导读:本文包含了实时荧光定量法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:柯萨奇B组病毒,实时荧光定量PCR,重组质粒,标准品
实时荧光定量法论文文献综述
虞勇,虞莹,王兴冈,邹云增,葛均波[1]（2019）在《柯萨奇B组病毒实时荧光定量PCR方法标准品构建》一文中研究指出目的构建柯萨奇B组病毒(CVB)载量绝对值定量实时荧光PCR检测标准品及建立标准曲线。方法 (1)在vero细胞上感染CVB3;(2)在柯萨奇B3病毒衣壳蛋白VP1基因保守区序列中设计合成特异性引物,PCR扩增后获得特异性产物;(3)PCR产物链接T载体,构建CVB3 VP1重组质粒;(4)对获得的CVB3 VP1充足质粒进行酶切分析及测序鉴定;(5)以CVB3 VP1重组质粒建立RT PCR标准曲线,建立柯萨奇B组病毒拷贝数绝对值定量RT PCR检测法,并进行稳定性和重复性实验。结果 (1)复制CVB3病毒株,感染vero细胞,克隆得到CVB3 VP1基因片段;(2)将CVB3 VP1基因片段链接载体构建得到重组质粒;(3)构建的重组质粒经酶切、测序,重组质粒cDNA序列和GenBank中提供的CVB3序列(模板)比对有99%的同源性且与引物设计的起始位点及终止位点一致;(4)构建的重组质粒作为标准品制备标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系(斜率为-3.32,R 2=0.99);熔解曲线分析提示,83℃的PCR产物是CVB3 VP1基因序列特异性产物,该标准品具有柯萨奇B组病毒特异性;(5)以CVB3 VP1重组质粒为标准品建立了RT PCR标准曲线,该标准品具有较大的检测范围(6.6×101～6.6×1010拷贝/μL),每个稀释梯度PCR可检测到50个拷贝的重组质粒,具有较高的灵敏度;(6)3次独立实验的变异系数CV<1.5%。,提示CVB3 VP1重组质粒标准品具有较高的稳定性和重复性。结论构建的CVB3 VP1重组质粒可以用做荧光定量PCR检测样品中柯萨奇B组病毒拷贝数绝对值定量标准品。(本文来源于《中国生物工程学会第十叁届学术年会暨2019年全国生物技术大会论文集》期刊2019-11-09）
刘沃满,唐玉芬,李祝坤[2]（2019）在《妊娠晚期孕妇B族链球菌实时荧光定量PCR检测结果分析》一文中研究指出目的应用实时荧光定量PCR(realtime PCR)方法检测妊娠晚期孕妇B族链球菌(GBS),了解妊娠晚期孕妇GBS的感染情况,为预防GBS感染提供依据。方法选取2017年1月～2018年12月我院进行GBS检测的10 691例孕妇。采用realtime PCR技术对孕妇阴道分泌物或阴道-直肠分泌物进行GBS检测,并对检测结果进行分析。结果10 691例孕妇中GBS感染阳性1466例(13.71%);阴道-直肠分泌物的阳性率(16.30%)高于阴道分泌物(9.18%),差异有统计学意义(χ~2=106.139,P=0.000);孕晚期>30～34岁组阳性率最高(15.32%),与≤20岁组阳性率(6.36%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与其他年龄组比较,差异无统计学意义(P>0.05);四季间GBS阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用realtime PCR方法对围生期孕妇进行GBS筛查时,同时采集阴道和直肠分泌物联合检测,能明显提高GBS的检出率。GBS在妊娠晚期孕妇中的感染率较高,应加强对孕晚期孕妇的GBS筛检,阳性者及时采取干预措施,降低新生儿GBS感染,改善母婴结局。(本文来源于《中国当代医药》期刊2019年30期）
李育敏,金潇,汤花梅,阚丽娟,张水兰[3]（2019）在《2种实时荧光定量PCR仪检测HBV DNA定量结果的可比性分析》一文中研究指出目的对罗氏cobas~? z480和ABI 7500 2种荧光定量PCR分析仪测定乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的结果进行比对和偏移评估。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP09-C方案,采用罗氏cobas~? z480(参比系统X)和ABI 7500(待评系统Y)2种荧光定量PCR分析仪分别单次测定40份患者血清样本HBV DNA浓度,极端学生化偏差(extreme studentized deviate,ESD)法对结果进行离群值检验,绘制散点图和偏差图,拟合回归方程,计算各参数的95%置信区间(confidence interval,CI)和医学决定水平处的偏移,以≤±0.4(LOG值)为可接受标准。结果通过ESD法检验发现2个离群值,剔除离群值并补充2份相近浓度样本数据后再分析,未发现离群值。根据偏差图特征分析差值具有恒定SD变化,绘制差值频数柱状图并经单样本K-S检验,差值服从正态分布,采用均值初步估算偏移为0.086,小于可接受标准。经OLR、WLS、Deming、Passing-Baklok(P-B)模型进行回归分析,医学决定水平处的偏移均小于可接受标准。2种荧光定量PCR仪检测结果相关性好(R~2=0.997 8)。结论罗氏cobas~? z480和ABI 7500 2种荧光定量PCR分析仪测定HBV DNA的结果具有可比性。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2019年10期）
