导读:本文包含了载脂蛋白基因缺陷小鼠论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:香青兰总黄酮,动脉粥样硬化,细胞间黏附分子1,血管细胞黏附分子1
载脂蛋白基因缺陷小鼠论文文献综述
全翊宁,王新春,郭新红,袁勇,曹文疆[1]（2017）在《香青兰总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变形成的影响》一文中研究指出目的研究香青兰总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变的作用及可能的机制。方法载脂蛋白E基因缺陷小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组及香青兰总黄酮高、中、低剂量组,以C57BL/6J小鼠为正常对照组,给药第12周后处死,检测血清血脂水平,主动脉粥样硬化斑块面积/管腔面积比值,免疫组织化学染色观察主动脉壁细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1及增殖细胞核抗原的表达。结果与模型组比较,各给药组可以显着降低血清甘油叁酯、低密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.05或P<0.01);苏木素伊红染色观察给药组动脉粥样硬化病变减轻,斑块面积/管腔面积比值减小(P<0.05或P<0.01);免疫组织化学染色显示给药组细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1及增殖细胞核抗原的表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论香青兰总黄酮可能通过调节载脂蛋白E基因缺陷小鼠血脂代谢及下调主动脉壁细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1及增殖细胞核抗原表达等的共同作用与影响,阻止载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变形成的发生、发展。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2017年09期）
李雄志[2]（2016）在《黄芪甲苷抑制载脂蛋白E基因缺陷小鼠心脏重构的机制研究》一文中研究指出背景心脏重构是指心脏受到各种内外刺激后,心脏形态、结构和功能等出现一系列适应性改变,其病理特点主要包括心肌肥厚及间质纤维化等,其病理机制主要涉及神经内分泌系统的激活。心脏重构早期为代偿性适应,晚期失代偿可发展为慢性心衰(congestive heart failure, CHF),而CHF是全球人群病死率的一个主要原因。因此,在临床中,抑制心脏重构是治疗CHF的重要策略,如p受体阻滞剂、肾素-血管紧张素-醛固酮系统拮抗剂等抑制神经内分泌系统药物的使用,对预防心脏重构、治疗CHF均取得一定效果。但CHF的发病率和病死率仍居高不下,因此研究心脏重构分子机制及干预药物具有必要性。高胆固醇血症被认为是心血管疾病,尤其是冠心病的主要危险因素之一,它可增加全因死亡率,其负面临床意义已得到反复证实。既往研究提示高胆固醇血症是引起左心室肥厚的独立危险因素,在心脏重构的发病及进展中起重要作用。载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠是被广泛用作研究高胆固醇血症、动脉粥样硬化性等疾病的动物模型,ApoE-/-除有血管表型外,还有如心脏质量增加、室壁厚度增加、心肌纤维化和心功能减低等心脏表型改变。关于ApoE-/-小鼠心脏重构的机制以及相关干预措施的研究很少。同时,高胆固醇血症对心肌细胞的再生、老化、凋亡以及P53信号转导通路的影响也知之甚少。黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, AST Ⅳ)是从中药黄芪中分离出来的一种羊毛脂醇型四环叁萜天然单体皂苷,具多重抗心血管疾病药理活性,既往研究证实AST Ⅳ可以抑制病毒感染、缺血缺氧等引起的心脏重构,降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌纤维化,抗氧化应激等。