导读:本文包含了脯氨酸脱氢酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:番茄,ProDH,RNA干扰,载体构建
脯氨酸脱氢酶论文文献综述
吴巧玲,任晓平,张喜春[1]（2016）在《番茄脯氨酸脱氢酶基因的克隆与RNAi植物表达载体的构建》一文中研究指出【目的】克隆了脯氨酸脱氢酶ProDH基因的全长cDNA,构建了ProDH基因的RNA干扰植物表达载体,并转化到农杆菌。【方法】以"耐运2000番茄"幼苗为试材,根据GenBan中公布的番茄脯氨酸脱氢酶ProDH基因的序列信息设计了一对特异性引物,克隆了该基因的全长cDNA,分析基因序列选择正反向片段并扩增,并通过酶切、连接的方法构建了ProDH基因的RNA干扰植物表达载体PBI121-PDHi;利用冻融法将表达载体转化到农杆菌EHA105中。【结果】所克隆到的ProDH基因片段长2 001bp,其中CDS为1 491bp,编码380个氨基酸。测序结果与公布序列同源性100%,因此可以用来构建干扰载体;通过酶切与测序鉴定,证明表达载体构建成功。【结论】经特异性引物扩增检测,证明表达载体已转入农杆菌,为进一步的研究该基因奠定了基础。(本文来源于《北京农学院学报》期刊2016年04期）
褚欣玲[2]（2016）在《球孢白僵菌脯氨酸脱氢酶的生物学功能及多蛋白桥联因子1介导菌体氧化耐受力的初步机制》一文中研究指出球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是丝孢类害虫生物防治真菌,寄主范围极广,因而已被开发成多种制剂用于害虫生物防治。本文主要研究了球孢白僵菌脯氨酸脱氢酶BbPDH在真菌生长发育中的功能。同时还对多蛋白桥联因子1(BbMBF1)调节的抗氧化路径进行了探究。球孢白僵菌BbPDH功能研究 首先,构建单基因敲除株和回补株,并以此为基础开展表型实验和生化分析。绿色荧光蛋白和MitoTraker荧光染料共定位分析显示,BbPDH蛋白在细胞内是定位在线粒体上的。BbPDH调控球孢白僵菌生长发育和对热胁迫的应激响应。基因敲除后,除了△BbPDH2,其他的叁个敲除菌株在萨氏培养基S DAY和察氏培养基CZA板上的生长都受到了抑制。更换氮源后,这叁个敲除株还是表现出生长缺陷。当用NH4Cl作为氮源,TCA循环中α-酮戊二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸分别作为碳源时,ΔBbPDH1和△BbPDH4有恢复生长的趋势。而△BbPDH3的生长速率相对野生株来说还是下降的。热激后,野生株、△BbPDH2和△BbP1 )H3菌株的生长速率分别下降了11.17%、11.83%和19.61%。但是△BbPDH1和△BbPDH4对热胁迫更为敏感。分生孢子产量测定结果显示△BbPDH2和△BbPDH3的分生孢子产量与野生株相比并无显着差异,但△BbPDH1和△BbPDH4由于生长速率变慢,产孢量会有一定程度的下降。△BbPDH1、ΔBbPDH2和△BbPDH3的芽孢产量和野生株相比并无明显差异,而ΔBbPDH4芽孢产量下降明显。除ΔBbPDH2 菌株芽孢大小没有明显改变,另外叁个敲除株的芽生孢子均比野生株大。在萌发板上,各敲除株分生孢子活力均没受到明显影响。但在水琼脂糖板上,ΔBbPDH1和△BbPDH4的孢子萌发率相对野生株显着下降,△BbPDH3次之,ΔBbPDH2孢子萌发率与野生株相近。在对大蜡螟幼虫的生测实验中,除△BbPDH2,其他叁个基因敲除株的毒力均呈显着下降。由此可见,球孢白僵菌四个BbPDH基因在菌株生长,耐热及致病力方面发挥着不同的作用。BbMBFl对球孢白僵菌抗氧化路径的调控多蛋白桥联因子1(BbMBF1),是一个进化上高度保守的转录辅因子,在真核生物发育和抗逆方面扮演着重要角色。我们已经证实,ΔBbMBF1在甲萘醌胁迫下生长速率变缓,RT-PCR分析在氧化胁迫条件下野生株中该基因的表达量升高。为了进一步探索BbMBF1 在甲萘醌胁迫下调节的下游靶标基因,我们比较了野生株和ΔBbMBF1的转录组。分析显示,BbMBF1调节的氧化响应基因在功能类上主要富集在代谢,细胞营救和运输方面。更重要的是,生物信息分析预测了一个假定的基序,主要分布在与代谢和解毒相关的基因的启动子上。为了获得与BbMBF1p特异性结合的转录因子,我们以提取的细胞核蛋白为样品,进行免疫共沉淀实验,洗脱下来的蛋白通过质谱分析,找到了转录因子BbAP-1。通过构建基因敲除菌株,发现与野生株相比,敲除株在甲萘醌胁迫下生长同样受到抑制。综上所述,这些结果表明球孢白僵菌的BbMBF1通过介导调节代谢和解毒路径的潜在转录因子响应氧化胁迫,为分子手段改造昆虫病原真菌提供了新的思路。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-01-09）
