导读:本文包含了人工过氧化物酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人工过氧化物酶,自组装,微凝胶-胶束,催化
人工过氧化物酶论文文献综述
石贺锦,马如江,史林启[1]（2017）在《基于微凝胶-胶束体系的人工过氧化物酶的构建》一文中研究指出酶是由蛋白质多肽与活性中心通过多级组装形成的大分子催化剂,具有较高的催化活性以及独特的底物选择性,因此在生物、医药等领域均有广泛应用。利用仿生手段模拟天然酶的结构和功能,构建具有催化活性以及选择性的人工酶体系具有重大意义。本文利用聚乙二醇-b-聚4-乙烯基吡啶(PEG-b-P4VP)与血红素自组装得到胶束,进而在胶束表面原位聚合生成微凝胶,构建微凝胶-胶束复合体系。聚合物胶束的形成可以有效地抑制血红素氧桥联二聚体的生成,将血红素稳定于水相体系中,具有较好的催化活性及稳定性。微凝胶网络结构通过改变底物分子的扩散方式,影响底物分子与血红素胶束的结合,从而赋予该体系对不同尺寸的底物分子的催化选择性。向微凝胶内共聚具有底物识别功能的单体,通过功能单体与底物之间的非共价相互作用,来进一步实现人工酶的底物选择性。通过构建这样一种微凝胶-胶束复合体系,可以得到同时具有催化活性以及底物选择性的人工酶。(本文来源于《中国化学会2017全国高分子学术论文报告会摘要集——主题J：高分子组装与超分子体系》期刊2017-10-10）
商圣哲[2]（2015）在《利用细菌人工染色体制备乳过氧化物酶小鼠乳腺反应器的研究》一文中研究指出乳腺生物反应器是一种具有广泛应用前景的蛋白生产模式。构建乳腺特异表达载体时常选用乳蛋白基因的启动子,常用的乳蛋白基因包括酪蛋白、乳清酸蛋白、乳清白蛋白、乳球蛋白基因等。有研究表明乳铁蛋白基因启动子也可用于调控外源基因的乳腺特异表达。利用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)载体制备乳腺反应器具有调控区完整、不受位置效应影响、表达量可与插入拷贝数呈正相关等优点。因此本研究用BAC载体进行外源基因的小鼠乳腺反应器的研究,验证其作为稳定高效的表达载体调控外源基因在乳腺中表达的能力。本研究选用牛乳过氧化物酶基因(bovine lactoperoxidase, bLPO)进行小鼠乳腺反应器模型制备。牛乳过氧化物酶与过氧化氢、硫氰化物共同组成具有天然抗菌作用的乳过氧化物酶系统,除广谱抗菌作用外还具有抗真菌、抗病毒、抗自由基、促进免疫等生物功能,因此该蛋白在生产生活中有极高的应用价值。本研究比较了携带有3种不同启动子的BAC载体在小鼠中调控外源基因bLPO表达的能力。3种启动子分别为bLPO自身启动子、αs1酪蛋白启动子、乳铁蛋白启动子。本研究制备了3种BAC载体调控bLPO表达的转基因小鼠,鉴定了转基因鼠中bLPO基因的插入与表达情况。结果表明bLPO自身启动子不能调控bLPO蛋白在乳腺中表达,仅在mRNA水平检测到有少量表达；αs1酪蛋白启动子、乳铁蛋白启动子均可调控bLPO的重组表达。乳铁蛋白BAC载体表达的重组bLPO在个别个体中表达量最高,但αs1酪蛋白的BAC载体表达的重组bLPO在不同个体的平均表达量高于乳铁蛋白BAC载体。Western blotting与去糖基化酶实验表明重组bLPO与天然bLPO具有相似的N-糖基化修饰,但分子量略有差异。酪蛋白启动子调控的转基因小鼠乳汁中重组LPO的浓度为0.118 μg/μL～0.216 μg/μL之间,乳铁启动子转基因小鼠乳中重组LPO的表达量在0.041μg/μL～0.364 μg/μL之间,两种转基因鼠乳汁中的重组bLPO均高于牛乳中bLPO的浓度(～0.03μg/μL)。本研究采用了ABTS法测定bLPO的酶活性,显示1微升转基因鼠乳中LPO酶活力(U/mL)在0.0198～0.0261之间,相当于1微克标准品bLPO酶活力的56.1%～73.9%,酶活与bLPO的含量呈正相关。抑菌圈法检测重组bLPO的抑菌活性,发现转基因鼠奶可以抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长形成抑菌圈。本研究成功获得了表达bLPO的转基因鼠。αs1酪蛋白和乳铁蛋白BAC载体均可在小鼠乳腺特异驱动表达bLPO, rbLPO表达水平最高达0.364μg/μL,说明BAC可以作为制备乳腺反应器的有效载体提高外源基因的表达量,可应用于转基因动物模型制备、研究外源蛋白功能以及大规模生产乳腺反应器等领域。(本文来源于《中国农业大学》期刊2015-11-01）
