一、骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究（论文文献综述）
李慧阁[1]（2017）在《Sestrin2/AMPK信号介导骨骼肌细胞自噬在有氧运动改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗过程中的作用研究》文中认为研究目的:长期的营养过剩和身体活动的缺乏导致肥胖、IR、T2DM等代谢性疾病的日趋流行,骨骼肌IR是造成全身IR及各种代谢性疾病的主要因素之一。有氧运动可有效改善IR,已被广泛用于临床代谢性疾病的预防和治疗,然而其调节机制尚不完全清楚。Sesns是一类高度保守的应激诱导蛋白,可对抗氧化应激、保护细胞免于凋亡,在延缓机体衰老、预防及治疗癌症以及肥胖等一系列代谢性疾病的发生与发展过程中具有十分重要的作用。哺乳类和大多脊椎类动物的基因组主要表达3种Sesns亚型,无脊椎动物机体仅表达1种。尤其重要的是,Sesns参与细胞自噬激活,与AMPK/m TORC1信号通路关联密切。自噬作为普遍存在的分解代谢调节机制,通过清除胞内损伤或衰老的细胞器、过量ROS及能量代谢产物,不仅参与维持正常状态下细胞的代谢平衡,也在代谢性疾病发生过程中起着重要作用。AMPK/m TOR信号通路通过感受细胞内营养与能量水平变化,在调控机体能量代谢与稳态维持过程中至关重要。而且细胞可通过AMPK/m TOR信号通路对一些来源于生长因子、激素水平、营养状态、细胞外环境压力以及细胞内能量应激等一些分子信号的变化进行整合从而实现对细胞自噬水平的调节。作为能量代谢调节的关键介质,AMPK活化通过增强骨骼肌细胞葡萄糖摄取和氧化、增加脂肪酸的氧化率,同时抑制肌糖原合成和促进糖原的分解、抑制骨骼肌蛋白合成等途径,在运动过程中骨骼肌能量代谢的供应与机体内稳态维持调节中发挥着至关重要的作用,且与IR相关代谢性疾病的预防和治疗关系密切。有氧运动作为细胞自噬的天然“激动剂”,通过自噬激活在维持能量代谢和防治肥胖、T2DM等疾病方面有着独特的优势。尽管目前运动与Sesns表达调控之间的关系并不明确,但Sesns涉及P53,AMPK,m TOR及过氧化物酶信号转导调节的重要过程,提示Sesns参与自噬激活和AMPK促进细胞能量代谢之间的潜在联系。并且,Sesns基因缺失引起的代谢表型改变与长期运动缺乏所致的代谢机能障碍极为相似。而且,单次抗阻运动及中、高强度的运动可激活细胞AMPK、增加Sesns上游效应蛋白P53的蛋白表达及磷酸化活性,改善增龄性心肌和骨骼肌功能退变而延缓衰老,表明Sesns可能参与运动促进健康的调节过程。此外,单次运动增加骨骼肌细胞Sesn2/3蛋白表达、抑制m TOR/S6K1通路活性,改善细胞胰岛素信号转导,然而有关长期有氧运动上调Sesns增强骨骼肌胰岛素敏感性与自噬的调节机制尚不明确。本研究综合在体和离体两方面,对Sesn2/AMPK信号通路介导的有氧运动促进骨骼肌细胞自噬发生和胰岛素敏感性过程中的相关调控机制展开研究,为探寻IR,T2DM等代谢性疾病药物防治的作用靶点以及有效运动处方的建立提供理论依据。本课题研究目的为:（1）明确有氧运动是否可以上调正常及IR小鼠骨骼肌细胞Sesns蛋白表达和自噬水平;（2）明确Sesns是否激活骨骼肌细胞自噬及改善高脂诱导的IR;（3）探讨Sesns是否依赖于AMPK激活自噬改善IR。研究方法:通过高脂饮食诱导小鼠IR,并结合AMPKα2基因敲除小鼠,进行有氧运动干预探讨小鼠骨骼肌组织代谢及细胞自噬的变化;同时进行离体肌管细胞培养诱导IR并做相关处理,探讨Sesn2/AMPK信号在骨骼肌细胞自噬和胰岛素敏感性调控及有氧运动改善IR中的作用机制。具体如下:（1）IR小鼠模型的建立与运动干预将4周龄的雄性C57BL/6小鼠进行随机分出正常饮食组和高脂饮食组,分别饲以正常和高脂饲料16周,建立小鼠IR模型;之后分别将各饮食组随机分出相应的安静组和运动组,运动组小鼠进行60min/天、强度为75%VO2max的6周有氧跑台训练。此外,6周龄的雄性野生型和AMPKα2基因敲除小鼠分别分为安静组和运动组,运动组完成6周的有氧跑台训练。（2）代谢表型的检测采用OGTT检测小鼠葡萄糖耐量;ELISA法检测FINs和酶法测血脂水平;油红O染色法检测骨骼肌脂质沉积;称量体重并用小动物体成分仪测定小鼠体脂含量。（3）指标检测Western Blot检测骨骼肌组织和肌管细胞蛋白表达;2-NBDG法检测肌管细胞葡萄糖摄取水平;Real-time PCR检测基因表达。（4）细胞培养及处理方案以Palmitate孵育C2C12肌管细胞以诱导细胞IR;构建过表达Sesn2腺病毒（Ad-Sesn2）和过表达AMPKα2-K45R显性负突变腺病毒（Ad-AMPKα2-DN）以感染肌管细胞;细胞自噬抑制采用3-MA;检测胰岛素信号通路蛋白表达及肌管细胞对葡萄糖摄取能力;用AICAR、过表达Sesn2和/或过表达AMPKα2显性负突变腺病毒处理肌管细胞,检测细胞自噬和胰岛素通路蛋白表达水平。研究结果:（1）6周有氧运动显着降低小鼠由高脂饮食引起的体重和体脂的增加、改善机体糖耐量、减少骨骼肌脂质沉积、改善高脂饮食诱导的高胰岛素血症及脂质代谢异常;（2）16周高脂饮食显着抑制小鼠骨骼肌细胞Sesn2蛋白表达水平,而6周运动增加其表达;Palmitate孵育肌管细胞24小时诱导IR,伴随Sesn2蛋白表达显着下降;（3）过表达Sesn2显着增加IR肌管细胞对胰岛素介导的葡萄糖摄取;同时,抑制Palmitate对胰岛素信号蛋白p IRS1-S636/639和p IRS1-S307增强效应,而p AKT-S473和p AKT-T308蛋白表达显着增加;（4）Sesn2过表达显着增加IR细胞自噬相关因子Beclin-1,p ULK1-S555蛋白表达和LC3II/I比值,而p62降低,提示Sesn2激活细胞自噬效应;（5）抑制细胞自噬显着增加Palmitate孵育诱导的p IRS1-S636/639蛋白表达、减少p AKT-S473表达,降低细胞对葡萄糖摄取;且过表达Sesn2未能改善Palmitate引起的p IRS1-S636/639增加和p AKT-S473表达下降及葡萄糖摄取抑制,提示Sesn2促进细胞葡萄糖摄取和改善胰岛素信号转导依赖于细胞自噬;（6）6周有氧运动使小鼠骨骼肌由高脂饮食抑制的AMPK磷酸化水平显着增加;肌管细胞过表达Sesn2则显着逆转Palmitate降低的AMPK磷酸化蛋白表达;（7）AICAR激活肌管细胞自噬;Ad-AMPKα2-DN显着降低自噬因子p ULK1-S555蛋白表达和LC3II/I比值,p62积聚增加;AMPK失活显着加剧细胞Palmitate诱导的p IRS1-S636/639蛋白表达水平升高和p AKT-S473降低,而Sesn2过表达无论是对细胞自噬或胰岛素信号通路蛋白表达均无显着性影响,提示AMPK在Sesn2激活自噬改善高脂饮食诱导机体代谢紊乱中发挥必要作用;（8）与安静组相比,长期有氧运动对AMPKα2基因敲除小鼠骨骼肌p ULK1-S555、p62蛋白表达水平和LC3II/I影响不显着;AMPKα2基因敲除运动组小鼠骨骼肌细胞LC3II/I比值和p ULK1-S555蛋白表达显着低于野生型运动组,p62积聚增加,提示小鼠骨骼肌细胞AMPKα2在长期运动促进细胞自噬过程中发挥着十分重要作用。