导读:本文包含了次级毛囊论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:绒山羊,血管内皮生长因子,次级毛囊外根鞘细胞,增殖
次级毛囊论文文献综述
张婧婧,王德光,周小兵,高晔,何晓琳[1]（2018）在《VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响》一文中研究指出本研究旨在探讨陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的培养和VEGF对次级毛囊外根鞘细胞增殖、分化及细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、角蛋白10(K10)和成纤维细胞生长因子5(FGF5)mRNA表达量的影响。采集绒山羊体侧部皮肤,并利用消化等方法分离次级毛囊外根鞘细胞,置于37℃、5%CO_2、饱和湿度条件下培养;选用第5代次级毛囊外根鞘细胞,添加不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF),分别处理24、48h,噻唑兰比色法(MTT)检测细胞活力,EdU核酸标记技术检测细胞增殖;实时荧光定量PCR技术检测PCNA、K 10、FGF5mRNA的表达情况。结果显示:1)成功培养出次级毛囊外根鞘细胞,CK17和CK15细胞免疫组化呈阳性。2)VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖。相同浓度VEGF处理48h组的细胞活力极显着高于处理24h组(P<0.01);在48h处理组中,100ng·mL~(-1)组的细胞活力极显着高于对照组、1ng·mL~(-1)组、10ng·mL~(-1)组(P<0.01),并显着高于50ng·mL~(-1)组(P<0.05),50ng·mL~(-1)组的细胞活力显着高于对照组(P<0.05);100ng·mL~(-1)组和50ng·mL~(-1)组增殖细胞比例均极显着高于对照组、1ng·mL~(-1)组、10ng·mL~(-1)组(P<0.01),100ng·mL~(-1)组显着高于50ng·mL~(-1)组(P<0.05)。3)PCNA、K10、FGF5mRNA在次级毛囊外根鞘细胞中均有表达。在VEGF处理48h时,PCNA mRNA的表达量100ng·mL~(-1)组最高,极显着高于对照组(P<0.01),显着高于10ng·mL~(-1)组(P<0.05);K10mRNA的表达量对照组最高,极显着高于10ng·mL~(-1)组与100ng·mL~(-1)组(P<0.01);FGF5mRNA的表达量对照组最高,极显着高于100ng·mL~(-1)组(P<0.01)。综上表明,本研究成功分离培养了陕北白绒山羊次级毛囊外根鞘细胞;VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化;VEGF可能通过抑制次级毛囊外根鞘细胞中FGF5基因的表达而促进毛囊生长。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年06期）
周光现[2]（2018）在《陕北白绒山羊次级毛囊周期循环关键基因的筛选及LHX2与miR-144的功能验证》一文中研究指出绒山羊绒毛是由次级毛囊产生的,具有“软黄金”的美誉,是高档纺织材料,并且次级毛囊是研究毛发再生循环机制的模型。本文拟通过研究陕北白绒山羊次级毛囊发育循环周期的分子机理,进而为提高绒山羊绒毛质量、增加绒毛产量提供理论基础,同时也为毛发再生的研究提供参考。本研究旨在精确定位次级毛囊周期循环的时间节点,筛选调控毛囊周期循环的关键基因,揭示非编码基因在毛囊周期循环调控中的作用。主要研究内容包括以下几个方面:1)通过显微测量对陕北白绒山羊全年不同月份次级毛囊长度及其毛球部宽度进行量化,揭示次级毛囊周期循环的时间节点规律;2)通过联合分析绒山羊次级毛囊发育叁个典型阶段(生长期、退行期和休止期)的mi RNA和m RNA数据,筛选出调控毛囊周期循环关键的mi RNAs和m RNA,并构建了mi RNA-m RNA调控关系网络;3)通过“全转录组学”测序技术深入分析次级毛囊从“生长期”向“退行期”转变的分子调控机制;4)利用双荧光素酶检测系统验证了mi R-144-3p与LHX2的靶向调控关系,并通过mi R-144腺病毒感染毛乳头细胞及构建LHX2-/-毛乳头细胞株进行其基因功能研究。