导读:本文包含了抗体亲和层析论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:重组抗CD52单克隆抗体,亲和层析,试验设计
抗体亲和层析论文文献综述
陈继军,南建军,乔玉玲,张超,宋兰兰[1]（2019）在《重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺的优化》一文中研究指出目的优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺。方法采用试验设计(Design of Experiment,DOE)方法优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺,试验因子为中间清洗液Na Cl浓度(130~870 mmol/L)和洗脱液p H(3.50~4.20),试验响应变量为纯化后样品收率、纯度、残余宿主蛋白含量、外源DNA含量及蛋白A含量,通过DOE构建模型,预测中间清洗液Na Cl浓度和洗脱液p H范围。同时采用DOE方法验证预测工艺参数的稳定性。结果确定中间清洗液Na Cl浓度为400~700 mmol/L,洗脱液p H为3.55~3.75。试验因子在该参数范围内变动时,样品收率均大于80%,纯度均大于97%,外源DNA浓度均低于260 pg/mg,宿主蛋白含量均低于2 300 ng/mg,蛋白A含量均低于6.5 ng/mg。结论成功优化了重组抗CD52单克隆抗体的亲和纯化工艺,且具有较好的稳定性。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年04期）
戴璐[2]（2016）在《抗体亲和层析配体的分子动力学设计及纯化抗体能力的研究》一文中研究指出近年来,抗体药物的发展十分迅速,具有较高的社会效益和经济效益。而抗体药物在生产过程中,下游的纯化所使用的填料作为一种耗材,消耗量很大,而国外抗体亲和填料产品价格较高,大大提高了抗体药物的生产成本。其中市面上最常见的用于抗体纯化的亲和配体为金黄色葡萄球菌蛋白A,它是由5个高度同源的抗体结合结构域组成的,这5个结构域都可以独立与抗体Fc片段及VH3亚类抗体Fab片段结合。其中D结构域与抗体Fab片段结合的复合物晶体已被解析出来,本论文选用该复合物晶体作为模型,目的是通过分子动力学模拟,突变可能影响D结构域与抗体结合的氨基酸残基,增大D结构域与Fab片段的结合能力。一方面是因为Fab段的结合研究较少,还有很大的研究空间;另一方面是因为结合Fab段的配体既可用于Ig G的纯化,也可用于Ig M的纯化,区别于在B结构域基础上开发的结合Fc片段的配体结合Ig M抗体量很低,不适用于Ig M纯化的特点。而采用分子动力学模拟技术的优势在于,可以在实验开始前对可能的结果进行预判,使实验的进行更具有方向性。为达到以上研究目的,本论文按照以下方案实施:1.采用MD模拟,对蛋白A的D结构域和Ig M抗体的复合物晶体进行模拟,找到可能阻碍D结构域与抗体Ig M结合的氨基酸残基位点,并对该位点进行突变改造,得到和抗体亲和力更强的突变体结构。2.因为曾有很多研究结果证明四联体串联配体对抗体的结合能力有明显提高。在本研究中对改造后的突变体和它的四联体进行大肠杆菌重组表达、中试发酵和纯化,得到D结构域和改造后的突变体蛋白,并比较突变体及其四联体和D结构域结合Ig G、Ig M抗体的能力。3.通过表面等离子共振技术(SPR)检测,定量比较D结构域、突变体单体和它的四联体对Ig G和Ig M抗体的结合能力。得到结合速率常数、解离速率常数和平衡解离常数等参数。4.把D结构域、突变体和突变体的四联体3种配体蛋白分别偶联到NHS预活化的琼脂糖基质上,在色谱条件下检验并比较了几种配体对Ig G、Ig M抗体的动态结合载量。通过上述实验,我们得到以下研究成果:1.通过对D结构域和Ig M复合物晶体结构的分析,我们发现D结构域上K46含有的正电荷对Ig M上K2589和R2611有阻碍结合的作用。我们尝试把K46突变为E46,因为E46带有负电荷不与Ig M上的K2589和R2611排斥。