王全义（济宁医学院附属医院病理科山东济宁272200）
【中图分类号】R730.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）15-0049-02
【摘要】目的探讨经典型霍奇金淋巴瘤(CHL)背景细胞复杂的原因。方法应用免疫组化Envision二步法检测IL-6及TGF-β1在CHL肿瘤细胞及背景细胞中的表达。结果三种不同类型CHL中肿瘤细胞和背景细胞表达IL-6相比较均有统计学意义（P<0.05）,MCHL及NSHL中肿瘤细胞和背景细胞表达TGF-β1相比较有统计学意义（P<0.05）,而LRHL中肿瘤细胞和背景细胞表达TGF-β1相比较无统计学意义(P=0.142)；三种类型的肿瘤细胞之间和背景细胞之间表达IL-6及TGF-β1相比较均没有统计学意义(P>0.05)。结论细胞因子IL-6及TGF-β1是经典型霍奇金淋巴瘤(CHL)背景细胞复杂的原因之一。
【关键词】霍奇金淋巴瘤细胞因子免疫组化
经典型霍奇金淋巴瘤（CHL）是恶性淋巴瘤的一种特殊类型，其独特的细胞构成与几乎所有的其他已知的恶性肿瘤有所不同：在炎症的背景下有少数的肿瘤细胞Hodgkin和Reed-Sternberg细胞（简称H/R-S细胞，常<1%），炎症背景复杂多变,组织结构复杂,细胞种类较多,包括血管成分、纤维化、炎症细胞、肉芽肿、出血和坏死等。目前细胞因子多数是用Elisa方法来检测，2010年5月～2010年8月，我们观察了CHL肿瘤细胞及背景细胞中IL-6、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达变化，并探讨其意义。经检索在国内尚未见报道。
1材料和方法
1.1材料选用济宁医学院附属医院2003～2010年CHL存档蜡块40例,其中男性28例，女性12例，年龄6～79岁，中位年龄28岁，发生于颈部28例，锁骨上8例，腋下2例，腹膜后及肠系膜各1例。每例均经两位有临床经验的高年资病理医师复阅片,40例CHL均行HE和CD30、CD15、CD20、CD3及EMA免疫组化标记确定诊断,根据WHO（2003）淋巴瘤分类标准进行亚型分类,其中结节硬化型（NS）23例，混合细胞型（MC）15例，淋巴细胞为主型（LR）2例，另外选择乳腺浸润性导管癌及慢性阑尾炎各1例作为阳性对照。
1.2试剂免疫组化试剂一抗IL-6、TGF-β1均购于博士德试剂公司，二抗试剂盒购于基因公司。
1.3免疫组化标本用4%中性缓冲甲醛固定,常规石蜡包埋,3μm连续切片,免疫组化采用Envision二步法,微波热修复，DAB显色,苏木精对比染色,中性树胶封固切片，阳性对照用已知阳性的乳腺癌及慢性阑尾炎作为对照，阴性对照用PBS溶液取代一抗进行对比实验。
1.4结果判定2种细胞因子阳性结果均为棕黄色，定位于细胞质中。其中≥1个肿瘤细胞阳性,判断为肿瘤细胞阳性，≥30%的背景细胞阳性判断为背景细胞阳性。
1.5观察方法同一张切片观察有肿瘤细胞的10个不同高倍镜视野（×400）中心1平方毫米面积内R-S细胞及各种变体的数量及其表达细胞因子的比例，累计后平均得每平方毫米内R-S细胞及变体的数量及表达细胞因子的结果；同法观察各种背景细胞成分的数量及表达细胞因子的结果。
1.6统计学分析用SPSSl3.0软件进行统计学处理。率的比较行x2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1肿瘤细胞与背景细胞表达IL-6的情况（1）MCHL中肿瘤细胞和背景细胞的比较：x2=21.240，P<0.05；（2）NSHL中肿瘤细胞和背景细胞的比较：x2=43.074，P<0.05；（3）LRHL中肿瘤细胞和背景细胞的比较：x2=34.047，P<0.05；（4）三种不同类型CHL中肿瘤细胞的比较：x2=1.465，P=0.461；（5）三种不同类型CHL中背景细胞的比较：x2=2.906，P=0.234。
2.2肿瘤细胞与背景细胞表达TGF-β1的情况（1）MCHL中肿瘤细胞和背景细胞的比较：x2=5.286，P<0.05；（2）NSHL中肿瘤细胞和背景细胞的比较：x2=8.120，P<0.05；（3）LRHL中肿瘤细胞和背景细胞的比较：x2=2.158，P=0.142；（4）三种不同类型CHL中肿瘤细胞的比较：x2=2.679，P=0.262；（5）三种不同类型CHL中背景细胞的比较：x2=0.720，P=0.698。
3讨论
