本文主要研究内容
作者王明明（2019）在《红阳猕猴桃原生质体培养及影响其生长分裂的理化因子分析》一文中研究指出：猕猴桃是上世纪人工驯化栽培最成功的野生果树之一,猕猴桃产业对世界果业发展做出了巨大贡献。但随着猕猴桃栽培面积的扩大,病害发生及危害愈来愈重,给猕猴桃高效安全生产带来严重威胁。在众多病害中,细菌性溃疡病是栽培猕猴桃的一种毁灭性病害,但迄今尚无根治的有效办法,并成为影响猕猴桃产业发展的瓶颈问题。因此,抗（耐）溃疡病的栽培新品种选育一直是育种者研究的重点。研究表明,在野生猕猴桃资源中,毛花猕猴桃和软枣猕猴桃对溃疡病的抗性较强,这对栽培猕猴桃的抗溃疡病资源创制乃至新品种选育提供了良好的亲本材料。原生质体融合是将野生种优良性状导入栽培种中的有效途径。因此,建立起高效的猕猴桃原生质体培养及融合技术体系,对后续栽培猕猴桃抗溃疡病资源创新和新品种选育有重要意义。红阳猕猴桃以其独特优异的品质受到广大消费者的青睐,但该品种高感溃疡病,已对很多产区造成极大的损失。为此,本研究以红阳猕猴桃和毛花猕猴桃为试材,对二者不同外植体所诱导的愈伤组织,进行原生质体分离和培养条件的筛选,以期建立适宜两种猕猴桃原生质体培养的技术体系,为后续杂种细胞的分裂和再生植株的获得奠定基础。但研究中发现,两种猕猴桃的原生质体分裂率较低,多种条件下持续继代培养后仅能观察到第2次细胞分裂。为此,笔者以具有高分裂率的烟草原生质体为对照,对红阳猕猴桃及烟草提取原生质体前的愈伤组织结构、及其原生质体分裂期的各种生理生化指标进行观察和分析,以期找出影响红阳猕猴桃原生质体分裂的理化因子,并调整培养方案进行原生质体生长与分裂的观察,为后续猕猴桃原生质体融合及抗溃疡病体细胞杂种的获得提供理论参考。本研究主要结果如下:1.红阳猕猴桃及毛花猕猴桃愈伤组织诱导。切取红阳猕猴桃和毛花猕猴桃种子萌发的无菌苗的子叶、下胚轴、茎尖、茎段、叶柄、叶片诱导愈伤组织,筛选适宜的愈伤组织诱导及增殖培养基。结果表明:红阳猕猴桃和毛花猕猴桃种子消毒的最佳方式为:20%次氯酸钠灭菌30分钟,无污染,红阳猕猴桃和毛花猕猴桃种子的发芽率分别为70.8%和75%。红阳猕猴桃各外植体在MS+0.2mg/L ZT+1.0mg/L 2,4-D愈伤组织诱导效果最好,出现愈伤快,出愈率达100%;愈伤组织颜色为黄白色,质地疏松,易于进行原生质体的制备。将毛花猕猴桃的不同外植体接种在上述最佳愈伤组织诱导培养基上,其结果与红阳猕猴桃基本相同。红阳猕猴桃茎段、叶柄、子叶、下胚轴的愈伤组织最佳增殖培养基为:N6+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA,增殖倍数分别为7.83,6.27,5.75,8.17;叶片愈伤组织的最佳增殖培养基为:N6+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,增殖倍数为6.75;而茎尖则为N6+1.0 mg/L2,4-D+1.0 mg/L NAA,增殖倍数为8.00。毛花猕猴桃的愈伤组织增殖培养基与红阳猕猴桃基本一致。2.红阳猕猴桃和毛花猕猴桃原生质体分离与纯化。对不同外植体获得的愈伤组织进行原生质体的分离和纯化结果表明:不同外植体来源的愈伤组织,以酶液组合2%纤维素酶+0.5%离析酶+1mmol/L CaCl2·2H2O+0.7mmol/L甘露醇酶解,以及CPW13-CPW25界面离心法纯化的效果最好,各愈伤组织原生质体产量在1.70×105-11.2×105个/g FW,原生质体的活力在81.7%-92.3%。其中,红阳猕猴桃原生质体产量最高的是茎段愈伤组织,产量为11.2×105个/g FW;原生质体活力为85.0%,活力最高的是叶片愈伤组织,为92.3%。而毛花猕猴桃而原生质体产量最高的是下胚轴愈伤组织,产量为9.5×105个/g FW,原生质体活力为81.7%;活力最高的是茎尖愈伤组织,为89.7%。3.原生质体培养方法与分裂。对不同外植体来源的原生质体进行不同培养方法和培养条件的分析,研究发现,红阳猕猴桃与毛花猕猴桃自第7-12d开始原生质体的第1次分裂,且叶柄、子叶来源的原生质体的分裂能力高于其他;但在不同条件下的分裂频率均较低,不同外植体来源的原生质体培养20d的分裂频率为4.9-15.7%。其中,红阳猕猴桃子叶愈伤组织原生质体利用液体浅层培养方法,在N6+1.0 mg/L 2,4-D+0.03 mg/L ZT+1.0%蔗糖+0.2 mol/L葡萄糖+200mg/L CH+0.45mol/L甘露醇的培养基上,培养密度5×104个/ml,光照强度1500lx,光照时长16h,培养温度24℃时效果最好,培养7-8d开始分裂,20d后其分裂频率达15.7%,且仅在此条件下观察到原生质体的第2次分裂。各培养条件下,持续继代培养6个月后,未发现持续分裂的情况。毛花猕猴桃叶片愈伤组织原生质体以液体浅层培养的方法,用N6+1.0mg/L 2,4-D+0.025mg/L ZT+1.0%蔗糖+0.2mol/L葡萄糖+200mg/L CH+0.45mol/L甘露醇培养基,培养密度5×104个/ml,光照强度1000lx,光照时间16h,培养温度26℃时,7d开始分裂,20d统计分裂频率13.4%,但持续培养仅观察到2次分裂。4.红阳猕猴桃与烟草原生质体分裂理化因子差异分析。烟草叶片愈伤组织来源的原生质体的分裂能力高于猕猴桃,培养14d的分裂频率为67.9%,植板率为26.3%,培养30d左右形成肉眼可见的小细胞团。