导读:本文包含了双荧光素酶检测论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:萤火虫荧光素酶,凋亡,Caspase-3
双荧光素酶检测论文文献综述
车路平,栗永华,杨斌,徐智凯,廖瑛[1]（2019）在《基于萤火虫荧光素酶报告基因检测凋亡的系统构建及鉴定》一文中研究指出为构建一个能够快速检测凋亡的含荧光素酶报告基因(Fluc)的真核表达质粒,采用PCR的方法将Caspase-3的识别基序Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)四个氨基酸引入至Fluc基因的C端和N端之间;同时选取Asp-Glu-Val-Gly (DEVG)四个氨基酸作为阴性对照。随后重组片段分别克隆至分离型内含肽的N端和C端之间,并命名为pFluc-DEVD和pFluc-DEVG。将该表达质粒与海肾荧光素酶报告质粒(RLUC)同时转染至HeLa细胞,通过双荧光素酶报告基因和Western blotting实验检测细胞凋亡水平。双荧光素酶报告基因系统实验结果显示,当发生凋亡时,pFluc-DEVD质粒组表达的萤火虫荧光素酶的含量高出pFluc-DEVG质粒组约3倍。Western blotting检测结果显示,转染pFluc-DEVD质粒的细胞在凋亡药物刺激后,Fluc活化的蛋白显着增多,且Caspase-3的活化程度与Fluc的表达呈正相关,并有显着的统计学差异。以上结果表明,pFluc-DEVD真核表达质粒表达的萤火虫荧光素酶蛋白能被细胞内的Caspase-3酶裂解,且该质粒能够精确地反映出细胞的凋亡水平,为后续进行凋亡定量检测提供了一个可借鉴的方法。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年08期）
王天禹,芜为,邓瑶,王文玲,谭文杰[2]（2019）在《基于寨卡病毒NS2B蛋白特异抗原多肽的荧光素酶免疫吸附法检测寨卡病毒抗体》一文中研究指出目前国内外针对寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的研究多集中于E蛋白与NS1蛋白,而对于其他非结构蛋白的研究则相对较少。为了进一步了解ZIKV感染免疫机制,为ZIKV免疫学检测和流行病学研究提供新的工具方法,本研究建立了基于NS2B蛋白多肽抗原荧光素酶免疫吸附试验(Luciferase immunosorbent assay,LISA)的新方法,应用于检测抗ZIKV IgG抗体(anti-ZIKV IgG)。通过构建NS2B蛋白特异性多肽抗原与新型荧光素酶融合表达的载体,转染真核细胞后获得含有目标抗原与荧光素酶融合蛋白的细胞裂解物,建立anti-ZIKV IgG检测的LISA法。采用正常人血清、ZIKV感染的阳性血清、乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染阳性血清,登革病毒(Dengue virus,DENV)感染阳性血清,评价该方法的特异性、灵敏度与重复性及交叉反应,并与基于NS1纯化抗原的商业化ELISA试剂盒(NS1-ELISA)进行平行比较。成功建立的NS2B-LISA方法,检测灵敏度和特异度分别为92%和96.2%,通过阳性样本倍比稀释评价两种检测方法灵敏度,NS2B-LISA的灵敏度比NS1-ELISA高16倍。重复性实验显示NS2B-LISA法检测anti-ZIKV IgG板间变异系数为(3.1±0.7)%,板内变异系数为(2.6±0.9)%。本研究基于NS2B蛋白多肽抗原成功建立了anti-ZIKV IgG检测的LISA新方法,该方法简便、特异、灵敏、重复性好,易于高通量自动化,可用于anti-ZIKV IgG感染的免疫学诊断与流行病学研究。(本文来源于《病毒学报》期刊2019年03期）
余倩,张玉宇,张曾娣,朱伟云,黄赞[3]（2019）在《荧光素酶报告系统检测大肠杆菌代谢产物调控STC-1细胞表达胆囊收缩素研究》一文中研究指出[目的]本文旨在筛选出可调控肠道Ⅰ细胞表达胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的大肠杆菌代谢物,建立可方便检测CCK表达的STC-1细胞模型。[方法]利用分子克隆技术构建含有CCK启动子调控荧光素酶的慢病毒载体,包装慢病毒并感染STC-1细胞,获得STC-1/CCK-Luc细胞系。用大肠杆菌基因敲除株培养液上清处理上述细胞,检测荧光素酶活性,确定可影响CCK表达的大肠杆菌基因及代谢产物。使用纯化的代谢产物处理STC-1细胞及肠道类器官,通过Western blot及免疫荧光法检测CCK表达水平的变化。[结果]酶切鉴定及DNA测序表明慢病毒载体构建成功,荧光素酶活性检测发现大肠杆菌ΔSapD株菌液上清可显着抑制荧光素酶的表达。敲除SapD基因可以使培养液中腐胺水平下降,而腐胺可以上调STC-1细胞及肠道类器官中CCK的表达。[结论]成功构建了能够体外检测CCK表达的细胞系,筛选出1个能够调控CCK表达的大肠杆菌突变体。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2019年06期）
