导读:本文包含了贴壁培养法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪成纤维细胞,贴壁培养,生长曲线,电转染
贴壁培养法论文文献综述
张树华,张帆,Christopher,Burlak,陈庆[1]（2019）在《猪尾小组织块贴壁培养法分离培养成纤维细胞及转染效率的研究》一文中研究指出目的采取猪尾小组织块贴壁法成功分离培养出原代猪成纤维细胞并进行细胞不同时期的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性质粒转染效率的研究。方法猪尾小组织块贴壁培养法分离培养出原代猪成纤维细胞后,传代并进行冻存和复苏,比较猪成纤维细胞原代培养、传代培养和复苏细胞存活率。绘制细胞原代培养、传代培养和复苏后的生长情况。分别在猪尾小组织块贴壁培养获得原代成纤维细胞,细胞传代和复苏后进行细胞GFP阳性质粒的Neon电转染,比较不同转染时期细胞存活率和生长情况,转染后24h和48h分别采用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞的GFP质粒阳性表达率。结果猪尾小组织块贴壁培养可以成功分离培养出猪成纤维细胞,细胞冻存后复苏能保持原代细胞生物学特性,原代细胞活力很高,细胞存活率97.670%,传代培养后细胞存活率95.670%,复苏细胞存活率仍在90%以上。原代培养、传代培养和复苏培养细胞生长曲线均呈"S"型,复苏细胞生长略微缓慢。原代培养、传代培养和复苏细胞电转染后细胞存活率均有少许下降,细胞生长增殖能力减弱,但是细胞生长曲线仍呈"S"型曲线。Neon电转染后24h均可获得GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,荧光显微镜均检测到GFP质粒阳性表达的成纤维细胞,48h后流式细胞仪检测显示原代细胞阳性率8.01%,稍高于传代细胞的7.91%和复苏细胞的7.86%。复苏细胞存活率下降,转染后细胞活力下降,但转染后仍可得到7.86%GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,原代培养细胞能够获得更高的阳性率,差异有统计学意义。结论猪尾小组织块贴壁培养法可以成功分离培养出成纤维细胞,细胞传代会对细胞活力有影响,冻存后复苏也会影响细胞的存活率和细胞增殖能力。原代细胞、传代细胞和复苏细胞转染均能获得GFP阳性质粒表达。原代培养细胞具有更佳的细胞活力和阳性转染率,进行基因敲除或基因敲入等基因编辑和体细胞克隆研究,选择原代细胞作为转染对象能获得更好的基因编辑成功率。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2019年01期）
胡玉婷,刘菲,刘静,陶欣荣[2]（2019）在《贴壁培养法鉴定海马神经干/祖细胞的增殖与分化能力》一文中研究指出背景:神经干/祖细胞广泛应用于神经发育、神经相关性疾病和细胞移植等研究,体外分离培养的神经干/祖细胞能够为相关研究提供细胞模型。目的:探讨分离新生小鼠海马组织并高效培养出神经干/祖细胞的方法,并使用贴壁培养法对其增殖以及分化能力进行鉴定。方法:分离新生C57BL/6小鼠海马组织,培养原代神经干/祖细胞并扩增,进行形态学观察;联合使用多聚赖氨酸和层粘连蛋白促进细胞贴附,进行贴壁培养;免疫荧光法检测特异性标志蛋白Nestin表达和增殖指标Ki-67的表达;使用神经干/祖细胞分化培养基诱导分化培养7 d后,免疫荧光法检测GFAP、DCX、Tuj1和S100β的表达。结果与结论:(1)培养的神经干/祖细胞约82%表达Nestin,约49%表达Ki-67;(2)诱导分化后,少数细胞为DCX阳性,大多数细胞为GFAP阳性。荧光双色染色后显示Tuj1和S100β表达的神经元和星形胶质细胞比例为1∶1.7;(3)结果显示,从新生C57BL/6小鼠海马组织中成功分离并高效培养出神经干/祖细胞,贴壁培养后有效地对其增殖和分化能力进行了鉴定,能够为进一步实验研究提供足够的细胞来源。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年09期）
