本文主要研究内容
作者武炜（2019）在《Caspase依赖的DDX21切割调控抗病毒先天性免疫机制研究》一文中研究指出：DEAD/H-box家族RNA解旋酶是一类重要的解旋酶,DDX21是DEAD box家族的一员,在正常细胞中主要位于细胞核的核仁中,对细胞RNA加工过程具有重要的作用。此外,DDX21被证实可能调控宿主细胞先天性免疫。在来源于骨髓的树突状细胞（myeloid dendritic cells,mDCs）细胞中,DDX21通过作用于DDX1-DDX21-DHX36-TRIF通路来调控天然免疫。登革热病毒感染后DDX21能够从细胞核迁移进入细胞质进而调控机体的免疫应答。然而,对于DDX21具体如何调控抗病毒天然免疫机制尚不可知。为了探究DDX21调控抗病毒天然免疫的新机制,我们展开以下研究:一、DDX21调控病毒刺激所诱导干扰素的产生。为了观察DDX21在抗病毒免疫应答的功能,沉默DDX21基因后感染病毒,以Western blot、TCID50、ELISA和RT-PCR方法鉴定DDX21基因的缺失对病毒复制和干扰素产生的影响,结果表明:DDX21的沉默能够促进干扰素的产生并且抑制病毒的复制。但是DDX21的过表达对干扰素的产生和病毒复制没有显著影响。二、DDX21在病毒的作用下能够发生切割。为了研究DDX21在病毒感染后蛋白表达的变化,用不同的细胞感染不同的病毒或使用核酸模拟物刺激细胞,以Western blot方法检测,结果表明:内源性和外源性的DDX21在病毒感染和核酸模拟物刺激后均能够发生切割。三、病毒感染通过Caspase-3/6途径切割DDX21。为了探究DDX21的切割机制,首先利用抑制剂处理病毒感染的细胞。结果显示:Caspase抑制剂z-VAD-FMK能够显著抑制DDX21的切割,通过构建一系列DDX21的缺失和突变真核表达质粒,证实DDX21 126位天冬氨酸为其切割位点。通过对其切割位点序列的分析及基因敲除实验验证,证实Caspase-3/6参与了病毒感染诱导的切割DDX21切割。四、DDX21切割后能够从细胞核迁移至细胞质中。为了观察DDX21在发生切割后是否影响其定位发生变化,以激光共聚焦的方法检测病毒感染后DDX21的定位,证实DDX21在病毒感染后从细胞核迁移到细胞质中,进一步结果证实DDX21的转位依赖于切割。五、DDX21切割抑制抗病毒先天性免疫通路。为了探究DDX21切割对先天性免疫通路的影响,通过比较DDX21切割与不切割对干扰素产生的影响,结果表明:DDX21切割抑制病毒感染和poly（I:C）诱导的干扰素的产生及下游干扰素刺激基因的表达。六、DDX21 C端结构域结合双链RNA。为了进一步地探究DDX21的切割如何调控干扰素的产生,利用CO-IP和RNA pull down方法检测DDX21与其自身和RNA的互作,结果显示DDX21能够通过其C端结构域与自身和双链RNA互作。本论文证明DDX21在抗病毒天然免疫中发挥重要的调控作用,更重要的是首次发现DDX21在病毒的作用下发生切割且能够发生迁移,通过与RNA结合调控抗病毒天然免疫。这为进一步的研究DDX21调控抗病毒天然免疫提供理论依据。
Abstract
DEAD/H-boxjia zu RNAjie xuan mei shi yi lei chong yao de jie xuan mei ,DDX21shi DEAD boxjia zu de yi yuan ,zai zheng chang xi bao zhong zhu yao wei yu xi bao he de he ren zhong ,dui xi bao RNAjia gong guo cheng ju you chong yao de zuo yong 。ci wai ,DDX21bei zheng shi ke neng diao kong su zhu xi bao xian tian xing mian yi 。zai lai yuan yu gu sui de shu tu zhuang xi bao （myeloid dendritic cells,mDCs）xi bao zhong ,DDX21tong guo zuo yong yu DDX1-DDX21-DHX36-TRIFtong lu lai diao kong tian ran mian yi 。deng ge re bing du gan ran hou DDX21neng gou cong xi bao he qian yi jin ru xi bao zhi jin er diao kong ji ti de mian yi ying da 。ran er ,dui yu DDX21ju ti ru he diao kong kang bing du tian ran mian yi ji zhi shang bu ke zhi 。wei le tan jiu DDX21diao kong kang bing du tian ran mian yi de xin ji zhi ,wo men zhan kai yi xia yan jiu :yi 、DDX21diao kong bing du ci ji suo you dao gan rao su de chan sheng 。wei le guan cha DDX21zai kang bing du mian yi ying da de gong neng ,chen mo DDX21ji yin hou gan ran bing du ,yi Western blot、TCID50、ELISAhe RT-PCRfang fa jian ding DDX21ji yin de que shi dui bing du fu zhi he gan rao su chan sheng de ying xiang ,jie guo biao ming :DDX21de chen mo neng gou cu jin gan rao su de chan sheng bing ju yi zhi bing du de fu zhi 。dan shi DDX21de guo biao da dui gan rao su de chan sheng he bing du fu zhi mei you xian zhe ying xiang 。