然而,AST Ⅳ对高胆固醇血症引起的心脏重构的影响及可能机制的研究尚无。因此,本研究目的是观察AST Ⅳ干预ApoE-/-小鼠心脏重构的疗效及探索其相关机制。目的验证假说：高胆固醇血症可引起心肌细胞增殖能力改变,促进心肌细胞老化、凋亡和心肌纤维化,影响P53信号转导通路的激活状态,最终导致以心肌肥厚、心功能下降为特点的病理性心脏重构;而AST Ⅳ治疗能抑制高胆固醇血症所致的心脏重构,进而改善心功能。方法1. AST-Ⅳ准备AST Ⅳ的纯度≥98%,羟丙基-β-环糊精溶解为浓度1%和10% AST Ⅳ溶液。2.动物分组雄性ApoE-/-小鼠随机分为高脂模型组(KO,n=14),低浓度AST Ⅳ干预组(AST-LD,n= 7),高浓度AST Ⅳ干预组(AST-HD, n= 8),以同龄同性别野生型C57BL/6J小鼠(WT,n=15)为对照组。8周龄时,分别获取WT(n=8)和KO(n=7)组小鼠治疗前各参数的基线水平。此后,AST-LD和AST-HD组分别隔日腹腔注射1mg/kg和10mg/kg的AST Ⅳ,余组以同方式同时长给予等剂量溶剂,SPF级普食喂养。药物干预8周(即小鼠16周龄),心脏超声检查后处死小鼠,取血及心脏标本,保存待检。3.心脏超声、血脂和心脏质量检测小鼠麻醉后,超声检测左室内径及后壁厚度,计算左室射血分数和缩短分数。禁食不禁饮12小时,称重后取血处死,分离血浆以测血脂四项；取心脏标本,测量心脏质量和左心室质量,随后垂直于心脏纵轴将左心室分为两部分,一部分用置于包埋剂用作冰冻切片,另一分部保存于超低温冰箱后期备用。4.心肌纤维化,免疫荧光染色法,心肌细胞尺寸和数量的检测马松染色检测心肌纤维化。免疫荧光染色检测各目标蛋白在心脏组织中的表达。使用心肌肌钙蛋白Ⅰ单抗标记心肌细胞；检测目标蛋白如与心脏的氧化应激相关蛋白尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4),抗氧化应激相关蛋白超氧化物歧化酶1、2(SOD1、2),细胞增殖相关蛋白Ki67,细胞老化相关蛋白P16 INK4a。参考文献方法测量心肌细胞尺寸和数量。5.末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测细胞凋亡细胞死亡原位检测试剂盒(荧光标记法)用于检测心肌细胞的凋亡。6.实时荧光定量聚合酶链式反应(QRT-PCR)检测心脏基因转录表达情况从心脏组织提取总RNA,逆转录成cDNA, QRT-PCR法检测与细胞生长周期、增殖、老化、P53信号转导通路、氧化应激等相关基因mRNA的表达。结果1.血脂四项:ApoE-/-小鼠在8周龄时已进展为高胆固醇血症(TC和LDL-C较WT组分别上升3.7倍和8.7倍,甘油叁酯(TG)不增高,HDL-C浓度较WT组下降23%)。16周龄时,ApoE-/-小鼠血脂变化趋势类似。AST Ⅳ治疗ApoE-/-小鼠8周后,血浆TC和LDL-C浓度较KO组上升,提示本实验中未观察到ASTⅣ有降血浆胆固醇作用。2.心脏质量和尺寸：ApoE-/-小鼠8周龄时心脏较WT组已表现为心肌肥厚,其心脏质量(HW,1.1倍)、左心室质量(LVW,1.3倍)、心脏质量体重比(HW/BW,1.1倍)、左心室质量体重比(LVW/BW,1.3倍)以及左心室质量心脏质量比(LVW/HW,1.2倍)均显着增加,左心室长轴(LAX)也增加1.1倍。16周时这些参数的差异仍然维持,AST IV治疗8周后,这些参数在AST-HD组较KO组分别下降了HW 24%、LVW 28%/HW/BW 8%、LVW/BW 10%、LVW/HW 5%、 LAX 10%; AST-LD组没有显着改变。3.心脏超声检测结果：与上述心脏质量和尺寸的变化趋势一致。8周龄时ApoE-/-小鼠较WT组左室舒张末期内径(LVDd)增加14%,左室收缩末期内径(LVDs)增加11%,左室舒张末期容积(LVEDV)和左室收缩末期容积(LVESV)分别增加39%和30%。16周时,除LVDs外,ApoE-/-小鼠LVESV较WT组增加至35%,左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、舒张期末左室后壁厚度(LVPWd).收缩期末左室后壁厚度(LVPWs)分别下降11%、13%、13%、6%。