磁性能为一体,且采用“双经济”(时间和费用)的合成策略,可以潜在地应用于大规模的内源性磷酸化蛋白质组学的研究。(3)通过简单溶剂热法合成尖晶石型磁性锰铁氧体(MnFe2O4)微球,将其作为一种新型吸附剂,用来选择性富集和有效分离磷酸化肽。这种MnFe2O4磁性亲和微球(MAMS),粒径均一,呈窄粒径分布,并显示出强的饱和磁化值及超顺磁性,便于磁分离应用,使操作更为简便。我们还探讨了 MnFe2O4微球的可能形成机理,在Fe3+和Mn2+分别作为铁源和锰源,同时作为双前驱体时,形成的是MnFe2O4微球;而单一的Fe3+和Mn2+作为前驱体时,则分别形成Fe3O4微球和MnOOH纳米片状结构,这些球状/片状纳米结构材料的形成过程,分别可以通过二次重结晶/Ostwald熟化机理来解释。MnFe2O4 MAMSs亲和探针在水溶液中展现出较优异的分散性,可以完成快速磁分离,且具有良好的可重复循环性。基于MnFe2O4中金属价态(Fe3+和Mn2+)和磷酸化肽中的磷酸基团(PO43-)之间的强配位作用,该探针对磷酸化肽具有高度选择性。实验还通过从β-casein及其与BSA胰蛋白酶酶解液的混合液(富含非磷酸化肽)中有效地富集磷酸化肽,证明了其高特异性吸附磷酸化肽的性能,并进一步应用于脱脂牛奶样中胰蛋白酶酶解液和复杂的生物样品人血清中磷酸化肽的富集。因此,可以预见MnFe2O4亲和探针材料在磷酸化蛋白组学研究中具有诱人的应用前景。(4)通过简便的溶剂热法制备了一种具有可控形态和尺寸的新型多功能磁性CuFeMnO4纳米球亲和探针(NSAP),并提出了该均匀NSAP颗粒的可能生长机制。这种纳米结构的亲和探针结合了 Cu2+,Fe3+和Mn2+的优异特征,它们的多功能性能通过与肽的羧基和胺基之间的超强配位能力(Cu2+和Fe3+),与磷酸化肽中的磷酸基团之间的特殊亲和力(Fe3+和Mn2+),以及良好的磁场响应性来体现。我们评估了 CuFeMnO4 NSAP从复杂生物样品中高效富集和快速磁分离低丰度肽(中性条件)和有效选择性捕获磷酸化肽(酸性条件)的潜力,尤其是探索了该NSAP探针用于从通过ZnO纳米颗粒刺激不同时间后的A549细胞裂解液中高度选择性分离并捕获磷酸化肽的可行性,从而提出了一种基于CuFeMnO4的研究经过外源物刺激后,细胞信号通路中磷酸化蛋白/磷酸化肽变化的新策略。(5)成功地合成了类似荔枝壳状核-壳结构的磁性磷酸镥(Fe3O4@LuPO4)亲和微球。基于磁性LuPO4亲和微球对磷酸化肽的特异亲和作用及其自身优异的快速磁分离的性质,将其应用于选择性富集磷酸化肽的研究并用于MALDI-TOFMS分析。通过从标准蛋白(β-酪蛋白)和复合样品(β-酪蛋白和牛血清白蛋白的不同摩尔比:1:10-1:50)的胰蛋白酶酶解液及混合液、以及真实生物样品(纯鲜牛奶样和人体血清样)选择性富集磷酸化肽来验证所制备微球的富集性能。结果表明,磁性LuPO4亲和微球对磷酸化肽的富集能力非常令人满意,可以选择性地捕获磷酸化肽且MS信号急剧增强,并且可通过质谱图中存在的分辨率较差的亚稳态离子峰进行可靠鉴定。Fe3O4@LuPO4亲和微球选择性富集磷酸化肽的研究,为大规模的磷酸化蛋白质组学分析提供了强有力的研究方法。(6)分别通过共沉淀法和溶剂热法制备出两种新型的铈基纳米复合材料(P-CCS和CSF)。并基于新型探针对磷酸化肽的亲和作用提出一种顺序组合的富集策略,不仅可以有效地将磷酸化肽与非磷酸化肽分离,而且可以进一步区分单磷酸化肽和多磷酸化肽。此外,这两种CeO2掺杂的亲和探针还表现出催化去磷酸化过程的性质,可以作为一种去磷酸化过程的催化剂。具体地说,CSF探针用于捕获多磷酸化肽,而P-CCF探针辅助捕获单磷酸化肽。通过这种方式,成功实现了单和多磷酸化肽的有效分步富集。因此,这种组合策略可以作为一种良好的对全磷酸化肽进行分离富集的替代方式。(本文来源于《南京大学》期刊2017-08-29）
