导读:本文包含了激活态雪旺细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脊髓损伤,音猥因子,雪旺细胞,基因转染
激活态雪旺细胞论文文献综述
唐亮[1]（2018）在《SHH基因转染激活态雪旺细胞移植修复脊髓损伤的实验研究》一文中研究指出【目的】脊髓损伤临床修复面临难题,再髓鞘化是修复的主要瓶颈之一,本课题通过脂质体介导音猥因子(Sonic Hedgehog,SHH)基因转染大鼠激活态雪旺细胞,过表达音猥因子并增强激活态雪旺细胞增殖和表达神经营养因子的活性,将其移植于损伤局部,探讨音猥因子和激活态雪旺细胞修复脊髓损伤的有效性,并分析两者促进损伤后轴突髓鞘化的协同作用及其机制。【方法】体外研究1.激活态雪旺细胞的分离培养、鉴定和基因转染:选择出生4-6天SD(Sprague Dawley)大鼠,预结扎坐骨神经激活雪旺细胞(Schwann Cells,SCs),1周后切取损伤神经,分离培养、纯化SCs,S100免疫荧光鉴定,保证纯度>95%,未预结扎坐骨神经分离获得未激活SCs作为对照。pEGFP-N1-SHH表达质粒已经构建并进行验证,脂质体介导pEGFP-N1-SHH和空载质粒pEGFP-N1转染激活态雪旺细胞(Activated Schwann Cells,ASCs),流式细胞分选绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)表达阳性细胞。2.细胞活性检测:流式分选后对数生长期细胞5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)染色观察细胞增殖情况,转染后不同时期酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测SHH因子及脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)、神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)的表达情况。Ⅰ组为未激活SCs组,Ⅱ组为未转染的ASCs组,Ⅲ组为转染空载质粒的ASCs(Vector-ASCs,V-ASCs)组,Ⅳ组为转染SHH基因的ASCs(SHH-ASCs,S-ASCs)组。体内研究1.大鼠脊髓损伤模型制备及分组:8-10周龄雌性SD大鼠,共计216只,IMPACTOR MODEL-Ⅱ脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)打击系统制作胸10(Thoracic 10,T10)节段脊髓打击模型,A组为DMEM移植组,B组为ASCs移植组,C组为S-ASCs移植组。2.细胞移植和行为学评价:SCI后1周损伤局部细胞移植。SCI后和移植后当天,SCI后每2周到第12周,每组8只,进行BBB评分(Basso,Beattie&Bresnahan locomotor rating scale)对各组大鼠后肢功能恢复情况进行评估。3.SCI后局部SHH因子表达:SCI后第2、4、8、12周,每组8只,SCI中心5mm节段,组织蛋白抽提试剂(Tissue Protein Extraction Reagent,T-PER)联合超声裂解提取总蛋白,二喹啉甲酸(Bicinchoninic Acid,BCA)法总蛋白定量,ELISA法测定SHH因子表达水平。4.SCI后局部轴突改变:SCI后第12周,每组8只,SCI中心行神经丝蛋白200(Neurofilament Protein 200,NF200)免疫荧光染色,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)核染,轴突计数,观察脊髓损伤局部轴突改变情况。5.损伤局部神经细胞增生及分化:SCI后第2、12周,每组8只,SCI中心分别行巢蛋白(Nestin)、少突胶质细胞转录因子-2(Oligodendrocyte transcription factor-2,Olig2)(增加损伤中心周围白质)、胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)免疫荧光染色,DAPI核染,细胞计数,观察脊髓损伤局部神经细胞增殖和分化。6.损伤局部白质及髓鞘变化:SCI后第4、12周,每组8只,SCI中心快蓝(Luxol fast blue,LFB)髓鞘染色,计算白质面积比例、髓鞘面积比例,观察脊髓损伤局部白质、髓鞘变化。7.数据统计分析:数据收集、统计采用SPSS 20.0软件完成,数据均使用`X±S表示。多组均数之间采用单因素方差分析法进行显着性检验,并利用LSD法进行多组均数之间的两两显着性检验;两组均数之间比较应用t检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。【结果】体外研究1.细胞增殖观察:EdU染色发现Ⅳ组(S-ASCs,26.17±4.03%)染色阳性率最高,Ⅱ组(ASCs,20.41±3.16%)和Ⅲ组(V-ASCs,19.34±2.82%)其次,Ⅰ组(SCs,11.86±2.98%)最低,具有统计学意义(P<0.05)。2.SHH、BDNF和NGF的表达:Ⅰ组和Ⅱ组经传代、Ⅲ组和Ⅳ组经流式分选后培养1、2、4、6、8周,不同时期SHH、BDNF和NGF的表达,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组均高于Ⅰ组,其中Ⅳ组表达水平最高,具有统计学意义(P<0.05)。体内研究1.行为学评价:SCI后第2周到第12周各组大鼠后肢功能都有恢复,SCI后第12周实验结束时,C组(16.13±2.03分)最高,B组(13.50±1.77分)其次,A组(9.25±1.58分)最低,具有统计学意义(P<0.01)。