导读:本文包含了重组灵芝免疫调节蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:重组灵芝免疫调节蛋白,抗衰老,抗氧化物质,丙二醛
重组灵芝免疫调节蛋白论文文献综述
刘凯,刘媛媛,孙非,任立群[1]（2018）在《重组灵芝免疫调节蛋白对衰老模型小鼠的抗衰老作用》一文中研究指出目的研究重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)对衰老小鼠的抗衰老作用。方法采用皮下注射D-半乳糖方式复制小鼠衰老模型,用剂量分别为660、990、1 320μg/kg的rLZ-8对衰老皮肤进行涂抹给药,分别测定各组血清及皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及血清褪黑素(MT)水平。结果 D-半乳糖显着降低小鼠血清与皮肤组织中各种抗氧化物质(SOD、CAT、GSH-Px)水平(P<0. 05),提升MDA水平(P<0. 05),降低血清MT水平(P<0. 05);而高剂量rLZ-8可显着升高上述各种抗氧化物质及MT水平(P<0. 05),降低MDA水平(P<0. 05)。结论 r LZ-8可通过增强衰老小鼠的抗氧化作用延缓其衰老。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年22期）
曲卉馨[2]（2017）在《重组灵芝免疫调节蛋白冻干粉针剂的研究》一文中研究指出蛋白药物开发过程中的问题之一就是蛋白质分子的不稳定性,因此开发稳定性好、有效期长、适于企业生产的药物剂型尤为重要。目前临床上通常使用水针剂和冻干粉针剂两种剂型的蛋白质药物,水针剂生产和使用方便,不需要使用前复溶,但蛋白质稳定性不好,需要低温保存,冻干粉剂型蛋白稳定性好,运输存储方便,使用前需要复溶。真菌免疫调节蛋白(Fungal immunomodulatory protein,Fip)是从灵芝、蘑菇等高等担子菌中提取的一类小分子蛋白质。其中重组灵芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma Lucidum Immunoregulatory Protein,rLZ-8)是从灵芝中提取的一种真菌免疫调节蛋白,具有血细胞凝集、促进淋巴细胞的增殖及各种细胞因子的分泌、抗肿瘤、升高白细胞等生物学活性,近年来引起了科研人员的广泛关注,具有重要的研究意义。本课题组应用毕赤酵母菌株重组表达了rLZ-8,但发现rLZ-8在水溶剂中稳定性不佳,且液体状态使得存储和运输较为麻烦,不适合制备成水针剂使用,因此研究rLZ-8的冻干粉针剂至关重要。基于以上问题,本论文首先构建rLZ-8表达菌株,优化其发酵条件及纯化工艺,获得了符合要求的目的蛋白,随后对rLZ-8冻干粉针剂的处方筛选及冻干工艺进行了研究,主要包括以下叁部分内容:一、rLZ-8表达菌株的构建、表达及鉴定基于毕赤酵母的密码子偏好性,重新设计编码了rLZ-8的基因序列,构建重组质粒p GAPZαA-rLZ-8,线性化重组质粒并电转化整合至X33酵母菌株的基因组中,对酵母阳性转化子进行鉴定之后摇瓶小量表达rLZ-8,检测不同转化子蛋白的表达,筛选出表达量最高的rLZ-8菌株。二、rLZ-8发酵工艺的建立及优化使用鉴定后蛋白表达量最高的菌株,在中试规模上进行rLZ-8的最佳发酵工艺条件摸索与纯化工作。将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后,接种到7.5 L的发酵罐中培养,通过调节发酵液的溶氧值(Dissolved Oxygen,DO)及生物量动态监测酵母菌的生长状态,ELISA检测发酵液中rLZ-8表达量。确定7.5 L发酵规模工艺参数:培养温度为28℃,培养时间为60 h,p H值为6.0,空气流量为2 v/v/m,溶氧控制为25%,搅拌转速控制为800 rpm。连续进行3批次7.5 L规模发酵稳定性实验,结果表明采用优化后的发酵条件获得的rLZ-8占全菌分泌产物的11.75%,蛋白产量达到528.09 mg/L。发酵获得的rLZ-8经分离纯化后纯度达到99.98%。叁、rLZ-8冻干粉针剂的处方筛选及冻干工艺研究根据rLZ-8的理化性质及前期调研,选择磷酸盐缓冲体系(p H7.0)作为rLZ-8原液基本缓冲体系,辅料选择海藻糖、甘露醇、乳糖作为稳定剂,吐温-80、泊洛沙姆-188作为表面活性剂,进行rLZ-8辅料影响因素实验。结果显示,在高温条件下,各个辅料对rLZ-8含量、纯度、活性几乎无影响,均可用于后续研究。实验设计了9个处方组合进行活性、不溶性微粒、纯度的放样考察,筛选出rLZ-8适用的冻干粉处方:海藻糖50 mg、甘露醇50 mg、rLZ-8 10 mg。处方确定后,选取不同的温度、真空度、冻干时间,以性状和水分为考察指标分别进行单因素实验,对rLZ-8冻干工艺进行摸索。确定其适用冻干工艺:升华干燥条件为温度-29℃,真空度250 m Torr,干燥时间90 h,解析干燥条件为温度40℃,真空度250 m Torr,干燥时间30 h。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-06-01）
