导读:本文包含了突变人论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:转基因,α-突触核蛋白,帕金森病,突变
突变人论文文献综述
张丽,陈炜,张旭,孙秀萍,杨亚军[1]（2013）在《携带A53T突变人α突触核蛋白转基因帕金森病大鼠模型的建立》一文中研究指出目的大鼠在神经系统疾病模型方面比小鼠有更好的表现,建立人α-syn A53T突变型转基因大鼠模型,为研究帕金森病发病提供更优良的疾病模型。方法构建人α-syn A53T表达载体,显微注射法制备转基因大鼠。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人α-syn蛋白的表达。免疫组化和免疫荧光观察中脑黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目变化,观察人α-syn蛋白在转基因大鼠黑质神经元中的表达和分布。Rotating rod实验和步态分析系统评价转基因大鼠的行为学改变。结果获得1个α-syn A53T高表达且可以稳定传代的转基因大鼠品系。转基因大鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目减少69%(P<0.05),残存神经元胞浆中有大量的α-syn蛋白聚集。转基因大鼠在滚轴上保持平衡的时间显着减少40%~60%(P<0.05),并表现出步态障碍如步宽加大、摆动期缩短和足迹最大接触面积减小等。结论建立了人α-syn A53T突变型转基因的帕金森病大鼠模型。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2013年10期）
刘丽,张洪红,王振东,段炼,孙瑞珍[2]（2013）在《表达突变人TDP-43建立小鼠肌萎缩侧索硬化症模型》一文中研究指出肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种神经退行性疾病,其临床特征为运动神经元进程行退化和缺失,最终发展为瘫痪或死亡。TDRDNA结合蛋白43(TDP-43)是ALS的病理学标志蛋白,其突变体与家族型和散发型ALS中均有关联。为了研究TDP-43在ALS中的作用机理,我们制作了在脊髓运动神经元特异表达突变的人类TDP-43的ALS小鼠模型。该转(本文来源于《中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编》期刊2013-08-02）
王参军,邹文艺,张玲,范清林,宋礼华[3]（2010）在《突变人干扰素-α2b基因5′端提高其在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出目的对人干扰素-α2b(hIFN-α2b)基因的5′端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平。方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5′端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b′,克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性。结果SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Western blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108IU/mg,与未突变工程菌一致。结论突变hIFN-α2b基因5′端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2010年02期）
王参军[4]（2010）在《5'端突变人干扰素-α2b基因在大肠杆菌BL21中的高效表达》一文中研究指出目的定点突变人干扰素-α2b(hIFN-α2b)基因的5’端序列,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达载体pJW2-rhIFN-α2b',转化至大肠杆菌DH5α, BL21, Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞,分析不同宿主菌对其表达量的影响,经SDS-PAGE, Western blot鉴定获得重组人干扰素-α2b的高表达工程菌pJW2-rhIFN-α2b'/BL21。方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5’端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b',克隆至pUC19,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,蓝-白斑筛选及测序验证正确,将rhIFN-α2b'克隆至温控型表达载体pJW2, NdeⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR验证正确后,分别将pJW2-rhIFN-α2b和pJW2-rhIFN-α2b'转化至大肠杆菌DH5α, BL21, Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞,30℃过夜培养,42℃温度诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析宿主菌DH5α, BL21, Rosetta-gami B(DE3)对目的蛋白表达的影响进而选择大肠杆菌BL21为其宿主菌;挑取pJW2-rhIFN-α2b'/BL21单菌落,30℃过夜培养,42℃温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE, Western blot鉴定分析并以WISH细胞-VSV病毒系统的细胞病变抑制法(CPE)测定表达蛋白的抗病毒活性及其效价。