本研究取得主要研究结果如下:1、通过对陕北白绒山羊全年皮肤样品中次级毛囊的形态显微测量,发现长度变化为1070.16μm至2267.61μm,次级毛囊毛球部宽度变化为44.05μm至108.61μm;根据次级毛囊在皮肤中的长度和毛球部宽度的变化规律,得出陕北白绒山羊次级毛囊发育周期规律为:5月份到10月份为次级毛囊生长期(9~10月份,旺盛期),11月份到次年2月份为次级毛囊退行期,次年3月份到次年4月份为次级毛囊休止期。2、通过对陕北白绒山羊生长期、退行期和休止期皮肤样品中mi RNAs和m RNAs表达变化联合分析,发现“生长期与退行期”比较有104个差异的mi RNAs和683个差异m RNAs参与mi RNA-m RNA网络调控构建,共构建5694条靶向网络调控关系;“生长期与退行期”比较有92个差异的mi RNAs和583差异m RNAs参与mi RNA-m RNA网络调控构建,共构建4185条靶向网络调控关系;“退行期与休止期”比较有57个差异的mi RNAs和125差异m RNAs参与mi RNA-m RNA网络调控构建,共构建574条靶向网络调控关系;对mi RNA靶基因进行GO功能富集,发现有48个显着富集的类别,且富集的功能类别符合生长期、退行期和休止期次级毛囊在皮肤中的生长发育特点;KEGG显着富集的通路有Focal adhesion、Protein digestion and absorption、ECM-receptor interaction、Cardiomyopathy related pathway、Regulation of actin cytoskeleton和PPAR signaling pathway等,发现皮肤下脂肪细胞亦可能是潜在调控次级毛囊周期循的关键因素;在“生长期/退行期”比较中,通过对mi RNA表达量倍数限定(1.5倍)和本底表达量限定(>50),筛选出5个候选mi RNAs,分别为mi R-1、mi R-125b、mi R-144、mi R-145和mi R-206。3、通过对陕北白绒山羊生长期和退行期的皮肤总RNA进行全转录组测序分析,发现403个新的lnc RNA转录本和307个新的mi RNA,同时鉴定出3500个差异可编码m RNA的转录本(共3357个基因)、172个差异的lnc RNA转录本和72个差异表达mi RNAs;对lnc RNA和mi RNA共有靶基因进行通路分析,发现许多疾病相关的通路(如pathways in cancer、systemic lupus erythematosus和Transcriptional misregulation in cancer),除此之外,还发现脂肪沉积相关的代谢通路(如PPAR signaling pathway)、环境信息处理相关的通路(如ECM-receptor interaction和Notch signaling pathway)和细胞间交流相关通路(如Focal adhesion),说明次级毛囊周期循环与皮肤环境中其它类型细胞调控息息相关;4、通过组织表达谱分析,发现LHX2基因在陕北白绒山羊的皮肤、肝脏和大脑中表达较高,且LHX2在皮肤中的表达具有明显的时间特异性,在4月份其表达量显着低于10月份(p<0.01);mi R-144-3p在皮肤中的表达也具有时间特异性,在休止期的表达显着高于生长期(p<0.01)。5、成功分离培养了次级毛乳头细胞,用毛乳头细胞分子标记α-SMA、Versican和CD133进行细胞免疫荧光鉴定,均显示为阳性,将毛乳头细胞传至第8代,发现其仍具有较强的凝聚性,说明在一定代数内毛乳头细胞仍具有一定活性。6、LHX2 3’UTR具有多个mi R-144-3p调控靶位点;mi R-144腺病毒感染毛乳头细胞,可以抑制LHX2的转录后翻译活性,使其蛋白水平降低,同时显着下调BMP2、BMP4和NOG的表达量(p<0.01),并使FGF7、β-Catenin和TGFβ1的表达水平显着上调(p<0.01)。