2.SCI后局部SHH因子的表达:SCI后第2、4周,C组表达水平最高,B组其次,A组最低,具有统计学意义(P<0.01),第8、12周,3组表达水平比较无统计学意义(P?0.05),基本接近正常大鼠脊髓表达水平。3.SCI后局部轴突改变:SCI后第12周,SCI中心轴突(NF200阳性)计数C组(55.13±12.16根/视野)最多,B组(23.63±8.75根/视野)其次,A组(10.50±5.58根/视野)最少,具有统计学意义(P<0.01)。4.SCI后局部神经细胞增生及分化:SCI后第2、12周,SCI中心神经干细胞(Nestin~+细胞)、损伤中心和周围白质少突胶质细胞前体细胞(Olig2~+细胞)计数C组最多,B组其次,A组最少,具有统计学意义(P<0.05),各组内比较,随时间延长无统计学意义(P?0.05);SCI后第2周,SCI中心星形胶质细胞(GFAP~+细胞)计数B组和C组多于A组,具有统计学意义(P<0.01),至第12周C组最少,具有统计学意义(P<0.01)。5.SCI后局部白质及髓鞘变化:SCI后第4到第12周,各组大鼠白质面积比例基本稳定无改变,无统计学意义(P?0.05),白质髓鞘面积比例B组和C组明显增加,具有统计学意义(P?0.05);两个时间,白质面积、髓鞘面积比例C组最大,B组其次,A组最小,具有统计学意义(P<0.05)。【结论】1.脂质体介导SHH表达质粒转染激活态雪旺细胞可过表达SHH因子,强化激活ASCs,促进细胞增殖,并促进BDNF和NGF的表达,且可维持至转染后6周以上。2.亚急性期脊髓损伤局部移植SHH基因转染强化激活的ASCs,比较单纯ASCs和DMEM,可以更好的促进大鼠损伤局部轴突髓鞘化、保护轴突,获得后肢功能的恢复,确定联合SHH因子和ASCs移植修复SCI的有效性。3.SHH因子可强化激活ASCs且转染细胞可成功表达SHH因子,两者联合既提供外源性移植细胞,又激活内源性神经细胞,增加神经干细胞和少突胶质细胞前体细胞,协同促进轴突髓鞘化,保护轴突,进一步支持髓鞘化和功能恢复的相关性。(本文来源于《天津医科大学》期刊2018-05-01）
史桂东[2]（2018）在《iPS细胞衍生的神经干细胞联合激活态雪旺细胞修复脊髓损伤的实验研究》一文中研究指出【目的】脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是困扰医学界的一大难题。干细胞移植促进脊髓损伤后神经修复是目前研究的重点和热点。诱导型多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS)的发现打破了此前关于干细胞分化和培养的传统观点。本研究将脐血干细胞诱导培养成iPS细胞作为种子细胞,并联合前期制备的PCL作为组织工程支架,将iPS细胞与激活态的雪旺细胞(Activated schwann cells,ASCs)联合培养在聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)生物支架上。并建立亚急性SCI动物模型,将搭载组织工程化iPS细胞及ASCs的支架移植入亚急性脊髓损伤实验动物体内。通过Western-Blot、免疫组化染色和行为学评估等方法探讨其修复脊髓损伤的有效性,以期对临床修复脊髓损伤提供新思路和理论依据。【方法】1.将脐血单个核细胞诱导成为iPS细胞并在人胚胎干细胞培养基条件下进行培养、扩增,采用神经干细胞条件培养基进行体外诱导培养。2.系统观察人脐血源性iPS细胞(Human umbilical cord blood derived induced pluripotent stem cells,HUCB-iPS)在条件培养基下向神经细胞方向的分化率及特性。3.将制成的PCL生物支架与两种细胞一起培养,使种子细胞迁移进入组织工程支架。将含有iPS-NSCs和ASCs的PCL支架移植入大鼠脊髓损伤局部,监测移植细胞的迁移、分化和存活情况。4.应用Western-blot方法检测移植修复后损伤部位相关神经营养因子的表达水平变化。探讨组织工程化iPS细胞移植修复脊髓损伤的原理,探讨iPS细胞修复脊髓损伤与促进轴突再生的机制。【结果】1.神经干细胞的诱导:体外实验在经四种转录因子诱导iPS细胞18天后,可以看到iPS细胞克隆团较大,边缘有较为清晰的界限并与MEF细胞相隔离,而细胞呈核大浆小,较为集中、均匀的成团生长。经过iPS细胞的NANOG、SOX2、OCT4、DAPI免疫荧光染色后,可以看到iPS细胞在NANOG和OCT4染色下呈绿色,而在SOX2染色下呈红色,在DAPI染色下呈蓝色。将iPS细胞更换RHB-A细胞培养基。7天后,可以见到球状体内,细胞逐渐增殖并且球体增大,暗黄色,透光并且形态规则。经过Nestin、DAPI染色后,荧光显微镜下,神经干细胞的Nestin染色呈绿色,DAPI染色呈蓝色,细胞球大小较为均匀。2.组织学观察:细胞移植修复脊髓损伤后,HE染色显示ASCs联合iPS-NSCs共培养支架植入组的空洞减少最为明显并且显示出较大量的细胞增生和浸润,提示ASCs与组织工程化的iPS细胞联合移植可以改善SCI后局部的病理结构,促进脊髓损伤后的运动功能恢复。3.行为学评估:在大鼠后肢运动功能评价中,ASCs与iPS-NSCs共培养支架植入组的实验动物运动功能恢复最为明显,该组的BBB评分在细胞移植后第8周可以达到12分以上。4.神经营养因子和炎性因子表达:细胞移植8周后,应用Western-blot检测NT3、GDNF、NGF等神经营养因子及炎性因子的表达。结果显示第八周细胞移植组脊髓的NT3表达相比脊髓损伤组差异不具有统计学意义(P>0.05)。结果显示第八周细胞移植组脊髓GDNF和NGF的表达相比脊髓损伤组要高,差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】本实验从脐血单个核细胞中诱导出人源性的iPS细胞,并将iPS细胞向神经干细胞方向诱导成功,成功地避开了长期以来争论不休的伦理问题,突破了核移植技术缺乏卵母细胞的窘境。探讨了激活态雪旺细胞分泌细胞因子作用下两种细胞与PCL支架的生物相容性及其移植治疗脊髓损伤的原理,揭示移植细胞在脊髓损伤局部微环境影响下命运决定和促进神经再生机制,为脊髓损伤的修复提供理论依据。(本文来源于《天津医科大学》期刊2018-05-01）