雷欣华[3]（2016）在《重组灵芝免疫调节蛋白通过动员造血干细胞治疗小鼠中性粒细胞减少症的研究》一文中研究指出作为人体外周循环内最丰富的白细胞类群,中性粒细胞在先天性免疫应答中起基础性作用,处于机体抵御微生物病原体的第一线。由于中性粒细胞广泛参与各类组织损伤,加上其本身具有极强的组织毒害作用,使得中性粒细胞的生成在生物体内是一个受到严格调控的过程。中性粒细胞减少症是指血液内中性粒细胞数目处于异常的低浓度,越低的嗜中性粒细胞计数意味着越大的感染几率,所有接受化疗药物治疗的病人均面临发展为化疗引起的中性粒细胞减少症的风险。临床使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)刺激功能性中性粒细胞的生成及成熟,用于预防及治疗中性粒细胞减少症,血液细胞在骨髓内通过造血作用生成,依赖于造血系统内唯一具有自我更新能力又可分化为所有功能血细胞的造血干细胞。在分化过程中,造血干细胞的子代经历多能细胞和谱系细胞等多个中间阶段才能达到成熟。G-CSF可刺激造血干细胞和骨髓基质细胞之间的相互作用,快速动员大量干／祖细胞进入外周循环。G-CSF诱导基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达下降,并促进趋化因子受体4(CXCR4)在骨髓(BM)内的表达,SDF-1的下调及CXCR4的上调会引起成熟中性粒细胞从骨髓到外周血的释放。重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)作为具有免疫调节功能的蛋白质,也显示出抗肿瘤的效应,其在小鼠白细胞减少症的治疗中也具有提高外周血白细胞数目的作用。本研究发现,rLZ-8可刺激环磷酰胺诱导的中性粒细胞减少症小鼠外周血及骨髓内中性粒细胞(CDllb+Ly6G+)的增殖,同时刺激骨髓细胞表面CXCR4的表达及抑制SDF-1的分泌,进而促进成熟的中性粒细胞从骨髓到外周血的释放,同时追溯到了蛋白的作用源头是骨髓内的造血干细胞(HSC),rLZ-8可促进HSC向粒细胞系祖细胞分化,实现对中性粒细胞减少症的治疗。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-06-01）
侯郑丹[4]（2016）在《重组灵芝免疫调节蛋白治疗皮肤衰老的实验研究》一文中研究指出衰老是生物在生命的整个过程中机体的形态、结构、功能逐渐衰退的一种综合性现象,而皮肤衰老是其中一个不可或缺的重要组成部分。皮肤衰老不但有损于美容,而且与许多皮肤疾病,如脂溢性角化症、日光性角化症、基底细胞癌、鳞状细胞癌的发生也有着密不可分的病理学关系。近年来的研究发现,中草药的有效成分可以促进人体内成纤维细胞胶原和弹性蛋白的合成,达到延缓细胞的衰老的作用,其中灵芝由于其具有免疫调节、清除自由基、平衡代谢等功能,加之其药性温和而越来越受到关注。灵芝免疫调节蛋白(LZ-8)是从灵芝菌丝体中提取出的一种新的免疫调节蛋白,结构小巧,成分单一,但制备困难,产量较低。因此本课题组选用了重组灵芝免疫调节蛋白即r LZ-8,拟进行r LZ-8对抗皮肤衰老方面的研究。本研究首先用D-半乳糖建造衰老大鼠模型。而后利用r LZ-8对衰老大鼠进行腹腔注射治疗,进而观察各组别大鼠的体重、皮肤组织含水量、羟脯氨酸(HYP)、透明质酸(HA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脂褐素(LF)等的变化,从而探讨r LZ-8的抗皮肤衰老作用。实验结果表明:r LZ-8治疗组中大鼠皮肤组织的含水量显着高于衰老模型组(P<0.05);r LZ-8高、低剂量治疗组大鼠皮肤组织中HYP及HA含量均显着高于衰老模型组(P<0.05),提示r LZ-8可以阻止大鼠皮肤中水分的散失同时还可以显着提高其皮肤组织中透明质酸的含量,促进皮肤胶原蛋白的合成,从而改善皮肤的弹性。同时经过r LZ-8治疗后,各组大鼠皮肤组织及血浆中的SOD含量均显着高于衰老模型组(P<0.05),而MDA、LF的含量均显着低于衰老模型组(P<0.05),由此表明r LZ-8可以提高大鼠体内超氧化物歧化酶的水平,降低其体内过氧化脂质代谢产物丙二醛的含量达到抗氧化的目的,还可以降低大鼠体内脂褐素水平,进而减缓皮肤衰老。大鼠组织学观察结果显示,r LZ-8治疗组与模型组比较,大鼠真皮层明显增厚,胶原纤维明显增多,光泽度增加,则说明r LZ-8可改善皮肤衰老的程度。综上所述,r LZ-8可以通过增加皮肤弹性,改善体内过氧化程度从而达到有效拮抗D-半乳糖所致的皮肤衰老的作用。本实验数据将为r LZ-8在对抗皮肤衰老方面的进一步研究和应用提供科学的实验依据。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-05-01）