7、成功构建了LHX2-/-细胞株,在该细胞株中,FGF7、FGF10、TGFβ2和TGFβ3的表达量显着上调,且与野生型细胞株相比,其增殖能力较快,表明LHX2-/-缺失可能促使SDP细胞增殖及Mx细胞增殖。8.、对毛乳头细胞进行mi R-144-3p过表达和LHX2基因敲除处理,发现在两种处理情况下,毛乳头表达基因具有一定相似性,FGF7和β-catenin表达上调。综上所述,本研究首次对陕北白绒山羊全年不同月份的次级毛囊长度及其毛球宽度变化进行量化研究,并归纳其次级毛囊周期循环时间节点。通过转录组联合分析筛选出潜在调控次级毛囊周期循环的靶基因,并在毛乳头细胞中验证mi R-144-3p与LHX2协同作用并调控毛囊细胞的增殖,同时为进一步揭示非编码基因调控次级毛囊周期循环的分子机理奠定基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-04-01）
马巍[3]（2017）在《NGF在绒山羊皮肤组织中的表达及其对次级毛囊外根鞘细胞增殖作用的研究》一文中研究指出绒山羊次级毛囊的生长发育与绒毛生产数量和质量息息相关。毛用哺乳动物的毛囊的生长发育一般经历叁个阶段(休止期、生长期、退行期)周而复始的循环,它是一系列信号分子相互作用相互调控的结果,在这一过程中,外跟鞘(Outer root sheath,ORS)细胞的增殖被认为是毛囊生长发育的重要动力来源之一。近年来的研究发现,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)除了在神经系统发挥作用以外,还在一些非神经系统发挥生物学功能,如有研究发现NGF可以影响小鼠毛囊的形态学变化,NGF及其受体存在于小鼠毛囊发育的不同阶段,说明NGF是小鼠毛囊发育过程中至关重要的一种因子。然而,作为重要的毛绒用动物—绒山羊的皮肤毛囊中是否存在NGF及其受体酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA),如果存在其功能又有哪些?绒山羊ORS细胞中是否是NGF的分泌细胞或作用靶细胞,NGF是否参与ORS细胞的增殖过程?针对上述假设本论文对此进行了系统的研究,并获得了相应的研究结果。1.NGF及其受体TrkA在绒山羊绒毛生长周期皮肤组织中的表达利用RT-PCR方法检测了皮肤组织中是否有NGF及其受体TrkAmRNA的表达,并利用实时荧光定量PCR和Western blot的方法对毛囊生长发育叁个阶段皮肤组织中NGF及其受体TrkA的表达进行定量分析。结果表明:NGF及其受体TrkA的mRNA存在于毛囊生长周期各阶段的皮肤组织中;生长期皮肤组织中NGF及其受体TrkA mRNA的表达水平显着高于休止期和退行期(p<0.05);生长期皮肤组织中NGF蛋白水平显着高于休止期和退行期(p<0.05),生长期TrkA的蛋白水平与休止期没有显着差异,但显着的高于退行期(p<0.05)。利用HE染色观察毛囊生长发育叁个阶段的绒山羊毛囊的形态。结果表明:在生长期,初级毛囊(Primary hair follicle,PF)和次级毛囊(Secondary hair follicle,SF)的数量要多于休止期和退行期,且毛囊结构完整、清晰;在退行期,PF和SF的数量显着降低。毛囊的结构松散,毛乳头(Dermal papilla,DP)、ORS和内根鞘(Internal root sheath,IRS)分层不清晰;在休止期,PF和SF的数量少,PF的ORS和IRS层清晰可见,但SF的ORS和IRS层不清晰。利用间接免疫荧光技术对NGF和TrkA的蛋白进行定位。结果表明:NGF和TrkA的蛋白存在于PF和SF毛囊生长周期的所有阶段;在生长期,在ORS和IRS细胞中检测到NGF的高表达,并且在ORS细胞中检测到TrkA的阳性信号。信号强度为生长期最高,休止期其次,退行期最低。2.NGF及其受体TrkA在体外培养绒山羊次级毛囊ORS细胞中的表达分离生长期绒山羊的SF,进行ORS细胞的体外分离与培养。