李岩[3]（2017）在《标准化激活态雪旺细胞修复脊髓损伤的临床前期研究》一文中研究指出【目的】本研究旨在获取非人灵长类动物雪旺细胞高效激活方法、高表达营养因子的关键技术,制备出标准化非人灵长类动物脊髓损伤的模型,进而移植激活态的雪旺细胞修复灵长类动物损伤的脊髓,通过行为学评分,感觉诱发电位及运动诱发电位检测、组织学等观察其疗效,建立疗效评价平台,确定激活态雪旺细胞移植修复脊髓损伤的移植时间与移植浓度,从而规范化细胞移植修复脊髓损伤的评价标准,为临床激活态雪旺细胞移植治疗脊髓损伤提供参考指标和依据。【方法】1.雪旺细胞原代培养前7天结扎食蟹猴双下肢腓肠神经,采用胰酶和胶原酶两种传代纯化雪旺细胞,体外培养5天后采用S100免疫荧光染色方法鉴定雪旺细胞,DAPI染色标记细胞核,检测雪旺细胞纯度。2.分离纯化培养雪旺细胞,加入重组白介素-11(IL-11)分别采用RT-qPCR和Western boltting检测雪旺细胞髓鞘蛋白的表达,进一步检测IL-11调控髓鞘蛋白表达的相关情况。3.采用SS-II型大动物脊髓打机器(打击头直径5mm,打击冲量50g×50mm)制作非人灵长类动物脊髓损伤模型。模型制作完成后,采用基本行为学评分,笼内攀爬实验,改良Tarlov评分等行为学评分系统和体感诱发电位、运动诱发电位神经评分系统检测双下肢功能情况,确定脊髓损伤模型的稳定性。4.食蟹猴脊髓损伤后7天,在损伤部位多点微量注射激活态雪旺细胞,每点微量注射10μl,共计30μl,细胞浓度:2-3×105/μl,纯度>95%,采用体感诱发电位、运动诱发电位及改良Tarlov评分等行为学评分方法检测双下肢功能,并通过HE染色方法和免疫组织化学染色观察组织学变化。【结果】1.经过两轮差速消化后,低浓度Ⅱ型胶原酶消化组雪旺细胞纯度为(96.1±1.68)%;对照组雪旺细胞纯度为(80.1±4.77)%,两组之间存在显着性差异,P<0.01。2.白介素-11可以显着提高雪旺细胞中周围神经髓鞘蛋白22的表达水平,而对雪旺细胞中髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白零的表达水平则没无明显影响,该生理作用可被JAK特异性抑制剂AG490所抑制。并且在经过IL-11处理的SCs细胞中可以观察到pJAK2(Y1007+Y1008)和pSTAT3(Y705)含量明显高于对照组且伴随着SCs中gp130表达的上调。3.脊髓损伤组食蟹猴双下肢体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期延迟,波幅降低,行为学评价显示脊髓损伤组较假手术组双下肢运动能力明显下降。4.在脊髓脊髓磋伤后第7天,在损伤部位多点微量注射激活态雪旺细胞,每点微量注射10μl,共计30μl,细胞浓度:2-3×105/μl,移植组HE染色显示空洞明显小于损伤组,GFAP染色显示胶质瘢痕面积小于损伤组(P<0.05),NF200染色显示轴突生长大于损伤组(p<0.05),行为学评分示移植组下肢功能恢复情况较损伤组有明显的好转。【结论】1.确定了雪旺细胞的自体来源,利用较少的神经组织在短时间内获得大量高纯度雪旺细胞。并且该培养方法未使用毛喉素等促进有丝分裂剂和阿糖胞苷等抑制成纤维细胞生长的物质,符合临床应用的要求,为自体雪旺细胞移植在临床的应用奠定了基础。2.IL-11可通过调剂gp130/JAK2/STAT3信号通路以促进雪旺细胞中周围神经髓鞘蛋白22的表达,从而在体外能更好的激活雪旺细胞。3.体感诱发电位和运动诱发点位作为一种定量、客观的脊髓电生理检测技术具有准确性好,灵敏度高的特点,可作为非人灵长类动物肢体功能评价的依据。行为学评分作为一种经典的评价方法,具有方便易行和经济实用的优点。本研究将脊髓损伤模型与电生理检测和行为学评分相结合,确保了模型制作的一致性,精确性,可重复性和经济实用性原则。4.在食蟹猴脊髓挫伤后第7天,在损伤部位多点微量注射激活态雪旺细胞,每点微量注射10μl,共计30μl,细胞浓度:2-3×105/μl,该移植途径以及移植剂量可为临床治疗脊髓损伤提供一定的指导意义,从而使细胞治疗脊髓损伤更具安全化,有效化,标准化。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
刘毅[4]（2017）在《激活态雪旺细胞联合骨髓间充质干细胞移植修复脊髓损伤的蛋白组学分析》一文中研究指出【目的】采用iTRAQ蛋白组学技术筛选脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)后激活态雪旺细胞(Activated Schwann cells,ASCs)联合骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)移植在损伤微环境中的蛋白表达水平,并对差异表达蛋白进行功能注释,分析其所涉及神经修复相关的重要功能,初步揭示细胞移植修复SCI在基因与分子水平上的调控机制,寻找关键调节蛋白,分析其作用方式,为进一步优化细胞移植修复脊髓损伤策略和临床转化应用提供理论依据。【方法】1.细胞分离培养:采用骨髓腔冲洗分离培养大鼠BMSCs,并应用流式细胞术检测胞膜表面分子鉴定BMSCs。应用坐骨神经预损伤激活和胶原酶消化分离培养SCs,采用S100免疫荧光染色鉴定SCs。2.实验分组:54只Wistar成年雌性大鼠随机分成6组(每组9只):A组,DMEM空白对照7天组;B组,DMEM空白对照14天组;C组,DMEM空白对照28天组;D组,BMSC联合ASC移植7天组;E组,BMSC联合ASC移植14天组;F组,BMSC联合ASC移植28天组。