ELISA、TRUST法行梅毒血清学检测效果比较

ELISA、TRUST法行梅毒血清学检测效果比较

威海卫人民医院检验科

【摘要】目的:对比ELISA、TRUST法行梅毒血清学检测效果。方法:收集2014年3月至2015年9月在我院门诊就诊的梅毒疑似患者1500例,均进行TRUST、TPPA、ELISA法检测,以TPPA检查结果作为诊断标准,对比分析TRUST、ELISA法的检查效果。结果:以TPPA法作为诊断标准,TRUST法灵敏度为46.8%(22/47),ELISA法为97.9%(46/47),TRUST法的灵敏度明显低于ELISA法(P<0.05)。结论:梅毒早期筛查时使用ELISA法,而在治疗过程中和病情转归时可结合TRUST进行判断,以避免漏诊、误诊。

【关键词】酶联免疫吸附法;甲苯胺红不加热血清试验;凝集法

【中图分类号】R275.3【文献标识码】A【文章编号】2096-0867(2016)09-238-01

近年来,梅毒发病率逐年升高,对女性的健康造成严重影响。目前,梅毒主要采用梅毒血清学检查进行诊断,常用的方法有甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、凝集法(TPPA)和酶联免疫吸附法(ELISA)[1]。TPPA检测准确度最高,但检查费用贵;TRUST、ELISA法检查准确度略低,然而费用较低,两种方法检测效果孰优孰劣尚无统一意见。本研究对1500例梅毒疑似患者采用TRUST、TPPA、ELISA法检测血清标本,以TPPA检查结果作为诊断标准,对比分析TRUST、ELISA法的检查效果,现报道如下。

1对象和方法

1.1研究对象收集2014年3月至2015年9月在我院门诊就诊的梅毒疑似患者1500例,其中男742例,女758例;年龄24~61例,平均(40.1±2.2)岁;所有患者及其家属均签署知情同意书。

1.2检测方法采集患者静脉血3mL静脉血,室温下静置5分钟,离心10分钟后分离血清,依次采用TRUST、TPPA、ELISA法检测,严格按试剂盒操作方法完成。TRUST、TPPA试剂盒均由富士瑞必欧株式会社公司提供,ELISA试剂盒由上海荣盛生物药业有限公司提供。①TRUST检测:取50μL血标本,放入卡片圈内,均匀涂布在整个卡片圈上。将抗原液摇匀后加入卡片圈中。随后把卡片放在脱色摇床中,轻柔震荡混匀,立即观察检测结果。②ELISA:取50μL血标本,加入预包被板条孔内,同时设置空白对照、阴性对照和阳性对照,置于37℃孵育1小时。空白对照、阴性对照和阳性对照孔分别加入50μL酶标记物,振荡混匀,置于37℃孵育30分钟。充分洗板后,空白对照、阴性对照和阳性对照孔分别加入50μL终止液,充分混匀后,置于酶标仪观察,判断结果。③TPPA法:取标本稀释液滴加到U型反应板上,加100μL到第1孔,2~9孔各加25μL。先加25μL血清到第1孔,混匀后取25μL加到第2孔,如此以此稀释至第9孔,最后从第9孔取出25μL液体弃掉。取25μL未致敏粒子液倒入第3孔中,同时取25μL致敏粒子液倒入第4~9孔中,把微量反应板置于振荡器上震荡混匀,取出置于有盖的湿盒中,静置2小时,立即观察结果。阳性检出率=阳性病例数/总检测人数。TRUST法灵敏度=TPPA法阳性检出中的TRUST法检测阳性数/TPPA法阳性检出例数。ELISA法灵敏度=TPPA法阳性检出中的ELISA法检测阳性数/TPPA法阳性检出例数。