结果表明:中性蛋白酶消化法分离毛囊省时省力,毛囊周围组织去除较干净,细胞不易污染;分离培养的ORS细胞于培养基中2~3天贴壁,细胞多呈多角形,少数为卵圆形,特异性蛋白CK19鉴定ORS细胞的特征,ORS细胞纯度在90%以上。利用间接免疫荧光技术发现ORS细胞中均可检测到NGF、TrkA的免疫活性,NGF在细胞核中的信号强度高于细胞质中,在细胞核中没有TrkA的免疫活性。利用ELISA方法发现体外培养的ORS细胞可以持续分泌NGF,但随着时间的延长,分泌量显着下降(p<0.05)。3.NGF对绒山羊次级毛囊ORS细胞增殖作用的研究通过外源性添加NGF重组蛋白及其受体阻断剂K252a的方法研究NGF对ORS细胞增殖的影响。结果表明:20ng/mL或100ng/mL的NGF重组蛋白可促进绒山羊次级毛囊ORS细胞的增殖,当用20ng/mL的K252a处理后,NGF的这种促增殖作用消失。说明NGF/TrkA系统可以以剂量依赖的方式促进ORS细胞的增殖。此外,我们利用细胞免疫荧光的方法研究了ORS细胞中是否存在环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)。结果表明:ORS细胞中检测到了CREB的免疫阳性信号,且细胞核中的信号强度强于细胞质中。外源性添加20ng/mL或100ng/mL NGF重组蛋白能显着的提高细胞中CREB的活性,且NGF提高细胞内CREB的活性依赖于NGF/TrkA。通过研究增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA的表达情况,发现NGF/TrkA系统在维持和促进PCNA表达过程中发挥着重要作用。综上所述,本论文证实了绒山羊毛囊组织中存在NGF及其高亲和力受体TrkA的mRNA和蛋白,且在毛囊生长期显着的高于其他时期。体外培养的外根鞘细胞能检测到NGF及其受体TrkA的蛋白,且在体外条件下,外根鞘细胞能持续分泌NGF。另外我们还发现NGF/TrkA路径影响转录因子CREB的活性,且这一路径影响增殖相关基因PCNA的表达。本研究结果初步探讨了NGF在毛囊中表达规律及其作用机制,为深入研究绒山羊绒毛生长机制提供了思路。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2017-05-01）
李常红[4]（2016）在《不同中草药添加组白鹅腹部皮肤次级毛囊活性检测》一文中研究指出绒用型白鹅母鹅,腹部采取皮肤样品,石蜡切片后利用Sacpic法对切片染色,研究次级毛囊的活性变化。结果表明,添加Ⅲ类中草药组鹅毛囊活性最高。(本文来源于《商业故事》期刊2016年26期）
季小阳,刘斌,白雪,王宏,付绍印[5]（2016）在《绒山羊次级毛囊基因表达滞后性的转录组分析》一文中研究指出毛囊是具有高度的自我更新能力、独特的可再生器官,其周期性变化是一个动态过程,为了研究毛囊差异基因表达变化情况,文章以内蒙古绒山羊生长期毛囊为研究对象,利用Illumina高通量测序技术方法,检测6~10月皮肤毛囊差异基因表达变化情况,寻找对绒毛生长及质量具有调控作用的特异表达基因。试验发现,多数差异基因分别在初级毛囊(PF)的7、8月份和次级毛囊的(SF)8、9月份表达;在绒毛生长期的相邻月份中,发现FAM83C、LOC102185501、FYCO1、CTTNBP2 NL、C6orf132、KRTAP29-1和CRYBG3 7个共同差异表达基因呈现相同的表达趋势,且在次级毛囊上的表达变化均比初级毛囊滞后1个月。综上所述,次级毛囊在基因表达调控中存在一定的滞后性,这将为绒毛周期生长发育和分子育种提供重要的理论基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2016年07期）