魏丽娟,张娟,王蕾,刘林德,赵同欣[3]（2014）在《南蛇藤脯氨酸脱氢酶基因的克隆和表达特性》一文中研究指出利用兼并性引物和RACE方法,在南蛇藤(Celastrus orbiculatus)中克隆了1个脯氨酸脱氢酶基因,并命名为Nst Pro DH1。序列比对显示该基因与拟南芥(Arabidopsis thaliana)和烟草(Nicotiana tabacum)的脯氨酸脱氢酶(Pro DH)具有很高的同源性。酶学特性分析表明该酶具有脯氨酸脱氢酶的活性。比较南蛇藤不同器官该基因的转录表达模式与脯氨酸脱氢酶活性,结果显示两者之间没有明显的关联,说明该基因的表达受到转录和翻译水平的双重调控,同时也暗示南蛇藤中还存在其它的脯氨酸脱氢酶基因。Nst Pro DH1基因的表达模式与野生型拟南芥中的Pro DH1具有相似性,因此推测Nst Pro DH1基因可能在功能上与拟南芥Pro DH1基因相似。(本文来源于《植物学报》期刊2014年06期）
张娜,黄韫宇,冯洁,刘莉莎,杨鹏[4]（2011）在《甘蓝脯氨酸脱氢酶基因克隆与RNAi表达载体构建》一文中研究指出通过RT-PCR、同源克隆和RACE等方法由甘蓝总RNA扩增得到了甘蓝脯氨酸脱氢酶基因cDNA全长(1 719 bp),其中包含了一个1 497 bp的完整开放阅读框,编码498个氨基酸,与已发表的十字花科植物ProDH基因均具有85%以上的同源性。在此基础上设计并克隆干扰片段,利用酶切连接的方法将该基因干扰片段正反向插入到载体pFGC-1008的GUS内含子两侧,经限制性内切酶酶切和测序鉴定,证明植物表达载体pFGC-gPDH已构建成功,为进一步研究该基因的功能创造了条件。(本文来源于《中国农业大学学报》期刊2011年03期）
林乐懿,张丽叶,末信一郎,郑海涛,白石智美[5]（2010）在《His-tag标记的嗜热菌来源L-脯氨酸脱氢酶的纯化与性质》一文中研究指出以引入了His-tag做标记的超嗜热菌Thermococcus profundus色素依存性L-脯氨酸脱氢酶基因片段为目的基因,在宿主大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)CompetentCells中表达目的蛋白。细胞培养液经超声菌体破碎、热处理、NiSepharose层析分离,得到纯度较高的His-tag色素依存性L-脯氨酸脱氢酶,比酶活是纯化前的5倍。纯化后的酶液经凝胶电泳分离得到片段为58600,40200,22300的3段短肽。通过对该酶性质的初步探索,得出在温度50℃,体系pH8.0,300mmol/LTris缓冲溶液的条件下,L-脯氨酸脱氢酶酶活最高,为1.5U/mL。(本文来源于《北京化工大学学报(自然科学版)》期刊2010年06期）
吕东,杨静,李国清[6]（2010）在《应用微生物发酵技术获得马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因双链RNA的初步研究》一文中研究指出RNA干扰技术在植物保护领域具有潜在的应用前景,寻找经济、实用的生产技术十分必要。将外源碱基序列通过载体转入基因工程菌,发酵增殖而获得大量目标dsRNA的方法是备选技术之一。建立了利用大肠杆菌表达目的基因双链RNA的方法,通过改变诱导子IPTG的浓度及诱导时间优化了发酵条件,初步肯定了此项技术应用于药剂开发的可能性。(本文来源于《农药》期刊2010年08期）
