导读:本文包含了质粒主动分配机制论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:RHH结构域,晶体结构,质粒主动分配,着丝粒结合
质粒主动分配机制论文文献综述
黄林[1]（2010）在《质粒主动分配的分子机制》一文中研究指出所有的生命形式都需要将遗传物质稳定的传到子代,低拷贝质粒的主动分配系统提供了一个简单并且易于操作的模型来研究这个问题。质粒的主动分配系统包含叁个元件：一个顺式作用DNA元件着丝粒,一个能形成丝状纤维的马达蛋白ParA,以及一个着丝粒结合蛋白ParB。在质粒分配过程中,多个ParB结合到着丝粒区形成有高级结构的分配亚复合体,这个复合体进一步招募ParA形成分配体。通常在结合ATP的情况下ParA可以通过多聚形成丝状纤维从而将ParB抓住的质粒推到子代细胞中去。我们实验室前期证明了革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp. Cynodontis的质粒pCXC100属于典型的Ib型主动分配系统。在这个质粒中ParA是一个典型的walker型(典型的ATPase结构域)马达蛋白,但是ParB仅从序列分析很难知道其包含什么样的结构域,这就提出了一系列的问题,即ParB是否含有一个新的DNA结合结构域并且它怎样和着丝粒结合而形成分配亚复合体等等。本论文中,我们通过一系列结构生物学和生物化学的手段来研究ParB和着丝粒的相互作用。(1)本文中我们解析了1.4A的ParB C端DNA结合区的结构,该结构表明ParB C端DNA结合区形成了一个二聚的β折叠-α螺旋-α螺旋(Ribbon-Helix-Helix简称RHH)结构,RHH结构域是一种典型的DNA结合结构域,在着丝粒结合蛋白中已经解析了四个含RHH结构域的蛋白,分别分布于Ib和Ⅱ型,我们的结构提供了新的证据表明RHH结构域在着丝粒蛋白中的广泛存在性。(2)我们通过羟自由基足迹实验,凝胶阻滞实验和等温滴定量热法深入的鉴定了ParB和着丝粒的相互作用。着丝粒是由九个无间隔的正向重复序列组成,保守序列为AGNTGGAAA。二聚的ParB(简称ParB2)的结合中心位于每个重复序列的第4对和第5对碱基对之间。由于9个重复序列序列之间有一定的差别,ParB和9个重复序列的亲和力各不相同(Kd=24-2900 nM)。ParB和连续重复序列的结合存在高度协同性,这将帮助ParB连续高效的结合到着丝粒上。我们的结果证明pCXC100主动分配系统和其它Ib型主动分配系统在着丝粒结合蛋白的DNA结合结构域,着丝粒的组织结构,以及着丝粒结合蛋白和着丝粒的协同相互作用这叁个方面都比较类似。(3)我们解析了一个1.8A的ParB RHH结构域和DNA非特异性结合的晶体结构。在这个结构里ParB2之间没有相互作用,而DNA处于一种标准B型DNA的状态,并且在这种非特异结合的情况下所观察到DNA和蛋白的相互作用的方式和特异性结合时相比发生了一系列改变。这是第一个在晶体结构里观察到的特异性识别DNA的RHH结构域和一个非特异DNA序列的相互作用。该结构可能展现的是ParB正在搜寻它特异性结合位点的状态。(4)我们解析了一系列ParB RHH结构域和含有连续重复序列DNA的复合物的结构,其中最高分辨率为3.25A。在晶体结构中,两个ParB2和两个连续的重复序列结合,并且自身发生相互作用,展现了蛋白发生协同作用的结构基础。另外RHH结构域C端的尾巴插入到富含AT的DNA小沟里,这个尾巴在只含ParB C端DNA结合区的结构里是没有观察到的。通过蛋白质酶解法我们还发现,C端能被含连续重复序列的DNA保护而不被只含单个重复序列或者是非天然序列所保护。这是第一次在晶体结构里观察到含RHH结构域的蛋白和DNA的小沟发生相互作用。在晶体结构里我们还发现双链的DNA在晶体里首尾相连,形成了类似于着丝粒的含有多个连续无间隔重复序列的DNA。而ParB则缠绕在DNA上,形成了一个超螺旋高级结构。和清华大学高宁老师实验室合作,我们通过电镜的负染方法观察了整个着丝粒和ParB RHH结构域结合的图像,发现在溶液状态下分配亚复合体也是超级螺旋结构,并且和我们在晶体结构里观察到的形状和大小一致。这种分配亚复合体与Ⅱ型的pSK41分配亚复合体以及Ⅰ型分配亚复合体的模型均不相同,揭示了分配亚复合体的多样性,加深了对Ib型主动分配作用机制的理解。(本文来源于《武汉大学》期刊2010-04-01）