王自强,王灿,董闪闪,邵泓,陈钢[4]（2018）在《利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性》一文中研究指出目的:利用sis诱导元素(sis-inducible element,SIE)转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6(IL-6)受体拮抗剂的生物活性。方法:采用脂质体转染法将含有SIE转录因子组件及荧光素酶报告基因的质粒pGL 4.47转入293T细胞,并通过潮霉素压力筛选获得稳定转染细胞株。加入IL-6激活稳转细胞株中的荧光素酶报告基因,构建SIE转录活性荧光素酶报告基因系统,并进一步建立基于此系统的IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性定量检测方法。结果:IL-6可激活293T-SIE稳定转染细胞中的荧光素酶报告基因,且具有量效关系。对此系统检测IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性进行方法学验证,显示本检测方法准确性及重复性均较好。结论:建立了一种基于荧光素酶报告基因系统的IL-6受体拮抗剂药物生物学活性检测方法,与现有方法相比,具有耗时少、准确性高、重复性好的优势。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2018年10期）
马慧,宋博宇,张嵩岩,谢群慧,徐丽[5]（2018）在《基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测法的发展与应用》一文中研究指出二英类生物检测法在大规模二英类筛查中具有重要的应用价值.其中,基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测技术,是依据二英类化合物通过结合芳香烃受体从而引发一系列毒理效应的生物过程而设计的,具有灵敏度高、应用范围广、与毒理效应相关性强的特点.最新研究进展表明,该类技术可检测到的2,3,7,8-TCDD标准物质的最低浓度达到了0.1 pM,可应用于农业、食品、环境等领域的多种样品中痕量二英类化合物的筛查,在政府管理部门、第叁方检测咨询机构及相关企业等方面具有广阔的应用和推广前景,同时,该方法在环境健康风险评估和相关基础研究中有更广阔的发展空间.本文着重介绍了基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测法——CALUX生物检测法的原理、发展进程、应用现状和标准化的方法体系并对CALUX法的优缺点进行总结及之后的发展进行展望.(本文来源于《中国科学:化学》期刊2018年10期）
张凤兰,李江[6]（2018）在《牙槽骨再生关键基因—FGFR1启动子荧光素酶报告基因的重组与功能检测》一文中研究指出目的:本实验选择调控牙槽骨再生的关键基因--碱性成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)作为靶向,构建FGFR1启动子的分子细胞模型,研究雌二醇及其促进剂对FGFR1启动子的调节作用,从而为临床应用雌二醇及促进剂治疗牙槽骨再生提供理论支持。(本文来源于《第十二次全国口腔修复学学术会议论文汇编》期刊2018-07-22）
张文影,李巍,吴赵斌,苏中静[7]（2018）在《双荧光素酶报告基因检测斑马鱼c-Myb与lect2l的靶标关系》一文中研究指出目的:构建斑马鱼lect2l基因启动子双荧光报告基因系统,研究lect2l是否是受c-Myb蛋白特异性调控的靶基因。方法:采用PCR方法克隆斑马鱼lect2l基因启动子序列,构建重组荧光素酶报告基因载体pGL4.20-lect2lp,并采用阳离子脂质体法将其与c-myb表达载体及pRL-CMV内参质粒共转染293T细胞,使用化学发光仪检测荧光强度并计算比值。结果:电泳显示酶切条带符合斑马鱼lect2l基因启动子序列长度,构建的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4.20-lect2lp荧光素酶活性的表达是对照组的30.34倍。结论:斑马鱼lect2l基因启动子驱动的荧光素酶表达载体pGL4.20-lect2lp构建成功,双荧光素酶报告基因系统提示斑马鱼c-Myb蛋白对lect2l基因有转录激活作用。(本文来源于《汕头大学医学院学报》期刊2018年02期）
高全新,刘云霞,程玉强,严亚贤,孙建和[8]（2018）在《鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测》一文中研究指出通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素酶活性。结果表明:包含鸭IFN-β启动子全长的报告质粒p GL-IFN-β-1593能够有效地被相应刺激物激活;截短研究表明,包含390 bp鸭IFN-β启动子的报告质粒p GL-IFN-β-453的荧光素酶活性与全长基本一致,且一定程度上可降低冗余碱基的不良影响,因此选取该质粒用于鸭IFN-β启动子活性检测。本研究建立的基于荧光素酶双报告基因系统的鸭IFN-β启动子活性检测方法,为后续鸭IFN-β通路研究提供了检测工具。(本文来源于《上海农业学报》期刊2018年03期）
