导读:本文包含了枯草杆菌表达系统论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:纳豆激酶,枯草芽孢杆菌,表达系统,基因敲除
枯草杆菌表达系统论文文献综述
李智[1]（2016）在《新型枯草杆菌基因敲除和表达系统的构建与纳豆激酶基因的克隆》一文中研究指出纳豆激酶(Nattokinase,NK)是一种早在1987年就由日本的Sumi H科学家在纳豆中发现的碱性丝氨酸蛋白酶,而纳豆是由枯草芽孢杆菌发酵而成的,该产品被誉为“超级健康食品”,是21世纪受众人追捧的营养健康食品。该产品在食品及医药领域的价值极为突出。纳豆激酶对缓解心脑血管类病症,降低血粘度,降血压,降血脂,预防骨质疏松及糖尿病,及对木制纤维和皮毛的降纤作用等方面都有非常显着的效果。为此,针对其进行进一步探索研究,对保健类药物及保健食品的开发具有重要意义。但是目前就我们所知,尽管一直以来它的作用功效一直被大众所追捧,但是在表达水平上仍然有待进一步提高,在底物特异性和活性等方向上也需要进一步优化。本研究采用缺失蛋白酶的WB800枯草芽孢杆菌菌株作为表达菌株,进行纳豆激酶的克隆和表达。该菌株能有效的缓解了以往枯草芽孢杆菌菌株表达产物易于被蛋白酶降解的不足。为了实现纳豆激酶基因在枯草芽孢杆菌基因组中的融合表达,本研究还成功的构建了Knock plasmidnew质粒载体,该载体可以同时满足枯草芽孢杆菌中基因敲入和敲除的需要。利用该质粒通过线性化DNA的胞内同源重组,可有效避免以往基因敲入敲除过程中需要反复构建质粒的复杂操作,可以使操作步骤更加简便化。另外,现有的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒只能够在大肠杆菌中进行复制,然后再在枯草芽孢杆菌中进行表达。但是在构建随机突变库进行高通量筛选的过程中,这一穿梭系统显然效率很低。如果能够在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中同时进行表达,则可以显着减少工作量,而且对酶的定向进化和蛋白突变库的筛选尤为重要。因此,本研究中我们致力于双表达质粒载体pSHUTTLE-1-NATTO的构建工作。该质粒具有大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的复制子,并设计了分别能在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中作用的启动子。此外,对质粒中核糖体识别位点(RBS)进行了改造,使得该RBS兼具大肠杆菌和枯草芽孢杆菌RBS的基本特征。基于以上特点,新构建的重组质粒可能实现在两个菌中都能够蛋白表达。同时,本文还针对纳豆激酶进行了生物信息学分析。上述研究,为纳豆激酶的基因的高效表达,分子定向改造和深入研究奠定了基础。此外,我们对现有的枯草芽孢杆菌基因提取方法进行了改进,建立起了一种更加简便,快速,高效的方法。为了检测该方法的使用范围,我们还将该方法应用于菠菜、鱼和其它微生物总DNA的提取,发现该方法同样有效。所提取的DNA具有产量高、品质好、无污染等优点,而且提取速度和简便程度显着优于以往的其它方法。据了解,目前还没有植物、动物和微生物细胞DNA提取的通用方法,因此本方法的建立不仅为本研究奠定了基础,也为相关研究提供了有益的参考。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2016-06-01）
张晓舟[2]（2006）在《枯草杆菌新型表达系统和遗传操作体系的建立及应用》一文中研究指出枯草杆菌由于具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础，是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白较理想的宿主。但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的重组表达质粒不太稳定等因素影响，其应用受到一定的限制。近年来，随着分子生物学和基因工程的发展，枯草芽孢杆菌作为基因工程表达系统发展迅速，并展现出良好的应用前景。