提示高胆固醇血症小鼠心脏室壁厚度变薄和收缩功能受损变化。经AST IV治疗后,AST-HD组小鼠LAX减小,LVESV恢复,EF由54%上升至60%,FS由28%上升至31%。AST-LD组较KO组在心脏超声方面并没有显着差异。4.心脏纤维化：8周龄ApoE-/-小鼠较WT组左心室胶原蛋白含量没有差异,但16周时胶原蛋白分数是WT组2倍,高剂量AST Ⅳ治疗后,胶原蛋白分数减低至KO组一半。提示高胆固醇血症易致心脏纤维化,AST Ⅳ具有明显抑制心脏纤维化作用。5.心肌细胞体积和数量：8周龄ApoE-/-小鼠较WT组心肌细胞体积增加19%,心肌细胞数量无改变；16周,心肌细胞体积增加了38%,心肌细胞数量减少了14%。而AST-LD和AST-HD组小鼠的心肌细胞体积较KO组的分别减低了19%和27%,AST-HD组小鼠的心肌细胞数量较KO组相比增加了10%。6.增殖、老化蛋白的表达：8周龄ApoE-/-小鼠较WT组ki67阳性心肌细胞数占心肌细胞总数比例基本相等,16周时该比例减至WT组的80%,而高剂量AST Ⅳ治疗后该比例较KO组增加3倍,ki67阳性细胞占整个心脏细胞总数比例增加2倍。其次,8周龄ApoE-/-小鼠较WT组在p16INK4a阳性心肌细胞数占心肌细胞总数比例无差异,16周时,该比例增为WT组的2.9倍,而低剂量和高剂量AST Ⅳ治疗后该比例较KO组分别减低了39%和60%。ki67阳性细胞占整个心脏细胞总数比例显着减低55%。7.心脏细胞凋亡：8周龄ApoE-/-小鼠心肌细胞凋亡(<2%)与WT组无差异。16周龄ApoE-/-小鼠凋亡心肌细胞数占总心肌细胞数比例超过WT组的23倍。AST-LD和AST-HD组的心肌细胞凋亡较KO组分别减少了87%和90%。凋亡阳性细胞占心脏细胞总数比例呈类似变化规律。8.氧化应激和抗氧化应激：8周时ApoE-/-小鼠较WT组心脏NOX4阳性细胞占心脏细胞总数比例、SOD1和SOD2的阳性表达面积均无显着改变；16周时,ApoE-/-小鼠NOX4阳性细胞占心脏总细胞比例是WT组的1.3倍,同时SOD2的阳性表达面积显着减小,SOD1相对表达面积没有显着差异。AST-LD和AST-HD组的NOX4阳性细胞占心脏总细胞比例较KO组分别降低16%和17%,SOD1和SOD2的表达则均无显着改变。9.目的基因转录：本实验检测了细胞周期、增殖、老化和P53信号转导通路和氧化应激相关基因表达的情况。1)8周时,ApoE-/-小鼠较WT组Cyclin D1(2.2倍)和MCM5(2.7倍)上调,CDKN1A (70%)和CDKN1B (28%)下调,其余细胞周期相关基因在转录水平均无显着改变。16周时,ApoE-/-小鼠较WT组反映细胞生长停滞的基因CDKN1A(7倍)、CDKN1B(2.7倍)、CDKN2A(9.6倍)明显上调,其中CDKN2A上调与前述翻译产物p16INK4a蛋白质表达变化一致,而CDK4(2.2倍),Cyclin B1(11.3倍).,Ki67(4.7倍)和MCM5(3.6倍)显着上调,其中Ki67mRNA表达与前述蛋白表达不完全一致。AST Ⅳ治疗后CDKN1A, CDKN1B, CDKN2A, MCM5, Cyclin B1、D1、E1、A2和CDK4在AST-LD和AST-HD两组均显着下调。2)8周时,ApoE-/-小鼠心脏除P53上调(1.6倍)和Mcl1下调(27%)之外,其余检测的P53信号转导通路相关基因(TP53、Bax、Bcl2、caspase-3、 Mdm2、ATM、GADD45A)较WT组没有显着差异；16周时除Bax和GADD45A外,其余检测基因表达上调了2.5倍以上。AST IV治疗后上述基因表达显着下调。3)8周时,ApoE/-小鼠心脏与氧化应激相关基因(Duox1、Srxn1、NOX1、 NOX4、GPX2、SOD1)表达较WT组无显着改变；16周时,除Duox1和SOD1外,余检测基因均出现了不同程度的上调,AST Ⅳ治疗后较KO组显着下调。结论本研究中观察到ApoE-/-小鼠心肌细胞增殖能力减低,细胞老化、凋亡加重,心肌纤维化和心脏中P53信号转导通路相关基因表达增高,这些与高胆固醇血症小鼠发生心肌肥厚、心脏收缩功能下降等病理性心脏重构相关；AST Ⅳ治疗并没有降低ApoE-/-小鼠血脂浓度,但逆转其心脏重构、改善心功能,与其促进心脏组织的增殖相关蛋白Ki67表达增加,减少老化相关蛋白p16INK4a表达,抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化,调控心脏P53信号转导通路相关基因的表达有关。本研究为AST Ⅳ应用于临床上治疗血脂异常相关的心脏重构提供了新的思路。(本文来源于《南京医科大学》期刊2016-05-01）
