导读:本文包含了驱动蛋白样结合蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:原核表达,麦芽糖结合蛋白-删除型微管驱动蛋白11融合蛋白,亲和层析
驱动蛋白样结合蛋白论文文献综述
宋婷婷,黄振强,郑意,宫瑾,Stanley,Lin[1]（2013）在《麦芽糖结合蛋白-微管驱动蛋白11删除型融合基因表达载体的构建及其蛋白表达》一文中研究指出目的:构建删除型微管驱动蛋白(KIF)11与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白的原核表达载体,并纯化得到高纯度的MBP-删除型KIF11融合蛋白。方法:PCR法从全长的KIF11基因组中扩增KIF11的相关删除型基因并连接到原核表达载体pMal中,此载体包含一个表达MBP的基因,删除型KIF11片段插入后与其融合,筛选和测序鉴定阳性克隆。将重组质粒转化到Rosseta大肠杆菌中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达和亲和层析分离纯化表达产物,对纯化的蛋白进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹杂交(Western blot)鉴定。结果:成功扩增删除型KIF11基因,构建MBP-KIF11-head,-stalk和-tail重组质粒并在Rosseta中诱导表达出MBP-KIF11-head,-stalk,-tail融合蛋白。经SDS-PAGE和Western blot法验证了高纯度纯化的融合蛋白。结论:建立了高效稳定的MBP-KIF11表达体系,为进一步研究KIF11与mRNA调控蛋白锌指结合蛋白1相互作用的区域打下基础。(本文来源于《汕头大学医学院学报》期刊2013年02期）
徐朋奇,李杰,张红梅,石科,韩康[2]（2011）在《杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区的表达与纯化》一文中研究指出目的:构建杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区(KMD)基因原核表达载体并表达纯化KMD。方法:通过软件和在线工具预测KMD的理化性质。构建KMD的原核表达载体pET28a-KMD,而后在大肠杆菌BL21(DE3)内16℃过夜诱导表达KMD,通过超声破碎菌体和高速离心,将上清液进行亲和层析,获得粗纯目的蛋白,再利用离子交换层析和凝胶过滤层析进一步纯化。SDS-PAGE检测层析各阶段蛋白样品。将纯化后的KMD均分3份分别放置在-80℃、4℃和18℃环境中,1周后SDS-PAGE检测目的蛋白是否降解。结果:KMD相对分子质量为37480,预测pI为7.99。基因中含有的稀有密码子不会明显影响其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。多步层析后可以获得2个独立的目的蛋白洗脱峰,均为KMD且纯度可满足结晶条件搜索。纯化后的KMD在4℃和18℃下放置1周后无降解。结论:获得大量高纯度、均一性良好的KMD蛋白,能够满足培养蛋白晶体所需。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2011年06期）
王小艳[3]（2008）在《驱动蛋白样DNA结合蛋白下游调节基因的筛选与验证》一文中研究指出背景：驱动蛋白样DNA结合蛋白Kid属于驱动蛋白家族(kinesin family, KIF)。Kid分子结构中N端的微管驱动区和ATP酶活性区及C端的DNA结合区和核定位区决定了该蛋白既具有Kinesin的微管驱动功能,又具有DNA结合蛋白(DNA binding protein, DBP)的转录因子功能。Kid作为微管驱动蛋白在有丝分裂的整个生物学过程中都起着关键作用,参与纺锤体的形成、染色体的运动以及调节细胞进入有丝分裂的末期；另外,Kid作为转录调节因子可能调节癌基因ErbB-2的表达。目前,国外关于Kid的研究仅限于对其分子结构和基于分子结构的功能描述,关于Kid在肿瘤发生发展中的作用机制尚无研究报道。本研究室前期研究发现Kid的编码基因kinesin-like4(KNSL4)在乳腺癌的淋巴结转移癌中的表达较其配对原发癌下调,KNSL4mRNA在乳腺原发癌中的下调与乳腺癌患者差的预后相关,提示Kid在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用。目的：通过筛选Kid下游的转录调节基因,并对筛选得到的候选靶基因进行生物学验证,进一步探讨Kid蛋白作为转录调节因子在乳腺癌发生发展中的作用机制。方法：联合染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation, ChIP)和启动子基因芯片(microarray)技术(ChIP-on chip),筛选Kid结合的候选靶基因。