林乐懿[7]（2010）在《His-tag标记的嗜热菌来源L-脯氨酸脱氢酶的纯化与性质研究及生物感应器的构建》一文中研究指出L-脯氨酸脱氢酶是一种生物体中广泛存在的酶,能在有电子接收体存在的情况下氧化L-脯氨酸。从日本温泉附近采集的超嗜热菌Thermococcus profundus,通过基因工程手段在其色素依存性L-脯氨酸脱氢酶基因片段中引入Hig-tag做标记并将该质粒提取纯化。采用E. coli Rosetta-gami (DE3) Competent Cells菌株进行质粒转换并培养,超声菌体破碎,热处理后使用Ni sepharose分离,得到纯度较高的His-tagL-脯氨酸脱氢酶(Dye-linked L-pro DH)。纯化后的酶液经凝胶电泳得到分离,分离片段为58.6 kDa,40.2 kDa,22.3 kDa,与理论值吻合。证明了His-tag和镍离子具有较强特异性结合,达到了较明显的纯化效果,为今后对该酶的定向固定化应用奠定基础。对该酶的性质在温度,缓冲体系pH值和缓冲溶液种类的选择上作了初步探索,得出最适宜酶活温度为50℃,300 mM的Tris缓冲溶液和pH值为8.0。利用物理吸附的方法将纯化后的His-tagL-脯氨酸脱氢酶固定在多壁碳纳米管(MCNT)修饰的玻碳电极表面。研究发现：在pH 7.5浓度300mM的磷酸缓冲溶液中,加入底物L-脯氨酸后,修饰电极上发生了可逆的氧化还原反应,表明His-tagL-脯氨酸脱氢酶在修饰电极上保持了自身的生物活性,并且多壁碳纳米管起到了良好电子传递体功能。为了验证该酶的His-tag的定向固定化性能,进行了石英晶体微天平(QCM)实验,在引入镍离子的金电极表面,His-tagL-脯氨酸脱氢酶相对于牛血清蛋白,表现出明显的特异性吸附,证明了His-tag的良好定向固定化性能。(本文来源于《北京化工大学》期刊2010-06-22）
吕东[8]（2010）在《马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的克隆、表达分析及其dsRNA的发酵生产》一文中研究指出脯氨酸脱氢酶在昆虫中广泛存在,其功能是氧化脯氨酸生成丙氨酸、二氧化碳和水。许多研究表明,脯氨酸脱氢酶主要参与了昆虫重要神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)的合成。但脯氨酸脱氢酶的另一功能——为鞘翅目昆虫的长距离飞行提供直接能量——一直没有受到应有的重视。本论文主要研究了重要鞘翅目害虫马铃薯甲虫的脯氨酸脱氢酶基因,解析马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶的基因结构,检测脯氨酸脱氢酶基因在马铃薯甲虫越冬前后表达丰度的差异,并在得到马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因干扰载体的基础上利用微生物发酵技术大量获得其dsRNA。本项研究对于更好的理解鞘翅目昆虫的长距离飞行及马铃薯甲虫的防治,具有重要意义。一、马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因全长的克隆根据其他昆虫的脯氨酸脱氢酶基因保守域序列设计兼并引物,扩增出马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的中心区段,结合5'RACE和3'RACE技术获得该基因的1个5’端序列和3个3’端序列,经序列拼接获得3个长度分别为2509bp、3076bp、3231bp的脯氨酸脱氢酶可变剪接体,在GenBank中登录号分别为GU355892、GU355893、GU355894,依次定名为脯氨酸脱氢酶基因转录异型体-1、2与3。序列分析结果表明,这3个可变剪接体均包含1个的开放阅读框,编码616氨基酸,其理论上的等电点PI=8.87,相对分子质量为7.07×104,聚类分析显示其与已报道的其它昆虫的脯氨酸脱氢酶基因具有较高的氨基酸序列同源性。二、马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的表达分析经过end-to-end PCR验证,进一步证实了马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶的3个转录异型体是确实存在的。以基因组DNA为对照,越冬前后的马铃薯甲虫cDNA为模板来研究脯氨酸脱氢酶的3个转录异型体在越冬前后表达丰度的差异。实验结果显示脯氨酸脱氢酶基因的3个转录异型体在越冬前都呈低水平表达,而脯氨酸脱氢酶基因转录异型体-1在越冬后优势转录表达。