李楠,魏婷,赵秀峰[3]（2015）在《谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)人工模拟酶的研究进展》一文中研究指出谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase,GPx)可以清除过量的氢过氧化物以保持活性氧(ROS)代谢平衡使机体免受损伤,作为一种抗氧化剂具有一定的药用价值。然而天然GPx异源表达困难、酶水解以及半衰期短等缺点限制了其应用,因而设计合成高效GPx抗氧化酶模拟物受到学术界广泛关注。本文从化学修饰法和基因工程法两个方面介绍了GPx人工模拟酶的主要合成方法。通过比较已有GPx人工模拟酶的优缺点及活力值,对其发展趋势做出展望。(本文来源于《山东化工》期刊2015年17期）
杨天,杨晓璐,张钰帅,耿方勇,康慧茹[4]（2014）在《新型自组装纳米胶团人工过氧化物酶研究》一文中研究指出十二烷基肌氨酸钠与天然细胞色素c通过自组装方式构建了一种新型纳米胶团结构人工过氧化物酶(Artificial Peroxidase,AP)。采用紫外可见光分光光度计对AP酶促反应过程进行研究。表明AP在较宽的pH范围具有活性,并在pH 5.0,100 mmol/L磷酸盐缓冲液中达到最大。该AP的米氏常数Km、催化速率kcat以及催化效率分别为1.70μmol/L、0.11 s-1、0.065μM-1s-1,催化效率为天然辣根过氧化物酶的90.2%。(本文来源于《广州化工》期刊2014年16期）
张彩顺,吕刚[5]（2014）在《辣根过氧化物酶逆行示踪评价组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损》一文中研究指出背景:作者前期制备了无细胞神经移植物,并将骨髓间充质干细胞种植其内,成功构建了组织工程人工神经。目的:应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术,评价无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建的组织工程人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损后对感觉神经元的保护作用。方法:成年清洁级健康雄性SD大鼠,随机分成3组:实验组采用复合骨髓间充质干细胞的无细胞神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损;空白对照组采用无细胞神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损;自体神经对照组采用自体神经移植桥接大鼠坐骨神经缺损。移植后12周应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术,对脊髓后根神经节感觉神经元的再生进行评价。结果与结论:移植12周后根神经节感觉神经元再生评价结果提示,实验组与自体神经对照组相比差异无显着性意义,优于空白对照组;足底皮肤S-100免疫组织化学染色结果显示,各组皮下均见棕色阳性反应。提示无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损,对大鼠脊髓后根神经节感觉神经元具有保护作用,可以促进感觉功能的恢复。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年29期）