er 、DDX21zai bing du de zuo yong xia neng gou fa sheng qie ge 。wei le yan jiu DDX21zai bing du gan ran hou dan bai biao da de bian hua ,yong bu tong de xi bao gan ran bu tong de bing du huo shi yong he suan mo ni wu ci ji xi bao ,yi Western blotfang fa jian ce ,jie guo biao ming :nei yuan xing he wai yuan xing de DDX21zai bing du gan ran he he suan mo ni wu ci ji hou jun neng gou fa sheng qie ge 。san 、bing du gan ran tong guo Caspase-3/6tu jing qie ge DDX21。wei le tan jiu DDX21de qie ge ji zhi ,shou xian li yong yi zhi ji chu li bing du gan ran de xi bao 。jie guo xian shi :Caspaseyi zhi ji z-VAD-FMKneng gou xian zhe yi zhi DDX21de qie ge ,tong guo gou jian yi ji lie DDX21de que shi he tu bian zhen he biao da zhi li ,zheng shi DDX21 126wei tian dong an suan wei ji qie ge wei dian 。tong guo dui ji qie ge wei dian xu lie de fen xi ji ji yin qiao chu shi yan yan zheng ,zheng shi Caspase-3/6can yu le bing du gan ran you dao de qie ge DDX21qie ge 。si 、DDX21qie ge hou neng gou cong xi bao he qian yi zhi xi bao zhi zhong 。wei le guan cha DDX21zai fa sheng qie ge hou shi fou ying xiang ji ding wei fa sheng bian hua ,yi ji guang gong ju jiao de fang fa jian ce bing du gan ran hou DDX21de ding wei ,zheng shi DDX21zai bing du gan ran hou cong xi bao he qian yi dao xi bao zhi zhong ,jin yi bu jie guo zheng shi DDX21de zhuai wei yi lai yu qie ge 。wu 、DDX21qie ge yi zhi kang bing du xian tian xing mian yi tong lu 。wei le tan jiu DDX21qie ge dui xian tian xing mian yi tong lu de ying xiang ,tong guo bi jiao DDX21qie ge yu bu qie ge dui gan rao su chan sheng de ying xiang ,jie guo biao ming :DDX21qie ge yi zhi bing du gan ran he poly（I:C）you dao de gan rao su de chan sheng ji xia you gan rao su ci ji ji yin de biao da 。liu 、DDX21 Cduan jie gou yu jie ge shuang lian RNA。wei le jin yi bu de tan jiu DDX21de qie ge ru he diao kong gan rao su de chan sheng ,li yong CO-IPhe RNA pull downfang fa jian ce DDX21yu ji zi shen he RNAde hu zuo ,jie guo xian shi DDX21neng gou tong guo ji Cduan jie gou yu yu zi shen he shuang lian RNAhu zuo 。ben lun wen zheng ming DDX21zai kang bing du tian ran mian yi zhong fa hui chong yao de diao kong zuo yong ,geng chong yao de shi shou ci fa xian DDX21zai bing du de zuo yong xia fa sheng qie ge ju neng gou fa sheng qian yi ,tong guo yu RNAjie ge diao kong kang bing du tian ran mian yi 。zhe wei jin yi bu de yan jiu DDX21diao kong kang bing du tian ran mian yi di gong li lun yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的武炜，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于切割论文,抗病毒天然免疫论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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