正常情况下,基因在3'UTR的序列越长,则其在细胞中的半衰期越短。这一结果表明,为了适应越冬后的长距离飞行需要,马铃薯甲虫通过缩短3’UTR序列长度的方式,达到延长脯氨酸脱氢酶mRNA半衰期进而来提高细胞中脯氨酸脱氢酶丰度的目的,以满足长距离飞行过程中高能量代谢的需求。叁、sid-1基因cDNA片段的克隆与进化分析通过生物信息学手段对NCBI EST数据库中类sid-1基因进行预测,而后选取几种重要农业害虫(马铃薯甲虫,灰飞虱,褐飞虱)的类sid-1基因进行RACE PCR克隆。在褐飞虱中得到1个1137bp的5‘端序列和1个1328bp的3‘端序列,拼接得到2786bp的cDNA全长序列；在灰飞虱中得到1个792bp的5‘端序列和1个1766bp的3‘端序列,拼接得到2515bp的cDNA全长序列；在马铃薯甲虫中得到1个350bp的5‘端序列。褐飞虱与灰飞虱类sid-1基因拼接序列的End-to-end PCR分别得到片段大小为2594bp与2322bp的产物,产物的测序结果与拼接得到的序列是一致的。与其他物种类sid-1基因构建的聚类树状图表明拼接马铃薯甲虫类sid-1基因cDNA片段与已报道的其它昆虫的类sid-1基因具有较高的氨基酸序列同源性,且与赤拟谷盗距离最近,推测马铃薯甲虫也具有类sid-1基因,具备系统性RNA干扰的前提条件。四、应用微生物发酵技术获得马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因双链RNA的初步研究在昆虫中,已有通过喂食dsRNA干扰靶标基因来研究基因功能及达到植物保护目的的报道,而上述dsRNA一般要通过体外转录来合成,成本较高且不易保存,因此寻找经济、实用的dsRNA生产技术十分必要。将外源碱基序列通过载体转入基因工程菌,发酵增殖而获得大量目标dsRNA的方法是备选技术之一。本研究建立了利用大肠杆菌表达目的基因dsRNA的方法,并通过改变诱导子IPTG的浓度及诱导时间优化了发酵条件,初步肯定了此项技术应用于基因研究和植物保护的可能性。(本文来源于《南京农业大学》期刊2010-06-01）
孔凡芝,洪晓虹,王常青,彭志珍,程璐[9]（2009）在《脯氨酸脱氢酶基因单核苷酸多态性与偏执型精神分裂症的关联研究》一文中研究指出目的:探讨脯氨酸脱氢酶(PRODH)基因单核苷酸多态性(SNP)与偏执型精神分裂症的关系。方法:应用聚合酶链反应技术及聚丙烯酰胺凝胶芯片技术对中国广东潮汕地区汉族276例偏执型精神分裂症患者与100例正常对照者的PRODH基因4个(2026、1945、1766、1852)SNP位点进行基因型检测,并对分型结果进行测序鉴定。结果:联合统计发现,PRODH基因的4个位点的单倍型频数两组分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PRODH基因多态性与偏执型精神分裂症存在关联,PRODH基因可能通过多个多态位点相互作用影响了偏执型精神分裂症的发病风险。(本文来源于《汕头大学医学院学报》期刊2009年01期）
许青松,姜万奎[10]（2008）在《中国延边地区朝、汉族人群脯氨酸脱氢酶和5-羟色胺2A受体基因基因座遗传多态性》一文中研究指出大量研究表明在精神疾病、心理疾病和药物依赖等过程中遗传因素起到重要作用。脯氨酸脱氢酶(proline dehydrogen-ase,PRODH)是把脯氨酸转化成Δ′pyrroline-5-carboxylate的一种线粒体酶,参与在线粒体膜中传递氧化还原(本文来源于《解剖学杂志》期刊2008年01期）
脯氨酸脱氢酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是丝孢类害虫生物防治真菌,寄主范围极广,因而已被开发成多种制剂用于害虫生物防治。本文主要研究了球孢白僵菌脯氨酸脱氢酶BbPDH在真菌生长发育中的功能。同时还对多蛋白桥联因子1(BbMBF1)调节的抗氧化路径进行了探究。球孢白僵菌BbPDH功能研究 首先,构建单基因敲除株和回补株,并以此为基础开展表型实验和生化分析。绿色荧光蛋白和MitoTraker荧光染料共定位分析显示,BbPDH蛋白在细胞内是定位在线粒体上的。BbPDH调控球孢白僵菌生长发育和对热胁迫的应激响应。基因敲除后,除了△BbPDH2,其他的叁个敲除菌株在萨氏培养基S DAY和察氏培养基CZA板上的生长都受到了抑制。