采用DNA选择性连接(DNA selection and ligation, DSL)的方法标记Kid抗体富集的DNA,筛选其与启动子芯片杂交的荧光强度与无抗体对照比较差异达2倍以上的基因作为候选的Kid调控靶基因;采用ChIP联合实时定量PCR(ChIP-qPCR)方法验证Kid与候选靶基因ATF7IP、CDC25、TM4SF3、PIP的启动子区(-100bp～+400bp)的结合。采用RNA干扰(RNA interference, RNAi)方法分别靶向KNSL4的第二和第叁外显子沉默,Kid在乳腺癌细胞MCF-7中的表达。采用实时定量RT-PCR和western blot方法检测Kid的mRNA和蛋白的表达量,筛选Kid低表达的稳定亚克隆,分别命名为MCF-7/exon2-siRNA和MCF-7/exon3-siRNA;采用实时定量RT-PCR (real time RT-PCR)方法比较ATF7IP、CDC25C、TM4SF3、PIP mRNA在MCF-7/exon3-siRNA与对照组MCF-7/vector细胞中mRNA表达量的差异。结果：1.DSL标记方法用于启动子芯片杂交的ChIP-DNA模板量为100ng,与连接介导PCR (ligation mediate PCR, LM-PCR)方法比较,DSL方法显着提高了检测转录因子靶基因的灵敏度,并减少了抗体用量和实验成本。2.共筛选出287个Kid调控的候选靶基因,其中26个与细胞周期调控相关,27个与信号传导相关,40个与转录调节相关,17个与细胞黏附相关,16个与细胞运动相关。ATF7IP基因在Kid抗体免疫沉淀DNA中的富集比无抗体免疫沉淀的阴性对照高4.8倍,CDC25C为8.3倍,PIP为11倍,TM4SF3为27.9倍。3.实时定量PCR检测ChIP的实验样本与阴性对照样本中ATF7IP、PIP CDC25C及TM4SF3启动子区扩增产物的差异,结果在实验样本中ATF7IP扩增产物比阴性对照高4.9倍,CDC25C为10倍,PIP为3倍,TM4SF3为11.8倍。4.与MCF-7/vector比较,MCF-7/exon3-siRNA中的KNSL4mRNA下调80%,Kid蛋白下调68%。MCF-7/exon2-siRNA中CNSL4mRNA下调76%,Kid蛋白下调52%。5.与MCF-7/vecto·比较,MCF-7/exon3-siRNA细胞中ATF7IP mRNA表达上调3.5倍,CDC25C mRNA表达上调10倍,PIP和TM4SF3在MCF-7/vector和MCF-7/exon3-siRNA细胞中均无表达。结论：1.本研究采用DSL标记法可以减少用于芯片杂交的ChIP-DNA模板量,检测灵敏度高于]LM-PCR标记法。2.本研究建立了Kid低表达的MCF-7细胞亚克隆。3.Kid蛋白对ATF7IP和CDC25C基因的转录具有负向调节作用,Kid可能通过调节其靶基因的转录进而影响乳腺癌的生物学行为。(本文来源于《天津医科大学》期刊2008-05-01）
驱动蛋白样结合蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区(KMD)基因原核表达载体并表达纯化KMD。方法:通过软件和在线工具预测KMD的理化性质。构建KMD的原核表达载体pET28a-KMD,而后在大肠杆菌BL21(DE3)内16℃过夜诱导表达KMD,通过超声破碎菌体和高速离心,将上清液进行亲和层析,获得粗纯目的蛋白,再利用离子交换层析和凝胶过滤层析进一步纯化。SDS-PAGE检测层析各阶段蛋白样品。将纯化后的KMD均分3份分别放置在-80℃、4℃和18℃环境中,1周后SDS-PAGE检测目的蛋白是否降解。结果:KMD相对分子质量为37480,预测pI为7.99。基因中含有的稀有密码子不会明显影响其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。多步层析后可以获得2个独立的目的蛋白洗脱峰,均为KMD且纯度可满足结晶条件搜索。纯化后的KMD在4℃和18℃下放置1周后无降解。结论:获得大量高纯度、均一性良好的KMD蛋白,能够满足培养蛋白晶体所需。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
驱动蛋白样结合蛋白论文参考文献
[1].宋婷婷,黄振强,郑意,宫瑾,Stanley,Lin.麦芽糖结合蛋白-微管驱动蛋白11删除型融合基因表达载体的构建及其蛋白表达[J].汕头大学医学院学报.2013
[2].徐朋奇,李杰,张红梅,石科,韩康.杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区的表达与纯化[J].郑州大学学报(医学版).2011
[3].王小艳.驱动蛋白样DNA结合蛋白下游调节基因的筛选与验证[D].天津医科大学.2008
标签：原核表达; 麦芽糖结合蛋白-删除型微管驱动蛋白11融合蛋白; 亲和层析;