季小阳[6]（2016）在《绒山羊皮肤初级毛囊与次级毛囊转录组比较分析》一文中研究指出绒毛是纺织业重要的原料之一,也是绒山羊主要的经济产物。由于不同品质的绒毛在纺织工业中具有不同的价值用途,因此绒山羊的绒毛品质及产量是影响其经济价值的关键因素。因此研究绒山羊毛囊的发育调控机理及生理结构特点,以及绒毛生长发育相关的候选基因,将有助于利用现代分子育种技术对绒山羊的绒毛经济性状进行改良和培育。基于上述原因,本研究针对绒山羊毛囊组织展开了以下两方面研究：1.为寻找能够区分不同类型毛囊且具有调控作用的基因,试验对绒山羊11个初级毛囊与7个次级毛囊表达谱进行研究,利用Illumina高通量测序技术方法,共检测到145,525个外显子表达,其中初级毛囊与次级毛囊之间差异表达外显子为4512个(P<0.01)。KEGG Pathway分析揭示了差异表达外显子显着富集到泛素化介导蛋白质水解通路上(UMPP) (P<3.32 E-07)。此外,将富集到的UMPP上的51个差异表达外显子进行聚类分析,很清晰的将初级毛囊与次级毛囊分为两类。最终试验采用qRT-PCR技术对筛选出的UBE20基因C-1、C-2外显子的转录数据进行定量验证。结果显示,C-1、C-2外显子在次级毛囊上的表达量显着高于初级毛囊,说明与RNA-seq测序结果相一致。本研究表明泛素化介导蛋白质水解通路在区分绒山羊初级毛囊与次级毛囊上起到突出作用,为今后利用转录组测序技术对绒山羊绒毛性状研究提供了理论基础。2.以内蒙古绒山羊生长期毛囊为研究对象,同样利用Illumina高通量测序技术方法,检测六月至十月皮肤毛囊差异基因表达变化情况,寻找对绒毛生长及质量具有调控作用的特异表达基因。实验发现,多数差异基因分别在初级毛囊的七、八月份表达和次级毛囊的八、九月份表达；在绒毛生长期的相邻月份中,发现FAM83C, LOC102185501, FYCO1, CTTNBP2NL, C6orf132, KRTAP29-1和CRYBG3七个共同差异表达基因呈现相同的表达趋势,且在次级毛囊上的表达变化均比初级毛囊滞后一个月。综上所述,次级毛囊在基因表达调控中存在一定的滞后性,这将为绒毛周期生长发育和分子育种提供重要的理论基础。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2016-06-01）
刘善博[7]（2016）在《细毛羊次级毛囊形态发生诱导期差异表达LncRNA靶基因的鉴定与功能分析》一文中研究指出绵羊次级毛囊(Secondary hair follicle,SF)发生(诱导期)涉及一系列复杂的表皮和真皮细胞间持续而复杂的信号通路。信号通路中任一配体、受体的遗传突变、表观遗传修饰以及蛋白翻译后修饰的改变等都将影响绵羊次级毛囊的发生。因此,除目前在mRNA水平关注的蛋白编码基因外,非编码长链RNA(long noncoding RNA,lncRNA)作为新型基因表达的调控因子,同样值得关注。大量研究已经证实LncRNA对器官形成、细胞分化和疾病发生等各种生理和病理过程都有重要的调控作用,但LncRNA在毛囊形态发生中的调控作用机制还知之甚少。因此本研究以前期对高山美利奴羊毛囊形态发生诱导期皮肤组织RNA-seq测序为基础,对细毛羊次级毛囊形态发生诱导期差异表达LncRNA进行筛选,并通过生物信息学和荧光素酶报告基因系统对LncRNA靶基因进行预测与验证,深入探讨LncRNA在细毛羊毛囊形态发生中的作用机理。1.对细毛羊毛囊形态发生诱导期皮肤组织RNA-seq测序数据中的LncRNA序列应用CNCI、Phylo CSF、Pfam进行预测,共获得884个新的LncRNA。应用EdgeR共筛选出15个在细毛羊毛囊形态发生诱导期差异表达LncRNA,13个LncRNA存在潜在cis或trans靶基因。通过GO、KEGG富集分析,将13个差异LncRNA的靶基因显着富集到NOD样受体信号通路、利什曼病信号通路和NF-kappa B信号通路中。说明这些差异表达的LncRNA可能通过信号通路参与细毛羊毛囊形态发生过程。2.将LncRNA005698、LncRNA000629与miRNA Base数据库中绵羊成熟miRNA进行BLAST比对分析,发现LncRNA005698与oar-miR-3955-5p的种子区具有较高的一致性,且LncRNA005698与oar-miR-3955-5p结合具有较低的最小自由能(minimum free energy,mfe)(mfe=34.4 kcal/mol),表明LncRNA005698可能作为oar-miR-3955-5p的竞争性内源RNA。