对两个结构最小结构体系的能量比较,可以得出结论K46E与Ig M的亲和力要强于D结构域。2.在对D结构域、K46E和K46E突变体3种蛋白的纯化过程中发现,对大肠杆菌细胞破碎后的上清液进行等电点沉淀,沉淀可以在中性条件下复溶,经过这一步骤的蛋白样品更易被镍柱结合。而这几种蛋白配体被镍柱结合后,四联体的洗脱条件比D结构域和K46E突变体2种蛋白温和,在中性含有咪唑的溶液中可以被洗脱,而单体蛋白需要在酸性条件下才能被洗脱。3.SPR的检测结果显示,D结构域和K46E相比,D结构域与Ig M的结合为慢速结合,慢速解离;K46E与Ig M的结合为快速结合,快速解离,亲和力明显增大。这一变化可能有利于K46E作为配体,在纯化抗体过程中增大纯化载量,也可以增大填料使用过程中的线性流速。四联体与Ig G、Ig M的结合速率、解离速率都明显增大,亲和力明显增强。证明了四联体作为配体的结合能力比单体强。4.从3种偶联抗体亲和层析填料纯化Ig G和Ig M的结果,可以观察到,K46E作为配体对Ig G的动态结合载量有明显增加,而对Ig M的动态结合载量没有明显改变,而K46E四联体对Ig G和Ig M的动态结合载量都有明显增加。本论文提供了一种抗体亲和层析填料开发策略,即在原有晶体结构基础上采用分子动力学模拟对配体结构进行改造,之后通过重组表达、发酵、纯化得到原配体蛋白和突变体蛋白。通过SPR技术得到改造前和改造后的配体对抗体的亲和能力的各项指标参数,再通过偶联填料基质检验它们对抗体纯化的能力。相信这一抗体亲和层析填料开发策略也可以用于对蛋白A其它结构域的改造,也有可能用于其它原理层析填料的开发。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-12-01）
李坤,詹少德,吴志华,陈红兵[3]（2016）在《利用自制免疫亲和层析柱纯化抗Ara h 2抗体》一文中研究指出目的 :近年来,抗体已经被广泛应用于体内/外的科学研究中,不仅应用于细胞内/外蛋白的识别与定位,在以抗原抗体特异性反应作为理论基础的免疫亲和分离或检测分析中,高效价的抗体更是一种不可或缺的重要工具。本研究利用自制免疫亲和层析柱(Immunoaffinity Chromatography Columns,IAC)纯化抗Ara h 2的多克隆抗体。方法 :首先利用离子交换层析柱从花生中纯化得到Ara h 2蛋白,以此作为抗原,采用多点皮下注射的方式免疫日本大耳兔,获得高效价血清备用。然后利用纯化的Ara h 2制备免疫亲和层析柱,并对多克隆抗体进行纯化,并与商业购买的已被成功用于纯化多克隆抗体的抗体亲和免疫球蛋白G琼脂糖高速流动树脂(Mab Affinity Protein G Agarose High Flow Resin,MPG)进行比较。结果 :尽管自制免疫亲和层析柱的柱容量只有商购MPG柱的40%左右,但在纯化效率上,自制柱的纯化因子为126.6,高于MPG的77.3。结论 :实验数据表明,与商购MPG柱相比,自制免疫亲和层析柱纯化出来的目标抗体效价较高。此外,与商购MPG柱相比,自制柱的制备成本低廉,可广泛适用于实验室抗体纯化工作。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集》期刊2016-11-04）
陈泉,卓燕玲,许爱娜,咸漠,彭馨莹[4]（2016）在《蛋白A亲和层析法纯化单克隆抗体工艺的优化》一文中研究指出治疗性单克隆抗体药物已成为生物医药领域市场最主要的产品类别。蛋白A亲和层析作为第一步捕获抗体蛋白最为有效的手段仍然在现有单克隆抗体纯化平台中占据主导地位。在本研究中,首先开发了一种基于低p H处理抗体细胞回收液的新型细胞液回收技术,该技术能有效去除宿主相关污染物(非组蛋白宿主杂质蛋白、组蛋白、DNA、蛋白聚合物等),同时保证较高的抗体回收率。通过该技术有效预处理后,蛋白A纯化效率可提高10倍左右,并且有效避免了抗体洗脱液中和后浊度的上升,大大减轻了后续蛋白纯化的压力。同时我们也对酸性处理中各种宿主杂质去除机制进行了研究。然后,预处理的洗脱液再经一步Capto adhere色谱纯化,非组蛋白宿主杂质蛋白降低至5 ppm、DNA小于1 ppb、组蛋白降低至检测限以下、蛋白聚合物小于0.01%。总过程抗体蛋白收率87%。该两步法抗体纯化技术可有效集成至当前主流抗体纯化平台,具有良好的大规模应用价值。(本文来源于《生物工程学报》期刊2016年06期）
