导读:本文包含了丝腺生物工厂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:转基因家蚕,hIGF-I,TIDM小鼠,血糖水平
丝腺生物工厂论文文献综述
张梦窈[1]（2014）在《家蚕丝腺生物工厂分泌表达hIGF-I及其生物活性的鉴定》一文中研究指出类胰岛素生长因子-I（hIGF-I）具有促进生长的作用，为了实现将转基因家蚕丝腺生物工厂表达的重组人类胰岛素生长因子-I（hIGF-I）分泌到蚕茧的丝胶层，在我们以前的研究中，用带有丝素重链信号肽序列的家蚕丝胶启动子控制hIGF-I基因、杆状病毒极早期启动子控制新霉素抗性（neo）基因构建了转基因载体piggyA3GFP-serHS-IGF-I-ie-neo。本研究将转基因载体piggyA3GFP-serHS-IGF-I-ie-neo通过精子介导法导入蚕卵，利用neo、gfp基因双重筛选，经过PCR和点杂交鉴定获得转基因家蚕，并培育至G8代。免疫组化实验结果显示，表达的hIGF-I可分泌至腺腔；转基因家蚕蚕茧脱胶，利用等电点沉淀法沉淀出含有hIGF-I的蛋白混合物，ELISA检测结果显示每克蚕茧中hIGF-1的含量达到162.7ng。为了分析转hIGF-I基因家蚕蚕茧中的丝胶提取物的生物活性，通过链脲佐菌素诱发建立I型糖尿病动物模型——TIDM小鼠，TIDM小鼠每日口服转hIGF-I基因家蚕蚕茧丝胶提取物（300μl，含hIGF-I25.42ng），6天后对其血糖水平进行检测，结果显示口服丝胶提取物后TIDM小鼠的血糖水平显着降低；与模型组、非转基因蚕茧丝胶提取物对照组相比，7天后小鼠的体重有较好的改善；同时运用血液分析仪和全自动生化仪分别对血常规和血生化指标进行检测，结果显示口服丝胶提取物后TIDM小鼠的血常规和血生化指标正常。由此推测，转hIGF-I基因家蚕蚕茧丝胶提取物有可能作为新型口服药物治疗I型糖尿病。(本文来源于《苏州大学》期刊2014-10-01）
宋作伟[2]（2013）在《过表达Bmovo-1对家蚕卵巢发育的影响及丝腺生物工厂分泌表达hIGF-I》一文中研究指出为了探讨调节Bmovo基因表达对家蚕（Bombyx mori）卵巢发育及丝蛋白合成的影响，本研究首先对Bmovo基因的4种剪接体Bmovo-1(GU477588), Bmovo-2(HQ831344), Bmovo-3(HQ831345)和Bmovo-4(JQ665224)通过qPCR进行表达谱分析，发现ovo基因主要在家蚕生殖腺中转录；Western blot检测结果显示，在卵巢和精巢中均有BmOVO-1和BmOVO-2，而BmOVO-3主要存在于卵巢中，BmOVO-4主要存在于精巢中；组织免疫荧光发现家蚕卵巢滤泡细胞、滋营细胞、卵母细胞中均有BmOVO蛋白表达。为了探讨过表达Bmovo-1基因对家蚕卵巢发育及丝蛋白合成的影响，将Bmovo-1过表达转基因载体pigA3GFP-IeNeo-VlgBmovo-1利用精子介导法导入家蚕卵，通过G418和荧光筛选，结合PCR、斑点杂交鉴定获得了转基因家蚕，qPCR检测结果显示转基因家蚕Bmovo-1基因在卵巢、精巢中的转录水平分别是非转基因家蚕的2.23和1.85倍；生产性状调查结果显示，与非转基因家蚕相比，转基因家蚕雌蛹重下降10.34%，茧层量下降14.59%；雄蛹重下降12.24%，茧层量下降21.72%，而造卵数提高了13.39%。性腺解剖发现，转基因家蚕卵巢重量上升，精巢重量下降。血液和卵巢中海藻糖含量及血液海藻糖酶活性测定发现，转基因家蚕血液和卵巢中海藻糖含量上升，血液中海藻糖酶活性转基因家蚕与非转基因家蚕之间无明显差异。为了从分子水平理解家蚕卵巢发育和卵子发生的机制，取5龄3d、6d及化蛹2d的家蚕卵巢，分别抽提RNA，并纯化mRNA，叁组的样品混合后进行RNA-Seq测序。测序完成后得到的总Reads数为6306078，平均长度为100bp，其中clean reads达到98.87%，测序饱和度良好，证明测序数据真实可靠。