刘文杰[5]（2016）在《重组灵芝免疫调节蛋白拮抗豚鼠庆大霉素耳毒性的实验研究》一文中研究指出研究背景及目的意义:庆大霉素对耳蜗毛细胞的损伤是不可逆的,其明显的耳毒性限制了其在临床上的应用。本研究通过观察r LZ-8拮抗庆大霉素耳毒性在耳蜗功能学及形态学上的表现,旨在探究一种新的药物—r LZ-8对庆大霉素造成的耳毒性是否具有保护作用,为临床上防治庆大霉素耳毒性提供理论依据。研究材料和方法:选取正常健康纯白红目豚鼠36只(72只耳),随机分为6组,每组6只:Ⅰ空白对照组:第1至15天,每日8:00和16:00腹腔注射生理盐水各2ml;从第2天至第15天,每日8:30肌内注射生理盐水,2.5mg/Kg;Ⅱ模型组(GM):第1至15天,每日8:00和16:00腹腔注射生理盐水,各2ml;从第2天至第15天,每日8:30肌内注射GM,100 mg/kg;Ⅲ阳性药组(GM+EGb):第1至15天,每日8:00和16:00腹腔注射EGb,各7 mg/kg;从第2天至第15天,每日8:30肌内注射GM,100 mg/kg;Ⅳr LZ-8低剂量组(GM+r LZ-8,28μg/kg):第1至15天,每日8:00和16:00腹腔注射r LZ-8,各28μg/kg;从第2天至第15天,每日8:30肌内注射GM,100mg/kg;Ⅴr LZ-8中剂量组(GM+r LZ-8,56μg/kg):第1至15天,每日8:00和16:00腹腔注射r LZ-8,各56 ug/kg;从第2天至第15天,每日8:30肌内注射GM,100mg/kg;Ⅵr LZ-8高剂量组(GM+r LZ-8,112μg/kg):第1至15天,每日8:00和16:00腹腔注射r LZ-8,各112μg/kg;从第2天至第15天,每日8:30肌内注射GM,100 mg/kg。各组豚鼠分别于用药前一天及停药后第一天进行ABR及DPOAE检测:比较用药前后ABR阈值及Ⅲ波潜伏期变化,比较在L1/L2=65/55d B SPL时f0分别为1、2、4、6 k Hz时DPOAE的幅值变化。ABR及DPOAE检测完成后,麻醉处死豚鼠,各组一半耳蜗进行耳蜗铺片,另一半耳蜗进行扫描电镜观察,比较用药前后耳蜗毛细胞形态及数量的变化。结果:1、模型组用药前后体重有显着差异(P<0.01);r LZ-8低剂量组用药前后体重略有下降,与阳性药组(EGb)无显着差异(P>0.01);2、模型组用药后ABR阈值较用药前升高38.50±3.94 d B n HL,Ⅲ波潜伏期延长,用药前后有显着差异(P<0.01);r LZ-8低剂量组ABR阈值及Ⅲ波潜伏期与空白对照组比较无显着差异(P>0.01);阳性药组用药前后ABR阈值有显着差异(P<0.01);阳性药组Ⅲ波潜伏期与r LZ-8低剂量组比较无统计学意义(P>0.05);3、用药后L1/L2为65/55 d B SPL时,模型组DPOAE幅值在1、2、4、6k HZ处阈值显着降低,与r LZ-8低剂量组比较有显着差异(P<0.01);4、耳蜗铺片、扫描电镜结果显示:模型组底回外毛细胞损伤严重,大量外毛细胞缺失、排列不齐,纤毛融合、倒伏、散乱、缺失或部分缺失,由底回至顶回损伤逐渐减轻,外毛细胞存活率仅30%左右;r LZ-8低剂量组3组外毛细胞排列整齐,纤毛形态规则,仅有少量外毛细胞缺失,其外毛细胞存活率与空白对照组无显着差异,。结论:1、GM能够提高豚鼠ABR阈值,使高频听阈上升;破坏外毛细胞形态,损伤由底回至顶回逐渐减轻。2、低剂量组r LZ-8能够减轻GM的全身毒性,拮抗GM对耳蜗毛细胞的损伤,保护毛细胞形态完整性及听力。3、r LZ-8的作用效果与剂量有关。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-05-01）