对烟草叶片愈伤组织和红阳猕猴桃不同外植体来源的愈伤组织结构进行石蜡切片发现,烟草愈伤、红阳猕猴桃叶柄、子叶愈伤组织的细胞排列较疏松,茎尖、下胚轴和叶片愈伤组织的细胞排列较紧密。结合原生质体培养结果,发现原生质体的生长分裂与愈伤组织的状态关系密切,排列较为疏松的愈伤组织有利于原生质体的培养。对红阳猕猴桃和烟草愈伤组织所分离的原生质体培养14d后,进行激素含量（IAA、ABA、ZR）、酶活性（POX、SOD）、可溶性蛋白含量、氨基酸含量、酚酸、二胺（腐胺和尸胺）和多胺（精胺和亚精胺）等理化指标测定发现,对于内源激素ZR、IAA和ABA的含量,各参试材料内源激素ZR、IAA和ABA的含量呈现茎尖>叶柄>子叶>茎段>叶片>烟草>下胚轴的趋势;且所有材料的ABA含量最高,而ZR与IAA的质量比维持在2.64-2.85之间,没有显著性差异。烟草的SOD、POX活性、可溶性蛋白含量、总氨基酸含量均显著高于猕猴桃的各种材料,分别是猕猴桃含量的1.3-16、2.0-4.5、1.7-3.0、1.6-2.4倍,且甘氨酸仅在烟草中检出。红阳猕猴桃除下胚轴的酚酸含量比烟草高之外,其余材料比烟草低1.1-2.9倍。红阳猕猴桃的胺类总量均显著高于烟草。为此,笔者推测烟草原生质体分裂中,SOD活性、可溶性蛋白含量和氨基酸含量高,说明其清除自由基的能力较强,且渗透调节和生长分裂所需蛋白质合成能力等均较红阳猕猴桃好;而烟草的POX活性高、酚酸含量也较高,说明烟草分裂旺盛,产生的酚酸类较多,而POX的活性强,能较快清除自由基和酚酸类,从而对原生质体伤害较小。这些可能是导致烟草和红阳猕猴桃原生质体分裂出现差异的重要原因。5.为了提高红阳猕猴桃原生质体培养中的自由基清除和抗氧化能力,本研究在上述获得的优化培养方案下,在额外添加20mg/L椰乳,以及不同浓度PVP、甘氨酸、Vc、还原型谷胱甘肽（GSH）等自由基清除和抗氧化剂的培养基上培养。结果表明,以0.05mol/L的甘氨酸处理效果最好,原生质体分裂频率达20.1%,比不加入抗氧化剂的数值（15.7）提高了1.3倍,植板率由2.3提高到2.9.增长了1.3倍。7d开始分裂,培养60d后观察到小细胞团。但未能得到再生植株,其再生条件尚需进一步优化。
Abstract
mi hou tao shi shang shi ji ren gong xun hua zai pei zui cheng gong de ye sheng guo shu zhi yi ,mi hou tao chan ye dui shi jie guo ye fa zhan zuo chu le ju da gong suo 。dan sui zhao mi hou tao zai pei mian ji de kuo da ,bing hai fa sheng ji wei hai yu lai yu chong ,gei mi hou tao gao xiao an quan sheng chan dai lai yan chong wei xie 。zai zhong duo bing hai zhong ,xi jun xing hui yang bing shi zai pei mi hou tao de yi chong hui mie xing bing hai ,dan qi jin shang mo gen zhi de you xiao ban fa ,bing cheng wei ying xiang mi hou tao chan ye fa zhan de ping geng wen ti 。yin ci ,kang （nai ）hui yang bing de zai pei xin pin chong shua yo yi zhi shi yo chong zhe yan jiu de chong dian 。yan jiu biao ming ,zai ye sheng mi hou tao zi yuan zhong ,mao hua mi hou tao he ruan zao mi hou tao dui hui yang bing de kang xing jiao jiang ,zhe dui zai pei mi hou tao de kang hui yang bing zi yuan chuang zhi nai zhi xin pin chong shua yo di gong le liang hao de qin ben cai liao 。yuan sheng zhi ti rong ge shi jiang ye sheng chong you liang xing zhuang dao ru zai pei chong zhong de you xiao tu jing 。yin ci ,jian li qi gao xiao de mi hou tao yuan sheng zhi ti pei yang ji rong ge ji shu ti ji ,dui hou xu zai pei mi hou tao kang hui yang bing zi yuan chuang xin he xin pin chong shua yo you chong yao yi yi 。