本文旨在建立一套枯草杆菌高效表达和分泌系统，实现甲基对硫磷水解酶基因mpd在枯草杆菌中的高效表达和分泌，以解决其在原始菌株中表达存在的一些问题；同时本文亦对枯草杆菌同源重组和载体转化等遗传操作体系进行了一些探索性研究。 以mpd基因为报告基因，构建了一个新型的方便而高效的启动子探针pUC-mpd。构建了枯草杆菌168的基因组DNA的启动子文库，利用启动子探针从文库中克隆了一系列启动子功能片段并比较了其在大肠杆菌中的启动子强度，得到了两个克隆有强启动子片段的克隆pMPDP3和pMPDP29。测定并分析了重组载体pMPDP3和pMPDP29克隆到的两个强启动子功能片段的序列，分别为两个功能未知基因ytkA和ywoF基因上游的启动子，mpd基因分别与ytkA和ywoF基因的信号肽编码序列发生了融合表达。对两个启动子的结构及两个基因与MPH的融合表达产物进行了预测和分析。ytkA基因表达产物的信号肽为脂蛋白信号肽，而ywoF基因表达产物的信号肽为分泌型信号肽。 利用大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pNW33N与mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。利用该探针钓取启动子后可以不经亚克隆而直接转入枯草杆菌测定和比较启动子的强弱。利用穿梭启动子探针重新克隆了ytkA和ywoF基因的启动子与信号肽编码序列，构建了mpd基因穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将载体pNYTM和pNYWM转入枯草杆菌1A751重组表达mpd基因。发现在枯草杆菌中，ytkA基因的启动子强度远强于ywoF基因的启动子。1A751(pNYTM)的mpd重组表达产物与细胞结合，而1A751(pNYWM)的mpd重组表达产物大部分分泌在发酵液上清中。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽重新构建了mpd基因的分泌表达载体pYNMK。将pYNMK转入缺失了8种蛋白酶的枯草杆菌WB800，使mpd基因获得了更高水平的分泌表达，91.4％的酶分泌在上清液中，表达量是出发菌株的10.8倍。 进而利用PCR方法克隆和融合了P_(43)启动子功能片段和nprB基因信号肽编码序列，构建了新的大肠杆菌-枯草杆菌分泌表达载体pP43NMK。将pP43NMK导入到枯(本文来源于《南京农业大学》期刊2006-03-01）
刘刚,邢苗,余少文[3]（2005）在《耐高温α-淀粉酶在溶源性枯草杆菌表达系统中的高效表达》一文中研究指出构建了高效表达耐高温α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌表达系统,并研究了该表达系统的主要特点.通过PCR扩增由地衣芽孢杆菌的基因组DNA分离高温淀粉酶基因后,将其克隆到质粒pSG703中.然后用pSG703质粒转化含温和性噬菌体φ105MU331的枯草芽孢杆菌,通过同源重组使高温淀粉酶基因插入到溶源性枯草芽孢杆菌的染色体上,并处于φ105MU331的强启动子下游.由于高温淀粉酶基因处于噬菌体的强启动子下游,在热诱导后可以实现高温淀粉酶的高效表达,诱导后8h内分泌到培养液中的高温淀粉酶活性可以达到9.58×103u/mL.本文构建的重组高温淀粉酶表达系统具有稳定、高效和杂蛋白分泌少的特点.图5参16(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2005年03期）
彭清忠,张惟材,朱厚础[4]（2001）在《枯草杆菌表达系统的研究进展》一文中研究指出枯草杆菌由于具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础 ,是目前原核表达系统中分泌表达外源蛋白较理想的宿主。本文简述枯草杆菌基因表达的一般特点、表达载体、表达类型以及分泌表达存在的问题(本文来源于《生物技术通讯》期刊2001年03期）