刘齐月,张笛,刘东,刘大伟,张艳菊[4]（2019）在《黄瓜棒孢叶斑病实时荧光定量PCR体系的建立与优化》一文中研究指出黄瓜棒孢叶斑病作为一种世界性的病害,具有传播迅速、难以防治的特点,对黄瓜的产量造成了巨大的危害。为了预防该病害,本研究旨在开发一种实时聚合酶链式反应方法(RT-PCR)用于快速、灵敏地检测和定量黄瓜叶片中的黄瓜棒孢叶斑病菌(Corynespora cassiicola)。本文基于黄瓜棒孢叶斑病菌(C.cassiicola) DNA的肌动蛋白基因(actin)序列设计了特异性引物CAF2/CAR2,可用于区分黄瓜上的主要病害并扩增出186bp的特异性条带。为了建立最优体系,本研究测试了3种DNA浓度、3种引物浓度以及4种退火温度:当退火温度为60℃,DNA模板量为3μL、引物量加入0.2μL(10mmol/L)时为最佳的体系条件,并利用阳性标准品建立了黄瓜棒孢叶斑病菌的标准曲线。此方法对黄瓜棒孢叶斑病DNA浓度检测范围为1.36×(10～(-7)～10) ng/μL,比普通常规PCR可检测的灵敏度高103倍;验证荧光定量PCR体系组内与组间的重复性和稳定性,其变异系数均小于2%,本研究为黄瓜棒孢叶斑病的预测预报和防治提供了技术手段。(本文来源于《中国植物保护学会2019年学术年会论文集》期刊2019-10-23）
李艳红,李春艳,陈天芳,杨静芬[5]（2019）在《实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度、特异度比较》一文中研究指出目的比较实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度、特异度。方法选取我院2017年1月至2018年12月收治的110例结核病患者(肺结核88例、肺外结核22例),采集样本后分别进行实时荧光定量PCR和痰涂片抗酸染色法检测,以临床诊断为金标准,比较两种方法的诊断效能。结果肺结核患者中实时荧光定量PCR检测的阳性率为94.32%,灵敏度为98.81%,特异度为100.00%,显着高于痰涂片抗酸染色法的85.23%、88.10%、75.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。肺外结核患者中实时荧光定量PCR检测的阳性率为86.36%,灵敏度为95.00%,特异度100.00%,显着高于痰涂片抗酸染色法59.09%、60.00%、50.00%(P<0.05)。结论在结核病诊断中使用实时荧光定量PCR检测的灵敏度、特异度高,可做为临床的优选诊断手段。(本文来源于《临床医学研究与实践》期刊2019年30期）
刘馨玉,李萌,石璞玉,陈明伟[6]（2019）在《多重实时荧光定量PCR对下呼吸道感染病原体检测分析》一文中研究指出目的比较多重实时荧光定量PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction,MRTPCR)和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对成人呼吸道病毒及非典型病原体检测结果。方法收集2014年1月至2017年12月间呼吸内科210例成人呼吸道感染的标本,采用MRTPCR检测8种常见呼吸道病原体,同时应用IFA检测血清8种病原体Ig M抗体,并全部进行PCR及测序分析,比较两种方法的特异性及敏感性,评估MRT-PCR的临床应用价值。结果 210例下呼吸道感染标本经MRT-PCR和IFA检测,阳性率分别为58.57%和38.10%,混合感染率分别为7.62%和4.76%。两种方法的灵敏度分别为94.74%和35.96%,特异度分别为84.38%和59.38%。灵敏度和特异度差异有统计学意义(P<0.05)。结论与IFA相比,MRT-PCR灵敏度、特异度好,检测性能优于IFA。(本文来源于《中华肺部疾病杂志(电子版)》期刊2019年05期）