研究结论:（1）长期高脂饮食诱导C57BL/6小鼠发生IR、抑制小鼠骨骼肌细胞自噬和Sesn2蛋白表达水平;（2）有氧运动有效改善高脂饮食诱导的小鼠糖、脂代谢异常与运动增加骨骼肌细胞自噬和Sesn2蛋白表达水平显着相关;（3）Sesn2通过AMPK激活骨骼肌细胞自噬改善高脂饮食引起的糖、脂代谢异常;（4）运动增加Sesn2蛋白表达在AMPK介导骨骼肌自噬、改善高脂饮食诱导机体IR过程中发挥重要作用。
刘永丹[2]（2015）在《Trim27在帕金森病中的表达及其在神经元凋亡中的作用机制研究》文中指出目的：细胞凋亡被认为是帕金森病病理机制中多巴胺能神经元的主要死亡方式，但是其中具体的分子机制和信号通路还有待研究。Trim27是Trim家族成员，有显着的促凋亡作用。本文旨在对Trim27在帕金森病中的功能及其可能机制进行探讨，以期为临床帕金森病的早期诊断及有效治疗提供新的有效靶位点。方法：采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法对帕金森病患者及正常人外周血中Trim27的表达进行检测；采用qPCR和免疫蛋白印迹（western blot）方法检测Trim27在1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium，MPP+）诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP）诱导的帕金森病小鼠黑质致密区的表达情况；采用基因敲除技术结合western blot方法分析探讨Trim27敲除对PC12细胞和帕金森病小鼠神经元凋亡的影响。结果：帕金森病患者外周血中Trim27表达显着高于正常人。50μM MPP+刺激24h能诱导PC12细胞凋亡，细胞凋亡的标志物活化型Caspase-3的表达上升，酪氨酸活化酶TH表达显着下降，与此同时Trim27表达升高。在PC12细胞中转染Trim27siRNA后，Trim27mRNA和蛋白的表达被有效抑制；MPP+诱导的细胞凋亡明显减少，活化型Caspase-3表达降低。机制研究表明Trim27通过激活NF-κB信号通路来促进细胞凋亡的发生。MPTP成功诱导的帕金森病小鼠模型中，黑质TH阳性多巴胺能神经元显着减少，western blot检测显示诱导后活化型Caspase-3的表达显着上升，且伴随着Trim27表达升高；Trim27-/-小鼠MPTP诱导后，神经元损失减少，凋亡蛋白Caspase-3表达降低。结论：Trim27在帕金森病患者、凋亡的PC12细胞和帕金森病模型小鼠中表达均上升。Trim27的基因沉默使MPP+诱导的PC12细胞凋亡受到抑制，Trim27基因敲除小鼠黑质多巴胺能神经元数量显着高于野生型小鼠，与未诱导组无显着差异，说明，Trim27在帕金森病发生发展过程中发挥了重要作用；Trim27基因敲除显着改善了小鼠帕金森病的状况，提示Trim27可能成为帕金森病治疗的有效新靶点。
阴晓峰[3]（2015）在《慢病毒介导Persephin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠帕金森模型的作用》文中进行了进一步梳理Persephin（PSPN）是胶质细胞源性神经营养因子中的一员,它能够促进神经组织的存活与分化。目的:本实验的目的是评价PSPN基因修饰的骨髓间充质干细胞Lv-PSPN-MSCs对6-OHDA损伤所致帕金森大鼠模型的潜在治疗作用方法:本实验首先在体外分离骨髓间充质干细胞,然后对其进行扩增及鉴定。免疫荧光方法检测MSCs表面神经蛋白nestin,GFAP and S100等的表达,慢病毒转染MSCs,流式细胞仪检测Persephin对MES23.5的作用,帕金森模型建立及纹状体细胞注射,脑片免疫荧光检测Nestin,GFAP,MAP-2 and connexin 43的表达情况,腹腔注射阿扑吗啡观察大鼠旋转行为的改变,高效液相检测不同组中多巴胺的含量。结果:利用贴壁法得到纯度较高的骨髓间充质干细胞,细胞表面抗原检测显示大部分细胞CD44和CD90阳性,CD34和CD45阴性,进一步的实验显示rMSCs免疫荧光染色GFAP（80±2.6%）、Nestin（10.8±5.9%）、β3-tubulin（89.2±4.5）、NES（65±2.2%）、S100（77.2±4.2%）、IBA-1（80.7±6.4%）阳性。WB和PCR显示慢病毒成功转染MSCs,采用流式细胞仪显示Persephin对MES23.5有一定的保护作用。细胞移植入后,在纹状体内迁移、分化,部分细胞表达Nestin,GFAP,MAP-2和connexin 43,Lv-PSPN-MSCs组表达量较其他组明显增强。不同组细胞移植后,阿扑吗啡诱导的旋转行为显示Lv-PSPN-MSCs组明显降低。高效液相检测纹状体内多巴胺的含量,Lv-PSPN-MSCs组较其他组明显增多。结论:我们的研究结果表明在纹状体移植慢病毒介导的骨髓间充质干细胞对大鼠帕金森病有显着的治疗作用。
刘婧,钱林学,胡向东[4]（2012）在《基因治疗中非病毒转移技术的研究进展》文中研究指明基因治疗是指将具有治疗作用的外源基因通过一定方式导入靶细胞,以纠正或替代发生功能缺陷的基因,从而达到治疗目的。随着对基因转移技术分子细胞生物学机制的深入探究,基因治疗正在各种疾病的治疗研究中发挥着越来越重要的作用[1]。但目前,基因治疗领域还存在许多问题,其中缺乏安全、