黄昕艳,刘爽,程春凤,杨智,尉荣翠[3]（2012）在《新生大鼠原代皮质神经元细胞差数贴壁培养法的优化》一文中研究指出神经元的培养是神经细胞生物学、神经药理、毒理学及神经电生理研究的重要手段,但要获得纯度较高,生长状态较好的神经元并非易事。神经元属于终末分化细胞,给培养带来一定难度,传统的方法多用胎鼠进行神经元的原代培养,因其细胞分化程度低利于存活,但胎鼠取材需处死孕鼠,(本文来源于《黑龙江医药科学》期刊2012年04期）
刘国红,柴玉荣,朱晓燕,张钦宪[4]（2008）在《连续微量培养液胃癌组织块贴壁培养法》一文中研究指出0引言目前采用蛋白质组学对胃癌的研究,多采用胃癌手术,活检标本或现成的胃癌细胞系。但胃癌组织有许多间质成分,比如成纤维细胞,这些都会对胃癌蛋白质组分析产生干扰,而胃癌细胞系虽然细胞种类单一,获取容易,但因传代次数过多,代数不明,其蛋白质表达与在体胃癌细胞(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2008年02期）
陈欢意,牛平,赵帅,杜迎春[5]（2007）在《改良贴壁培养法简单的骨髓基质干细胞分离纯化法》一文中研究指出骨髓基质干细胞(marrow stromal cells,MSCs)来源广泛,取材容易,体外培养可迅速增殖,移植物抗宿主反应轻,体外诱导可分化为神经胶质细胞和神经元样细胞等。近年来,MSCs移植已被用于神经系统变性疾病及脑缺(本文来源于《解剖科学进展》期刊2007年02期）
赖平红,唐仕波,林少芬,朱晓波,高艺[6]（2006）在《全神经球贴壁培养法体外长期扩增视网膜前体细胞》一文中研究指出目的:探寻一种既高效又能连续体外扩增视网膜前体细胞(RetinalProgenitorCell,RPC)的培养方法。方法:小鼠胚胎视网膜细胞采取神经球贴壁培养或直接贴壁培养法。神经球贴壁培养时,先经悬浮培养生成富含前体细胞的神经球,然后将低速离心分离出的神经球接种到Poly-D-Lysine包被的培养瓶,在前体细胞培养液中(含FGF-2、EGF和LIF)贴壁培养,头24h在培养液中添加10%的胎牛血清。直接贴壁培养法是将细胞悬液直接接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶。免疫组化和FACS分析神经球贴壁培养细胞的干细胞特性和分化能力,并与直接贴壁培养法得到的细胞进行比较。结果:神经球接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶后贴附到培养瓶底,逐渐形成贴壁生长的单层细胞。该法能够在体外长期扩增视网膜前体细胞,3个月内细胞能够传代10次以上。在RA诱导分化时,能够生成成熟视网膜细胞,表达视网膜细胞特异性标记。FACS分析和免疫组化染色显示神经球贴壁培养所得细胞在未分化时Nestin阳性率(92%)细胞率以及分化为成熟视网膜细胞的比率(53.7%),均高于直接贴壁培养法获得的细胞。结论:神经球贴壁培养法能够在体外长期大量扩增视网膜前体细胞,能较好地保持干细胞特性,并容易分化为成熟的视网膜细胞,较直接贴壁培养具有较大的优越性。(本文来源于《眼科学报》期刊2006年02期）
李冬梅,金连弘,张宇,李呼伦,张宝东[7]（2006）在《密度梯度离心法结合贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性》一文中研究指出目的:建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞的方法,观察成年大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法:实验于2003-03/2004-05于哈尔滨医科大学组胚教研室完成。①用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化成年大鼠骨髓间充质干细胞。②采用倒置显微镜、透射电镜观察,免疫细胞化学法鉴定骨髓间充质干细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。③体外加成骨、成软骨诱导剂,14d分别做碱性磷酸酶组织化学、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察骨髓间充质干细胞的成骨分化及成软骨分化结果。结果:①成年大鼠骨髓间充质干细胞呈均一的成纤维细胞样,具有一般干细胞的超微结构特点。②广泛表达Vimentin,CD29,CD44,不表达CD14,CD34。③加入成骨诱导剂14d后,骨髓间充质干细胞呈多层重迭生长,现碱性磷酸酶强阳性,阳性率为90.5%。④经成软骨诱导后,Ⅱ型胶原免疫组化染色,诱导14d的骨髓间充质干细胞呈现广泛的棕褐色染色,在细胞密集处细胞周围可见黄褐色染色。结论:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化成年大鼠骨髓间充质干细胞,用此种方法培养的细胞具有骨髓间充质干细胞的一般生物学特性。(本文来源于《中国临床康复》期刊2006年17期）