孙国富,童克中[5]（1991）在《枯草杆菌(Bacillus subtilis)稳定的基因表达系统》一文中研究指出芽孢杆菌属(Bacillus)在应用微生物学方面有着悠久的应用历史,尤其是本世纪以来,该属在工业用酶生产中所起的作用愈来愈显重要。液化淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)曾占据α—淀粉酶工业生产的主导地位,而地衣芽孢杆菌(B.1icheniformis)则是当今世界工业用酶的主要来源之一。除分泌多种胞外酶外,该属的一些(本文来源于《生物工程进展》期刊1991年01期）
枯草杆菌表达系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
枯草杆菌由于具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础，是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白较理想的宿主。但由于受自身分泌蛋白酶多、构建的重组表达质粒不太稳定等因素影响，其应用受到一定的限制。近年来，随着分子生物学和基因工程的发展，枯草芽孢杆菌作为基因工程表达系统发展迅速，并展现出良好的应用前景。本文旨在建立一套枯草杆菌高效表达和分泌系统，实现甲基对硫磷水解酶基因mpd在枯草杆菌中的高效表达和分泌，以解决其在原始菌株中表达存在的一些问题；同时本文亦对枯草杆菌同源重组和载体转化等遗传操作体系进行了一些探索性研究。 以mpd基因为报告基因，构建了一个新型的方便而高效的启动子探针pUC-mpd。构建了枯草杆菌168的基因组DNA的启动子文库，利用启动子探针从文库中克隆了一系列启动子功能片段并比较了其在大肠杆菌中的启动子强度，得到了两个克隆有强启动子片段的克隆pMPDP3和pMPDP29。测定并分析了重组载体pMPDP3和pMPDP29克隆到的两个强启动子功能片段的序列，分别为两个功能未知基因ytkA和ywoF基因上游的启动子，mpd基因分别与ytkA和ywoF基因的信号肽编码序列发生了融合表达。对两个启动子的结构及两个基因与MPH的融合表达产物进行了预测和分析。ytkA基因表达产物的信号肽为脂蛋白信号肽，而ywoF基因表达产物的信号肽为分泌型信号肽。 利用大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pNW33N与mpd基因构建了穿梭启动子探针pNW33N-mpd。利用该探针钓取启动子后可以不经亚克隆而直接转入枯草杆菌测定和比较启动子的强弱。利用穿梭启动子探针重新克隆了ytkA和ywoF基因的启动子与信号肽编码序列，构建了mpd基因穿梭表达载体pNYTM和pNYWM。将载体pNYTM和pNYWM转入枯草杆菌1A751重组表达mpd基因。发现在枯草杆菌中，ytkA基因的启动子强度远强于ywoF基因的启动子。1A751(pNYTM)的mpd重组表达产物与细胞结合，而1A751(pNYWM)的mpd重组表达产物大部分分泌在发酵液上清中。利用ytkA基因的强启动子和nprB基因的分泌型信号肽重新构建了mpd基因的分泌表达载体pYNMK。将pYNMK转入缺失了8种蛋白酶的枯草杆菌WB800，使mpd基因获得了更高水平的分泌表达，91.4％的酶分泌在上清液中，表达量是出发菌株的10.8倍。 进而利用PCR方法克隆和融合了P_(43)启动子功能片段和nprB基因信号肽编码序列，构建了新的大肠杆菌-枯草杆菌分泌表达载体pP43NMK。将pP43NMK导入到枯
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
枯草杆菌表达系统论文参考文献
[1].李智.新型枯草杆菌基因敲除和表达系统的构建与纳豆激酶基因的克隆[D].沈阳农业大学.2016
[2].张晓舟.枯草杆菌新型表达系统和遗传操作体系的建立及应用[D].南京农业大学.2006
[3].刘刚,邢苗,余少文.耐高温α-淀粉酶在溶源性枯草杆菌表达系统中的高效表达[J].应用与环境生物学报.2005
[4].彭清忠,张惟材,朱厚础.枯草杆菌表达系统的研究进展[J].生物技术通讯.2001
[5].孙国富,童克中.枯草杆菌(Bacillussubtilis)稳定的基因表达系统[J].生物工程进展.1991