跃华[5]（2009）在《孟加拉虎体细胞异种核移植及其组蛋白乙酰化研究》文中研究指明Extinction of wildlife genetic resources imply that basic material with which we do cellular and molecular biological scientific research will lost forever.If these genetic resources are not preserved by anay way,we will lost the gene resources forever,lost search on cellular and molecular biological mechanism of the extincted wildlife species and recovery those species by somatic cell cloning technology,also lost worldwide Genetic resourses and treasure house of life scientific theory.Bengal tiger at the distribution of our country is a narrow,extremely scarce quantity of rare and endangered wild animals.Tibet Yarlung Zangbo Grand Canyon region of wild Bengal tigers in China are the main areas of habitat.So,in this research,we study the establishment of cell line and biological characteristic research on the purpose of long-term preservation and sustainable utilization of the valuable genetic resources by somatic cell and provision of valuable experimental material for cell biology,medicine,genomics,post genomics,genetic engineering and embryo engineering research.The Bengal tiger group ear marginal tissue fibroblast cell bank（BTEM2/2） And analyzed their biological characteristics,chromosomes,cell cycles and exogenous gene expression,to provide not only nuclear donors with good morphology,but also reliable data for further studying.The biological analysis results showed that,population doubling time（PDT） for revival cells was approximately 28h,there was no cross-contamination among the cells by measure Lactic dehydrogenase（LDH） and Malic dehydrogenase（MDH） isoenzymes. Chromosome analysis showed that the frequency of cell chromosome number of 2n=38 was 98.6%.The test results of the bacteria,fungi,virus,and mycoplasma were negative.In order to study exogenous gene expression,six fluorescent proteins were transfected into the BTEM cells.The transfection efficiency of these genes was between 4.4%～31.9%.The corresponding fluorescence was distributed throughout the cytoplasm and nucleus 24 h after transfection except for some cryptomere vesicles.Every index of the Bengal tiger cell line meets all the standard quality controlsof ATCC（American type Culture Collection）.Not only had the germplasm resources of Bengal tiger been preserved at the cell level,but also valuable material had been provided for the research of genome,postgenome and somacloning.Establishment of somatic cell banks using low emperature biological techniques is new effective approach to conserve and maintain the diversity of wild animals.Donor cells with different treatments were used to verify how donor cells influence nuclear-transfer reconstructed embryos development in the Bengal tiger.The results showed: there also was no significantly difference（P＞0.05） between the cleavage rates and the blastula ratios of the nuclear-transfer embryos reconstructed by using donor cells with 5 time passages after revival;The Bengal tiger cells after treatments have good morphology,10ng/mL TSA make the cell cycle stop at the G0/G1 and the highest cleavage and blastula rate（P＜0.01）.The Bengal tiger fibroblast cells deal with 10ng/mL TSA not only have a high level of acetylation and better morphology change compare with the other groups,but also the highest percent of blastula,so it must be more suitable method to deal with the donor cells.Comparitive study of level of histone acetylation in IVFand cloned embroyo after activation with different time shows:the histone fluorescence signal at 0 hours is cloned embroyo higher than IVF embroyo,and there were not significant differenences.The histone fluorescence signal at 2 hours is cloned embroyo lower than IVF embroyo.The histone fluorescence signal at 4 hours is cloned embroyo higher than IVF embroyo,and there were not significant differenences.The histone fluorescence signal at 6 hours is cloned embroyo lower than IVF embroyo.The histone fluorescence signal at 8 hours is gradually increased too, cloned embroyo lower than IVF embroyo.The histone fluorescence signal at 10 hours is gradually increased too,cloned embroyo higher than IVF embroyo.The histone fluorescence signal at 12 hours is gradually increased too,and at this time the aeetylation level reach to Maximum,and there were not significant differenences.
詹以安[6]（2007）在《IFN-β基因修饰的人骨髓间充质干细胞抗前列腺癌细胞系PC-3效应的实验研究》文中认为目的:观察人类β干扰素（IFN-β）基因转染的人骨髓间充质干细胞（hMSCs）对前列腺癌细胞PC-3体外生长情况的影响,初步探讨人骨髓间充质干细胞作为基因运载细胞治疗前列腺癌的可行性。方法:构建人类β干扰素基因的真核表达质粒pCDNA3.1-IFN-β,通过脂质体介导,体外转染人骨髓间充质干细胞。将成功表达β干扰素的IFN-β-hMSCs与前列腺癌细胞系PC-3在Transwell培养体系中体外共培养,分别于共培养后第1天、第3天、第5天对前列腺癌细胞株PC-3进行胎盼蓝染色,计数存活细胞数目,流式细胞仪分析PC-3凋亡情况。同时保留部分细胞上清,ELISA法分析IFN-β的表达情况。结果:经IFN-β基因修饰的hMSCs在体外实验中能有效地抑制前列腺癌细胞生长,促进其凋亡。共培养后第5天,IFN-β-hMSCs与PC-3共培养组的存活PC-3数量由共培养前的0.5×106减少到（0.42±0.032）×106,而各对照组（PC-3单独培养组、浓度为1000IU/ml人工重组IFN-β作用下的PC-3单独培养组、hMSCs与PC-3共培养组、P-hMSCs与PC-3共培养组）前列腺癌细胞数量均有不同程度的增长,实验组与各对照组之间比较差异存在统计学意义（P<0.001）。流式细胞仪分析前列腺癌细胞的凋亡率为40.29%。ELISA分析细胞上清:在转染后4小时,IFN-β-hMSCs即可分泌表达出IFN-β,24小时到高峰（3～4×103IU/105个细胞）,72小时后表达量有所下降。对照组中未能检测出IFN-β的表达。结论:经β干扰素基因修饰的hMSCs能成功分泌表达出β干扰素,并且在体外实验可以有效抑制前列腺癌细胞生长,促进其凋亡。研究结果可能为前列腺癌的基因靶向治疗提供新的研究方法。
李华玲,周晓霞[7]（2006）在《阳离子脂质体转染人类骨骼肌原代细胞的初步研究》文中研究指明探讨不同脂质体介导基因转染人类骨骼肌原代细胞的转染效率和基因的表达。将含有β-半乳糖苷酶LacZ结构基因的质粒,用三种不同的阳离子脂质体导入人类骨骼肌原代细胞中,通过X-Gal染色观察不同的转染效率。结果发现,Fugene 6转染效率最高,蓝染细胞达10%,其脂质体与DNA的最佳比例为3∶2。Fugene 6可有效地将外源基因导入骨骼肌原代细胞,而且外源基因可以长效高效地表达,有望用来作为基因治疗的载体。