结果NdeⅠ/BamHⅠ双酶切、PCR验证及测序结果证实pJW2-rhIFN-α2b'构建成功;SDS-PAGE分析表明pJW2-rhIFN-α2b'(BL21)比pJW2-rhIFN-α2b'(DH5α), pJW2-rhIFN-α2b'(Rosetta-gami B(DE3))的hIFN-α2b表达量高;SDS-PAGE分析表明pJW2-rhIFN-α2b'/BL21表达的rhIFN-α2b约占菌体总蛋白23.6%,Western blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,纯化的rhIFN-α2b经WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108 IU/mg。结论成功构建出5’端突变的rhIFN-α2b原核高表达工程菌pJW2-rhIFN-α2b'(BL21),可提高其在大肠杆菌中的表达水平。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2010-04-01）
张丽,高美华[5]（2009）在《突变人CD59分子抗MAC沉积在糖尿病血管病中的作用》一文中研究指出目的:研究糖化人突变(HM)CD59作为补体攻膜复合体(MAC)抑制物在糖尿病血管病病理机制中的重要作用。方法:构建2种HMCD59重组质粒,转染CHO细胞;FCM、Western blot筛选高表达细胞。糖化,BCECF释放试验测定糖化HMCD59和糖化HNCD59抗补体活性。ELISA测定30例糖尿病无血管病变组和30例Ⅱ型糖尿病血管病组血清PDGF-BB、VEGF含量。结果:筛选细胞株表达率分别为59.8%、53.7%、54.5%;BCECF释放试验显示糖化前转染突变CD59细胞比较糖化后细胞染料释放率低(P<0.01);而正常CD59细胞比较糖化后细胞染料释放率无统计学意义。Ⅱ型糖尿病有血管病变组与糖尿病无血管病变组相比,血清PDGF-BB、VEGF明显增高(P<0.01)。结论:证实HMCD59易糖化抗补体活性下降加速糖尿病血管病的发生发展。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2009年09期）
李将辉[6]（2009）在《我们都是突变人》一文中研究指出本报讯 我们长久以来已经知道我们每个人都会偶尔发生突变，但是一直需要猜测究竟突变率是多少。由16位科学家组成的一个国际研究组日前发布的一份报告显示，这个研究组对来自分离了13个世代的两位男性的Y染色体上的同一段DNA——大约一千万核苷酸——进行了测序。他(本文来源于《人民政协报》期刊2009-09-03）
王琳琳[7]（2006）在《定点突变人源化含硒单链抗体酶》一文中研究指出谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是生物体内抗氧化酶系的重要成员之一,它利用硒代半胱氨酸(Sec)作为催化官能团,通过谷胱甘肽(GSH)催化还原氢过氧化物,从而保护细胞免遭氧化损伤,因此,它作为抗氧化剂具有广泛的药用价值。但由于天然GPX来源有限、纯化困难和难于用DNA重组技术生产等不利因素,制备具有高GPX活力的人工模拟酶具有很高的实用价值。我们实验室将利用蛋白质工程法制备的鼠源单链抗体进行改型,构建了人—鼠嵌合的人源化单链抗体库,通过噬菌体抗体库的筛选获得了ELISA信号较高的噬菌体阳性克隆B14,通过PCR方法扩增目的基因并将其克隆至表达载体pPelB中,在E.coli.Rosetta中进行蛋白的表达,对表达蛋白进行纯化及鉴定,然后用化学突变法引入催化基团硒代半胱氨酸(Sec),结果表明其GPX活力为880 U/μmol,较鼠源单链抗体的GPX酶活力低很多。提取质粒经DNA测序结果表明,有3个核苷酸与设计的位点不同,分别改变了位于VL区Gln27、Val90和VH区Lys13,分析其较低的GPX活力应该是由于DNA序列发生了改变,使scfv的空间构象发生了改变,才导致GPX酶活力不高。本文通过重迭PCR法进行定点突变修正错配碱基,序列测定表明获得了DNA顺序正确的人源化单链抗体,用PCR法扩增出目的基因,然后首先将其亚克隆至pGEM-TEasy载体中,蓝白斑筛选获得阳性克隆后用酶切法和序列测定验证阳性,再用PCR法扩增出目的基因,克隆至表达载体pPelB中,经双酶切和序列测定鉴定阳性克隆后,将其转化入E.coli Rosetta、C43、JM 109和BL21(DE3)中确定最佳表达菌株为E.coli Rosetta,然后通过对菌体浓度、诱导物IPTG浓度、诱导温度和诱导时间4因素2水平的正交实验确定目的蛋白表达的最佳条件,对表达的蛋白用CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换树脂和Ni2+金属离子层析树脂进行纯化后,用Western-blot验证纯化蛋白,经化学突变引入催化基团—Sec,获得的硒化单链抗体的GPX活力是1680 U/μmol,是突变前硒化单链抗体的GPX活力的2倍。(本文来源于《吉林大学》期刊2006-05-01）