崔迪,吕晶露,卞添颖,李丽丽,闫福华[3]（2016）在《人beta防御素3抑制载脂蛋白E基因缺陷型小鼠牙周炎进展》一文中研究指出目的:人beta防御素3(human beta-defensin 3,hBD3)是一种阳离子多肽,它具有抗菌和抗炎作用。本研究的目的是,研究局部使用hBD3是否能有效抑制结扎导致的载脂蛋白E基因缺陷(apolipoprotein E deficient,Apo E-/-)型小鼠牙周炎,以及可能的机制。方法:32只9周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组、结扎组、非治疗组、治疗组,每组8只。适应性喂养一周后,除对照组外,剩余小鼠用5-0丝线结扎双侧上颌第二磨牙,一周后去除结扎丝。去除后第0、48、96小时,以50μl 40mg/ml hBD3溶液灌注治疗组小鼠上颌第二磨牙牙周袋。第30天取材。microCT检测小鼠上颌骨,免疫组化或PCR方法检测牙周组织相关因子的表达水平。结果:治疗组小鼠牙槽骨吸收高度明显小于非治疗组,且牙周组织内的MMP9、TNF-α、IL-6、CD68表达水平明显下降,IL-10表达水平明显上升,血浆内的IL-6水平也明显下降。结论:h BD3局部使用能有效减少牙槽骨吸收,抑制牙周炎进展。(本文来源于《2016牙周病学学术研讨会论文集》期刊2016-03-25）
郑秀峰,赵石磊,杨力明[4]（2015）在《冠状动脉内干细胞灌注对载脂蛋白E基因缺陷小鼠离体心脏血液动力学影响的实验研究》一文中研究指出目的探讨冠状动脉内干细胞灌注对载脂蛋白E基因缺陷小鼠离体心脏血液动力学的影响。方法设计Langendorff离体心脏灌注模型,比较接受低剂量(1.0×10~6)、高剂量(2.5×10~6)干细胞灌注时及灌注后5 min、15 min、30 min两组载脂蛋白E基因缺陷小鼠(低剂量组、高剂量组)和两组WT小鼠心脏(低剂量对照组、高剂量对照组)的血流动力学指标。同时比较注射后5 min、15 min、30 min时,两组心脏细胞的血流动力学指标。结果四组T1~T4时刻的心率均显着低于T0时刻差异有统计学意义(P<0.05);且高剂量组的心率变化最明显。四组在进行细胞灌注后,LVEDP水平均显着升高,+dp/dt和-dp/dt水平均显着降低,且均以高剂量组的上升或下降幅度最为显着。细胞灌注后,四组的冠脉流量均较灌注前显着降低差异有统计学意义(P<0.05);且以高剂量组的降低幅度最明显,与其他叁组比较差异有统计学意义(P<0.05)。灌注后30 min,四组的漏出液细胞含量均达到了60%以上。结论冠脉内干细胞灌注会对载脂蛋白E基因缺陷小鼠离体心脏的血流动力学产生不良影响,并且灌注剂量越大,不良影响越显着。(本文来源于《中外医疗》期刊2015年17期）
朱中生,王海燕,王登峰,鲁亚丽[5]（2014）在《瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响》一文中研究指出目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油叁酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2014年12期）