刘凯[6]（2016）在《重组灵芝免疫调节蛋白抗衰老与美白作用实验研究》一文中研究指出目的:研究重组灵芝免疫调节蛋白对D-半乳糖诱导的衰老小鼠的抗衰老及其美白作用。方法:(1)重组灵芝免疫调节蛋白抗衰老作用实验研究?体内实验除正常对照组外,其余4组全部采用D-半乳糖诱导小鼠的衰老模型。将健康昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、模型对照组、rLZ-8低、中、高剂量组(剂量由低到高分别为660,990及1320ug/kg体重)。连续给予受试药物(小鼠背部去毛后涂抹给药)8周后,麻醉取血与皮肤组织,用于血清学与组织形态学等指标检测。?体外实验体外培养人皮肤成纤维细胞,将细胞分为4组:正常对照组、rLZ-8低、中、高剂量组(0.5,1及2ug/ml),分别于24h,48h,72h收集6孔板中细胞培养上清以检测胶原、HA及HYP含量。(2)重组灵芝免疫调节蛋白美白作用实验研究体外培养黑色素瘤细胞,均匀接种于6孔培养板中,细胞接种24h后,吸去培养液,加入无血清培养液。次日,加入受试药物rLZ-8使终浓度为8,16,24,32,48ug/ml,并分别于24h,36h,48h及60h后收集细胞及培养上清,检测TYR与LDH活性。同时采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定黑色素瘤细胞增殖抑制率。结果:(1)涂抹给药后,小鼠较造模后毛色变亮,行动较为敏捷,外观方面出现一定程度改观。(2)给予受试药物后,各给药组小鼠皮肤含水量均有不同程度提高。(3)HE染色结果显示,rLZ-8各剂量组小鼠皮肤表皮增厚,真皮层纤维增多增粗、皮肤附属器数目亦有所增加。(4)免疫组织化学染色结果显示,各剂量组I型、III型胶原蛋白、波形蛋白含量均有提高。(5)血清学与皮肤组织匀浆结果显示,各给药组与模型对照组相比,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)、褪黑素(Melatonin,MT)均有明显上调(P<0.05),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量降低(P<0.05)。(6)体外实验结果显示,与空白对照组相比,各给药组人皮肤成纤维细胞I型、III型胶原蛋白、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)及HYP水平均有上调(P<0.05)。(7)rLZ-8可抑制黑色素瘤细胞增殖速率,同时降低酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)、乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)活性。结论:1.rLZ-8可有效改善衰老小鼠的外观特征及皮肤组织的病理形态,提高皮肤组织中I型、III型胶原蛋白、波形蛋白含量,上调成纤维细胞分泌I型、III型胶原蛋白、HYP及HA,体内体外实验共同证实重组灵芝免疫调节蛋白具有抗衰老作用。2.rLZ-8可提高抗氧化物酶(SOD、CAT及GSH-Px)活性、上调HYP、MT水平,下调脂质过氧化产物MDA水平,增强衰老小鼠机体抗氧化能力,发挥其延缓机体衰老的作用。3.rLZ-8可以抑制黑色素瘤细胞增殖降低黑色素合成过程中限速酶TYR的活性,破坏黑色素瘤细胞,以达到美白肌肤的作用。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-05-01）
徐畅[7]（2016）在《重组灵芝免疫调节蛋白（rLZ-8）临床前药代动力学初步研究》一文中研究指出Ling Zhi-8(LZ-8)是一种从赤灵芝(Ganoderma lucidium)中提取出的真菌免疫调节蛋白。国内外的研究报道显示通过基因重组技术生产的r LZ-8(重组灵芝免疫调节蛋白)与天然LZ-8具有一致的抑制过敏性反应、促淋巴细胞增生等生物学活性,具有潜在药用价值,但对r LZ-8药代动力学方面的研究未见报道。本论文初步研究了r LZ-8在大鼠体内的药代动力学。采用Iodogen法对r LZ-8样品进行I~(125)同位素标记,并结合TCA沉淀法研究r LZ-8随时间进程在大鼠体内的动态变化规律,阐明药代动力学特征,以及在大鼠体内的组织分布和排泄规律,为r LZ-8由临床前研究过渡到临床研究以及为将来的新药审批工作提供必要的依据。经SHPLC测定,I~(125)标记后r LZ-8的平均放化纯度为97.44%,符合示踪要求。I~(125)-r LZ-8生物学活性鉴定结果显示Iodogen法标记对r LZ-8的生物学活性影响不大,符合药代动力学实验要求。本论文设计了静脉和皮下注射两种给药途径单次给药,每种给药途径分别测定血清药物浓度和血凝块药物浓度。将38只SD大鼠分8组用于动物实验,每组均4只,雌雄各半;组1和组2为药代动力学实验组,给药剂量均为500μg/kg;组3到组6分别为6 h、12 h、24 h和48 h组织分布实验组,组7和组8分别为粪尿排泄和胆汁排泄实验组,给药剂量均为500μg/kg,剩6只用于空白基质研究。实验结果显示:(1)I~(125)-r LZ-8单次静脉注射后,通过测定血清中的药物浓度计算得到的主要药代动力学参数Cmax、AUC0-t和T1/2分别为5487.58 ng/m L,12884.55 h*ng/m L和34.62 h;通过测定血凝块中的药物浓度计算得到的药代动力学参数Cmax、AUC0-t和T1/2分别为3200.60 ng/m L,7647.83 h*ng/m L和21.67 h。