李嘉元,龙星宇,盛东,练鸿振[8]（2017）在《有机分子辅助合成磁性氧化石墨烯亲和材料用于低丰度肽和磷酸化肽的同时富集》一文中研究指出随着质谱分析的生物信息学方法的发展,人们发现低丰度肽和磷酸化肽包含了可能记录人类生理和病理状态的生物标记物,而这些标记物比常规的标记物具有更高的临床灵敏性和特异性[1]。目前,虽然对低丰度肽和磷酸化肽的单独研究比较多,但其同时富集研究很少[2,3]。我们利用有机分子辅助合成法简单、快速地从氯化亚铁(FeCl_2)合成了磁性四氧化叁铁(Fe_3O_4),再通过Fe_3O_4和氧化石墨烯(GO)之间的静电作用制备了磁性氧化石墨烯(Fe_3O_4/GO),进而建立了一种磁固相微萃(本文来源于《第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集》期刊2017-05-19）
秦倩,王博弘,常蒙蒙,周智慧,石先哲[9]（2017）在《基于SiO_2@PD-Ti~(4+)亲和色谱材料富集和固相衍生细胞中磷酸糖类代谢物》一文中研究指出磷酸糖类物质,如葡萄糖-6-磷酸、核糖-5-磷酸、赤藓糖-4-磷酸和甘油醛-3-磷酸是糖酵解、磷酸戊糖等代谢途径中重要的中间产物,对细胞能量代谢起着调控作用。然而,这些内源性代谢物含量较低,并且极性较强,反相色谱保留弱,对其测定带来了一定的挑战。通常采用衍生的方法对其进行分析检测,常用的液相衍生方法尽管简便,但存在反应时间长、残留过量衍生试剂干扰后续检测等问题。为此,我们基于两步法制备了一种金属离子亲和色谱材料(SiO_2@PD-Ti~(4+)),可同时实现富集和(本文来源于《第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集》期刊2017-05-19）
王倩[10]（2017）在《固定金属亲和材料的制备及其在磷酸化多肽富集中的应用》一文中研究指出可逆的蛋白质磷酸化修饰(phosphorylation)作为生物体内较为重要的翻译后修饰,参与调控细胞增殖、分化以及信号传递等生命活动。磷酸化的异常是导致细胞癌变的关键步骤之一,往往会引起众多疾病,这使得对磷酸化蛋白质的研究具有重要的意义。目前,鉴于质谱(mass spectrometry,MS)高通量,高灵敏度和精确度高等优势,MS成为分析磷酸化蛋白质的有力工具。然而,磷酸化多肽在进行质谱分析时,离子化效率低、受非磷酸化多肽信号的抑制以及蛋白质和脂质等基质的干扰,导致其检测灵敏度低。因此,对目标磷酸化多肽进行选择性的分离和富集是对其进行有效质谱分析的必要前提。目前已经开发和发展了很多富集磷酸化多肽的方法和技术,但是一些方法在制备和应用时仍存在一定的问题,因此有必要开发新的方法。本文基于固定金属亲和色谱原理,开发了两种磷酸化多肽的预富集方法,主要内容如下:1.概述了磷酸化蛋白质组学的研究背景以及到目前为止的研究策略。着重分析了磷酸化多肽的分离富集方法以及基于这些基本原理发展起来的一些新技术。简单介绍了研究磷酸化多肽的检测技术。最后阐述了本论文的选题意义。2.引入多巴胺作为配体,棉花作为基底,制备了一种新型的固定金属亲和材料(Cotton@PDA-Ti4+),并将其用于磷酸化多肽的富集新技术研究。该材料机械性能好,化学性能稳定和生物相容性好,且制备过程简单,通过简易的In-pipet-tipSPE装置使整个富集操作过程简便快速。