吴小宁,王军,欧阳五庆[8]（2005）在《脂质体在生物领域内的研究进展》文中研究表明从Allison首次报道脂质体具有免疫佐剂效应以来,脂质体在生物领域的研究取得了很大的进展,目前已成为生物领域内的一项高新技术。脂质体作为基因载体主要被应用于基因转染和基因组功能研究,并取得了较大的成绩。作为一种新的药物剂型,脂质体在生物药品的制剂技术中得到了广泛的应用,它除了用做疫苗的佐剂之外,还被用作激素类、多肽类、酶类等药物的载体,从而开辟了生物药制剂技术的新时代。尽管脂质体这种新技术在生物领域内具有极其广阔的应用前景,但脂质体在该领域的研究应用中存在着较多的技术难题。文章对脂质体在生物领域内的研究进展进行了详尽的叙述,可为脂质体在生物领域内的进一步研究提供参考。
肖颂华,刘军,杨淞然,李庆军,周道友,陶恩祥,邢诒刚[9]（2004）在《骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究》文中研究指明[目的]观察骨骼肌细胞和阳离子脂质体介导的芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）重组体脑内移植对帕金森病的治 疗效果,比较两种基因治疗方法的有效性。[方法]骨骼肌细胞与pCDNA3-AADC重组体构建成AADC转基因骨骼肌细胞,将 转基因骨骼肌细胞和阳离子脂质体包裹的pCDNA3-AADC重组体分别移植到帕金森病SD大鼠纹状体内,移植后进行行为学 和组织形态学的检测以评价两种治疗方法的疗效。[结果]转基因骨骼肌细胞脑内移植后,帕金森病模型鼠旋转行为较对照组 获得了改善（P<0.05）,11周时最明显。阳离子脂质体包裹的重组体脑内注射后,PD模型鼠的旋转行为也获得了一定的改 善,以1周时最为明显（P<0.05）,而在第5周时,其旋转行为与移植前无明显差异（P>0.05）;免疫组化证实了转基因骨骼 肌细胞在脑内长时期存活以及目的基因在脑内纹状体区的稳定表达。[结论]骨骼肌细胞和阳离子脂质体介导的AADC基因 重组体脑内移植可增加脑内AADC基因的表达,有效改善帕金森病大鼠的旋转行为;但骨骼肌细胞比阳离子脂质体介导的基 因治疗疗效持续时间明显长。
郑敏[10]（2003）在《神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究》文中研究指明研究背景与目的：神经干细胞（neural stem cell，NSC）的发现是神经生物学领域的最重要进展之一。NSC不仅对于中枢神经系统发育成熟后不可能再生的理论提出了挑战, 为研究神经发生、神经系统遗传病的发病机制提供了理想的载体，还为神经系统损伤修复和退行性病变的治疗带来了新的希望。NSC的培养扩增是研究的基础，本实验目的在于通过培养了解其生物学特性，为深入研究其体内外分化奠定基础。方法： 采用体外无血清培养和增殖刺激因子的作用，分离培养人和大鼠胎脑NSC。通过单细胞克隆实验和体外长期传代培养扩增和冻存复苏检测其自我更新能力、增殖能力和生物学特性稳定；免疫细胞化学检测NSC特征性标志nestin表达和分化为神经元和胶质细胞能力；BrdU掺入实验检测细胞增殖状态；通过克隆和细胞计数比较EGF、bFGF对鼠NSC增殖刺激作用，对LIF在人NSC培养中的作用进行探讨。结果：体外无血清选择性传代培养，获得的NSC能分化为神经细胞和神经胶质细胞，具有多向分化能力；有很强的自我更新能力，经体外20次传代培养后仍然具有克隆形成能力；NSC表达nestin，部分细胞处于增殖活跃期；NSC扩增迅速；传代培养的NSC性能稳定，经长期培养和冻存复苏后保持NSC特点；联合运用EGF、bFGF对NSC增殖作用较单用强；LIF对人NSC长期培养扩增有明显促进作用。结论：建立了体外培养人和大鼠NSC的方法，培养的NSC表达nestin，有自我更新、多向分化的特点，通过培养细胞大量扩增。EGF、FGF联合作用促进大鼠NSC增殖，LIF能促进人NSC培养扩增。
二、骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究（论文提纲范文）
（1）Sestrin2/AMPK信号介导骨骼肌细胞自噬在有氧运动改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗过程中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、有氧运动对小鼠骨骼肌细胞自噬和Sesns表达的影响 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验小鼠的分组及IR模型建立 |
| 1.1.2 实验小鼠运动试验干预方案 |
| 1.1.3 实验研究的技术路线方案 |
| 1.1.4 实验主要试剂、耗材和仪器 |
| 1.1.5 小鼠口服葡萄糖耐量试验 (OGTT) |
| 1.1.6 小鼠空腹血清胰岛素值 (FINs) |
| 1.1.7 小鼠血脂指标检测 |
| 1.1.8 小鼠取材 |
| 1.1.9 小鼠骨骼肌油红O染色 |
| 1.1.10 总蛋白提取 |
| 1.1.11 蛋白印迹实验 (Western Blot) |
| 1.1.12 统计学处理 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 有氧运动降低由高脂饮食诱导IR小鼠的体重和体脂含量 |
| 1.2.2 有氧运动改善高脂饮食诱导IR小鼠的高胰岛素血症及血脂代谢异常 |
| 1.2.3 有氧运动改善高脂饮食诱导IR小鼠受损的葡萄糖耐量 |
| 1.2.4 有氧运动减少高脂饮食诱导IR小鼠骨骼肌的脂质沉积 |
| 1.2.5 有氧运动对正常和IR小鼠骨骼肌细胞Sesns蛋白表达的影响 |
| 1.2.6 有氧运动对正常和高脂饮食诱导IR小鼠骨骼肌细胞自噬的影响 |
| 1.2.7 有氧运动对正常和高脂饮食诱导IR小鼠骨骼肌细胞胰岛素信号通路的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 长期高脂饮食、有氧运动与IR的发生 |
| 1.3.2 自噬调节与IR发生 |
| 1.3.3 有氧运动调节骨骼肌细胞自噬活性 |
| 1.3.4 长期高脂饮食和有氧运动对骨骼肌细胞Sesns蛋白表达的影响 |
| 1.4 小结 |
| 二、Sesn2对骨骼肌细胞葡萄糖摄取和自噬的调节作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 游离脂肪酸的配制 |
| 2.1.2 总RNA提取 |
| 2.1.3 cDNA第一链的合成 |