静脉给药后血清和血凝块中的药物暴露比为1:0.59。(2)I~(125)-r LZ-8经皮下给药后,通过测定血清中的药物浓度计算得到的药代动力学参数Cmax和AUC0-t分别为128.20 ng/m L和5638.81 h*ng/m L;通过测定血凝块中的药物浓度计算得到的药代动力学参数Cmax和AUC0-t分别为53.46ng/m L和3040.20 h*ng/m L。皮下给药后血清和血凝块中的药物暴露比为1:0.54。皮下注射r LZ-8在大鼠体内生物利用度(血清和血凝块的总和)为42.27%。(3)I~(125)-r LZ-8经皮下给药后,吸收缓慢,主要分布在肺、脾、淋巴结等组织/器官中,而脂肪、脑、肌肉及骨髓分布较少。(4)I~(125)-r LZ-8单次静脉注射12天后尿、粪分别排出注入放射性物质的74.27%±5.73%,2.52%±0.42%。尿、粪合计排出注入放射性物质的76.85%±5.73%。大鼠静脉注射I~(125)-r LZ-8后8 h内胆汁排泄放射性占注入放射性物质的2.00%±0.64%。因此,大鼠静脉注射I~(125)-r LZ-8后放射性代谢物主要经尿排泄,肾脏是其主要排泄器官。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-04-01）
顾博思[8]（2015）在《重组灵芝免疫调节蛋白对神经性耳聋模型豚鼠的保护作用及机制研究》一文中研究指出神经性耳聋也称感音神经性耳聋（sensorineural hearing loss，SNHL)，是常见的耳鼻喉科疾病之一，指内耳耳蜗螺旋器的毛细胞或听神经发生病变，或大脑的听觉中枢对感受声音和传导神经冲动出现障碍而引起的听力下降或者全聋的一种听力障碍。在其病发机制的研究领域，近年来对于其发病机制的研究热点主要集中在氧化应激损伤以及神经炎症反应。当SNHL出现以后，机体内自由基增加从而造成氧化应激损坏，同时促炎因子以及神经调节因子也有相应变化。已有研究证明，一些抗氧化类药物以及调节促炎因子水平的药物能够对庆大霉素所致的SNHL产生保护。因此，设计本论文首次探索rLZ-8对SNHL是否具有保护作用，并探索了rLZ-8对SNHL提供保护作用的可能机制。灵芝，英文名Ganoderma lucidum，在日本被称为Reishi，Munnertake，Sachitake等，在韩国亦被称为Youngzhi。属担子菌，有“仙草”之称，是我国传统的珍贵中草药，被《神农本草经》列为滋补、固本的上品。本实验中使用的重组灵芝免疫调节蛋白（Recombinant Ganoderma lucidum immunoregulatory protein，rLZ-8）是利用基因工程的方法，对灵芝免疫调节蛋白(Fungal Immunomodulatory Protein ofGanoderma Iucidum,LZ-8)的基因进行重新编码，使其在毕赤酵母中分泌并表达，再经中试发酵以及纯化，最终得到的一种高纯度，高稳定性的蛋白。rLZ-8在免疫活性方面，依然继承LZ-8的生物活性，具有促进外周淋巴细胞增生，抑制过敏、排斥反应，促进粘附因子的分泌以及抗肿瘤等活性。本实验选取白毛红目豚鼠42只，随机分为7组：生理盐水组、模型组、金纳多组、葛根素组、rLZ-8低剂量组、rLZ-8中剂量组、rLZ-8高剂量组。豚鼠肌肉注射庆大霉素（Gentamicin，GM，100mg/kg/day），连续给药14天以建立SNHL模型。GM首次注射前一天，生理盐水组和模型组腹腔注射生理盐水，金纳多组按照14mg/kg体重腹腔注射金纳多，葛根素组按照10mg/kg体重腹腔注射葛根素，rLZ-8低、中、高剂量组分别按照28μg/kg体重、56μg/kg体重、112μg/kg体重腹腔注射rLZ-8，每天给药一次，连续给药15天，一直持续到GM末次给药。给药期间，每天对豚鼠体重进行测量并记录，并且对各组豚鼠进行耳动反射实验。GM末次给药后，对各组豚鼠进行听信脑干反应（ABR）检测。ABR检测结束之后，处死豚鼠，取耳蜗组织石蜡切片进行HE染色；使用生化试剂盒检测豚鼠耳蜗组织过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、一氧化氮合酶（iNOS）活力；使用ELISA法检测豚鼠血清白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）。