1.3统计学处理选用SPSS21.0统计学软件进行数据分析,计数资料以率描述,采用方差分析,以P<0.05为差异有显著性。

2结果

在1500例血清标本中TPPA法阳性检出47例,阳性检出率为3.13%;TRUST法阳性检出24例,阳性检出率为1.60%;ELISA法阳性检出49例,阳性检出率为3.27%。ELISA、TPPA法两种方法的阳性检出率比较差异无显著性(P>0.05),但均显著高于TURST法(P<0.05)。以TPPA法作为诊断标准,TRUST法灵敏度为46.8%(22/47),ELISA法为97.9%(46/47),TRUST法的灵敏度明显低于ELISA法(P<0.05)。

3讨论

目前,血清学检查是梅毒诊断检查中最广泛、效果最好的方法之一。其中最常用的方法主要包括TRUST、TPPA、ELISA三种方法。有研究证实,梅毒侵入机体后15天左右,血清中即出现特异性抗体IgG和IgM[2]。TRUST是重要的梅毒血清学检查之一,它是通过检测对抗心磷脂抗体来对照梅毒进行诊断。该法对1期、2期梅毒的阳性检出率高达96%以上,但对晚期梅毒或1期梅毒潜伏阳性检出率较低,因此一般不作为晚期梅毒或1期梅毒潜伏诊断方法,仅作为辅助诊断方法。研究表明,TRUST应用于梅毒诊断具有较高的假阳性和假阴性,而其他一些疾病,如疟疾、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等疾病也可有一定的阳性率,且易造成漏诊[2]。然而,该法用在梅毒患者的疗效观察和病情转归方面有很好的临床价值,加之它的检查费用较低,患者容易接受。本研究结果显示,TRUST对梅毒的阳性检出率为1.60%,明显低于TPPA的3.13%。TPPA法主要是检测包被明胶颗粒的梅毒特异性抗原,其特异度和敏感度均较高,特别是潜伏期梅毒。

ELISA法则是采用基因重组法形成特异性抗原来识别梅毒产生的特异性抗体IgG和IgM,即可用于1期、2期梅毒的诊断,还可用于潜伏期或完全梅毒的诊断[3]。ELISA法还有其他优势:操作简便,费用低廉,还可使用半自动或全自动酶标仪,可进行批量检测,同时可保存原始数据。然而,梅毒特异性抗体IgG在梅毒治愈后较长甚至终生可表现为阳性。故ELISA的阳性检出率较高,但阳性者并不是表示梅毒病毒处于活动状态,而是需要结合患者的临床表现判断是否为梅毒病毒活动期,以免造成误诊。本研究结果显示,ELISA对梅毒的阳性检出率为3.27%,略高于TPPA,但无统计学意义。然而,ELISA检测存在一定的假阳性率,这是由血清内的纤维蛋白原所致。研究表明,某些疾病及免疫接种可导致ELISA检测为阳性;另外部分基础疾病可引起机体合成诱导抗TP的抗体或抗类脂抗体交叉抗原而使ELISA检测为阳性[4]。

本研究结果表明,ELISA法对梅毒病毒检测的灵敏度较TRUST明显提高,其中早期梅毒或晚期梅毒均可有较高的特异性和敏感性,而TRUST在梅毒治疗疗效及病情转归中有较高的应用价值,结合两种方法检出率的差异,可考虑梅毒早期筛查时使用ELISA法,而在治疗过程中和病情转归时可结合TRUST进行判断,以避免漏诊、误诊。

参考文献:

[1]刘小平,邓岩.?3种梅毒血清学诊断方法在梅毒诊治中的应用价值[J].检验医学,2004,65(2):77-78.

[2]罗米.?两种方法联合检测梅毒螺旋体抗体的临床应用[J].检验医学与临床,2012,74(2):33-34.

[3]侯喜琴,黄朝阳,戴淑惠,等.?TPPA、TRUST和电化学发光法检测梅毒螺旋体效果比较[J].中国临床实用医学2010,99(2):52-53.

[4]林益振.四种梅毒血清学检测方法的比较?[J]?.中国皮肤性病学杂志,2009,63(6):50-51.

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