马莉,白泉,王骊丽,耿信笃[8]（2006）在《突变人GM-CSF基因在大肠杆菌中的表达及纯化》一文中研究指出目的构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的高效表达质粒,将其表达产物用于分离纯化的研究。方法用人外周血单核细胞获得总RNA作为模板和修饰的5′端密码子的引物经RT-PCR反应扩增到人GM-CSF基因,插入温控表达载体pDH构建了突变的hGM-CSF表达质粒,并将在E.coli中获得表达的突变rhGM-CSF包含体8 mol/L脲提取液进一步用离子交换色谱柱分离纯化。结果rhGM-CSF在大肠杆菌表达占菌体总蛋白量的22%,用弱阴离子交换色谱对rhGM-CSF的工程菌表达产物8 mol/L脲提取液直接经35 m in分离纯化,所得产物纯度可达95%,质量回收率可达到60%。结论这表明用离子交换色谱可进行rhGM-CSF的复性与同时纯化。(本文来源于《西北大学学报(自然科学版)》期刊2006年01期）
任书荣,高美华[9]（2006）在《突变人CD59分子糖基化前后抗补体活性的变化》一文中研究指出目的探讨2种突变CD59分子(HM3、HM4)糖基化前后抗补体活性的变化,为糖尿病血管增殖的发生机制提供理论基础。方法采用重组聚合酶链反应定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点“41位赖氨酸—44位组氨酸”将44位的组氨酸基因位置改变,构建2种不同的CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞。G418筛选稳定转染细胞克隆,免疫标记技术检测筛选突变CD59基因蛋白高表达株。染料释放实验检测突变CD59分子糖基化前后抗补体活性。结果序列测定及酶切鉴定均证实成功构建了pALTER-突变CD59重组真核表达载体系统。经酶免疫组织化学、荧光免疫组织化学和流式细胞术鉴定出较高表达突变CD59分子的阳性细胞克隆。免疫印迹技术检测出阳性细胞克隆裂解液中有1条相对分子质量约20 000的CD59蛋白表达带。染料释放实验初步证实突变CD59分子具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低。结论2种突变CD59分子均具有抗补体活性,高糖环境下易被糖基化,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖的发生机制提供了线索。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2006年01期）
任书荣,高美华[10]（2005）在《突变人CD59分子真核表达体系的构建和功能的初步研究》一文中研究指出构建突变人CD59分子(HMCD59)真核表达体系,探讨HMCD59糖基化前后抗补体活性的变化。采用重组PCR定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点构建CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。G418压力筛选稳定转染细胞克隆,检测筛选HMCD59蛋白高表达株。免疫印迹技术(Western blot)检测出HMCD59蛋白分子量约为20kDa。2,7-二羧乙基-5,6羧基荧光素(BCECF)释放实验初步证实HMCD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖症的发生机制提供了线索。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2005年08期）
突变人论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种神经退行性疾病,其临床特征为运动神经元进程行退化和缺失,最终发展为瘫痪或死亡。TDRDNA结合蛋白43(TDP-43)是ALS的病理学标志蛋白,其突变体与家族型和散发型ALS中均有关联。为了研究TDP-43在ALS中的作用机理,我们制作了在脊髓运动神经元特异表达突变的人类TDP-43的ALS小鼠模型。该转
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
突变人论文参考文献
[1].张丽,陈炜,张旭,孙秀萍,杨亚军.携带A53T突变人α突触核蛋白转基因帕金森病大鼠模型的建立[J].中国比较医学杂志.2013
[2].刘丽,张洪红,王振东,段炼,孙瑞珍.表达突变人TDP-43建立小鼠肌萎缩侧索硬化症模型[C].中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编.2013
[3].王参军,邹文艺,张玲,范清林,宋礼华.突变人干扰素-α2b基因5′端提高其在大肠杆菌中的表达[J].安徽医科大学学报.2010
[4].王参军.5'端突变人干扰素-α2b基因在大肠杆菌BL21中的高效表达[D].安徽医科大学.2010
[5].张丽,高美华.突变人CD59分子抗MAC沉积在糖尿病血管病中的作用[J].细胞与分子免疫学杂志.2009
[6].李将辉.我们都是突变人[N].人民政协报.2009
[7].王琳琳.定点突变人源化含硒单链抗体酶[D].吉林大学.2006
[8].马莉,白泉,王骊丽,耿信笃.突变人GM-CSF基因在大肠杆菌中的表达及纯化[J].西北大学学报(自然科学版).2006
[9].任书荣,高美华.突变人CD59分子糖基化前后抗补体活性的变化[J].中国动脉硬化杂志.2006
[10].任书荣,高美华.突变人CD59分子真核表达体系的构建和功能的初步研究[J].中国生物工程杂志.2005