何凌冰,李乐,邓义熹,蒙国基,于玉根[5]（2015）在《几种Protein A亲和层析填料纯化重组单克隆抗体效果的比较》一文中研究指出随着表达技术的进步以及发酵技术的优化,细胞发酵上清液中抗体的滴度大幅度提高,必然对下游纯化工艺的处理能力有更高的要求。Protein A亲和层析是分离单克隆抗体的一种标准纯化方法。目前已经有很多种protein A亲和填料,其配体基本上都是大肠杆菌发酵的重组protein A。不同厂家生产的protein A填料有各自不同的基质或键合技术,从而造成填料对抗体亲和力以及对碱耐受性的差异。针对正在研发的WLB303单克隆抗体,比较了6种不同的protein A填料的动态载量,并从洗脱溶液种类和p H两个方面进行单克隆抗体纯化条件的筛选,分析纯化后样品SEC纯度和回收率。综合考虑载量、除杂效果、回收率叁个因素,Mab Select填料是最适合本抗体纯化的,SEC纯度可以达到98%,回收率可以达到100%左右。基于这些数据,对Mab Select填料进行了使用寿命试验,200次循环之后载量仅衰减了5%。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年12期）
丁建坤,彭育才,邓巧春,何丽秀,闫鸿鹏[6]（2014）在《应用于抗体药物捕获的耐碱亲和层析介质性能的比较》一文中研究指出目的比较应用于抗体药物捕获的耐碱的4种蛋白A亲和层析介质和2种小分子亲和层析介质的性能,为单抗纯化工艺的选择提供参考。方法利用两种单抗纯品(mAb1和mAb2)测定4种蛋白A亲和层析介质MabSelectSuRe、POROS MabCaptureA、Absolute High Cap、TOYOPEARL AF-rProtein A-650F和2种小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF、Fabsorbent F1P HF在停留时间分别为4、6、8 min时的动态载量;利用含mAb2的发酵液,从回收率和杂质去除方面比较6种亲和层析介质的纯化效果。结果在5%穿透点,各介质对mAb1和mAb2的动态载量在35~73 g/L之间。小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF纯化mAb2的回收率为89%,其他5种介质纯化mAb2的回收率均≥96%;6种介质纯化mAb2的宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)在2 000 ppm之内,蛋白A残留量在20 ppm之内。结论结合流速、动态载量、回收率和杂质去除效果等指标,可从6种亲和层析介质中挑选适用于抗体类药物下游纯化工艺的耐碱型蛋白A或小分子亲和介质。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2014年05期）
阮乾坤,韩志刚,余军阳,杜伊达,杨大军[7]（2014）在《苯扎氯铵对单克隆抗体亲和层析填料的杀菌效果及其残留量的检测》一文中研究指出通过菌悬液定量杀菌实验和亲和层析凝胶蛋白吸附量测定,最终从众多杀菌剂中筛选出一种既能有效杀死亲和层析介质中感染的细菌,又不影响其蛋白吸附量的理想杀菌剂苯扎氯铵;建立了利用反相离子对高效液相色谱测定层析柱中苯扎氯铵残留量的方法。采用C18色谱柱,流动相为乙腈-0.2 mol/L庚烷磺酸钠,于210 nm紫外波长下检测,检出限为0.000 25 mg/mL,实际样品中苯扎氯铵含量测定结果的相对标准偏差为0.63%,本方法具有良好的灵敏度和精密度。(本文来源于《生物技术进展》期刊2014年02期）