吴卫东,张建军,岳静静,荆西民[6]（2014）在《有氧运动对载脂蛋白E基因缺陷小鼠主动脉C反应蛋白表达水平的影响》一文中研究指出目的:本实验以载脂蛋白基因缺陷(ApoE-/-)小鼠为研究对象,观察其在动脉粥样硬化(AS)发病过程中有氧运动对脂联素和C反应蛋白(CRP)的影响,以期探讨有氧运动通过脂联素-CRP发挥抗AS作用的机制。方法:8周龄雄性ApoE-/-小鼠20只,随机分为安静组(C)10只和运动组(E)10只。两组小鼠均饲以高脂饲料,C组不训练,E组小鼠进行14周跑台运动。14周末取材比较两组小鼠主动脉管壁及斑块的病理变化,检测比较其脂肪组织脂联素mRNA表达、血清脂联素水平及主动脉CRP表达、血清CRP水平。结果:E组小鼠与C组小鼠相比,主动脉血管壁纤维弹力板和内膜较完整,AS斑块面积相对较小。E组小鼠脂肪组织脂联素mRNA表达及血清水平较C组显着增加,主动脉CRP的表达及血清水平较C组小鼠则有显着降低,且主动脉CRP的表达与脂联素mRNA表达及血清水平呈显着负相关。结论:有氧运动可以通过提高血清脂联素、脂联素mRNA表达水平的途径,有效降低血清CRP和主动脉CRP的表达,从而发挥延缓AS发展的作用,这可能是运动通过脂联素-CRP发挥抗AS作用的另一机制。(本文来源于《中国康复医学杂志》期刊2014年08期）
张国侠,盖国忠[7]（2013）在《莱菔子水溶性生物碱对载脂蛋白E基因缺陷小鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶、核因子-кB的影响》一文中研究指出目的探讨莱菔子水溶性生物碱对载脂蛋白E基因缺陷小鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶、核因子-κB的影响。方法将载脂蛋白E基因敲除小鼠(高脂饮食)随机分为5组,为莱菔子水溶性生物碱高、中、低剂量组,血脂康组,模型组,每组6只。另设C57BL/6J小鼠组,6只。给药时间为8周。结果内皮型一氧化氮合酶:模型组140.67,C57BL/6J 102.33,高剂量组110.83,中剂量组119.33,低剂量组128.83,血脂康组110.5;核因子-κB:模型组46.99,C57BL/6J 132.17,高剂量组95.99,中剂量组119.33,低剂量组128.83,血脂康组110.5。结论莱菔子水溶性生物碱具有抗动脉粥样硬化作用。(本文来源于《环球中医药》期刊2013年08期）
陈国华,林玲,陈江木,崔然然[8]（2012）在《载脂蛋白E基因缺陷小鼠雌激素与抑郁症及血脂相关性的初步研究》一文中研究指出目的探讨载脂蛋白E基因缺陷(apo-/-)小鼠雌激素(E2)、血清总胆固醇水平(TC)和抑郁症之间的关系。方法 30只成年apo-/-雌性小鼠随机分为3组。A组:双侧卵巢切除(OVX)+E2;B组:OVX+芝麻油;C组:假手术组(Sham)。叁个月后ELISA检测血清E2和TC水平,观察小鼠悬尾不动时间,分析他们之间的关系。结果小鼠悬尾不动时间和TC水平与E2呈明显的负相关,小鼠悬尾不动时间与TC有一定的正相关。结论雌激素能抑制抑郁症倾向和降低TC水平,叁者关系中,雌激素起主导作用。(本文来源于《四川解剖学杂志》期刊2012年03期）
苏琳,康丽萍,宝辉,李卫,闫征[9]（2012）在《达肝素对载脂蛋白E基因缺陷小鼠肾动脉粥样硬化病变的影响》一文中研究指出目的在动脉粥样硬化模型鼠中,观察达肝素对肾动脉粥样硬化病变进展及对植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达影响,探讨达肝素可能的抗动脉粥样硬化机制。方法以6周龄雄性C57BL/6J小鼠24只为对照,随机分为普通饲料组及高脂饲料组。雄性6周龄载脂蛋白E基因缺陷(Apo E-/-)小鼠36只,均予高脂饲料喂养至12周龄,随机分为模型组、低剂量肝素组[达肝素钠100 IU/(kg.d)]、高剂量肝素组[达肝素钠200 IU/(kg.d)],皮下注射连续4周(16周龄)后各组随机取6只处死。分离肾动脉,制成石蜡切片行HE及免疫组织化学染色,观察斑块情况及LOX-1蛋白的表达。用RT-PCR方法,检测肾动脉LOX-1 mRNA及VEGF mRNA的表达。用Western Blot分析法,检测肾动脉中LOX-1蛋白的表达。剩余小鼠继续原方案喂养4周(20周龄)后处死,肾动脉石蜡切片行HE染色,观察斑块情况。结果 Apo E-/-模型组在16周龄时出现轻度肾动脉粥样硬化。低剂量及高剂量达肝素均抑制肾动脉粥样硬化的形成(P<0.05)。Apo E-/-模型组LOX-1 mRNA、VEGF mRNA及LOX-1蛋白的表达水平较C57BL/6J普通饲料组的表达水平明显升高(P<0.05)。低剂量及高剂量达肝素治疗后,LOX-1 mRNA、VEGF mRNA及LOX-1蛋白的表达水平表达较模型组明显下降(P<0.05)。结论达肝素钠可能通过抑制LOX-1蛋白及VEGF表达的途径,抑制肾动脉粥样硬化的进展。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2012年05期）