杨卫云[6]（2013）在《过氧化氢酶及人工过氧化物酶直接电化学研究》一文中研究指出本文工作主要采用纳米高分子材料纳米金和修饰有羧基的多壁碳纳米管的有利结合，利用电化学循环伏安方法实现了以血红素为中心的蛋白质的直接电化学研究，成功将过氧化氢酶、自组装构建的人工酶与新型纳米复合材料膜连接并修饰于玻碳电极表面，制备第叁代酶生物传感器，运用电化学循环伏安法分析过氧化氢酶及人工酶电化学反应机制为固化机制，且制备的酶生物传感器对底物H_2O_2具有很好的响应。采用电子透射技术及直接电化学方法，研究了过氧化氢酶与人工酶的结构、直接电化学特性、机制、电化学酶促动力学参数测量等。主要实验方法为循环伏安法、时间电流扫描及交流阻抗方法。主要工作包括：(1)不同修饰材料循环伏安曲线对比；(2)修饰电极在不同扫描速度下机制的研究；(3)不同pH对修饰电极的影响；(4)不同修饰材料交流阻抗的研究；(5)修饰电极对不同浓度H_2O_2的响应。首先，研究了过氧化氢酶的直接电化学：利用纳米复合材料制备CAT-AuNPs膜修饰新型酶生物传感器，采用循环伏安法结果可得一对准可逆的氧化还原峰，式电势为-0.451V(vs SCE)，随着溶液pH值的增加峰电流值呈负向移动。该酶电极还原峰电流随溶液中H_2O_2浓度的增加而增大。当H_2O_2浓度在1nmol/l-1μmol/l之间，酶电极的还原峰电流符合线性关系，其检测限为0.5nmol/l，动力学表观米氏常数K_m~(app)为0.34μmol/l，异相电子转移常数（ks）为8.72s~(-1).第二，由Gemini-iminidazole-heme-SDS构建的人工酶直接电化学研究：采用pH值7.0，浓度为12mmol/l的heme和0.8mmol/l的Gemini、3mmol/l的iminidazole、90mmol/l的SDS纳米胶团溶液自组装构建人工酶，用纳米高分子材料Nafion固定在修饰有纳米复合材料的玻碳电极上，构建了纳米簇人工过氧化物酶生物传感器；该酶生物传感器具有很好的稳定性和电化学活性，能够替过氧化物酶构建第叁代生物传感器。利用循环伏安法测得该人工酶在-0.6-0.6V电压下有一对准可逆的氧化还原峰，酶与电极之间电子迁移速度常数ks为5.4s~(-1)。利用电线扫描方法测量人工酶催化浓度为0.03~(-1)60μmol/l的过氧化氢(H_2O_2)，其阴极峰电流随H_2O_2浓度增加而增大，且符合线性关系，其检测限为0.03μmol/l，动力学表观米氏常数K_m~(app)为0.034±0.003mmol/l。第叁，由SDS+细胞色素c构建的人工酶直接电化学：这种由阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠(SDS)与细胞色素c通过自组装的方法构建的纳米超分子结构不仅具有很好的稳定性和酶活性，而且通过纳米复合材料可固定化于电极上，实现与电极间的直接电子传递。该修饰电极具有一对明显的氧化还原峰，在扫描速度为0.05V/s时式电势E°′为59±2mV (vs. Ag/AgCl)。电化学方法测得其人工酶的动力学表观米氏常数K_m~(app)为0.27±0.02μmol/l,电子传递速率常数ks为2.1±0.1s~(-1).该修饰电极实现对过氧化氢的检测，为研制第叁代生物传感器奠定基础。由实验数据我们得出以下结论：1、成功的利用纳米复合材料将过氧化氢酶及人工过氧化物酶酶固定化与电极上；2、过氧化氢酶与人工酶对较低浓度的H_2O_2均具有很好的响应和高的催化效率；3、成功的构建第叁代酶生物传感器。(本文来源于《河南大学》期刊2013-06-01）