gong yang mi hou tao yi ji du te you yi de pin zhi shou dao an da xiao fei zhe de qing lai ,dan gai pin chong gao gan hui yang bing ,yi dui hen duo chan ou zao cheng ji da de sun shi 。wei ci ,ben yan jiu yi gong yang mi hou tao he mao hua mi hou tao wei shi cai ,dui er zhe bu tong wai zhi ti suo you dao de yu shang zu zhi ,jin hang yuan sheng zhi ti fen li he pei yang tiao jian de shai shua ,yi ji jian li kuo yi liang chong mi hou tao yuan sheng zhi ti pei yang de ji shu ti ji ,wei hou xu za chong xi bao de fen lie he zai sheng zhi zhu de huo de dian ding ji chu 。dan yan jiu zhong fa xian ,liang chong mi hou tao de yuan sheng zhi ti fen lie lv jiao di ,duo chong tiao jian xia chi xu ji dai pei yang hou jin neng guan cha dao di 2ci xi bao fen lie 。wei ci ,bi zhe yi ju you gao fen lie lv de yan cao yuan sheng zhi ti wei dui zhao ,dui gong yang mi hou tao ji yan cao di qu yuan sheng zhi ti qian de yu shang zu zhi jie gou 、ji ji yuan sheng zhi ti fen lie ji de ge chong sheng li sheng hua zhi biao jin hang guan cha he fen xi ,yi ji zhao chu ying xiang gong yang mi hou tao yuan sheng zhi ti fen lie de li hua yin zi ,bing diao zheng pei yang fang an jin hang yuan sheng zhi ti sheng chang yu fen lie de guan cha ,wei hou xu mi hou tao yuan sheng zhi ti rong ge ji kang hui yang bing ti xi bao za chong de huo de di gong li lun can kao 。ben yan jiu zhu yao jie guo ru xia :1.gong yang mi hou tao ji mao hua mi hou tao yu shang zu zhi you dao 。qie qu gong yang mi hou tao he mao hua mi hou tao chong zi meng fa de mo jun miao de zi xie 、xia pei zhou 、jing jian 、jing duan 、xie bing 、xie pian you dao yu shang zu zhi ,shai shua kuo yi de yu shang zu zhi you dao ji zeng shi pei yang ji 。jie guo biao ming :gong yang mi hou tao he mao hua mi hou tao chong zi xiao du de zui jia fang shi wei :20%ci lv suan na mie jun 30fen zhong ,mo wu ran ,gong yang mi hou tao he mao hua mi hou tao chong zi de fa ya lv fen bie wei 70.8%he 75%。gong yang mi hou tao ge wai zhi ti zai MS+0.2mg/L ZT+1.0mg/L 2,4-Dyu shang zu zhi you dao xiao guo zui hao ,chu xian yu shang kuai ,chu yu lv da 100%;yu shang zu zhi yan se wei huang bai se ,zhi de shu song ,yi yu jin hang yuan sheng zhi ti de zhi bei 。jiang mao hua mi hou tao de bu tong wai zhi ti jie chong zai shang shu zui jia yu shang zu zhi you dao pei yang ji shang ,ji jie guo yu gong yang mi hou tao ji ben xiang tong 。