陈正贤,徐婷,梁五生[8]（2012）在《免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体》一文中研究指出报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1%BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒(TMV)杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Western blot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Western blot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。(本文来源于《科技创新导报》期刊2012年29期）
封琳,王桂珍,李阳,李任强[9]（2011）在《免疫亲和层析法快速纯化猪瘟病毒抗体》一文中研究指出目的应用免疫亲和层析技术快速纯化猪瘟病毒抗体。方法将猪瘟病毒接种于猪传代肾细胞PK-15中培养,收获并纯化猪瘟病毒,将其与环氧氯丙烷活化的Sepharose-4B偶联,制备免疫亲和层析柱,从猪瘟病毒高免疫猪血清中纯化猪瘟病毒抗体,分别应用SDS-PAGE和ELISA进行抗体纯度和活性检测。结果自制免疫亲和层析柱的偶联率为0.36 mg抗原/g载体;纯化的猪瘟病毒抗体纯度高,活性强,抗体回收率占猪血清总蛋白的2.45%。结论已建立了成本低、可快速有效纯化猪瘟病毒抗体的免疫亲和层析法。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2011年10期）
杜洪桥,朱蓉,徐葛林,严家新[10]（2011）在《两种亲和层析方法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的比较》一文中研究指出目的比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果。方法制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯度;Western blot分析抗体的特异性。结果兔IgG经蛋白A亲和层析纯化后,ELISA效价约为1∶106,抗体纯度达81.3%;经抗原偶联亲和层析纯化后,ELISA效价可达1∶107,抗体纯度达80.6%。两种方法纯化的抗体特异性均较好。结论抗原偶联亲和层析法更适合纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2011年08期）
抗体亲和层析论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近年来,抗体药物的发展十分迅速,具有较高的社会效益和经济效益。而抗体药物在生产过程中,下游的纯化所使用的填料作为一种耗材,消耗量很大,而国外抗体亲和填料产品价格较高,大大提高了抗体药物的生产成本。其中市面上最常见的用于抗体纯化的亲和配体为金黄色葡萄球菌蛋白A,它是由5个高度同源的抗体结合结构域组成的,这5个结构域都可以独立与抗体Fc片段及VH3亚类抗体Fab片段结合。其中D结构域与抗体Fab片段结合的复合物晶体已被解析出来,本论文选用该复合物晶体作为模型,目的是通过分子动力学模拟,突变可能影响D结构域与抗体结合的氨基酸残基,增大D结构域与Fab片段的结合能力。一方面是因为Fab段的结合研究较少,还有很大的研究空间;另一方面是因为结合Fab段的配体既可用于Ig G的纯化,也可用于Ig M的纯化,区别于在B结构域基础上开发的结合Fc片段的配体结合Ig M抗体量很低,不适用于Ig M纯化的特点。而采用分子动力学模拟技术的优势在于,可以在实验开始前对可能的结果进行预判,使实验的进行更具有方向性。为达到以上研究目的,本论文按照以下方案实施:1.采用MD模拟,对蛋白A的D结构域和Ig M抗体的复合物晶体进行模拟,找到可能阻碍D结构域与抗体Ig M结合的氨基酸残基位点,并对该位点进行突变改造,得到和抗体亲和力更强的突变体结构。