clean reads对应的基因条数为9609。以Actin3基因为参照，计算所测基因的log2(Fold_change)，将log2(Fold_change)大于2的定义为高表达基因，结果发现有66个基因为高表达基因。KEGG分析发现这些基因主要集中在能量代谢、蛋白合成、信号转导等路径中。研究结果基本解明了卵巢发育、卵子发生与基因表达的关系以及卵巢发育与丝蛋白合成的互作；为提高产丝量或产卵量提供了新的线索和方案。本研究同时还开展了转基因家蚕丝腺分泌表达类胰岛素生长因子（hIGF-I）研究。将转基因载体piggyA3GFP-serHS-IGF-I-ie-neo通过精子介导法导入蚕卵，利用neo、gfp基因双重筛选，经过PCR和点杂交鉴定获得转基因家蚕，并培育至G8代。转基因家蚕蚕茧脱胶，利用等电点沉淀法沉淀出含有hIGF-I的蛋白混合物，ELISA检测结果显示每克蚕茧中hIGF-1的含量达到162.7ng。(本文来源于《苏州大学》期刊2013-04-01）
李曦[3]（2009）在《家蚕丝腺生物工厂表达hGM-CSF的研究》一文中研究指出人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( human granucyto-macrophage colony-stimulating factor, hGM-CSF)是一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白,在造血调控和免疫调节方面具有重要作用,其临床应用价值很高。目前,重组hGM-CSF有多种表达体系,其中昆虫表达体系以其自身优势逐渐脱颖而出。家蚕是传统的经济昆虫,在我国饲养历史悠久,遗传背景清楚,其五龄幼虫丝腺是巨大的蛋白合成工厂,目前已作为生物工厂表达了多种蛋白。但是,外源基因的有效导入、整合表达水平及遗传稳定性上还存在很多不足。本研究成功构建了基于piggyBac转座子的转基因载体,该载体带有家蚕丝素重链启动子(fib-H)驱动hGM-CSF的表达盒和家蚕杆状病毒极早期基因启动子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)的表达盒。转基因载体与辅助质粒共转染BmN细胞,并利用G418筛选得持续表达hGM-CSF稳定转化细胞系,ELISA检测结果显示,hGM-CSF表达水平为1534.55 pg/106个细胞;分别利用精子介导法、基因枪、扎卵法和性腺导入法将转基因载体导入家蚕,利用绿色荧光及G418双重筛选,结合PCR和Southern blot鉴定,获得了转基因家蚕。western blot结果显示,转基因家蚕丝腺表达的hGM-CSF的分子量为22 kD。ELISA检测结果显示,hGM-CSF在丝腺中的表达水平为5.15 ng/g丝腺冻干粉。有关研究开辟了hGM-CSF表达新途径,为高水平利用家蚕提供了新方法。(本文来源于《苏州大学》期刊2009-05-01）
贾海芳[4]（2008）在《家蚕丝腺生物工厂表达hGM-CSF基因打靶载体的构建及应用研究》一文中研究指出家蚕(Bombyx mori)丝腺具有作为生物工厂的潜质,为了通过基因打靶实现外源基因在丝腺组织特异表达,克隆、并测定了fib-H基因启动子及其旁侧序列(DQ989298)、fib-H内含子和第二外显子部分序列(EU346954),结果显示,该2个片段与已公开的家蚕丝素重链基因(AF226688)对应区域的同源性分别达98.48%和99.58%;二级结构分析显示,启动子区域可形成多个可能与调控蛋白的识别和作用有关的茎环结构;将第2外显子对应的部分氨基酸序列与其他昆虫的丝蛋白进行比对分析,发现不同的丝蛋白在比对的区域具有潜在的GX3EX3TX1KX20-22X1VX3DX2GX1EX3EEDV守恒基序,可能对丝蛋白结构起到重要作用;利用克隆的丝素重链基因的2个片段作为同源臂,成功构建了带有A3启动子驱动GFP的表达盒、丝素轻链启动子驱动hGM-CSF打靶载体;体外翻译和体内瞬时表达结果显示,该基因打靶载体可以在后部丝腺组织匀浆中表达hGM-CSF,在丝腺可以检测到GFP的表达,有关结果为最终通过基因打靶在丝腺组织表达hGM-CSF奠定了基础。(本文来源于《苏州大学》期刊2008-05-01）