行为学实验结果表明，与模型组相比，rLZ-8能够减少GM对豚鼠听力的损害，改善豚鼠外耳廓状态；ABR测定结果表明，rLZ-8能够减少GM造成的豚鼠阈值的增加；HE染色结果表明，rLZ-8能够对柯蒂氏器（organ of Corti）起到保护作用；生化检测结果表明，rLZ-8能够显着增强豚鼠耳蜗组织CAT、SOD、GSH-Px、iNOS活力，降低MDA含量；ELISA实验结果表明，rLZ-8能够降低豚鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量。通过上述研究结果，可以得到以下结论：rLZ-8对GM所致的SNHL具有一定的保护作用，其作用机制可能通过对氧化应激以及促炎症因子的调节而实现。提示rLZ-8在临床上可以成为一种潜在的防治SNHL的药物。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-05-01）
刘大维[9]（2015）在《重组灵芝免疫调节蛋白对小鼠肝癌相关成纤维细胞的生物学影响》一文中研究指出研究表明，肿瘤的发生发展并非由肿瘤细胞单方面决定的，而是由肿瘤细胞和间质两者相互作用所构成的肿瘤-宿主界面微环境的平衡状态所决定的。癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated-fibro blasts，CAFs）是肿瘤-宿主界面微环境中最重要的宿主细胞，它通过分泌多种生物信息与肿瘤微环境中的各组成成分发生交互作用，从而影响肿瘤的发生发展。癌相关成纤维细胞又称为肿瘤相关成纤维细胞（tumor-associated fibroblas，TAFs）、肿瘤间质成纤维细胞（tumor stroma fibroblasts）等，是指肿瘤间质中的成纤维细胞群。与正常成纤维细胞相比，CAFs处于活化状态，在形态结构、生长方式、增殖活性、运动能力以及分泌功能等方面均发生了显着变化，从而对肿瘤微环境内的肿瘤细胞、周围基质、其他宿主细胞产生重要影响。大量实验研究表明，CAFs在肿瘤发生的过程中起着至关重要的作用，抑制CAFs可以间接地抑制肿瘤组织的发生。重组灵芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma lucidum immunoregulatoryprotein)属于真菌免疫调节蛋白(Fips)家族，是从赤灵芝菌丝体中提取的，经重组表达的一种蛋白质。以往研究表明，rLZ-8具有抑制小鼠系统性过敏反应、刺激人类外周血淋巴细胞增殖和IL-2、TNF-α和IFN-β等细胞因子产生的免疫学活性。研究报道，rLZ-8对H22肝癌细胞和肝癌细胞株S180等均有明显抑制作用，但针对CAFs的杀伤作用及作用机制的研究尚无报道。本课题将研究rLZ-8对H22小鼠肝癌细胞动物模型中CAFs体内、体外的影响，探讨rLZ-8对癌相关成纤维细胞的抑制作用。实验方法体内实验：应用H22小鼠肝癌细胞接种小鼠腹腔7天后，取其腹水。以适量无菌生理盐水稀释成瘤细胞悬液，细胞计数为107ml-1，小鼠右腋窝皮下接种0.2ml。接种24h后小鼠分组：模型组、rLZ-8低剂量治疗组（0.5mg kg-1）、rLZ-8中剂量治疗组（1mg kg-1）、rLZ-8高剂量治疗组（2mg kg-1）。每组10只。模型组给予生理盐水0.2ml只-1d-1，腹腔注射；rLZ-8治疗组分别给予相应剂量腹腔注射，0.2ml只-1d-1。连续10天。在停药次日，处死小鼠，解剖取出瘤块。分离提取各组肿瘤组织中CAFs。体外实验：分离提取上述模型组肿瘤组织中CAFs，根据培养基中所含rLZ-8浓度分为对照组（0μg/ml）、低剂量组（2μg/ml）、中剂量组（5μg/ml）和高剂量组（10μg/ml）。rLZ-8作用时间分别为24h、48h、72h。MTT方法检测体外实验各组CAFs细胞增殖活性，Western-Blot和RT-PCR方法检测α-SMA和Vimentin蛋白和基因表达。通过观察rLZ-8对CAFs的抑制作用，为rLZ-8抑制CAFs的生物活性从而降低肿瘤细胞的生长侵袭等方面提供科学依据和线索。实验结果：体内实验：1.应用小鼠H22肝癌细胞建立小鼠肝癌模型。成功分离并鉴定小鼠CAFs；2.与对照组相比，rLZ-8低、中、高叁个剂量组中CAFs α-SMA和Vimentin蛋白表达量明显降低（P<0.01）。体外实验：1.细胞增殖活力检测：rLZ-8作用24h、48h和72h，与对照组比较，rLZ-8低、中、高剂量组CAFS增殖活性均显着降低（P<0.01）；其细胞相对增殖率也显着降低（P<0.01）；2.Western-Blot方法检测CAFs中α-SMA和Vimentin蛋白的表达，发现rLZ-8低剂量组中α-SMA表达量与对照组相比无显着性差异，中、高两个剂量组α-SMA无表达；Vimentin表达在rLZ-8低剂量组和中剂量组中与对照组相比无明显差异，但在高剂量组中表达显着性降低（P<0.01）；3.Real-time PCR检测CAFs中α-SMA和Vimentin基因表达。