| 2.1.4 Real Time PCR |
| 2.1.5 腺病毒过表达质粒构建和包装 |
| 2.1.6 腺病毒扩增 |
| 2.1.7 C2C12细胞培养及干预 |
| 2.1.8 葡萄糖摄取水平测定 |
| 2.1.9 蛋白印迹实验 (Western Blot) |
| 2.1.10 实验主要试剂、耗材和仪器 |
| 2.1.11 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 Palmitate抑制肌管细胞胰岛素信号转导及葡萄糖摄取 |
| 2.2.2 Palmitate对肌管细胞Sesn2蛋白表达的影响 |
| 2.2.3 Sesn2逆转Palmitate介导的葡萄糖摄取的抑制作用 |
| 2.2.4 Sesn2对肌管细胞胰岛素信号通路蛋白表达的影响 |
| 2.2.5 Sesn2对肌管细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 2.2.6 自噬在Sesn2对肌管细胞胰岛素信号转导及葡萄糖摄取中的作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 自噬调控与IR |
| 2.3.2 Sesn2与代谢改善 |
| 2.3.3 Sesn2与自噬调节 |
| 2.4 小结 |
| 三、Sesn2促进骨骼肌细胞自噬激活依赖于AMPK |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验小鼠的分组 |
| 3.1.2 总RNA提取 |
| 3.1.3 合成cDNA第一链 |
| 3.1.4 PCR反应 |
| 3.1.5 突变质粒的构建 |
| 3.1.6 腺病毒质粒的构建、包装及腺病毒扩增 |
| 3.1.7 细胞培养及干预 |
| 3.1.8 AMPKα2 基因敲除小鼠的有氧运动干预方案 |
| 3.1.9 蛋白印迹实验 (Western Blot) |
| 3.1.10 实验主要试剂、耗材和仪器 |
| 3.1.11 统计学处理 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 Sesn2对AMPK活性的影响 |
| 3.2.2 AMPK活性在Sesn2激活肌管细胞自噬中的作用 |
| 3.2.3 AMPK活性对肌管细胞胰岛素信号通路蛋白表达的影响 |
| 3.2.4 有氧运动增加正常及IR小鼠骨骼肌细胞AMPK磷酸化活性 |
| 3.2.5 AMPKα2 敲除抑制运动介导的小鼠骨骼肌细胞自噬活性 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 Sesn2与AMPK |
| 3.3.2 AMPK活性在Sesn2介导自噬改善能量代谢中的作用 |
| 3.3.3 AMPK活性在运动介导的骨骼肌自噬与机体能量代谢调节中的作用 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 Sesns、骨骼肌细胞自噬与运动改善机体代谢 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）Trim27在帕金森病中的表达及其在神经元凋亡中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 文献综述 |
| 1.2.1 细胞凋亡与帕金森病 |
| 1.2.2 Trim27 的发现，结构及其生物学功能 |
| 1.2.3 NF‐κB 与帕金森病 |
| 1.3 结语 |
| 第2章 帕金森病患者外周血中 Trim27 的表达 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 |
| 2.1.3 实验方法及技术路线 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 帕金森病患者外周血中 Trim27 mRNA 的表达升高 |
| 2.2.2 帕金森病患者外周血中 Trim27 蛋白水平升高 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 Trim27 在 MPP+刺激的 PC12 细胞中的表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 细胞株 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 |
| 3.1.3 实验方法及技术路线 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 MPP+诱导 PC12 细胞凋亡 |
| 3.2.2 MPP+诱导 PC12 细胞内 Trim27 表达升高 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 Trim27 基因沉默对 MPP+诱导的 PC12 细胞模型中细胞凋亡的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 主要仪器及试剂 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.1.4 技术路线 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 外源性 Trim27 基因沉默效率鉴定 |
| 4.2.2 si RNA 能够在转录水平和翻译水平显着降低 PC12 细胞内 Trim27 的表达 |
| 4.2.3 Trim27 基因沉默能抑制 MPP+所诱导的 PC12 细胞凋亡 |
| 4.2.4 Trim27 能够促进 NF‐κB 活化 |
| 4.2.5 Trim27 可通过促进 NF‐κB 活化来促进凋亡 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 帕金森病小鼠模型脑黑质区域 Trim27 的表达 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要仪器及试剂 |