李晓燕,杨国良,刘科卫,谈红,许琳[10]（2011）在《瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化辅助性T细胞相关细胞因子的影响》一文中研究指出目的探讨瑞舒伐他汀对动脉粥样硬化中T细胞相关细胞因子的影响。方法雄性载脂蛋白E(apoE)~(-/-)小鼠24只,随机分为模型组和瑞舒伐他汀组[10 mg/(kg·d)蒸馏水稀释后灌胃],每组1 2只。雄性C57BL/6J野生型小鼠12只作为对照组。12周后,处死小鼠,收集血清,测定血脂及干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)含量。取主动脉根部做病理切片,HE染色,检测校正斑块面积。取小鼠的胸腹主动脉检测IFNγ、IL10含量。结果与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C明显升高(P<0.01)。与模型组比较,瑞舒伐他汀组小鼠血清TC、TG、LDL-C、IFN-γ、动脉粥样硬化校正斑块面积明显降低,IL-10明显升高;主动脉IFNγ明显降低,IL-10明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论瑞舒伐他汀除具有较强的调脂作用外,还可以明显改善外周血及局部组织中的T细胞相关细胞因子失衡,减缓动脉粥样硬化进展,发挥抗动脉粥样硬化的非调脂作用。(本文来源于《中华老年心脑血管病杂志》期刊2011年01期）
载脂蛋白基因缺陷小鼠论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景心脏重构是指心脏受到各种内外刺激后,心脏形态、结构和功能等出现一系列适应性改变,其病理特点主要包括心肌肥厚及间质纤维化等,其病理机制主要涉及神经内分泌系统的激活。心脏重构早期为代偿性适应,晚期失代偿可发展为慢性心衰(congestive heart failure, CHF),而CHF是全球人群病死率的一个主要原因。因此,在临床中,抑制心脏重构是治疗CHF的重要策略,如p受体阻滞剂、肾素-血管紧张素-醛固酮系统拮抗剂等抑制神经内分泌系统药物的使用,对预防心脏重构、治疗CHF均取得一定效果。但CHF的发病率和病死率仍居高不下,因此研究心脏重构分子机制及干预药物具有必要性。高胆固醇血症被认为是心血管疾病,尤其是冠心病的主要危险因素之一,它可增加全因死亡率,其负面临床意义已得到反复证实。既往研究提示高胆固醇血症是引起左心室肥厚的独立危险因素,在心脏重构的发病及进展中起重要作用。载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠是被广泛用作研究高胆固醇血症、动脉粥样硬化性等疾病的动物模型,ApoE-/-除有血管表型外,还有如心脏质量增加、室壁厚度增加、心肌纤维化和心功能减低等心脏表型改变。关于ApoE-/-小鼠心脏重构的机制以及相关干预措施的研究很少。同时,高胆固醇血症对心肌细胞的再生、老化、凋亡以及P53信号转导通路的影响也知之甚少。黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, AST Ⅳ)是从中药黄芪中分离出来的一种羊毛脂醇型四环叁萜天然单体皂苷,具多重抗心血管疾病药理活性,既往研究证实AST Ⅳ可以抑制病毒感染、缺血缺氧等引起的心脏重构,降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌纤维化,抗氧化应激等。然而,AST Ⅳ对高胆固醇血症引起的心脏重构的影响及可能机制的研究尚无。因此,本研究目的是观察AST Ⅳ干预ApoE-/-小鼠心脏重构的疗效及探索其相关机制。目的验证假说：高胆固醇血症可引起心肌细胞增殖能力改变,促进心肌细胞老化、凋亡和心肌纤维化,影响P53信号转导通路的激活状态,最终导致以心肌肥厚、心功能下降为特点的病理性心脏重构;而AST Ⅳ治疗能抑制高胆固醇血症所致的心脏重构,进而改善心功能。方法1. AST-Ⅳ准备AST Ⅳ的纯度≥98%,羟丙基-β-环糊精溶解为浓度1%和10% AST Ⅳ溶液。