张海霞,李生军,陈琳,韩玉梅,李倩[7]（2019）在《人源细胞间黏附分子-1基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用》一文中研究指出目的建立并验证细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并用该方法检测不同细胞中ICAM-1的基因水平。方法根据GenBank中登录的ICAM-1基因序列设计并合成引物,建立ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,验证方法的适用性、线性范围、灵敏性、特异性及精密性。同时采用该方法对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)、人星形神经胶质瘤细胞(u251)、人原发性肝癌细胞(PLC/PRF/5)、人胚肾细胞(HEK293)及人脐静脉内皮细胞(HuvEc)进行检测。结果该方法的溶解曲线峰单一,无非特异性产物和引物二聚体;标准质粒在6. 74×10~4～6. 74×10~9 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好的线性关系,线性方程为y=-3. 576 log x+42. 982,R~2=1. 000;建立方法的灵敏性是普通PCR法的10倍;该方法检测不同物种细胞无交叉反应,仅能检出人源细胞ICAM-1;批内和批间CV均<1%。不同组织来源的细胞内ICAM-1基因含量不同,其中MRC-5细胞含量最高。结论成功建立了ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,且具有良好的特异性、灵敏性及精密性,可用于ICAM-1基因的定量检测。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
代资举,王艳,王新涛,杨青,张莹莹[8]（2019）在《玉米粗缩病诱导下实时荧光定量PCR内参基因的选择》一文中研究指出为了选择玉米粗缩病诱导下合适的内参基因,本研究选取ACT、GADPH、UBQ、TUB、CYP、EF1A和18S共7个基因做为候选内参基因,以自交系郑58 (感粗缩病)和D863F (高抗粗缩病)为材料,利用RT-qPCR技术检测这7个基因的表达情况。通过geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对循环阈值(C_t)进行数据分析。结果表明,两材料在玉米粗缩病诱导下UBQ和EF1A基因表达最为稳定, ACT和18S最不稳定。另外,选择玉米粗缩病相关基因ZmNPR1对候选内参基因进行进一步验证,发现不合适的内参基因确实影响结果的准确性。UBQ和EF1A这两个最优内参基因的筛选为玉米粗缩病诱导下功能基因的表达分析及抗病机制的研究奠定基础。(本文来源于《植物生理学报》期刊2019年10期）
池俊玲,赵一博,郭江波,张龙,刘汉阳[9]（2019）在《不同浓度Cd~(2+)胁迫下烟草实时荧光定量PCR内参基因的筛选》一文中研究指出【目的】筛选出镉(Cd)胁迫下烟草的最佳内参基因,为后续研究与Cd~(2+)相关的功能性基因提供理论依据。【方法】分别以0、250和500 mg/L氯化镉(CdCl_2)溶液对本生烟草进行胁迫处理,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同浓度Cd~(2+)胁迫处理下肌动蛋白基因(ACT)、微管蛋白基因(TUB)、蛋白磷酸酶2基因(PP2A)、18S rRNA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)及转录延伸因子基因(EF1a)6个候选内参基因的表达情况,并利用geNorm和NormFinder综合评价Ct各内参基因表达的稳定性。【结果】以不同浓度Cd~(2+)胁迫处理的本生烟草c DNA为模板均可PCR扩增出ACT、TUB、18S rRNA、PP2A、GAPDH和EF1a等6个内参基因。6个内参基因的qRT-PCR扩增曲线走势正常,平行性好,无引物二聚体和非特异性条带产生,且绘制的标准曲线上各点基本分布在一条直线上,扩增效率在要求范围(90.00%～105.00%)之内,符合下一步评价要求,且斜率的回归系数(R~2)>0.9800,说明线性关系较好。GAPDH和EF1a基因的表达丰度较高,18S rRNA处于中等水平,ACT、TUB和PP2A基因的表达丰度较低。geNorm分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>GAPDH基因>ACT基因>TUB基因>PP2A基因>18S rRNA;NormFinder分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>TUB基因>GAPDH基因=PP2A基因>ACT基因>18S rRNA。【结论】EF1a基因在不同浓度Cd~(2+)胁迫处理下表达水平较高,稳定性最好,可作为Cd胁迫下本生烟草的最佳内参基因。(本文来源于《南方农业学报》期刊2019年10期）