| 5.1.3 实验方法及技术路线 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 MPTP 可成功建立 PD 小鼠模型 |
| 5.2.2 PD 小鼠黑质区 TH 表达降低，活化型 Capase‐3、Trim27表达显着升高 |
| 5.3 讨论 |
| 第6章 Trim27 基因敲除对 MPTP 所诱导的多巴胺能神经元凋亡的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 主要仪器及试剂 |
| 6.1.3 实验方法及技术路线 |
| 6.2 实验结果 |
| 6.2.1 Trim27 基因敲除效率鉴定 |
| 6.2.2 Trim27 基因敲除能够降低由 MPTP 所导致的多巴胺能神经元的凋亡 |
| 6.3 讨论 |
| 第7章 结论 |
| 创新点自评 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（3）慢病毒介导Persephin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠帕金森模型的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品及配置方法 |
| 1.3 实验仪器 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 体外实验 |
| 2.1.1 动物准备及麻醉 |
| 2.1.2 骨髓间充质干细胞的提取 |
| 2.1.3 细胞培养 |
| 2.1.4 骨髓间充质干细胞的鉴定 |
| 2.1.5 骨髓间充质干细胞表面神经抗原的检测 |
| 2.1.6 过表达慢病毒载体构建 |
| 2.1.7 慢病毒携带PSPN基因转染MSCs |
| 2.1.8 免疫蛋白印迹法测定PSPN的表达 |
| 2.1.9 聚合酶链反应测定PSPN的表达 |
| 2.1.10 免疫荧光实验检测PSPN的表达 |
| 2.1.11 MTT法检测细胞存活率 |
| 2.1.12 流式细胞术分析细胞凋亡率 |
| 2.2 体内试验 |
| 2.2.1 动物准备及帕金森模型建立 |
| 2.2.2 纹状体内细胞移植 |
| 2.2.3 免疫荧光组织化学实验 |
| 2.2.4 旋转行为测试 |
| 2.2.5 高效液相检测纹状体多巴胺的含量 |
| 2.2.6 数据处理 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 体外实验结果 |
| 3.1.1 骨髓间充质干细胞的形态学特征 |
| 3.1.2 CD90及CD44在骨髓间充质干细胞表面表达 |
| 3.1.3 神经抗原在骨髓间充质干细胞表面表达 |
| 3.1.4 慢病毒携带PSPN基因转染MSCs |
| 3.1.5 PSPN在骨髓间充质干细胞内表达 |
| 3.1.6 慢病毒对骨髓间充质干细胞的生长无影响 |
| 3.1.7 PSPN能够拮抗6-OHDA诱导的MES23.5的凋亡 |
| 3.2 体内实验结果 |
| 3.2.1 帕金森模型成功建立 |
| 3.2.2 PSPN能够提高骨髓间充质干细胞在纹状体内迁移、分化 |
| 3.2.3 骨髓间充质干细胞在脑内移植后神经表面标记蛋白的表达 |
| 3.2.4 PSPN明显改善大鼠的旋转行为 |
| 3.2.5 PSPN能够提高纹状体多巴胺的含量 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述的参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）基因治疗中非病毒转移技术的研究进展（论文提纲范文）
| 一、非病毒载体基因转移技术 |
| 1. 脂质体: |
| 2. 阳离子聚合物: |
| 3. 纳米粒: |
| 二、机械转染技术 |
| 1. 电穿孔技术: |
| 2. 基因枪技术: |
| 3. 超声介导微泡破裂技术: |
（5）孟加拉虎体细胞异种核移植及其组蛋白乙酰化研究（论文提纲范文）
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 虎的现状 |
| 1.2 野生动物品种细胞库的构建 |
| 1.3 异种核移植 |
| 1.4 组蛋白乙酰化研究 |
| 2 孟加拉虎成纤维细胞库构建 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料 |
| 2.3 方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 孟加拉虎成纤维细胞生物学特性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料 |
| 3.3 方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 孟加拉虎成纤维细胞异种核移植 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料 |
| 4.3 方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 5 体外受精胚胎与异种核移植胚胎的乙酰化水平比较 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料及试剂 |
| 5.3 方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（6）IFN-β基因修饰的人骨髓间充质干细胞抗前列腺癌细胞系PC-3效应的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 试剂及仪器 |
| 2.2 实验步骤 |
| 2.2.1 试剂的配制 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 人β干扰素真核表达质粒pCDNA3.1-IFN-β的构建 |
| 2.2.4 质粒转化扩增 |
| 2.2.5 质粒的提取纯化 |
| 2.2.6 质粒的酶切鉴定及测序鉴定 |
| 2.2.7 确定G418 的筛选剂量 |
| 2.2.8 质粒DNA 对hMSCs 的转染 |