gong yang mi hou tao jing duan 、xie bing 、zi xie 、xia pei zhou de yu shang zu zhi zui jia zeng shi pei yang ji wei :N6+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA,zeng shi bei shu fen bie wei 7.83,6.27,5.75,8.17;xie pian yu shang zu zhi de zui jia zeng shi pei yang ji wei :N6+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,zeng shi bei shu wei 6.75;er jing jian ze wei N6+1.0 mg/L2,4-D+1.0 mg/L NAA,zeng shi bei shu wei 8.00。mao hua mi hou tao de yu shang zu zhi zeng shi pei yang ji yu gong yang mi hou tao ji ben yi zhi 。2.gong yang mi hou tao he mao hua mi hou tao yuan sheng zhi ti fen li yu chun hua 。dui bu tong wai zhi ti huo de de yu shang zu zhi jin hang yuan sheng zhi ti de fen li he chun hua jie guo biao ming :bu tong wai zhi ti lai yuan de yu shang zu zhi ,yi mei ye zu ge 2%qian wei su mei +0.5%li xi mei +1mmol/L CaCl2·2H2O+0.7mmol/Lgan lou chun mei jie ,yi ji CPW13-CPW25jie mian li xin fa chun hua de xiao guo zui hao ,ge yu shang zu zhi yuan sheng zhi ti chan liang zai 1.70×105-11.2×105ge /g FW,yuan sheng zhi ti de huo li zai 81.7%-92.3%。ji zhong ,gong yang mi hou tao yuan sheng zhi ti chan liang zui gao de shi jing duan yu shang zu zhi ,chan liang wei 11.2×105ge /g FW;yuan sheng zhi ti huo li wei 85.0%,huo li zui gao de shi xie pian yu shang zu zhi ,wei 92.3%。er mao hua mi hou tao er yuan sheng zhi ti chan liang zui gao de shi xia pei zhou yu shang zu zhi ,chan liang wei 9.5×105ge /g FW,yuan sheng zhi ti huo li wei 81.7%;huo li zui gao de shi jing jian yu shang zu zhi ,wei 89.7%。3.yuan sheng zhi ti pei yang fang fa yu fen lie 。dui bu tong wai zhi ti lai yuan de yuan sheng zhi ti jin hang bu tong pei yang fang fa he pei yang tiao jian de fen xi ,yan jiu fa xian ,gong yang mi hou tao yu mao hua mi hou tao zi di 7-12dkai shi yuan sheng zhi ti de di 1ci fen lie ,ju xie bing 、zi xie lai yuan de yuan sheng zhi ti de fen lie neng li gao yu ji ta ;dan zai bu tong tiao jian xia de fen lie pin lv jun jiao di ,bu tong wai zhi ti lai yuan de yuan sheng zhi ti pei yang 20dde fen lie pin lv wei 4.9-15.7%。