赵莹雪,洪军,杨卫云,肖保林,高云飞[7]（2013）在《一种基于纳米胶团自组装结构人工过氧化物酶》一文中研究指出用十二烷基硫酸钠与血红素和组氨酸通过自组装的方式构建了一种纳米结构人工过氧化物酶(AP)。利用紫外可见光分光光度仪测量AP结构酶促反应过程,观察到了过氧化物酶活性在pH 8.0,50 mmol/L Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液时达到最大。该AP的米氏常数Km、催化速率以及催化效率分别为5.5μmol/L、0.6 s-1、0.011μM-1.s-1,其催化效率为天然辣根过氧化物酶的15%。(本文来源于《广州化工》期刊2013年03期）
黄琨[8]（2012）在《高效纳米自组装人工过氧化物酶研究》一文中研究指出本文利用半合成酶制备原理，采用内部疏水的SDS纳米胶团结构作为人工过氧化物酶的外部结构；采用分子结构小、适用条件广且廉价易得的天然细胞色素c作为人工过氧化物酶的活性催化中心结构；通过二者在缓冲溶液中发生自组装的方式构建人工过氧化物酶，来模拟天然过氧化物酶的催化特性。本工作主要采用光谱学方法、热分析方法及电化学分析方法对由细胞色素c和SDS纳米胶团溶液自组装构建的人工过氧化物酶的催化反应能力、结构变化、自组装过程、酶动力学、自杀性失活底物以及电化学特性进行检测。首先，对人工过氧化物酶的表观催化活性进行测量：采用紫外可见分光光度计，用过氧化物酶研究工作中最常使用的愈创木酚法测定人工过氧化物酶、细胞色素c及天然辣根过氧化物酶(HRP)的表观催化活性，观察到了人工酶具有良好的催化过氧化氢及愈创木酚发生氧化反应的活性。第二，研究了人工酶的催化环境：包括溶液pH值、细胞色素c浓度、SDS浓度及溶液离子强度在内的催化反应条件，实验得出在溶液pH值为10.5时，人工酶具有较高的表观活性；且其表观催化活性与在一定浓度范围内的细胞色素c (1~10μM)成线性关系，且最适溶液离子强度随pH升高而升高；实验还得出人工过氧化物酶的表观催化活性随SDS浓度升高而升高，但是，只要SDS浓度高于其临界胶束浓度(CMC)人工酶活性与SDS纳米胶团浓度无关。第叁，本工作采用紫外可见分光光度法及圆二色谱法对人工酶中蛋白质生色氨基酸残基：酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸周围环境特性的改变以及血红素周围环境的改变做了测试。实验结果表明，血红素周围环境疏水性随pH值增加而加强，这可能导致人工酶活性的增强。二级结构测试中，β折叠和反向平行结构相较于天然细胞色素c有所增加，这说明人工酶的活性极大程度上依赖于β折叠结构，β折叠可增加蛋白质血红素周围的疏水性，而这种结构使蛋白质具有催化活性；而反向平行结构增加几乎一倍，说明人工酶结构相较天然细胞色素c是一个更具空间对称性结构。第四，采用热分析法，对人工酶的结构及自组装构建人工酶这一过程中伴随的分子间相互作用进行考察，实验结果显示1分子细胞色素c与116分子SDS相互结合，改变了SDS纳米胶团本身结构；表明张力测试表明，构建人工酶时，SDS形成胶团的临界浓度小于5mM，比溶液中只有SDS时小；并通过DLS法测得人工酶结构的直径为6.4nm。第五，对构建的人工过氧化物酶的酶学动力学进行研究，测试得到其具有可观的催化效率，光谱学法得到人工酶催化效率与细胞色素c浓度有关，其中实验得最高人工酶催化效率为0.0335μM-1s-1，其对应的构建人工酶的细胞色素c浓度为0.1μM；酶动力学参数Km值为5.205μM，催化速率常数为0.174s-1。相当于天然HRP催化效率的46%。同时由于天然HRP具有自杀性失活底物过氧化氢(H2O2)，本文还测试了人工酶及天然HRP的自杀性失活过程，并得出其自杀性失活参数Ki，数据显示人工酶相对于天然HRP更耐受高浓度的过氧化氢，有工业应用前景。第六，本实验还将细胞色素c与SDS纳米胶团自组装构建的人工酶采用纳米高分子材料Nafion固定于玻碳电极上，然后通过循环伏安法研究人工酶在电极上的电化学性质。结果表明，人工酶在电极表面能进行有效地直接电子转移且为固化机制，并且通过该电极对H2O2进行检测，结果表明固定在电极表面的人工过氧化物酶能够保持其对H2O2的生物催化活性，可以实现对过氧化氢的检测，电化学法测得人工酶的Km为5.28μM，这为研制第叁代生物传感器奠定基础，同时也为对人工酶的研究提供了一种新方法。(本文来源于《河南大学》期刊2012-06-01）