3.动物模型制作与细胞移植:采用成年雌性Wistar大鼠,利用NYU Impactor II型打击装置建立胸10节段脊髓挫伤模型,打击重量为10g,高度为2.5cm。在损伤后7天,使用10μl Hamilton微量注射器分别将DMEM,ASCs与BMSCs混合悬液缓慢注射入脊髓损伤区域,注射剂量为每只15μl,细胞密度为1×105/μl。分别在移植后7天,14天,28天行心脏灌注,取出损伤区域0.5cm组织。4.蛋白组学分析:应用裂解液提取法提取脊髓组织蛋白,应用2D Quant试剂盒测定每组蛋白浓度,应用Mascot软件对二级质谱图信息进行定性定量计算,采用iTRAQ/TMT质谱定量方法鉴定差异蛋白,对差异蛋白分别进行GO功能富集分析与String网络分析。【结果】BMSCs联合ASCs移植修复脊髓损伤后7天,差异表达蛋白数为105个,其中,39个表达上调,66个表达下调;移植后14天,差异表达蛋白数为185个,其中,151个表达上调,34个表达下调;移植后28天,差异表达蛋白数为81个,其中,46个表达上调,35个表达下调。差异表达蛋白的GO功能富集分析结果发现,移植后7天差异蛋白主要富集于炎症反应、免疫应答、急性期反应等免疫相关生物学过程。移植后14天组差异蛋白主要富集于神经突触、神经递质运输、金属离子代谢等生物学过程。移植后28天组,差异蛋白主要富集于胞外空间重塑、细胞外基质、层黏连蛋白、细胞粘附、髓鞘化等生物学过程与细胞组分。String网络互作分析发现表达下调的STAT1蛋白在移植7天后位于蛋白互作网络的核心位置。【结论】1.本研究初步绘制了ASCs联合BMSCs移植后脊髓损伤微环境的蛋白表达谱,发现了神经丝蛋白,钙网织蛋白,Lyn蛋白等与脊髓损伤修复相关的差异蛋白。2.ASCs联合BMSCs移植主要通过抑制炎症免疫反应、抗凋亡、重塑细胞外基质、调节损伤局部微环境等作用机制促进脊髓损伤修复,并提示STAT1蛋白在ASCs联合BMSCs移植修复脊髓损伤中可发挥免疫调理和抗凋亡的作用。3.深入探讨ASCs联合BMSCs联合移植促进修复的分子机制有助于优化移植策略的探索研究,为细胞移植修复脊髓损伤的临床治疗应用奠定基础。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
樊保佑[5]（2017）在《神经干细胞联合激活态雪旺细胞与PCL支架生物相容性的实验研究》一文中研究指出【目的】本课题拟通过检测激活态雪旺细胞(activated Schwann cells,ASCs)和非激活态雪旺细胞(Schwann cells,SCs)之间营养因子的表达差异,探究体外培养对ASCs的功能状态影响,及ASCs、SCs诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化的作用;通过培养ASCs、SCs于静电纺丝聚己内酯(PCL)纤维支架上,对比ASCs、SCs与PCL纤维支架的生物相容性;通过培养NSCs或联合ASCs于静电纺丝PCL纤维支架上,观察细胞分布、增殖、分化,探究ASCs和NSCs共培养体系与静电纺丝PCL纤维支架的生物相容性。【方法】通过结扎Wistar大鼠坐骨神经7天,模拟坐骨神经挫伤模型,提取ASCs;由正常坐骨神经提取SCs,分别培养至第3代,提取总蛋白,通过Western Blot对比分析ASCs和SCs的营养因子在蛋白水平的表达差异;提取Wister孕鼠E14.5天胚胎海马区NSCs,通过免疫荧光染色进行细胞鉴定及观察NSCs的多向分化能力;通过ASCs和SCs的条件培养基半量换液诱导NSCs分化,观察神经元分化比例及轴突长度;3D培养ASCs和SCs在静电纺丝PCL纤维支架上,通过CCK-8实验检测细胞活性与增殖,结晶紫染色观察细胞分布及寻找合适细胞密度,激光共聚焦显微镜观察细胞粘附和形态;将NSCs单纯或联合ASCs培养于静电纺丝PCL纤维支架上,通过CCK-8实验检测NSCs增殖,通过激光扫描电镜观察细胞形态和分布,通过激光共聚焦显微镜观察NSCs神经元的分化和ASCs MBP的表达。【结果】1.传至第3代的ASCs较SCs高表达BDNF、NGF(P<0.05),而NT-3、MBP的表达则低于SCs(P<0.05);半量换液7天后,ASCM组,神经元分化比例为36.06±7.04%;SCM组分化比例为17.22±3.78%;M组分化比例为5.78±3.03%。ASCM组神经元分化比例高于其他两组(P<0.05)。ASCM组,神经元轴突长度为161.33±67.44μm;SCM组神经元轴突长度为110.33±60.34μm;M组,神经元轴突长度为97.55±54.09μm。ASCM组神经元轴突长于其余两组(P<0.05)。2.静电纺丝PCL纤维支架的纤维直径集中在7.93±1.41μm,纤维随机分布能形成3D培养结构;结晶紫染色观察:一定数量的雪旺细胞紧贴纤维纵向分布,且细胞种植密度为2×10^4个/cm2时细胞增殖良好;通过S-100染色,激光共聚焦显微镜观察:细胞呈典型的梭型,并且细胞紧贴纤维分布,与结晶紫染色观察结果相一致;CCK-8实验检测:ASCs在PCL支架上比SCs的增殖更快,第7天OD值高于SCs(P<0.05)。3.神经干细胞在静电纺丝PCL纤维支架上培养,1-7天OD值逐渐增大,在第6-7天时,趋于平缓,在第7天时细胞增殖达到最高峰;通过βⅢ-Tubulin、GFAP、O4免疫荧光染色,利用激光共聚焦显微镜进行观察:神经干细胞分化7天后,能够分化为星形胶质细胞,神经元和少突胶质细胞;NSCs与ASCs共培养于静电纺丝PCL支架上后,分化7天进行疫荧光染色共聚焦显微镜观察:一定数量的ASCs能够表达MBP,神经干细胞能够分化为神经元,并且神经元多分布于表达MBP的ASCs周围。【结论】1.体外培养条件下传代至第3代的ASCs仍能保持一定的激活表型,且能促进NSCs向神经元方向分化;2.静电纺丝PCL支架具有3D培养结构,与ASCs具有良好的生物相容性,且纤维对细胞分布具有一定导向性作用;3.NSCs、ASCs共培养体系在静电纺丝PCL支架上能够形成3D培养,可以进行体内移植探究。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