HL是恶性淋巴瘤的一种独特类型，在欧美各国是儿童和青少年中最常见的恶性肿瘤之一。在我国淋巴瘤占恶性肿瘤的第11位，HL占淋巴瘤的9.4%。根据世界卫生组织WHO关于淋巴瘤的新分类，可将其主要分为如下两大类：（1）结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL）；（2）经典型霍奇金淋巴瘤（CHL）。CHL独特的细胞构成与几乎所有的其他已知的恶性肿瘤有所不同：在炎症的背景下有少数的肿瘤细胞Hodgkin和Reed-Sternberg细胞，炎症背景复杂多变,组织结构复杂,细胞种类较多。
经国内外大量研究证实H/R-S细胞来源于B细胞，但为什么HL的组织学表现和普通B细胞淋巴瘤会有如此大的差异？不到1％的H/R-S细胞何以能引起HL的症状和临床表现？如炎症性背景、纤维化等一直是个难题[1]。
细胞因子（CK）是多种细胞所分泌的能调节细胞生长分化、调节免疫功能、参与炎症发生、创伤愈合、肿瘤免疫等多种生理和病理过程的小分子多肽的统称。根据分泌细胞因子的细胞来源可分为单核巨噬细胞分泌的单核因子和淋巴细胞产生的淋巴因子，根据细胞因子的主要功能分为白细胞介素（IL）、肿瘤坏死因子（TNF）、集落刺激因子（CSF）、趋化因子家族、干扰素（IFN）及生长因子（GF）六种。
IL-6又称作β细胞刺激因子,β2干扰素,杂交瘤细胞生长因子和细胞毒性T细胞分化生长因子。它是一种由184个氨基酸组成的分子量为26kDa的糖蛋白[2]。IL-6是多功能的细胞因子,可刺激B淋巴细胞分化和诱导B淋巴细胞最终分化为浆细胞，浆细胞可以分泌多种免疫球蛋白；IL-6刺激T淋巴细胞分泌IL-2和合成IL-2受体；IL-6和IL-1可以活化T淋巴细胞识别抗原、刺激细胞毒性淋巴细胞的增殖和分化；而且IL-6对有活性和无活性的淋巴细胞都具有诱导作用。在本实验中IL-6广泛表达于肿瘤细胞及背景细胞中，可以认为IL-6在CHL肿瘤形成过程中发挥着重要作用,成为CHL背景细胞复杂的原因之一。
转化生长因子(TGF-β)最早是由Delarco和Todaro于1978年在研究病毒转化细胞过程中发现的，它包含6种同分异构体：TGF-βl～TGF-β6。哺乳动物有TGF-βl、TGF-β2、TGF-β3三种生物活性相似的亚型，它们抑制细胞增殖和免疫功能，诱导上皮细胞凋亡，调节细胞生长分化，刺激间质细胞增殖并产生细胞外基质，诱导体内各种组织纤维化反应。其中以TGF-β1的致纤维化作用最强。TGF-β1是一种多功能的细胞因子，在细胞的生长分化、胚胎发育、免疫调节、损伤后修复及细胞外基质的产生等方面发挥着重要作用。在本实验中TGF-βl广泛表达于肿瘤细胞及背景细胞中，可以认为TGF-βl在CHL肿瘤形成过程中发挥着重要作用,成为CHL背景复杂特别是纤维化的原因之一。由于LRHL的组织学表现较为特殊，背景中富含大量的小淋巴细胞，缺乏中性粒细胞及嗜酸性粒细胞，由此可以推测LRHL中肿瘤细胞和背景细胞表达TGF-β1相比较无统计学意义。
H/R-S细胞表达的功能性酪氨酸激酶受体，与HL淋巴结内成纤维细胞中高水平表达的干细胞因子相互作用，促进H/R-S细胞生长存活、逃逸凋亡，而成纤维细胞产生的IL-6、IL-7也促进H/R-S细胞的分化和增生。
H/R-S细胞分泌的细胞因子不仅作用于背景细胞，也对H/R-S细胞自身的存活产生直接的影响，例如IL-3/IL-3R、IL-13/IL-13R和CD30/CD30L的交互作用，IL-9和SCF的共刺激作用都可促进H/R-S细胞的增殖或抗细胞凋亡。H/R-S细胞和背景细胞之间通过自分泌、旁分泌相互作用所介导形成的微环境，有利于H/R-S细胞的增生、抗凋亡，以及逃避机体的抗肿瘤反应,在CHL发病机制中起重要的作用。
H/R-S细胞表现复杂的表达模式，能产生多种细胞因子或趋化因子，至少包括IL-2、IL-6、TNFα、TGFβ等数10种，调节HL组织中细胞间的相互作用。各型HL的组织病理特征、临床表现和预后的差异皆与各种细胞因子和趋化因子的表达相关。
由于HL发病率低，细胞因子种类繁多，肿瘤细胞与背景细胞的关系还有待于增加标本量及细胞因子种类和应用免疫组化及原位杂交双结合等技术来研究。
参考文献
[1]梁国桢，邓飞，郭瑞珍主编.淋巴瘤与瘤样增生病理学.贵州：贵州科技出版社，1999，202-213.
[2]KishimotoT．Interleukin-6：discoveryofaplei-otropiccytokine[J].ArthritisResTher,2006,8Suppl2：S2.