ji zhong ,gong yang mi hou tao zi xie yu shang zu zhi yuan sheng zhi ti li yong ye ti jian ceng pei yang fang fa ,zai N6+1.0 mg/L 2,4-D+0.03 mg/L ZT+1.0%zhe tang +0.2 mol/Lpu tao tang +200mg/L CH+0.45mol/Lgan lou chun de pei yang ji shang ,pei yang mi du 5×104ge /ml,guang zhao jiang du 1500lx,guang zhao shi chang 16h,pei yang wen du 24℃shi xiao guo zui hao ,pei yang 7-8dkai shi fen lie ,20dhou ji fen lie pin lv da 15.7%,ju jin zai ci tiao jian xia guan cha dao yuan sheng zhi ti de di 2ci fen lie 。ge pei yang tiao jian xia ,chi xu ji dai pei yang 6ge yue hou ,wei fa xian chi xu fen lie de qing kuang 。mao hua mi hou tao xie pian yu shang zu zhi yuan sheng zhi ti yi ye ti jian ceng pei yang de fang fa ,yong N6+1.0mg/L 2,4-D+0.025mg/L ZT+1.0%zhe tang +0.2mol/Lpu tao tang +200mg/L CH+0.45mol/Lgan lou chun pei yang ji ,pei yang mi du 5×104ge /ml,guang zhao jiang du 1000lx,guang zhao shi jian 16h,pei yang wen du 26℃shi ,7dkai shi fen lie ,20dtong ji fen lie pin lv 13.4%,dan chi xu pei yang jin guan cha dao 2ci fen lie 。4.gong yang mi hou tao yu yan cao yuan sheng zhi ti fen lie li hua yin zi cha yi fen xi 。yan cao xie pian yu shang zu zhi lai yuan de yuan sheng zhi ti de fen lie neng li gao yu mi hou tao ,pei yang 14dde fen lie pin lv wei 67.9%,zhi ban lv wei 26.3%,pei yang 30dzuo you xing cheng rou yan ke jian de xiao xi bao tuan 。dui yan cao xie pian yu shang zu zhi he gong yang mi hou tao bu tong wai zhi ti lai yuan de yu shang zu zhi jie gou jin hang dan la qie pian fa xian ,yan cao yu shang 、gong yang mi hou tao xie bing 、zi xie yu shang zu zhi de xi bao pai lie jiao shu song ,jing jian 、xia pei zhou he xie pian yu shang zu zhi de xi bao pai lie jiao jin mi 。jie ge yuan sheng zhi ti pei yang jie guo ,fa xian yuan sheng zhi ti de sheng chang fen lie yu yu shang zu zhi de zhuang tai guan ji mi qie ,pai lie jiao wei shu song de yu shang zu zhi you li yu yuan sheng zhi ti de pei yang 。dui gong yang mi hou tao he yan cao yu shang zu zhi suo fen li de yuan sheng zhi ti pei yang 14dhou ,jin hang ji su han liang （IAA、ABA、ZR）、mei huo xing （POX、SOD）、ke rong xing dan bai han liang 、an ji suan han liang 、fen suan 、er an （fu an he shi an ）he duo an （jing an he ya jing an ）deng li hua zhi biao ce ding fa xian ,dui yu nei yuan ji su ZR、IAAhe ABAde han liang ,ge can shi cai liao nei yuan ji su ZR、IAAhe ABAde han liang cheng xian jing jian >xie bing >zi xie >jing duan >xie pian >yan cao >xia pei zhou de qu shi ;ju suo you cai liao de ABAhan liang zui gao ,er ZRyu IAAde zhi liang bi wei chi zai 2.64-2.85zhi jian ,mei you xian zhe xing cha yi 。