| 2.2.9 间接细胞免疫荧光染色检测IFN-β表达 |
| 2.2.10 转染细胞表达IFN-β的分析及鉴定 |
| 2.2.11 IFN-β-hMSCs 与前列腺癌细胞株PC-3 共培养 |
| 2.2.12 检测IFN-β-hMSCs 对于PC-3 生长情况的影响 |
| 2.2.13 ELISA 法分析IFN-β-hMSCs 表达IFN-β情况 |
| 2.3 统计学处理 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.1.1 PC-3 体外稳定传代培养 |
| 3.1.2 人骨髓间充质干细胞（hMSCs）的生长 |
| 3.2 质粒酶切电泳及鉴定 |
| 3.3 质粒转染hMSCs 后，G418 抗性筛选结果 |
| 3.4 质粒转染hMSCs 转染率的间接判定 |
| 3.5 间接细胞免疫荧光染色检测IFN-β表达 |
| 3.6 IFN-β-hMSCs 对于PC-3 生长情况的影响 |
| 3.7 基因转染后人骨髓间充质干细胞表达IFN-β的情况 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 前列腺癌基因治疗研究现状 |
| 4.2 体外研究中IFN-β对人前列腺癌细胞系PC-3 的生物学效应 |
| 4.3 以质粒为载体的目的基因表达系统 |
| 4.4 骨髓间充质干细胞作为基因运载细胞的研究 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录（质粒pCDNA3.1-IFN-β测序报告） |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（8）脂质体在生物领域内的研究进展（论文提纲范文）
| 1 脂质体作为基因载体的研究 |
| 1.1 脂质体作为基因载体的特点 |
| 1.2 脂质体在基因转染技术中的研究与应用 |
| (1) 脂质体在基因治疗方面的研究与应用。 |
| (2) 脂质体在基因组功能研究方面的研究与应用。 |
| 2 脂质体作为生物药品运载系统的研究 |
| 2.1 脂质体作为生物药品运载系统的特点 |
| 2.2 脂质体作为生物药品运载系统的研究 |
| (1) 激素类药物的载体。 |
| (2) 多肽及酶类药物的载体。 |
| (3) 疫苗的载体。 |
| 3 脂质体在其他领域内的应用 |
| 4 问题和展望 |
（10）神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩写及中文对照一览表 |
| 第一部分 中英文摘要 |
| 第二部分 中英文摘要 |
| 第三部分 中英文摘要 |
| 第四部分 中英文摘要 |
| 论文正文 神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究 |
| 总前言 |
| 第一部分 神经干细胞的分离培养与生物学特性研究 |
| 前言 |
| 实验一 大鼠胚胎神经干细胞的分离培养和扩增 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 实验二 人胚胎神经干细胞的分离培养和扩增 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 神经干细胞移植治疗帕金森模型大鼠 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 体外诱导神经干细胞定向分化为多巴胺能神经细胞及机制初探 |
| 前言 |
| 实验一 体外诱导神经干细胞定向分化为多巴胺能神经细胞 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 实验二 抗坏血酸诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经细胞的机理初探 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 绿色荧光蛋白逆转录病毒载体的构建及其在神经干细胞中的表达 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 照片 |
| 文献综述1 成体干细胞的分化潜能 |
| 文献综述2 神经干细胞的研究进展 |
| 攻读学位期间撰写及发表的文章 |
| 致谢 |
四、骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究（论文参考文献）
- [1]Sestrin2/AMPK信号介导骨骼肌细胞自噬在有氧运动改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗过程中的作用研究[D]. 李慧阁. 天津医科大学, 2017(01)
- [2]Trim27在帕金森病中的表达及其在神经元凋亡中的作用机制研究[D]. 刘永丹. 吉林大学, 2015(08)
- [3]慢病毒介导Persephin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠帕金森模型的作用[D]. 阴晓峰. 青岛大学, 2015(07)
- [4]基因治疗中非病毒转移技术的研究进展[J]. 刘婧,钱林学,胡向东. 中华临床医师杂志(电子版), 2012(19)
- [5]孟加拉虎体细胞异种核移植及其组蛋白乙酰化研究[D]. 跃华. 东北林业大学, 2009(10)
- [6]IFN-β基因修饰的人骨髓间充质干细胞抗前列腺癌细胞系PC-3效应的实验研究[D]. 詹以安. 南昌大学, 2007(03)
- [7]阳离子脂质体转染人类骨骼肌原代细胞的初步研究[J]. 李华玲,周晓霞. 生物学杂志, 2006(06)
- [8]脂质体在生物领域内的研究进展[J]. 吴小宁,王军,欧阳五庆. 动物医学进展, 2005(06)
- [9]骨骼肌细胞和脂质体介导的基因治疗帕金森病的比较研究[J]. 肖颂华,刘军,杨淞然,李庆军,周道友,陶恩祥,邢诒刚. 中山大学学报(医学科学版), 2004(S2)
- [10]神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究[D]. 郑敏. 重庆医科大学, 2003(01)