林伟[6]（2017）在《正常态和激活态雪旺细胞与轴突再生相关基因甲基化差异的实验研究》一文中研究指出【目的】雪旺细胞(Schwann cells,SCs)是周围神经系统中最重要的细胞之一。成熟的SCs包裹神经元的轴突形成髓鞘,此时的SCs称为正常态雪旺细胞(Normal Schwann cells,NSCs)。周围神经损伤后,损伤远端神经纤维的轴突和髓鞘均被破坏,继而完全崩解,这种现象被称之为华勒变性。神经损伤后SCs即表现出高生物活性,此时的SCs称之为激活态雪旺细胞(Activated Schwann cells,ASCs),ASCs的高生物活性对轴突再生有良好的促进作用。然而,目前的研究绝大部分都集中在蛋白质水平和miRNA水平,并且大量的研究已经证实:ASCs和NSCs在蛋白质水平和miRNA水平存在显着差异,但是两种状态SCs存在差异的根本原因尚不清楚。近些年随着基因工程技术的逐渐成熟,DNA甲基化的研究越来越受到研究者重视,并且研究发现:周围神经系统损伤后,可使部分基因(如Shh和Olig1)发生甲基化状态改变,这些基因的甲基化改变对轴突再生起到关键作用。然而,目前还没有全基因组的比较ASCs和NSCs与轴突再生相关基因甲基化差异的实验研究。本课题通过DNA甲基化免疫共沉淀测序(Methylated DNA immunoprecipitation sequencing,MeDIP-Seq)技术检测Wistar大鼠ASCs和NSCs全基因组的甲基化差异,筛选轴突再生相关基因,并做功能分析。【方法】健康成年Wistar大鼠(约150±5克)3只,坐骨神经预损伤,臂丛神经仅做分离。饲养7天后,脱颈处死Wistar大鼠,提取坐骨神经损伤远端和臂丛神经各1.5厘米,采用低浓度胰蛋白酶消化法从坐骨神经组织提取ASCs、从臂丛神经提取NSCs。分别培养ASCs和NSCs至第3代,S-100抗体免疫荧光染色鉴定细胞,并计算细胞纯度。CCK8法测定细胞增殖,并绘制ASCs和NSCs的增值曲线。收集第3代ASCs和NSCs,使用EDTA方法提取DNA。运用MeDIP-Seq技术筛选出ASCs和NSCs的差异性甲基化区域;使用KOBAS软件对差异甲基化区域注释和统计分析,筛选出轴突再生相关差异甲基化基因,使用InterProScan软件分析差异基因的染色体分布情况、基因本体(GO)分析以及信号通路分析。【结果】本研究获得纯度为95%以上的ASCs和NSCs,两者S-100免疫荧光染色均表达阳性。在相同培养条件下,ASCs生长速度和贴壁速度更快。MeDIP-Seq共发现177176个差异性甲基化区域,其中位于启动子(≤1 kb)内1 097个、启动子(1~2 kb)内1 136个,CpG岛内567个。基因注释分类后,共获得214个与轴突再生相关的差异甲基化基因。这些基因分布于各个染色体上,以12号染色体上最多(22个),M染色体最少(2个)。GO分析结果显示差异甲基化基因涉及轴突生长、轴突形成、轴突延伸和轴突导向等过程;并且与MAPK、细胞黏附分子和Ras等信号通路有关。【结论】ASCs和NSCs的甲基化水平存在明显的差异,214个甲基化差异基因与轴突再生有关,分布于各个染色体上;涉及轴突生长、轴突形成、轴突延伸和轴突导向等过程,并且与MAPK、细胞黏附分子和Ras等主要信号通路有关。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
刘靓[7]（2015）在《脉冲电磁场对雪旺细胞的激活作用及其在周围神经损伤修复中的应用》一文中研究指出周围神经损伤是临床上常见的创伤类型,尤其是长节段的神经缺损一直是最为棘手的治疗难题之一。虽然自体周围神经移植可以促进神经再生并恢复一定的功能,然而自体神经移植具有很大的局限性,如二次手术损伤和供区感觉等功能的缺失。此外,供体神经来源有限以及供、受体神经直径不匹配等因素也限制了自体神经移植的应用。越来越多的学者尝试用组织工程神经支架来修复神经缺损,而对于长节段的神经缺损,单纯依靠支架材料进行修复往往存在神经生长时间过长,靶肌肉萎缩程度严重等现象,修复效果并不理想。大量研究表明,在神经修复材料局部构建良好的生物学微环境,是决定神经缺损修复效果的关键。有研究表明将种子细胞复合在神经支架内部,可改善神经再生的微环境,起到有效的促神经再生作用。雪旺细胞作为周围神经系统的主要胶质细胞,在周围神经损伤的修复中具有非常重要的作用,也是最常用的种子细胞之一。然而,雪旺细胞经分离培养后,其合成及分泌神经营养因子和细胞粘附分子的能力显着下降,不能持续、高效的合成神经营养因子等有利于神经再生的分子,在一定程度上限制了雪旺细胞构建神经支架局部生物学微环境的能力。因此需要寻找一种能方便、有效激活雪旺细胞,使其保持生物活性的技术来解决上述问题。有研究表明,电磁场作为一种安全、经济、无创、易实施的物理方法,可有效的调节多种细胞的生物学性能,包括分化、增殖、凋亡、伸展和迁移等,并且可以促进神经元突起的生长,延缓靶肌肉的萎缩,加速创伤愈合等。本研究应用脉冲电磁场(2.0 m T;50Hz)干预雪旺细胞4小时,发现可促进雪旺细胞的增殖并激活其合成、分泌多种神经营养因子(BDNF,GDNF,VEGF),并进一步通过体内试验发现,将雪旺细胞与神经导管相复合,同时辅以脉冲电磁场进行实时刺激,可有效促进大鼠12mm坐骨神经缺损的修复,提示了脉冲电磁场可通过激活移植雪旺细胞等作用,从而促进神经的再生和功能的恢复。第一部分脉冲电磁场参数的选择及其对雪旺细胞的激活效应目的:筛选最佳的磁场参数,探究脉冲电磁场对雪旺细胞生物学行为的影响。方法:将接种的雪旺细胞分为5组,依次以0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 m T;50 Hz的脉冲磁场分别干预各组细胞4小时。