蒋丽娜[2]（2007）在《对Leifsonia xyli subsp.cynodontis pLXC100质粒主动分配机制ParB蛋白的研究》一文中研究指出基因组能够被平等分配到子细胞中是保证遗传物质稳定传代的条件之一。在真核细胞中，基因的分配过程已经研究较为清楚，但是人们对原核细胞的质粒和染色体分配过程仍知之甚少。目前已发现原核细胞的质粒和染色体编码两个反式作用蛋白和一个顺式作用位点参与质粒和染色体的分配过程，这种分配方式称为主动分配机制(active partition mechanism)。两个反式作用蛋白中一个蛋白是典型的ATP酶，具有ATP酶活性；另一个蛋白是DNA结合蛋白，能够结合到顺式作用位点，并与ATP酶共同作用形成分配复合物来介导分配过程。目前大多数研究主要针对革兰氏阴性菌，而对革兰氏阳性菌质粒主动分配机制研究较少。我们之前报道了革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp．cynodontis天然质粒pLXC100的初步研究，这个质粒也存在两个蛋白(ParA、ParB)和一段DNA序列(parS)与主动分配相关，ParB是DNA结合蛋白，ParA是ATPase，并且活性受到ParB、pars的调节，叁者可以形成复合物。这是在革兰氏阳性菌质粒中首次发现完整的主动分配元件。初步推测这种分配元件属于主动分配机制中的Ib类型。本研究以革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp. cynodontis天然质粒pLXC100为材料，建立在前面的研究基础之上，应用多种生化技术对其分配元件ParB蛋白进行定性分析，展开对ParB蛋白性质的探索。此研究用IMPACT-TWIN蛋白纯化系统得到不含外源多肽标签的纯ParB蛋白，通过EMSA、DnaseI footprinting和SPR等技术，证实了ParB蛋白的DNA结合活性，得到结合DNA的动力学参数；基于二级结构的预测，克隆表达得到了五个突变体蛋白，应用EGS化学交联、HPLC和CD等方法，探讨了ParB蛋白结合DNA的氨基酸和二级结构，证实K70对ParB蛋白维持DNA结合活性是非常重要的。本研究对ParB蛋白的研究结果，丰富了革兰氏阳性菌Ib型主动分配机制的研究内容，推进了原核细胞质粒和染色体分离的研究进展。(本文来源于《曲阜师范大学》期刊2007-04-01）
蒋丽娜,李晓,李晓波,徐承水[3]（2007）在《质粒主动分配机制的研究进展》一文中研究指出高拷贝数的质粒可以通过其较大的数量来保证它的稳定传代,但是低拷贝数的质粒只能依靠其他的方式。其中有一种被称为主动分配机制,含有分配位点。它由两个反式作用蛋白和一个顺式作用类着丝粒位点组成。其中一个蛋白是ATPase,另外一个蛋白是DNA结合蛋白,能够结合到顺式作用位点,并且与ATPase共同作用,形成分配复合物,来介导分配过程。(本文来源于《科技信息》期刊2007年09期）
质粒主动分配机制论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
基因组能够被平等分配到子细胞中是保证遗传物质稳定传代的条件之一。在真核细胞中，基因的分配过程已经研究较为清楚，但是人们对原核细胞的质粒和染色体分配过程仍知之甚少。目前已发现原核细胞的质粒和染色体编码两个反式作用蛋白和一个顺式作用位点参与质粒和染色体的分配过程，这种分配方式称为主动分配机制(active partition mechanism)。两个反式作用蛋白中一个蛋白是典型的ATP酶，具有ATP酶活性；另一个蛋白是DNA结合蛋白，能够结合到顺式作用位点，并与ATP酶共同作用形成分配复合物来介导分配过程。目前大多数研究主要针对革兰氏阴性菌，而对革兰氏阳性菌质粒主动分配机制研究较少。我们之前报道了革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp．cynodontis天然质粒pLXC100的初步研究，这个质粒也存在两个蛋白(ParA、ParB)和一段DNA序列(parS)与主动分配相关，ParB是DNA结合蛋白，ParA是ATPase，并且活性受到ParB、pars的调节，叁者可以形成复合物。这是在革兰氏阳性菌质粒中首次发现完整的主动分配元件。初步推测这种分配元件属于主动分配机制中的Ib类型。本研究以革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp. cynodontis天然质粒pLXC100为材料，建立在前面的研究基础之上，应用多种生化技术对其分配元件ParB蛋白进行定性分析，展开对ParB蛋白性质的探索。此研究用IMPACT-TWIN蛋白纯化系统得到不含外源多肽标签的纯ParB蛋白，通过EMSA、DnaseI footprinting和SPR等技术，证实了ParB蛋白的DNA结合活性，得到结合DNA的动力学参数；基于二级结构的预测，克隆表达得到了五个突变体蛋白，应用EGS化学交联、HPLC和CD等方法，探讨了ParB蛋白结合DNA的氨基酸和二级结构，证实K70对ParB蛋白维持DNA结合活性是非常重要的。本研究对ParB蛋白的研究结果，丰富了革兰氏阳性菌Ib型主动分配机制的研究内容，推进了原核细胞质粒和染色体分离的研究进展。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
质粒主动分配机制论文参考文献
[1].黄林.质粒主动分配的分子机制[D].武汉大学.2010
[2].蒋丽娜.对Leifsoniaxylisubsp.cynodontispLXC100质粒主动分配机制ParB蛋白的研究[D].曲阜师范大学.2007
[3].蒋丽娜,李晓,李晓波,徐承水.质粒主动分配机制的研究进展[J].科技信息.2007