刘磊[9]（2008）在《构建具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的人工酶》一文中研究指出酶的人工模拟,对认识酶自身生物进化过程和酶结构与功能关系有着十分重要的作用。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)是机体内重要的含硒酶,其催化基团为硒代半胱氨酸,以谷胱甘肽(GSH)为底物分解体内的氢过氧化物,清除自由基,从而保护细胞免遭氧化损伤。随着近年来自由基致病理论的建立和发展,GPx的作用逐渐引起人们重视,成为研究的热点。酶催化的基石是底物结合和分子内催化。因此构建人工酶的关键在于酶模型能识别和结合底物,催化官能团布局合理。本文根据所在小组所提出的人工模拟酶策略,在所选择的模型上,引入酶的催化基团,并构建合适的底物结合部位,利用化学和生物学的方法和原理,制备出两个高GPx活力的人工酶。另外还研究了本实验室构建的含硒单链抗体酶活性部位的结构。1.构建含硒生物印迹酶模拟GPx我们将枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)转变为硒化枯草杆菌蛋白酶(selenosubtilisin),以硒化枯草杆菌蛋白酶为起始蛋白,印迹分子为谷胱甘肽(GSH),采用生物印迹技术,以共价键将一个底物连接到模板分子上,得到GSH-硒化枯草杆菌印迹酶(imprinted GSH-selenosubtilisin),简称印迹酶。其催化GSH还原H2O2的最高活力和平均活力分别为597U/μmol和462U/μmol,比硒化枯草杆菌蛋白酶活力提高了100多倍,是Ebselen活力的500倍。印迹酶的催化机制与天然酶类似属于乒乓机制。印迹酶高活力的原因是:该模拟物是直接具有底物GSH结合部位的含硒印迹酶,首次实现了催化基团硒代半胱氨酸与底物结合部位的合理定位。2.构建环糊精模型模拟GPx在小组原有6-SeCD模拟物的基础之上,改造出一个新的活力提高的GPx模拟物:6A,6B-环己胺基- 6A' ,6B' -硒桥联-β-CD(6-CySeCD)。6-CySeCD模拟物催化GSH还原H2O2活力为7.9 U/μmol,比Ebselen的催化效率高7.9倍,比原模拟物6-SeCD(4.2 U/μmol)高1.8倍。其催化机制与天然酶类似。应用过氧化氢损伤Wistar大鼠乳鼠的背部表皮细胞为模型,研究了6-CySeCD的抗氧化能力。6-CySeCD活力的提高在于环己胺的定向引入。3.含硒单链抗体酶活性部位研究本实验室近年来设计并制备了几种谷胱甘肽过氧化酶模拟物,其中单链抗体GPx模拟酶(Se-scFv-2F3)就是其中之一。该酶是从含硒抗体酶(Se-Ab-2F3)出发,通过蛋白质工程和化学修饰相结合的方法将Se-Ab-2F3改造成为Se-scFv-2F3的。迄今,对Se-scFv-2F3的活性部位结构知之甚少。该酶的计算机模拟模型显示,SerH52和SerH59位于单链抗体的疏水性空腔内部,该空腔为谷胱甘肽的结合位点,因此这两个丝氨酸在进行硒化学修饰后,都极有可能成为该模拟酶的催化中心。本实验通过重迭PCR的方法,分别将SerH52和SerH59突变为Ala,获得两个突变体,比较其与原单链抗体的活性差异,从而判断单链抗体的活性位点的具体部位。(本文来源于《吉林大学》期刊2008-04-20）