2.动物分组雄性ApoE-/-小鼠随机分为高脂模型组(KO,n=14),低浓度AST Ⅳ干预组(AST-LD,n= 7),高浓度AST Ⅳ干预组(AST-HD, n= 8),以同龄同性别野生型C57BL/6J小鼠(WT,n=15)为对照组。8周龄时,分别获取WT(n=8)和KO(n=7)组小鼠治疗前各参数的基线水平。此后,AST-LD和AST-HD组分别隔日腹腔注射1mg/kg和10mg/kg的AST Ⅳ,余组以同方式同时长给予等剂量溶剂,SPF级普食喂养。药物干预8周(即小鼠16周龄),心脏超声检查后处死小鼠,取血及心脏标本,保存待检。3.心脏超声、血脂和心脏质量检测小鼠麻醉后,超声检测左室内径及后壁厚度,计算左室射血分数和缩短分数。禁食不禁饮12小时,称重后取血处死,分离血浆以测血脂四项；取心脏标本,测量心脏质量和左心室质量,随后垂直于心脏纵轴将左心室分为两部分,一部分用置于包埋剂用作冰冻切片,另一分部保存于超低温冰箱后期备用。4.心肌纤维化,免疫荧光染色法,心肌细胞尺寸和数量的检测马松染色检测心肌纤维化。免疫荧光染色检测各目标蛋白在心脏组织中的表达。使用心肌肌钙蛋白Ⅰ单抗标记心肌细胞；检测目标蛋白如与心脏的氧化应激相关蛋白尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4),抗氧化应激相关蛋白超氧化物歧化酶1、2(SOD1、2),细胞增殖相关蛋白Ki67,细胞老化相关蛋白P16 INK4a。参考文献方法测量心肌细胞尺寸和数量。5.末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测细胞凋亡细胞死亡原位检测试剂盒(荧光标记法)用于检测心肌细胞的凋亡。6.实时荧光定量聚合酶链式反应(QRT-PCR)检测心脏基因转录表达情况从心脏组织提取总RNA,逆转录成cDNA, QRT-PCR法检测与细胞生长周期、增殖、老化、P53信号转导通路、氧化应激等相关基因mRNA的表达。结果1.血脂四项:ApoE-/-小鼠在8周龄时已进展为高胆固醇血症(TC和LDL-C较WT组分别上升3.7倍和8.7倍,甘油叁酯(TG)不增高,HDL-C浓度较WT组下降23%)。16周龄时,ApoE-/-小鼠血脂变化趋势类似。AST Ⅳ治疗ApoE-/-小鼠8周后,血浆TC和LDL-C浓度较KO组上升,提示本实验中未观察到ASTⅣ有降血浆胆固醇作用。2.心脏质量和尺寸：ApoE-/-小鼠8周龄时心脏较WT组已表现为心肌肥厚,其心脏质量(HW,1.1倍)、左心室质量(LVW,1.3倍)、心脏质量体重比(HW/BW,1.1倍)、左心室质量体重比(LVW/BW,1.3倍)以及左心室质量心脏质量比(LVW/HW,1.2倍)均显着增加,左心室长轴(LAX)也增加1.1倍。16周时这些参数的差异仍然维持,AST IV治疗8周后,这些参数在AST-HD组较KO组分别下降了HW 24%、LVW 28%/HW/BW 8%、LVW/BW 10%、LVW/HW 5%、 LAX 10%; AST-LD组没有显着改变。3.心脏超声检测结果：与上述心脏质量和尺寸的变化趋势一致。8周龄时ApoE-/-小鼠较WT组左室舒张末期内径(LVDd)增加14%,左室收缩末期内径(LVDs)增加11%,左室舒张末期容积(LVEDV)和左室收缩末期容积(LVESV)分别增加39%和30%。16周时,除LVDs外,ApoE-/-小鼠LVESV较WT组增加至35%,左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、舒张期末左室后壁厚度(LVPWd).收缩期末左室后壁厚度(LVPWs)分别下降11%、13%、13%、6%。提示高胆固醇血症小鼠心脏室壁厚度变薄和收缩功能受损变化。经AST IV治疗后,AST-HD组小鼠LAX减小,LVESV恢复,EF由54%上升至60%,FS由28%上升至31%。AST-LD组较KO组在心脏超声方面并没有显着差异。4.心脏纤维化：8周龄ApoE-/-小鼠较WT组左心室胶原蛋白含量没有差异,但16周时胶原蛋白分数是WT组2倍,高剂量AST Ⅳ治疗后,胶原蛋白分数减低至KO组一半。提示高胆固醇血症易致心脏纤维化,AST Ⅳ具有明显抑制心脏纤维化作用。5.