结果显示，rLZ-8中、高两个剂量组中α-SMA基因表达量与对照组相比均显着降低（P<0.01)；rLZ-8低、中两个剂量组Vimentin基因表达量与对照组相比显着性增加，高剂量组中Vimentin基因表达量显着性降低（P<0.01)。本研究的创新之处在于首次从小鼠H22肝癌模型中提取CAFs，并首次应用rLZ-8进行体内和体外的干预实验。结果发现rLZ-8可明显抑制CAFs的细胞增殖活力，并明显降低CAFs中标志物α-SMA和Vimentin的蛋白和基因表达。本研究将为肿瘤发生和逆转机制以及从肿瘤间质角度进行肿瘤的治疗提供新的科学线索和科学依据。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-04-01）
阎明慧[10]（2015）在《重组灵芝免疫调节蛋白进入肝癌细胞内吞机制的研究》一文中研究指出肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，且近年来其发病率和死亡率均呈上升趋势，由于一直缺少有效的药物和治疗手段，临床中很难取得满意的治疗效果。因此，肝癌特效药物的研究将可极大提高肝癌患者的生存期和生存质量，这也是国家多次五年计划中治疗重大疾病新药创制的重点方向。灵芝免疫调节蛋白（Ling Zhi-8，LZ-8）是一种从赤灵芝（Ganodermalucidium）菌丝体中提取出的真菌免疫调节蛋白。在抗肿瘤研究中，我们发现rLZ-8具有大量进入并杀伤肿瘤细胞的功能，同时对正常组织细胞却无杀伤作用。论文作者所在课题组已有大量研究表明进入肿瘤细胞是rLZ-8执行抗肿瘤作用的先决条件，因此，明确rLZ-8的入胞机制在rLZ-8的抗肿瘤研究中至关重要。本论文根据天然LZ-8的氨基酸序列及毕赤酵母的密码子偏好性，将LZ-8基因进行了密码子优化，合成目的基因并构建pGAPZα A-rLZ-8重组质粒，通过电转化法将目的基因整合到组成型表达载体X-33酵母基因组中。经Zeocin抗性培养基和PCR、Western Blot鉴定筛选出成功整合并表达rLZ-8的酵母工程菌，表达产物经分离纯化获得了高纯度的rLZ-8，经蛋白质N端测序证明与天然LZ-8一致。在后续研究中，我们通过观察荧光标记的rLZ-8在肝癌细胞HepG2中的定位来进行rLZ-8内吞机制的初步研究。通过选用针对不同细胞内吞途径的化学抑制剂，研究和分析了rLZ-8入胞依赖的内吞途径，并通过siRNA干扰第一轮筛选到的通路中关键基因进行了表达抑制，对细胞内吞的机制进行了进一步确证。主要研究结果如下：1、rLZ-8进入HepG2细胞不依赖网格蛋白介导的内吞途径网格蛋白抑制剂氯丙嗪可阻断网格蛋白介导的内吞途径，但并不影响rLZ-8进入HepG2细胞，提示rLZ-8进入细胞不通过网格蛋白介导的内吞途径。2、rLZ-8进入HepG2细胞不依赖小窝/脂筏介导的内吞途径小窝/脂筏依赖内吞途径抑制剂，即胆固醇抽提剂制菌霉素和孕酮，二者可以去除细胞膜上胆固醇及破坏小窝结构的完整性来抑制小窝/脂筏介导的内吞。实验发现，上述两种抑制剂对rLZ-8的入胞过程均无影响，提示rLZ-8的入胞机制与小窝/脂筏介导的内吞途径无关。3、rLZ-8进入HepG2细胞与Src激酶有关研究发现，经Src激酶特异性抑制剂Genistein处理后，HepG2细胞对rLZ-8的内吞作用受到明显抑制，提示rLZ-8入胞机制与Src激酶有关。为了进一步确证，我们使用siRNA特异性抑制了c-Src蛋白的表达，结果表明rLZ-8的内吞作用受到了显着抑制，证明了rLZ-8的入胞跟Src激酶有关。4、rLZ-8进入HepG2细胞与Src-PI3K信号通路有关系研究发现，经PI3K特异性抑制剂Wortmannin处理后，HepG2细胞对rLZ-8的内吞作用部分受到抑制，且c-Src是PI3K的上游分子，提示rLZ-8入胞机制可能与Src-PI3K通路有关系。综上所述，本文利用组成型毕赤酵母表达系统成功表达了rLZ-8，并得到了高纯度和具有稳定生物活性的rLZ-8。在rLZ-8内吞机制的研究中，发现rLZ-8进入HepG2细胞与经典的网格蛋白和小窝/脂筏依赖内吞途径无关，与Src激酶和Src-PI3K通路有关，具体的调控机制有待进一步研究确认。对rLZ-8进入HepG2细胞中所涉及的途径和调控机制的进行初步筛选，有利于深入研究和阐明rLZ-8的抗肿瘤机理，并为其作为抗肝癌新药的研发奠定了理论基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-04-01）