24小时后使用流式细胞技术检测雪旺细胞的凋亡,扫描电镜观察雪旺细胞的形态,根据检测结果筛选最佳磁场强度。随后在最佳磁场参数下分别刺激雪旺细胞(0.5、1、2、3、4、5、6和8小时),刺激完成后的24和48小时应用CCK-8检测雪旺细胞的活性,以确定磁场的干预时间。将雪旺细胞在2.0 m T;50Hz的磁场参数下作用4小时,采用Ed U-labeling量化分析磁场作用后12小时、24小时雪旺细胞的增殖情况,通过RT-PCR检测脉冲电磁场干预后雪旺细胞神经营养因子m RNA水平的表达,ELISA检测神经营养因子的分泌情况。结果:雪旺细胞在0.5、1.0、2.0 m T;50 Hz的脉冲电磁场干预下,无明显的细胞凋亡现象,当磁场强度增加至5.0 m T和10.0 m T时,细胞出现明显凋亡;扫描电镜观察发现当磁场强度低于2.0 m T时,雪旺细胞的形态良好,细胞延展成典型的双极性形态,然而当磁场强度继续升高至5.0 m T时,雪旺细胞表面出现空泡,细胞呈圆形且延展性变差,失去了雪旺细胞原有的形态特征。继续将磁场强度增加到10.0m T时,可以观察到雪旺细胞的细胞膜已碎裂,细胞形态完全破坏,雪旺细胞彻底凋亡。通过CCK-8检测发现,在磁场下作用4小时雪旺细胞的活性达到最佳,当刺激时间继续延长时,其活性并没有发生明显的变化。雪旺细胞在脉冲电磁场(2.0 m T;50Hz)干预后12小时和24小时,Ed U结果显示雪旺细胞明显增殖,其合成和分泌神经营养因子BDNF、GDNF、VEGF的能力也有显着提高。结论:2.0 m T;50 Hz为最佳磁场参数,4小时为合理干预时间;该参数的脉冲电磁场可有效激活雪旺细胞,促进雪旺细胞的增殖,并促进其合成和分泌多种神经营养因子。第二部分胶原-壳聚糖神经导管的构建及相关性能参数测试目的:构建具有良好的生物相容性、可降解性的胶原-壳聚糖神经导管,并进行相关性能参数测试。方法:将胶原与壳聚糖以4:1的比例在冰醋酸中混合,通过梯度冷淋及冷冻干燥技术制备胶原-壳聚糖神经导管,扫描电镜观察其微观结构,并对其孔隙率、体外降解率、吸水膨胀率、抗拉强度进行相关测定。结果:扫描电镜下观察神经导管的横截面为蜂窝状多孔立体结构,微孔间彼此连通交错,从而有利于营养物质及代谢产物的运输和交换。该导管具备良好的生物相容性、降解性、吸水膨胀性,以及抗拉强度等特点,为再生的神经纤维提供了良好的微环境,同时其中空样的结构有利于种子细胞的移植。结论:胶原-壳聚糖神经导管具有良好的微观结构和理化性质,是一种理想的组织工程神经。第叁部分雪旺细胞复合神经导管在脉冲电磁场的作用下修复坐骨神经缺损的有效性研究目的:探究雪旺细胞作为种子细胞与神经导管相复合,在脉冲电磁场的刺激下,修复周围神经缺损的有效性。方法:将雪旺细胞与胶原-壳聚糖导管相复合,用于修复大鼠12mm坐骨神经缺损,在术后12周同时辅以脉冲电磁场刺激(2.0 m T;50Hz),以实现对移植雪旺细胞的实时激活,分5组(1自体神经移植组;2 Scaffolds组;3 Scaffolds+PMF组;4Scaffolds+Scs组;5 Scaffolds+Scs+PMF组),对照比较其神经修复效果的有效性。通过对再生神经形态学(透射电镜)的观察和功能学(荧光金逆行示踪;坐骨神经指数和神经电生理检测)的分析以及靶肌肉的染色来评价其修复效果,并用RT-PCR检测再生神经营养因子的表达,初步探究其再生机制。结果:术后12周,电磁场作用下的雪旺细胞与胶原壳聚糖导管复合组可观察到更多均匀分布的轴突,再生神经纤维的数量和直径明显高于其他各组,并最接近自体神经组。该组靶肌肉HE染色显示腓肠肌萎缩情况得到明显缓解,脊髓前角运动神经元和DRG感觉神经元的数目显着高于其他各组,坐骨神经指数的逆转速度高于其他几组,神经传导速度、潜伏期和波幅也显着好于其他几组,并与自体神经组无差异,同时该组的BDNF、GDNF以及VEGF基因的表达水平明显升高。结论:雪旺细胞与神经导管相复合,同时辅以脉冲电磁场进行实时刺激,可构建有利于神经再生的微环境,有效促进周围神经缺损的修复。(本文来源于《第四军医大学》期刊2015-05-01）
曹代桂[8]（2014）在《激活态雪旺细胞源性神经营养因子对胚芽干细胞向神经细胞分化的影响》一文中研究指出目的探索小鼠胚芽干细胞(Embryonic Germ Cells, EGCs)分离、培养的有效方法；观察激活态雪旺细胞(Activated Schwann cells, ASCs)源性神经营养因子对小鼠EGCs句神经细胞分化的影响。方法分离受精11天小鼠生殖腺嵴及同时取少量的腹壁组织共同消化培养,经质量分数0.125%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化制备成胚芽干细胞悬液,将细胞种植在饲养层(经丝裂霉素C处理过的胎鼠成纤维细胞)细胞上。观察小鼠EGCs集落形成情况,并采用阶段特异性胚胎抗原-1(Stage Specificity Embryo Antigen-1, SSEA-1),碱性磷酸酶染色(Alkaline Phosphatase, AKP),过碘酸-雪大染色(Periodic Acid-Schiff staining, PAS)对其进行鉴定。采用双酶消化组织块法结合机械分离法分离培养ASCs。将神经诱导实验分为：基础培养基+小鼠EGCs (空白对照组)；ASCs培养基与小鼠EGCs共培养(实验组)；培养3周后对神经诱导结果进行神经元特异性核蛋白(Neuron-specific Nuclear Protein, NeuN),髓鞘相关蛋白(Myelin Basic Protein, MBP),胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibril lary Acidic Protein, GFAP)免疫荧光染色鉴定、统计细胞染色阳性率,对实验结果进行统计学分析。结果(1)小鼠EGCs的鉴定：呈集落性生长,集落隆起、多数呈鸟巢状、与周围的饲养层细胞存在明显界限；集落内的细胞密集,呈现一个或几个核仁、核质比高的圆形或卵圆形；阶段特异性胚胎抗原-1染色、碱性磷酸酶染色、过碘酸-雪夫染色均阳性；(2)小鼠EGCs神经诱导：诱导3周后,在倒置显微镜下：观察到细胞伸出类似轴突的细长突起,部分胞体变大,伸出的轴突和树突交织在一起；NeuN, MBP, GFAP免疫荧光染色结果阳性；细胞染色阳性率比较显示差异具有统计学意义。结论本实验通过一种简单、经济的方法,体外成功分离获得小鼠EGCs;ASCs可以分泌多种神经营养因子并能够促进小鼠EGCs在体外向神经细胞分化。(本文来源于《天津医科大学》期刊2014-05-01）