马世兴,王峰[8]（1998）在《连续微量培养液强行细胞贴壁培养法》一文中研究指出随着医学科学技术的发展，组织细胞培养技术的建立与应用，不仅促进了细胞生物学、病毒学和细胞免疫学研究的进展，也推动了诸如分子免疫学、分子细胞学、分子遗传学，以及基因诊断、基因治疗等方面的研究进展，但在实际进行细胞原代培养中仍然困难很多。细胞能否生长的关...(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊1998年04期）
胡淑如,姚秀缤,王世丽[9]（1986）在《米饭培养基贴壁培养法分离血中白色念珠菌的实验研究》一文中研究指出用特制的米饭培养基采用贴壁培养法分离血中的白色念珠菌,其分离速度与膜过滤技术近似,明显快于目前国内普遍采用的增菌法,并能在24～48h内对该菌的形态学特征作出鉴定。本法简便、经济、不需特殊设备,适于我国广大实验室应用。(本文来源于《湖北医学院学报》期刊1986年01期）
贴壁培养法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:神经干/祖细胞广泛应用于神经发育、神经相关性疾病和细胞移植等研究,体外分离培养的神经干/祖细胞能够为相关研究提供细胞模型。目的:探讨分离新生小鼠海马组织并高效培养出神经干/祖细胞的方法,并使用贴壁培养法对其增殖以及分化能力进行鉴定。方法:分离新生C57BL/6小鼠海马组织,培养原代神经干/祖细胞并扩增,进行形态学观察;联合使用多聚赖氨酸和层粘连蛋白促进细胞贴附,进行贴壁培养;免疫荧光法检测特异性标志蛋白Nestin表达和增殖指标Ki-67的表达;使用神经干/祖细胞分化培养基诱导分化培养7 d后,免疫荧光法检测GFAP、DCX、Tuj1和S100β的表达。结果与结论:(1)培养的神经干/祖细胞约82%表达Nestin,约49%表达Ki-67;(2)诱导分化后,少数细胞为DCX阳性,大多数细胞为GFAP阳性。荧光双色染色后显示Tuj1和S100β表达的神经元和星形胶质细胞比例为1∶1.7;(3)结果显示,从新生C57BL/6小鼠海马组织中成功分离并高效培养出神经干/祖细胞,贴壁培养后有效地对其增殖和分化能力进行了鉴定,能够为进一步实验研究提供足够的细胞来源。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
贴壁培养法论文参考文献
[1].张树华,张帆,Christopher,Burlak,陈庆.猪尾小组织块贴壁培养法分离培养成纤维细胞及转染效率的研究[J].华中科技大学学报(医学版).2019
[2].胡玉婷,刘菲,刘静,陶欣荣.贴壁培养法鉴定海马神经干/祖细胞的增殖与分化能力[J].中国组织工程研究.2019
[3].黄昕艳,刘爽,程春凤,杨智,尉荣翠.新生大鼠原代皮质神经元细胞差数贴壁培养法的优化[J].黑龙江医药科学.2012
[4].刘国红,柴玉荣,朱晓燕,张钦宪.连续微量培养液胃癌组织块贴壁培养法[J].肿瘤防治研究.2008
[5].陈欢意,牛平,赵帅,杜迎春.改良贴壁培养法简单的骨髓基质干细胞分离纯化法[J].解剖科学进展.2007
[6].赖平红,唐仕波,林少芬,朱晓波,高艺.全神经球贴壁培养法体外长期扩增视网膜前体细胞[J].眼科学报.2006
[7].李冬梅,金连弘,张宇,李呼伦,张宝东.密度梯度离心法结合贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性[J].中国临床康复.2006
[8].马世兴,王峰.连续微量培养液强行细胞贴壁培养法[J].细胞与分子免疫学杂志.1998
[9].胡淑如,姚秀缤,王世丽.米饭培养基贴壁培养法分离血中白色念珠菌的实验研究[J].湖北医学院学报.1986