实验结果显示,Cotton@PDA-Ti4+不仅对标准蛋白酶解物有着良好的萃取效果,而且在人类血清和脱脂牛奶裂解液中磷酸化多肽的富集上也有很好的应用,说明该方法灵敏度高、选择性好,在复杂的样品中也表现出良好的富集能力。3.利用5-磷酸吡哆醛(PLP)作为配体,选取叁种不同基底(二氧化硅、氧化碳纳米管、包硅磁颗粒)和不同金属离子(Ti4+,Ga3+,Fe3+),采用简单的合成策略,制备了五种新的固定金属亲和材料,并用标准蛋白裂解液考察了这一系列材料对磷酸化多肽的富集效果。实验结果表明,基于包硅磁颗粒和Ti4+所得材料(Fe3O4@Si02-PLP-Ti4+)对磷酸化多肽有更好的选择性,而且磁颗粒的存在使材料具有磁分离能力,使整个萃取操作过程简便快速;并将其成功的应用于脱脂牛奶酶解液、人类血清以及鼠脑裂解液中磷酸化多肽的特异性富集。结果显示Fe3O4@Si02-PLP-Ti4+对磷酸化多肽富集效果良好。(本文来源于《武汉大学》期刊2017-05-01）
亲和富集论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟。硼酸亲和材料的选择性,生物相容性,制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题。该研究立足硼酸亲和材料开发的关键问题,设计并开发了一种新型苯硼酸亲和硅胶(TCNBA)。该材料采用基于迭氮基-氰基的无铜催化点击化学方法进行合成,生物相容性好,制备方法简便。红外光谱和X射线光电子能谱图表征结果证明材料合成成功。TCNBA的糖肽富集选择性利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行评价,结果表明,TCNBA能够分别从辣根过氧化物酶(HRP)和免疫球蛋白G(IgG)酶解液中鉴定出13个和11个糖肽;以HRP和牛血清白蛋白(BSA)酶解液混合物(物质的量比1∶10)作为研究对象,富集后能够鉴定出5个糖肽。TCNBA的糖蛋白富集选择性利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)进行评价,以HRP、IgG、核糖核酸酶B(RNaseB)作为考察对象,结果表明,TCNBA对糖蛋白具有较好的富集选择性。以实际样品人血清为测试对象验证TCNBA在实际生物样品中的应用价值。结果显示,富集后非糖蛋白得到较大程度去除,糖蛋白得以富集。所制备的材料和方法具有大规模实际蛋白质样品分离处理的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
亲和富集论文参考文献
[1].戴国鑫,王迪,王彦,曹之涵,戴荣继.用于富集磷酸化合物的温度敏感亲和色谱材料的制备及其应用[J].色谱.2019
[2].张丽媛,王立恒,王丽莉,董佩佩,刘和真.基于迭氮基-氰基点击化学的苯硼酸亲和硅胶的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用[J].色谱.2019
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[4].王祥宇.特异性小肽亲和整体柱对单抗药的富集纯化策略研究[D].暨南大学.2018
[5].尚骏.基于亲和富集质谱分析的宿主抗病毒蛋白质组学研究[D].武汉大学.2018
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标签：可逆加成断裂链转移聚合; 富集与分离; 温度敏感色谱材料;