2.因为曾有很多研究结果证明四联体串联配体对抗体的结合能力有明显提高。在本研究中对改造后的突变体和它的四联体进行大肠杆菌重组表达、中试发酵和纯化,得到D结构域和改造后的突变体蛋白,并比较突变体及其四联体和D结构域结合Ig G、Ig M抗体的能力。3.通过表面等离子共振技术(SPR)检测,定量比较D结构域、突变体单体和它的四联体对Ig G和Ig M抗体的结合能力。得到结合速率常数、解离速率常数和平衡解离常数等参数。4.把D结构域、突变体和突变体的四联体3种配体蛋白分别偶联到NHS预活化的琼脂糖基质上,在色谱条件下检验并比较了几种配体对Ig G、Ig M抗体的动态结合载量。通过上述实验,我们得到以下研究成果:1.通过对D结构域和Ig M复合物晶体结构的分析,我们发现D结构域上K46含有的正电荷对Ig M上K2589和R2611有阻碍结合的作用。我们尝试把K46突变为E46,因为E46带有负电荷不与Ig M上的K2589和R2611排斥。对两个结构最小结构体系的能量比较,可以得出结论K46E与Ig M的亲和力要强于D结构域。2.在对D结构域、K46E和K46E突变体3种蛋白的纯化过程中发现,对大肠杆菌细胞破碎后的上清液进行等电点沉淀,沉淀可以在中性条件下复溶,经过这一步骤的蛋白样品更易被镍柱结合。而这几种蛋白配体被镍柱结合后,四联体的洗脱条件比D结构域和K46E突变体2种蛋白温和,在中性含有咪唑的溶液中可以被洗脱,而单体蛋白需要在酸性条件下才能被洗脱。3.SPR的检测结果显示,D结构域和K46E相比,D结构域与Ig M的结合为慢速结合,慢速解离;K46E与Ig M的结合为快速结合,快速解离,亲和力明显增大。这一变化可能有利于K46E作为配体,在纯化抗体过程中增大纯化载量,也可以增大填料使用过程中的线性流速。四联体与Ig G、Ig M的结合速率、解离速率都明显增大,亲和力明显增强。证明了四联体作为配体的结合能力比单体强。4.从3种偶联抗体亲和层析填料纯化Ig G和Ig M的结果,可以观察到,K46E作为配体对Ig G的动态结合载量有明显增加,而对Ig M的动态结合载量没有明显改变,而K46E四联体对Ig G和Ig M的动态结合载量都有明显增加。本论文提供了一种抗体亲和层析填料开发策略,即在原有晶体结构基础上采用分子动力学模拟对配体结构进行改造,之后通过重组表达、发酵、纯化得到原配体蛋白和突变体蛋白。通过SPR技术得到改造前和改造后的配体对抗体的亲和能力的各项指标参数,再通过偶联填料基质检验它们对抗体纯化的能力。相信这一抗体亲和层析填料开发策略也可以用于对蛋白A其它结构域的改造,也有可能用于其它原理层析填料的开发。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗体亲和层析论文参考文献
[1].陈继军,南建军,乔玉玲,张超,宋兰兰.重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺的优化[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].戴璐.抗体亲和层析配体的分子动力学设计及纯化抗体能力的研究[D].吉林大学.2016
[3].李坤,詹少德,吴志华,陈红兵.利用自制免疫亲和层析柱纯化抗Arah2抗体[C].第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集.2016
[4].陈泉,卓燕玲,许爱娜,咸漠,彭馨莹.蛋白A亲和层析法纯化单克隆抗体工艺的优化[J].生物工程学报.2016
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[10].杜洪桥,朱蓉,徐葛林,严家新.两种亲和层析方法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的比较[J].中国生物制品学杂志.2011
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