张睿,张军,赵承斌[9]（2014）在《激活态雪旺细胞对神经干细胞分化作用的研究》一文中研究指出目的探讨激活态雪旺细胞(SCs)对神经干细胞(NSCs)的分化作用。方法取出生24 h内的SD乳鼠脊髓NSCs,分离培养并传至4代。取体重(100±5)g的SD大鼠,结扎右侧坐骨神经,1周后取双侧坐骨神经,左侧提取正常坐骨神经分离培养SCs(普通SCs),右侧提取结扎变性的坐骨神经分离培养SCs(激活态SCs),均采用双酶消化加差速贴壁法。将SCs与NSCs应用Transwell培养皿联合培养,分为叁组:A组为激活态SCs与NSCs;B组为普通SCs与NSCs;C组仅为NSCs。于培养的第2、4、6天检测各组NSCs活性。1周后,Western blot检测各组SCs表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平,免疫荧光检测各组NSCs分化比例。结果传至4代的NSCs生长稳定,分离的SCs 7 d后大量增殖呈旋涡状。联合培养后MTT法检测细胞活性,第2、4天叁组细胞的活性差异无统计学意义(P>0.05),第6天C组活细胞比例开始降低,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot检测A组细胞表皮生长因子(EGF)表达水平(0.486±0.028)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平(0.385±0.023)均高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。MAP-2荧光染色,每高倍视野阳性细胞比例A组[(35.26±2.53)%]高于B组[(27.63±3.45)%],差异有统计学意义(P<0.05);GFAP荧光染色,每高倍视野阳性细胞比例A组[(62.42±3.78)%]低于B组[(70.18±1.26)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活态SCs能够促进NSCs向神经元的分化进程,提高神经元的分化比例。(本文来源于《中国医药导报》期刊2014年07期）
周先虎,冯世庆,陈有,王颖,郝岩[10]（2013）在《激活态雪旺细胞联合脐血间充质干细胞移植修复脊髓损伤的实验研究》一文中研究指出【目的】观察激活态雪旺细胞(Activated Schwann cells,ASCs)分泌神经营养因子对诱导人脐血间充质干细胞(Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal StemCells,HUCBMSCs)神经方向分化的作用。同时评价脊髓损伤局部微环境对HUCBMSCs分化影响。探讨ASCs与HUCBMSCs联合移植在促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢复方面所起的作用。【方法】结扎成年Wistar大鼠双侧隐神经近端,一周后取下结扎处远端的隐神经,采用双酶消化组织块法结合机械分离法分离培养ASCs;Ficoll法分离得到的人脐血单个核细胞(HumanCord Blood Mononuclear Cells,HCMNCs)并经贴壁培养、分离后获得HUCBMSCs。采用全反式微甲酸+bFGF+EGF(含50ng/ml人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、50ng/ml人表皮生长因子(EGF)、O.5μmol/L全反式维甲酸和10%FBS的DMEM/F12培养液,对照组)、体外ASCs培养基半量换液法(实验组)及体内共移植诱导HUCBMSCs向神经方向分化(空白对照组、ASCs移植组、HUCBMSCs移植组、ASCs+HUCBMSCs移植组),应用免疫组化、Western-Bolt半定量、Realtime PCR(NF200、GFAP、MBP)定量分析等方法在诱导培养后1、2、3、4周进行综合评价HUCBMSCs诱导分化情况,分析其神经标志性蛋白的表达情况。同时,用NYU Impactor-Ⅱ打击器制作成年雌性Wistar大鼠胸10脊髓损伤模型(打击重量和高度为:10g×50mm)。将80只大鼠随机分成4组:空白对照组(注射DMEM);ASCs移植组;HUCBMSCs移植组;ASCs与HUCBMSCs联合移植组。分别将DMEM,消化后的ASCs,HUCBMSCs,以及ASC+BMSC移植入对应组的脊髓损伤部位。术后采用BBB评分对大鼠的后肢功能恢复情况进行评价。12周后,从每组随机选取8只大鼠进行10%BDA顺行示踪标记。标记两周后处死动物,将损伤段脊髓取出作5μm快速冰冻切片后,进行BDA显影、HE染色,NF200、GFAP、MBP免疫组化染色。综合以上数据并进行统计学分析。【结果】ASCs和HUCBMSCs经分离,纯化后可以在体外分别稳定的传4代和6代以上;NF200、GFAP、MBP免疫组化染色结果可以证实HUCBMSCs在ASCs和全反式微甲酸及bFGF、EGF的作用下向神经源性细胞分化。