重组灵芝免疫调节蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蛋白药物开发过程中的问题之一就是蛋白质分子的不稳定性,因此开发稳定性好、有效期长、适于企业生产的药物剂型尤为重要。目前临床上通常使用水针剂和冻干粉针剂两种剂型的蛋白质药物,水针剂生产和使用方便,不需要使用前复溶,但蛋白质稳定性不好,需要低温保存,冻干粉剂型蛋白稳定性好,运输存储方便,使用前需要复溶。真菌免疫调节蛋白(Fungal immunomodulatory protein,Fip)是从灵芝、蘑菇等高等担子菌中提取的一类小分子蛋白质。其中重组灵芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma Lucidum Immunoregulatory Protein,rLZ-8)是从灵芝中提取的一种真菌免疫调节蛋白,具有血细胞凝集、促进淋巴细胞的增殖及各种细胞因子的分泌、抗肿瘤、升高白细胞等生物学活性,近年来引起了科研人员的广泛关注,具有重要的研究意义。本课题组应用毕赤酵母菌株重组表达了rLZ-8,但发现rLZ-8在水溶剂中稳定性不佳,且液体状态使得存储和运输较为麻烦,不适合制备成水针剂使用,因此研究rLZ-8的冻干粉针剂至关重要。基于以上问题,本论文首先构建rLZ-8表达菌株,优化其发酵条件及纯化工艺,获得了符合要求的目的蛋白,随后对rLZ-8冻干粉针剂的处方筛选及冻干工艺进行了研究,主要包括以下叁部分内容:一、rLZ-8表达菌株的构建、表达及鉴定基于毕赤酵母的密码子偏好性,重新设计编码了rLZ-8的基因序列,构建重组质粒p GAPZαA-rLZ-8,线性化重组质粒并电转化整合至X33酵母菌株的基因组中,对酵母阳性转化子进行鉴定之后摇瓶小量表达rLZ-8,检测不同转化子蛋白的表达,筛选出表达量最高的rLZ-8菌株。二、rLZ-8发酵工艺的建立及优化使用鉴定后蛋白表达量最高的菌株,在中试规模上进行rLZ-8的最佳发酵工艺条件摸索与纯化工作。将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后,接种到7.5 L的发酵罐中培养,通过调节发酵液的溶氧值(Dissolved Oxygen,DO)及生物量动态监测酵母菌的生长状态,ELISA检测发酵液中rLZ-8表达量。确定7.5 L发酵规模工艺参数:培养温度为28℃,培养时间为60 h,p H值为6.0,空气流量为2 v/v/m,溶氧控制为25%,搅拌转速控制为800 rpm。连续进行3批次7.5 L规模发酵稳定性实验,结果表明采用优化后的发酵条件获得的rLZ-8占全菌分泌产物的11.75%,蛋白产量达到528.09 mg/L。发酵获得的rLZ-8经分离纯化后纯度达到99.98%。叁、rLZ-8冻干粉针剂的处方筛选及冻干工艺研究根据rLZ-8的理化性质及前期调研,选择磷酸盐缓冲体系(p H7.0)作为rLZ-8原液基本缓冲体系,辅料选择海藻糖、甘露醇、乳糖作为稳定剂,吐温-80、泊洛沙姆-188作为表面活性剂,进行rLZ-8辅料影响因素实验。结果显示,在高温条件下,各个辅料对rLZ-8含量、纯度、活性几乎无影响,均可用于后续研究。实验设计了9个处方组合进行活性、不溶性微粒、纯度的放样考察,筛选出rLZ-8适用的冻干粉处方:海藻糖50 mg、甘露醇50 mg、rLZ-8 10 mg。处方确定后,选取不同的温度、真空度、冻干时间,以性状和水分为考察指标分别进行单因素实验,对rLZ-8冻干工艺进行摸索。确定其适用冻干工艺:升华干燥条件为温度-29℃,真空度250 m Torr,干燥时间90 h,解析干燥条件为温度40℃,真空度250 m Torr,干燥时间30 h。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组灵芝免疫调节蛋白论文参考文献
[1].刘凯,刘媛媛,孙非,任立群.重组灵芝免疫调节蛋白对衰老模型小鼠的抗衰老作用[J].中国老年学杂志.2018
[2].曲卉馨.重组灵芝免疫调节蛋白冻干粉针剂的研究[D].吉林大学.2017
[3].雷欣华.重组灵芝免疫调节蛋白通过动员造血干细胞治疗小鼠中性粒细胞减少症的研究[D].吉林大学.2016
[4].侯郑丹.重组灵芝免疫调节蛋白治疗皮肤衰老的实验研究[D].吉林大学.2016
[5].刘文杰.重组灵芝免疫调节蛋白拮抗豚鼠庆大霉素耳毒性的实验研究[D].吉林大学.2016
[6].刘凯.重组灵芝免疫调节蛋白抗衰老与美白作用实验研究[D].吉林大学.2016
[7].徐畅.重组灵芝免疫调节蛋白（rLZ-8）临床前药代动力学初步研究[D].吉林大学.2016
[8].顾博思.重组灵芝免疫调节蛋白对神经性耳聋模型豚鼠的保护作用及机制研究[D].吉林大学.2015
[9].刘大维.重组灵芝免疫调节蛋白对小鼠肝癌相关成纤维细胞的生物学影响[D].吉林大学.2015
[10].阎明慧.重组灵芝免疫调节蛋白进入肝癌细胞内吞机制的研究[D].吉林大学.2015
标签：重组灵芝免疫调节蛋白; 抗衰老; 抗氧化物质; 丙二醛;