郑克岩[10]（2007）在《谷胱甘肽过氧化物酶的人工模拟及其抗肿瘤活性研究》一文中研究指出硒为生物必需微量元素,在人类的生长发育过程中发挥重要的生理功能。生物体内,硒主要以叁种形式存在:硒蛋白、硒多糖和硒核酸。研究表明,硒蛋白和硒多糖具有抗氧化、抗肿瘤、提高机体免疫力等生物学功能,对它们结构和作用机制的研究,可以为人类在医学保健上提供有用的资料,为人类的健康成长谋福。硒在人体内最重要的生理功能就是针对活性氧及其衍生物的抗氧化活性,从而构成人体的抗氧化防御体系。在哺乳动物体内,最重要的功能硒蛋白就是谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPX),它的主要功能是清除机体在新陈代谢过程中产生的氧自由基,保护细胞的膜结构,抗氧化损伤。晶体结构研究证明,硒以硒代半胱氨酸的形式定位在GPX的活性位点上,是GPX的活性基团,对它的酶活性起关键性的作用。硒多糖主要存在于一些植物和真菌体内,是人体最重要的硒补充剂,进一步研究发现,硒多糖还具有一些其它的功能,例如清除有害的金属离子、提高机体免疫力等。因此,对这两种有机硒化合物进行研究和开发,就成为科学工作者的研究热点。GPX在人体内具有重要的生理活性,但是它的不稳定性和资源局限性导致它的利用率很低,因此,开发具有高GPX活力的人工模拟物就成为研究的重点。人工模拟酶的关键是构建具有与天然酶相似的底物结合部位和活性中心结构。在以前化学合成的小分子模拟物的研究中发现,从仅考虑活性基团而不考虑底物结合位点到二者全部考虑,模拟物的GPX活力有大幅的提高,但是活力均小于天然酶,限制了它们的应用。我们利用天然酶为材料,通过化学修饰其活性位点的丝氨酸残基,得到了接近天然酶活力的GPX模拟物,提示我们这是一种理想的模拟方法。文献表明,谷胱甘肽硫转移酶(glutathione transferase,GST)与GPX具有共同的GSH结合位点,如果在它的活性中心上含有丝氨酸残基(Ser),我们利用化学修饰的方法将其转变为硒代半胱氨酸(Sec),则可能获得高GPX活力的模拟酶。通过对天然酶进行筛选,我们利用人zeta族谷胱甘肽硫转移酶(hGST Z1-1)作为模拟的蛋白骨架。hGST Z1-1的活性中心结构同GPX相似,并且其活性中心的开口处具有两个Ser残基,利于化学修饰和与底物结合,因此是一个理想的模拟材料。化学修饰后得到的Se-hGST Z1-1具有很高的GPX活性,是某些天然酶活力的1.5倍。结果表明进行酶模拟的关键是构建与天然酶相似的活性部位的微环境,这为我们将来的工作提供了理论依据。在开发小分子GPX模拟物的时候,我们惊喜地发现某些模拟物还具有其它的生理活性,其中硒化环糊精对肿瘤细胞的双重作用提示我们,它可以预防和治疗某些癌症,具有潜在的药用价值。2-硒桥联-β-环糊精(2-selenium-bridgedβ-cyclodextrin,2-SeCD)在低剂量时可以促进HeLa细胞的生长,2-SeCD起抗氧化保护细胞的作用;在高剂量时,引起HeLa细胞凋亡,2-SeCD此时为细胞内的GSH耗竭剂,细胞内GSH快速大量的消耗引起细胞内氧化还原态的变化,激活caspase-3,直接引起肿瘤细胞凋亡。2-SeCD的这种双重调节作用是因为其具有谷胱甘肽过氧化物酶、脱氢抗坏血酸还原酶、巯醇转移酶活性,在行使这些功能时,将大量的GSH转化成GSSG,改变了细胞内的氧化还原平衡导致细胞凋亡。硒多糖作为硒的一种功能性化合物由于其在自然界中含量很低,因此对它的化学合成及抗肿瘤活性研究就成为科学家的研究重点。我们利用研究GPX模拟物的化学修饰方法,将蛋白多糖的羟基用PMSF活化,然后用-SeH亲核取代活化的-OH,将硒连接到蛋白多糖分子上,得到具有抗氧化活性的硒化蛋白多糖。生物活性实验研究表明,它具有直接杀死肿瘤细胞的功能,并且还保留了原多糖的免疫增强作用。离体实验表明它的抗肿瘤活性是通过调整细胞内bcl-2和bax的比值来启动肿瘤细胞凋亡。(本文来源于《吉林大学》期刊2007-05-01）