王倩颖,常鹏杰,申亚梅,张超,董彬[10]（2019）在《景宁木兰热胁迫下实时荧光定量PCR内参基因的筛选》一文中研究指出高温对景宁木兰Magnolia sinostellata生长产生严重影响。通过筛选景宁木兰热胁迫下稳定表达的内参基因,可以为景宁木兰在高温条件下基因表达研究提供准确数据,达到对目的基因进行准确量化的目的。以热胁迫下景宁木兰1年生实生苗的根、茎、叶组织为材料,从转录组数据库中选取13个管家基因ACTIN-7(肌动蛋白基因-7),CYP(亲环蛋白基因),EF-1α(延伸因子-1α蛋白基因),GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因),GTB(GTP结合蛋白基因),NAC(NAC域蛋白基因),NADP(异柠檬酸脱氢酶基因),TEF(翻译延伸因子基因),UBC(泛素化酶基因),UBQ(多聚泛素蛋白基因),α-TUB(α微管蛋白基因),β-TUB(β微管蛋白基因)和18S(18S核糖体RNA),通过Primer 5.0进行引物设计,琼脂糖电泳和溶解曲线分析验证引物特异性;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)技术和geNorm, NormFinder和BestKeeper等3个内参分析软件研究候选内参基因在热胁迫下不同组织中的表达稳定性,并通过CSLD3和KOR 2个目的基因的表达分析验证其可靠性。13个内参基因的电泳结果均显示单一条带,溶解曲线也均显示单一峰,证明引物特异性良好;13对引物的扩增效率均在100%左右;内参软件综合分析得到,UBC, EF-1α和ACTIN-7是景宁木兰在热胁迫下较为稳定的内参基因,以3个单独的内参基因以及内参组合(EF-1α和ACTIN-7)为参照对CSLD3和KOR的表达模式进行校准,也显示了一致的表达水平。通过qRT-PCR技术和内参软件分析,UBC, EF-1α和ACTIN-7等3个内参基因在景宁木兰热胁迫下不同组织中稳定性较高,CSLD3和KOR等2个目的基因的表达也证实了其可靠性。因此,UBC, EF-1α和ACTIN-7可以作为景宁木兰热胁迫下稳定表达的内参基因。图4表3参34(本文来源于《浙江农林大学学报》期刊2019年05期）
实时荧光定量法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的应用实时荧光定量PCR(realtime PCR)方法检测妊娠晚期孕妇B族链球菌(GBS),了解妊娠晚期孕妇GBS的感染情况,为预防GBS感染提供依据。方法选取2017年1月～2018年12月我院进行GBS检测的10 691例孕妇。采用realtime PCR技术对孕妇阴道分泌物或阴道-直肠分泌物进行GBS检测,并对检测结果进行分析。结果10 691例孕妇中GBS感染阳性1466例(13.71%);阴道-直肠分泌物的阳性率(16.30%)高于阴道分泌物(9.18%),差异有统计学意义(χ~2=106.139,P=0.000);孕晚期>30～34岁组阳性率最高(15.32%),与≤20岁组阳性率(6.36%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与其他年龄组比较,差异无统计学意义(P>0.05);四季间GBS阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用realtime PCR方法对围生期孕妇进行GBS筛查时,同时采集阴道和直肠分泌物联合检测,能明显提高GBS的检出率。GBS在妊娠晚期孕妇中的感染率较高,应加强对孕晚期孕妇的GBS筛检,阳性者及时采取干预措施,降低新生儿GBS感染,改善母婴结局。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
实时荧光定量法论文参考文献
[1].虞勇,虞莹,王兴冈,邹云增,葛均波.柯萨奇B组病毒实时荧光定量PCR方法标准品构建[C].中国生物工程学会第十叁届学术年会暨2019年全国生物技术大会论文集.2019
[2].刘沃满,唐玉芬,李祝坤.妊娠晚期孕妇B族链球菌实时荧光定量PCR检测结果分析[J].中国当代医药.2019
[3].李育敏,金潇,汤花梅,阚丽娟,张水兰.2种实时荧光定量PCR仪检测HBVDNA定量结果的可比性分析[J].临床检验杂志.2019
[4].刘齐月,张笛,刘东,刘大伟,张艳菊.黄瓜棒孢叶斑病实时荧光定量PCR体系的建立与优化[C].中国植物保护学会2019年学术年会论文集.2019
[5].李艳红,李春艳,陈天芳,杨静芬.实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度、特异度比较[J].临床医学研究与实践.2019
[6].刘馨玉,李萌,石璞玉,陈明伟.多重实时荧光定量PCR对下呼吸道感染病原体检测分析[J].中华肺部疾病杂志(电子版).2019
[7].张海霞,李生军,陈琳,韩玉梅,李倩.人源细胞间黏附分子-1基因SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用[J].中国生物制品学杂志.2019
[8].代资举,王艳,王新涛,杨青,张莹莹.玉米粗缩病诱导下实时荧光定量PCR内参基因的选择[J].植物生理学报.2019
[9].池俊玲,赵一博,郭江波,张龙,刘汉阳.不同浓度Cd~(2+)胁迫下烟草实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J].南方农业学报.2019
[10].王倩颖,常鹏杰,申亚梅,张超,董彬.景宁木兰热胁迫下实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J].浙江农林大学学报.2019