丝腺生物工厂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了探讨调节Bmovo基因表达对家蚕（Bombyx mori）卵巢发育及丝蛋白合成的影响，本研究首先对Bmovo基因的4种剪接体Bmovo-1(GU477588), Bmovo-2(HQ831344), Bmovo-3(HQ831345)和Bmovo-4(JQ665224)通过qPCR进行表达谱分析，发现ovo基因主要在家蚕生殖腺中转录；Western blot检测结果显示，在卵巢和精巢中均有BmOVO-1和BmOVO-2，而BmOVO-3主要存在于卵巢中，BmOVO-4主要存在于精巢中；组织免疫荧光发现家蚕卵巢滤泡细胞、滋营细胞、卵母细胞中均有BmOVO蛋白表达。为了探讨过表达Bmovo-1基因对家蚕卵巢发育及丝蛋白合成的影响，将Bmovo-1过表达转基因载体pigA3GFP-IeNeo-VlgBmovo-1利用精子介导法导入家蚕卵，通过G418和荧光筛选，结合PCR、斑点杂交鉴定获得了转基因家蚕，qPCR检测结果显示转基因家蚕Bmovo-1基因在卵巢、精巢中的转录水平分别是非转基因家蚕的2.23和1.85倍；生产性状调查结果显示，与非转基因家蚕相比，转基因家蚕雌蛹重下降10.34%，茧层量下降14.59%；雄蛹重下降12.24%，茧层量下降21.72%，而造卵数提高了13.39%。性腺解剖发现，转基因家蚕卵巢重量上升，精巢重量下降。血液和卵巢中海藻糖含量及血液海藻糖酶活性测定发现，转基因家蚕血液和卵巢中海藻糖含量上升，血液中海藻糖酶活性转基因家蚕与非转基因家蚕之间无明显差异。为了从分子水平理解家蚕卵巢发育和卵子发生的机制，取5龄3d、6d及化蛹2d的家蚕卵巢，分别抽提RNA，并纯化mRNA，叁组的样品混合后进行RNA-Seq测序。测序完成后得到的总Reads数为6306078，平均长度为100bp，其中clean reads达到98.87%，测序饱和度良好，证明测序数据真实可靠。clean reads对应的基因条数为9609。以Actin3基因为参照，计算所测基因的log2(Fold_change)，将log2(Fold_change)大于2的定义为高表达基因，结果发现有66个基因为高表达基因。KEGG分析发现这些基因主要集中在能量代谢、蛋白合成、信号转导等路径中。研究结果基本解明了卵巢发育、卵子发生与基因表达的关系以及卵巢发育与丝蛋白合成的互作；为提高产丝量或产卵量提供了新的线索和方案。本研究同时还开展了转基因家蚕丝腺分泌表达类胰岛素生长因子（hIGF-I）研究。将转基因载体piggyA3GFP-serHS-IGF-I-ie-neo通过精子介导法导入蚕卵，利用neo、gfp基因双重筛选，经过PCR和点杂交鉴定获得转基因家蚕，并培育至G8代。转基因家蚕蚕茧脱胶，利用等电点沉淀法沉淀出含有hIGF-I的蛋白混合物，ELISA检测结果显示每克蚕茧中hIGF-1的含量达到162.7ng。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
丝腺生物工厂论文参考文献
[1].张梦窈.家蚕丝腺生物工厂分泌表达hIGF-I及其生物活性的鉴定[D].苏州大学.2014
[2].宋作伟.过表达Bmovo-1对家蚕卵巢发育的影响及丝腺生物工厂分泌表达hIGF-I[D].苏州大学.2013
[3].李曦.家蚕丝腺生物工厂表达hGM-CSF的研究[D].苏州大学.2009
[4].贾海芳.家蚕丝腺生物工厂表达hGM-CSF基因打靶载体的构建及应用研究[D].苏州大学.2008