yan cao de SOD、POXhuo xing 、ke rong xing dan bai han liang 、zong an ji suan han liang jun xian zhe gao yu mi hou tao de ge chong cai liao ,fen bie shi mi hou tao han liang de 1.3-16、2.0-4.5、1.7-3.0、1.6-2.4bei ,ju gan an suan jin zai yan cao zhong jian chu 。gong yang mi hou tao chu xia pei zhou de fen suan han liang bi yan cao gao zhi wai ,ji yu cai liao bi yan cao di 1.1-2.9bei 。gong yang mi hou tao de an lei zong liang jun xian zhe gao yu yan cao 。wei ci ,bi zhe tui ce yan cao yuan sheng zhi ti fen lie zhong ,SODhuo xing 、ke rong xing dan bai han liang he an ji suan han liang gao ,shui ming ji qing chu zi you ji de neng li jiao jiang ,ju shen tou diao jie he sheng chang fen lie suo xu dan bai zhi ge cheng neng li deng jun jiao gong yang mi hou tao hao ;er yan cao de POXhuo xing gao 、fen suan han liang ye jiao gao ,shui ming yan cao fen lie wang cheng ,chan sheng de fen suan lei jiao duo ,er POXde huo xing jiang ,neng jiao kuai qing chu zi you ji he fen suan lei ,cong er dui yuan sheng zhi ti shang hai jiao xiao 。zhe xie ke neng shi dao zhi yan cao he gong yang mi hou tao yuan sheng zhi ti fen lie chu xian cha yi de chong yao yuan yin 。5.wei le di gao gong yang mi hou tao yuan sheng zhi ti pei yang zhong de zi you ji qing chu he kang yang hua neng li ,ben yan jiu zai shang shu huo de de you hua pei yang fang an xia ,zai e wai tian jia 20mg/Lye ru ,yi ji bu tong nong du PVP、gan an suan 、Vc、hai yuan xing gu guang gan tai （GSH）deng zi you ji qing chu he kang yang hua ji de pei yang ji shang pei yang 。jie guo biao ming ,yi 0.05mol/Lde gan an suan chu li xiao guo zui hao ,yuan sheng zhi ti fen lie pin lv da 20.1%,bi bu jia ru kang yang hua ji de shu zhi （15.7）di gao le 1.3bei ,zhi ban lv you 2.3di gao dao 2.9.zeng chang le 1.3bei 。7dkai shi fen lie ,pei yang 60dhou guan cha dao xiao xi bao tuan 。dan wei neng de dao zai sheng zhi zhu ,ji zai sheng tiao jian shang xu jin yi bu you hua 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西南大学的王明明，发表于刊物西南大学2019-09-24论文，是一篇关于猕猴桃论文,愈伤组织论文,原生质体培养论文,分裂论文,理化因子论文,西南大学2019-09-24论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西南大学2019-09-24论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。