人工过氧化物酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乳腺生物反应器是一种具有广泛应用前景的蛋白生产模式。构建乳腺特异表达载体时常选用乳蛋白基因的启动子,常用的乳蛋白基因包括酪蛋白、乳清酸蛋白、乳清白蛋白、乳球蛋白基因等。有研究表明乳铁蛋白基因启动子也可用于调控外源基因的乳腺特异表达。利用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)载体制备乳腺反应器具有调控区完整、不受位置效应影响、表达量可与插入拷贝数呈正相关等优点。因此本研究用BAC载体进行外源基因的小鼠乳腺反应器的研究,验证其作为稳定高效的表达载体调控外源基因在乳腺中表达的能力。本研究选用牛乳过氧化物酶基因(bovine lactoperoxidase, bLPO)进行小鼠乳腺反应器模型制备。牛乳过氧化物酶与过氧化氢、硫氰化物共同组成具有天然抗菌作用的乳过氧化物酶系统,除广谱抗菌作用外还具有抗真菌、抗病毒、抗自由基、促进免疫等生物功能,因此该蛋白在生产生活中有极高的应用价值。本研究比较了携带有3种不同启动子的BAC载体在小鼠中调控外源基因bLPO表达的能力。3种启动子分别为bLPO自身启动子、αs1酪蛋白启动子、乳铁蛋白启动子。本研究制备了3种BAC载体调控bLPO表达的转基因小鼠,鉴定了转基因鼠中bLPO基因的插入与表达情况。结果表明bLPO自身启动子不能调控bLPO蛋白在乳腺中表达,仅在mRNA水平检测到有少量表达；αs1酪蛋白启动子、乳铁蛋白启动子均可调控bLPO的重组表达。乳铁蛋白BAC载体表达的重组bLPO在个别个体中表达量最高,但αs1酪蛋白的BAC载体表达的重组bLPO在不同个体的平均表达量高于乳铁蛋白BAC载体。Western blotting与去糖基化酶实验表明重组bLPO与天然bLPO具有相似的N-糖基化修饰,但分子量略有差异。酪蛋白启动子调控的转基因小鼠乳汁中重组LPO的浓度为0.118 μg/μL～0.216 μg/μL之间,乳铁启动子转基因小鼠乳中重组LPO的表达量在0.041μg/μL～0.364 μg/μL之间,两种转基因鼠乳汁中的重组bLPO均高于牛乳中bLPO的浓度(～0.03μg/μL)。本研究采用了ABTS法测定bLPO的酶活性,显示1微升转基因鼠乳中LPO酶活力(U/mL)在0.0198～0.0261之间,相当于1微克标准品bLPO酶活力的56.1%～73.9%,酶活与bLPO的含量呈正相关。抑菌圈法检测重组bLPO的抑菌活性,发现转基因鼠奶可以抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长形成抑菌圈。本研究成功获得了表达bLPO的转基因鼠。αs1酪蛋白和乳铁蛋白BAC载体均可在小鼠乳腺特异驱动表达bLPO, rbLPO表达水平最高达0.364μg/μL,说明BAC可以作为制备乳腺反应器的有效载体提高外源基因的表达量,可应用于转基因动物模型制备、研究外源蛋白功能以及大规模生产乳腺反应器等领域。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人工过氧化物酶论文参考文献
[1].石贺锦,马如江,史林启.基于微凝胶-胶束体系的人工过氧化物酶的构建[C].中国化学会2017全国高分子学术论文报告会摘要集——主题J：高分子组装与超分子体系.2017
[2].商圣哲.利用细菌人工染色体制备乳过氧化物酶小鼠乳腺反应器的研究[D].中国农业大学.2015
[3].李楠,魏婷,赵秀峰.谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)人工模拟酶的研究进展[J].山东化工.2015
[4].杨天,杨晓璐,张钰帅,耿方勇,康慧茹.新型自组装纳米胶团人工过氧化物酶研究[J].广州化工.2014
[5].张彩顺,吕刚.辣根过氧化物酶逆行示踪评价组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损[J].中国组织工程研究.2014
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