余婷玉[9]（2018）在《穿膜肽标记的荧光素酶的构建及其在肿瘤体外药敏检测中的应用》一文中研究指出目的:随着肿瘤发病率的不断上升,恶性肿瘤已成为危害人类生命和健康的常见病及多发病,对人类的生存构成了严重威胁。但临床上肿瘤患者的化疗仍存在着明显的个体差异,不同个体肿瘤组织对同一化疗药物或化疗方案反应性不同,即使同一病理类型及分期的肿瘤患者对同一化疗方案的敏感性也有一定差异。故肿瘤化疗疗效仍不理想。因此如何在患者化疗前检测出该患者肿瘤细胞对药物的敏感性,筛选相对有效抗肿瘤药物,避免化疗的盲目性及不必要的不良反应成为有效提高肿瘤化疗疗效的关键。其中对细胞内叁磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的分析可以揭示细胞对不同治疗方法的反应,对于个体化医疗很重要。在本研究中,我们研发了细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)标记的荧光素酶(TAT-LUC)用于体外肿瘤细胞化疗敏感性测定。方法:1、利用引物(TAT-LUC)以含荧光素酶的质粒为模板PCR钓取基因,构建原核基因表达载体pET28a-TAT-LUC,转化BL21(DE3)后经IPTG诱导表达目的蛋白。2、利用镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白TAT-LUC。使用ATP标准溶液和肿瘤细胞评估重组蛋白的活性。另外在肿瘤细胞内ATP的检测中,利用动力学研究测定TAT-LUC进入细胞的最佳孵育时间。将未用穿膜肽标记的荧光素酶(LUC)测定细胞内和细胞外的ATP含量;同时,用传统的荧光素-荧光素酶法测定细胞裂解后释放出的细胞内ATP含量。将上述两种方法做对比进一步评估TAT-LUC的敏感性和可靠性。3、利用TAT-LUC检测四种肿瘤细胞(Skov-3/DDP,A549/DDP,MDA-MB-231,Huh-7)的体外化疗药物敏感性。同时与MTT检测法比较,评估TAT-LUC方法的检测性能。成果:1、成功构建含有穿膜肽标记的荧光素酶基因的重组质粒pET28a-TAT-LUC,同时目的蛋白TAT-LUC在BL21(DE3)中表达成功。并且在含Mg~(2+)浓度为50 mM的LB培养基中将大肠杆菌培养至OD600为0.6时加入终浓度为0.5 mM的IPTG,22℃诱导16 h可获得大量高活性的TAT-LUC。2、用于表达TAT-LUC的表达载体pET28a含有六个组氨酸标签,利用该特点采用了Ni-NTA柱纯化目标蛋白的方法从经IPTG诱导后重组大肠杆菌中纯化出目的蛋白TAT-LUC。对于游离的ATP的测定,相比LUC(R~2=0.993),TAT-LUC在整个ATP浓度范围内的发光强度相对较低但TAT-LUC的灵敏度仍足以检测小于10 nM的ATP并且与ATP浓度成强相关性(R~2=0.994)。对于细胞内ATP的测定,用LUC处理测得的发光强度显着低于TAT-LUC。TAT-LUC在加入培养基2 min后可以进入肿瘤细胞,其活性与细胞数量成正相关(R~2=0.997)。另外,传统的荧光素-荧光素法酶测定裂解细胞后提取的ATP能够最低检测100个细胞(R~2=0.996),并且在整个细胞数量范围内传统的荧光素-荧光素酶测定法发光强度相对较低。相比之下,TAT-LUC可以检测至少40个细胞的细胞内ATP。结果表明TAT-LUC对于活细胞内ATP的测量是一个可靠和敏感的工具。3、TAT-LUC成功检测了4种肿瘤细胞(Skov-3/DDP,A549/DDP,MDA-MB-231,Huh-7)的化疗药物敏感性,并且通过与MTT法检测的化疗药物敏感性检测结果进行对比,证明了TAT-LUC法的可靠性。结论:成功创建了一种融合蛋白即穿膜肽标记的荧光素酶TAT-LUC。与LUC相比,TAT-LUC能够穿透细胞膜进入细胞。TAT-LUC方法具有很好的灵敏度,可以检测低至10 nM的ATP或40个肿瘤细胞。TAT-LUC法进一步分析了四种肿瘤细胞(Skov-3/DDP,A549/DDP,MDA-MB-231,Huh-7)的化疗药物敏感性,证明其对于肿瘤体外药敏检测的可靠性和敏感性。TAT-LUC法最大的优点是可以快速直接测量活细胞内的ATP含量而无需裂解细胞,避免因细胞裂解造成潜在的ATP降解及丢失。单个或很少的肿瘤标本也可用于药物敏感性检测,大大提高了检测速度。此外,TAT-LUC可实时反映肿瘤的耐药性,提高检测效率,有利于癌症化疗个性化的实现。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2018-04-01）
黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君[10]（2018）在《人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测》一文中研究指出目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测。方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段,将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,然后进行转化、菌落PCR及测序验证等。将构建成功的pGL3-proDNMT1-luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性。结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段,并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体,启动子具有活性。结论:DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础。(本文来源于《皖南医学院学报》期刊2018年01期）
双荧光素酶检测论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目前国内外针对寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的研究多集中于E蛋白与NS1蛋白,而对于其他非结构蛋白的研究则相对较少。为了进一步了解ZIKV感染免疫机制,为ZIKV免疫学检测和流行病学研究提供新的工具方法,本研究建立了基于NS2B蛋白多肽抗原荧光素酶免疫吸附试验(Luciferase immunosorbent assay,LISA)的新方法,应用于检测抗ZIKV IgG抗体(anti-ZIKV IgG)。通过构建NS2B蛋白特异性多肽抗原与新型荧光素酶融合表达的载体,转染真核细胞后获得含有目标抗原与荧光素酶融合蛋白的细胞裂解物,建立anti-ZIKV IgG检测的LISA法。采用正常人血清、ZIKV感染的阳性血清、乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染阳性血清,登革病毒(Dengue virus,DENV)感染阳性血清,评价该方法的特异性、灵敏度与重复性及交叉反应,并与基于NS1纯化抗原的商业化ELISA试剂盒(NS1-ELISA)进行平行比较。成功建立的NS2B-LISA方法,检测灵敏度和特异度分别为92%和96.2%,通过阳性样本倍比稀释评价两种检测方法灵敏度,NS2B-LISA的灵敏度比NS1-ELISA高16倍。重复性实验显示NS2B-LISA法检测anti-ZIKV IgG板间变异系数为(3.1±0.7)%,板内变异系数为(2.6±0.9)%。本研究基于NS2B蛋白多肽抗原成功建立了anti-ZIKV IgG检测的LISA新方法,该方法简便、特异、灵敏、重复性好,易于高通量自动化,可用于anti-ZIKV IgG感染的免疫学诊断与流行病学研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双荧光素酶检测论文参考文献
[1].车路平,栗永华,杨斌,徐智凯,廖瑛.基于萤火虫荧光素酶报告基因检测凋亡的系统构建及鉴定[J].生物工程学报.2019
[2].王天禹,芜为,邓瑶,王文玲,谭文杰.基于寨卡病毒NS2B蛋白特异抗原多肽的荧光素酶免疫吸附法检测寨卡病毒抗体[J].病毒学报.2019
[3].余倩,张玉宇,张曾娣,朱伟云,黄赞.荧光素酶报告系统检测大肠杆菌代谢产物调控STC-1细胞表达胆囊收缩素研究[J].南京农业大学学报.2019
[4].王自强,王灿,董闪闪,邵泓,陈钢.利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6受体拮抗剂的生物活性[J].药物分析杂志.2018
[5].马慧,宋博宇,张嵩岩,谢群慧,徐丽.基于荧光素酶报告基因的二英类生物检测法的发展与应用[J].中国科学:化学.2018
[6].张凤兰,李江.牙槽骨再生关键基因—FGFR1启动子荧光素酶报告基因的重组与功能检测[C].第十二次全国口腔修复学学术会议论文汇编.2018
[7].张文影,李巍,吴赵斌,苏中静.双荧光素酶报告基因检测斑马鱼c-Myb与lect2l的靶标关系[J].汕头大学医学院学报.2018
[8].高全新,刘云霞,程玉强,严亚贤,孙建和.鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测[J].上海农业学报.2018
[9].余婷玉.穿膜肽标记的荧光素酶的构建及其在肿瘤体外药敏检测中的应用[D].广州中医药大学.2018
[10].黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君.人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J].皖南医学院学报.2018