更换氮源后,这叁个敲除株还是表现出生长缺陷。当用NH4Cl作为氮源,TCA循环中α-酮戊二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸分别作为碳源时,ΔBbPDH1和△BbPDH4有恢复生长的趋势。而△BbPDH3的生长速率相对野生株来说还是下降的。热激后,野生株、△BbPDH2和△BbP1 )H3菌株的生长速率分别下降了11.17%、11.83%和19.61%。但是△BbPDH1和△BbPDH4对热胁迫更为敏感。分生孢子产量测定结果显示△BbPDH2和△BbPDH3的分生孢子产量与野生株相比并无显着差异,但△BbPDH1和△BbPDH4由于生长速率变慢,产孢量会有一定程度的下降。△BbPDH1、ΔBbPDH2和△BbPDH3的芽孢产量和野生株相比并无明显差异,而ΔBbPDH4芽孢产量下降明显。除ΔBbPDH2 菌株芽孢大小没有明显改变,另外叁个敲除株的芽生孢子均比野生株大。在萌发板上,各敲除株分生孢子活力均没受到明显影响。但在水琼脂糖板上,ΔBbPDH1和△BbPDH4的孢子萌发率相对野生株显着下降,△BbPDH3次之,ΔBbPDH2孢子萌发率与野生株相近。在对大蜡螟幼虫的生测实验中,除△BbPDH2,其他叁个基因敲除株的毒力均呈显着下降。由此可见,球孢白僵菌四个BbPDH基因在菌株生长,耐热及致病力方面发挥着不同的作用。BbMBFl对球孢白僵菌抗氧化路径的调控多蛋白桥联因子1(BbMBF1),是一个进化上高度保守的转录辅因子,在真核生物发育和抗逆方面扮演着重要角色。我们已经证实,ΔBbMBF1在甲萘醌胁迫下生长速率变缓,RT-PCR分析在氧化胁迫条件下野生株中该基因的表达量升高。为了进一步探索BbMBF1 在甲萘醌胁迫下调节的下游靶标基因,我们比较了野生株和ΔBbMBF1的转录组。分析显示,BbMBF1调节的氧化响应基因在功能类上主要富集在代谢,细胞营救和运输方面。更重要的是,生物信息分析预测了一个假定的基序,主要分布在与代谢和解毒相关的基因的启动子上。为了获得与BbMBF1p特异性结合的转录因子,我们以提取的细胞核蛋白为样品,进行免疫共沉淀实验,洗脱下来的蛋白通过质谱分析,找到了转录因子BbAP-1。通过构建基因敲除菌株,发现与野生株相比,敲除株在甲萘醌胁迫下生长同样受到抑制。综上所述,这些结果表明球孢白僵菌的BbMBF1通过介导调节代谢和解毒路径的潜在转录因子响应氧化胁迫,为分子手段改造昆虫病原真菌提供了新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脯氨酸脱氢酶论文参考文献
[1].吴巧玲,任晓平,张喜春.番茄脯氨酸脱氢酶基因的克隆与RNAi植物表达载体的构建[J].北京农学院学报.2016
[2].褚欣玲.球孢白僵菌脯氨酸脱氢酶的生物学功能及多蛋白桥联因子1介导菌体氧化耐受力的初步机制[D].浙江大学.2016
[3].魏丽娟,张娟,王蕾,刘林德,赵同欣.南蛇藤脯氨酸脱氢酶基因的克隆和表达特性[J].植物学报.2014
[4].张娜,黄韫宇,冯洁,刘莉莎,杨鹏.甘蓝脯氨酸脱氢酶基因克隆与RNAi表达载体构建[J].中国农业大学学报.2011
[5].林乐懿,张丽叶,末信一郎,郑海涛,白石智美.His-tag标记的嗜热菌来源L-脯氨酸脱氢酶的纯化与性质[J].北京化工大学学报(自然科学版).2010
[6].吕东,杨静,李国清.应用微生物发酵技术获得马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因双链RNA的初步研究[J].农药.2010
[7].林乐懿.His-tag标记的嗜热菌来源L-脯氨酸脱氢酶的纯化与性质研究及生物感应器的构建[D].北京化工大学.2010
[8].吕东.马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的克隆、表达分析及其dsRNA的发酵生产[D].南京农业大学.2010
[9].孔凡芝,洪晓虹,王常青,彭志珍,程璐.脯氨酸脱氢酶基因单核苷酸多态性与偏执型精神分裂症的关联研究[J].汕头大学医学院学报.2009
[10].许青松,姜万奎.中国延边地区朝、汉族人群脯氨酸脱氢酶和5-羟色胺2A受体基因基因座遗传多态性[J].解剖学杂志.2008