心肌细胞体积和数量：8周龄ApoE-/-小鼠较WT组心肌细胞体积增加19%,心肌细胞数量无改变；16周,心肌细胞体积增加了38%,心肌细胞数量减少了14%。而AST-LD和AST-HD组小鼠的心肌细胞体积较KO组的分别减低了19%和27%,AST-HD组小鼠的心肌细胞数量较KO组相比增加了10%。6.增殖、老化蛋白的表达：8周龄ApoE-/-小鼠较WT组ki67阳性心肌细胞数占心肌细胞总数比例基本相等,16周时该比例减至WT组的80%,而高剂量AST Ⅳ治疗后该比例较KO组增加3倍,ki67阳性细胞占整个心脏细胞总数比例增加2倍。其次,8周龄ApoE-/-小鼠较WT组在p16INK4a阳性心肌细胞数占心肌细胞总数比例无差异,16周时,该比例增为WT组的2.9倍,而低剂量和高剂量AST Ⅳ治疗后该比例较KO组分别减低了39%和60%。ki67阳性细胞占整个心脏细胞总数比例显着减低55%。7.心脏细胞凋亡：8周龄ApoE-/-小鼠心肌细胞凋亡(<2%)与WT组无差异。16周龄ApoE-/-小鼠凋亡心肌细胞数占总心肌细胞数比例超过WT组的23倍。AST-LD和AST-HD组的心肌细胞凋亡较KO组分别减少了87%和90%。凋亡阳性细胞占心脏细胞总数比例呈类似变化规律。8.氧化应激和抗氧化应激：8周时ApoE-/-小鼠较WT组心脏NOX4阳性细胞占心脏细胞总数比例、SOD1和SOD2的阳性表达面积均无显着改变；16周时,ApoE-/-小鼠NOX4阳性细胞占心脏总细胞比例是WT组的1.3倍,同时SOD2的阳性表达面积显着减小,SOD1相对表达面积没有显着差异。AST-LD和AST-HD组的NOX4阳性细胞占心脏总细胞比例较KO组分别降低16%和17%,SOD1和SOD2的表达则均无显着改变。9.目的基因转录：本实验检测了细胞周期、增殖、老化和P53信号转导通路和氧化应激相关基因表达的情况。1)8周时,ApoE-/-小鼠较WT组Cyclin D1(2.2倍)和MCM5(2.7倍)上调,CDKN1A (70%)和CDKN1B (28%)下调,其余细胞周期相关基因在转录水平均无显着改变。16周时,ApoE-/-小鼠较WT组反映细胞生长停滞的基因CDKN1A(7倍)、CDKN1B(2.7倍)、CDKN2A(9.6倍)明显上调,其中CDKN2A上调与前述翻译产物p16INK4a蛋白质表达变化一致,而CDK4(2.2倍),Cyclin B1(11.3倍).,Ki67(4.7倍)和MCM5(3.6倍)显着上调,其中Ki67mRNA表达与前述蛋白表达不完全一致。AST Ⅳ治疗后CDKN1A, CDKN1B, CDKN2A, MCM5, Cyclin B1、D1、E1、A2和CDK4在AST-LD和AST-HD两组均显着下调。2)8周时,ApoE-/-小鼠心脏除P53上调(1.6倍)和Mcl1下调(27%)之外,其余检测的P53信号转导通路相关基因(TP53、Bax、Bcl2、caspase-3、 Mdm2、ATM、GADD45A)较WT组没有显着差异；16周时除Bax和GADD45A外,其余检测基因表达上调了2.5倍以上。AST IV治疗后上述基因表达显着下调。3)8周时,ApoE/-小鼠心脏与氧化应激相关基因(Duox1、Srxn1、NOX1、 NOX4、GPX2、SOD1)表达较WT组无显着改变；16周时,除Duox1和SOD1外,余检测基因均出现了不同程度的上调,AST Ⅳ治疗后较KO组显着下调。结论本研究中观察到ApoE-/-小鼠心肌细胞增殖能力减低,细胞老化、凋亡加重,心肌纤维化和心脏中P53信号转导通路相关基因表达增高,这些与高胆固醇血症小鼠发生心肌肥厚、心脏收缩功能下降等病理性心脏重构相关；AST Ⅳ治疗并没有降低ApoE-/-小鼠血脂浓度,但逆转其心脏重构、改善心功能,与其促进心脏组织的增殖相关蛋白Ki67表达增加,减少老化相关蛋白p16INK4a表达,抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化,调控心脏P53信号转导通路相关基因的表达有关。本研究为AST Ⅳ应用于临床上治疗血脂异常相关的心脏重构提供了新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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