Western-Bolt半定量、Real-time PCR(NF200、GFAP、MBP)定量分析结果显示两种诱导方法比较无统计学差异。损伤后4周开始,共移植组动物的BBB评分显着高于其余3组(p<0.05)。BDA顺行示踪标记显示共移植组较ASCs移植组和HUCBMSCs移植组有较多的再生神经纤维通过损伤区,而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越。HE染色显示细胞共移植组损伤空洞明显小于其余叁组(p<O.05)。【结论】ASCs可以分泌多种神经营养因子并促进HUCBMSCs在体外及Wistar大鼠体内的增值和向神经源性细胞分化,与传统全反式微甲酸诱导方法相比更简单。动物实验结果显示HUCBMSCs联合ASCs共移植后HUCBMSCs在脊髓损伤区域可以向神经元和少突胶质细胞分化,填充组织缺损,弥补脊髓空洞,有利于神经再生轴突的延伸和突触之间的连接。ASCs联合HUCBMSCs移植治疗脊髓损伤可促进更多比例的HUCBMSCs向神经元方向分化,促进轴突再生,改善脊髓损伤后功能的恢复。(本文来源于《第25届全国脊柱脊髓学术会议暨2013年贵州省骨科年会论文汇编》期刊2013-07-26）
激活态雪旺细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是困扰医学界的一大难题。干细胞移植促进脊髓损伤后神经修复是目前研究的重点和热点。诱导型多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS)的发现打破了此前关于干细胞分化和培养的传统观点。本研究将脐血干细胞诱导培养成iPS细胞作为种子细胞,并联合前期制备的PCL作为组织工程支架,将iPS细胞与激活态的雪旺细胞(Activated schwann cells,ASCs)联合培养在聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)生物支架上。并建立亚急性SCI动物模型,将搭载组织工程化iPS细胞及ASCs的支架移植入亚急性脊髓损伤实验动物体内。通过Western-Blot、免疫组化染色和行为学评估等方法探讨其修复脊髓损伤的有效性,以期对临床修复脊髓损伤提供新思路和理论依据。【方法】1.将脐血单个核细胞诱导成为iPS细胞并在人胚胎干细胞培养基条件下进行培养、扩增,采用神经干细胞条件培养基进行体外诱导培养。2.系统观察人脐血源性iPS细胞(Human umbilical cord blood derived induced pluripotent stem cells,HUCB-iPS)在条件培养基下向神经细胞方向的分化率及特性。3.将制成的PCL生物支架与两种细胞一起培养,使种子细胞迁移进入组织工程支架。将含有iPS-NSCs和ASCs的PCL支架移植入大鼠脊髓损伤局部,监测移植细胞的迁移、分化和存活情况。4.应用Western-blot方法检测移植修复后损伤部位相关神经营养因子的表达水平变化。探讨组织工程化iPS细胞移植修复脊髓损伤的原理,探讨iPS细胞修复脊髓损伤与促进轴突再生的机制。【结果】1.神经干细胞的诱导:体外实验在经四种转录因子诱导iPS细胞18天后,可以看到iPS细胞克隆团较大,边缘有较为清晰的界限并与MEF细胞相隔离,而细胞呈核大浆小,较为集中、均匀的成团生长。经过iPS细胞的NANOG、SOX2、OCT4、DAPI免疫荧光染色后,可以看到iPS细胞在NANOG和OCT4染色下呈绿色,而在SOX2染色下呈红色,在DAPI染色下呈蓝色。将iPS细胞更换RHB-A细胞培养基。7天后,可以见到球状体内,细胞逐渐增殖并且球体增大,暗黄色,透光并且形态规则。经过Nestin、DAPI染色后,荧光显微镜下,神经干细胞的Nestin染色呈绿色,DAPI染色呈蓝色,细胞球大小较为均匀。2.组织学观察:细胞移植修复脊髓损伤后,HE染色显示ASCs联合iPS-NSCs共培养支架植入组的空洞减少最为明显并且显示出较大量的细胞增生和浸润,提示ASCs与组织工程化的iPS细胞联合移植可以改善SCI后局部的病理结构,促进脊髓损伤后的运动功能恢复。3.行为学评估:在大鼠后肢运动功能评价中,ASCs与iPS-NSCs共培养支架植入组的实验动物运动功能恢复最为明显,该组的BBB评分在细胞移植后第8周可以达到12分以上。4.神经营养因子和炎性因子表达:细胞移植8周后,应用Western-blot检测NT3、GDNF、NGF等神经营养因子及炎性因子的表达。结果显示第八周细胞移植组脊髓的NT3表达相比脊髓损伤组差异不具有统计学意义(P>0.05)。结果显示第八周细胞移植组脊髓GDNF和NGF的表达相比脊髓损伤组要高,差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】本实验从脐血单个核细胞中诱导出人源性的iPS细胞,并将iPS细胞向神经干细胞方向诱导成功,成功地避开了长期以来争论不休的伦理问题,突破了核移植技术缺乏卵母细胞的窘境。探讨了激活态雪旺细胞分泌细胞因子作用下两种细胞与PCL支架的生物相容性及其移植治疗脊髓损伤的原理,揭示移植细胞在脊髓损伤局部微环境影响下命运决定和促进神经再生机制,为脊髓损伤的修复提供理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
激活态雪旺细胞论文参考文献
[1].唐亮.SHH基因转染激活态雪旺细胞移植修复脊髓损伤的实验研究[D].天津医科大学.2018
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[9].张睿,张军,赵承斌.激活态雪旺细胞对神经干细胞分化作用的研究[J].中国医药导报.2014
[10].周先虎,冯世庆,陈有,王颖,郝岩.激活态雪旺细胞联合脐血间充质干细胞移植修复脊髓损伤的实验研究[C].第25届全国脊柱脊髓学术会议暨2013年贵州省骨科年会论文汇编.2013