基于荧光素酶报告基因系统的靶向关系表明,oar-miRNA-3955-5p与LncRNA005698之间具有靶向关系。此外,利用实时荧光定量PCR对LncRNA005698和oar-miRNA-3955-5p在细毛羊组织中的表达量进行分析,进一步说明LncRNA005698与oar-miRNA-3955-5p之间存在靶向关系。综上所述,LncRNA005698可能在细毛羊毛囊形态发生过程中起着重要的作用,并且可能通过调节oar-miRNA-3955-5p来调节细毛羊毛囊形态发生。本研究对调控细毛羊毛囊形态发生的LncRNA的研究,将为研究非编码RNA在绵羊毛囊形态发生的作用机制提供理论参考。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2016-05-01）
张婧婧[8]（2016）在《VEGF、L-蛋氨酸对绒山羊次级毛囊外根鞘细胞增殖和分化的影响》一文中研究指出本研究旨在研究陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的体外培养,并通过在培养液中分别添加VEGF和L-蛋氨酸,检测它们对次级毛囊外根鞘细胞的增殖、分化的影响,以及VEGF对次级毛囊外根鞘细胞中FGF5 mRNA表达量的影响,来阐述外根鞘细胞在次级毛囊周期中的作用,为进一步研究绒山羊次级毛囊发育机制提供理论支持。采集陕北白绒山羊体侧部皮肤,通过剪碎、消化、剥离等方法分离初、次级毛囊,再将分离出的毛囊消化得到外根鞘细胞,并置于在37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养;选用第5代次级毛囊外根鞘细胞,分别添加不同浓度血管内皮生长因子(ascular endothelial growth factor,VEGF)和L-蛋氨酸,分别处理24 h、48 h,噻唑兰比色法(Methyl thiazolte trazoliu,MTT)检测VEGF和L-蛋氨酸对细胞活力的影响,EdU核酸标记技术检测VEGF和L-蛋氨酸对细胞增殖的影响;根据GenBank公布的山羊PCNA、K10和FGF5基因cDNA序列设计引物,通过实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,q-PCR)技术检测上述叁个基因在次级毛囊外根鞘细胞中的表达情况。主要研究结果如下:1.成功培养出了陕北白绒山羊初、次级毛囊外根鞘细胞,并利用细胞免疫荧光的方法检测到初级外根鞘细胞的标记基因CK17,以及次级毛囊外根鞘细胞的标记基因CK17和CK15,免疫荧光染色结果均呈阳性;对初、次级毛囊外根鞘细胞分别做了生长曲线,均为“S”型,初、次级毛囊外根鞘细胞在形态和体积上存在一定差异。2.在培养液中添加VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化,抑制细胞中FGF5基因的表达。当VEGF处理浓度达到100 ng/mL时,细胞活力(48 h)、增殖细胞数以及PCNA mRNA的表达量均达到最高,且均极显着高于对照组(P<0.01),细胞活力(24 h)显着高于对照组(P<0.05);VEGF处理24 h时的细胞活力和PCNA mRNA表达量的上升趋势高于48 h。随着浓度的增加,VEGF对细胞分化的抑制作用在增强,当浓度为100 ng/mL时,K10 mRNA的表达量最低;随着时间的增加,VEGF对细胞分化的抑制作用在增强,100 ng/mL组处理48 h时的表达量显着低于处理24 h(P<0.05)。随着浓度的增加,FGF5 mRNA在100 ng/mL组时表达量最低,并推测VEGF可以通过抑制FGF5的表达促进毛囊生长。3.在培养液中添加L-蛋氨酸抑制绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖和分化。处理24 h时,随着浓度的增殖,L-蛋氨酸对细胞增殖的抑制作用在增强,120μg/mL时抑制作用最强,但无显着差异;处理48 h时,随着浓度的增加,L-蛋氨酸对细胞增殖的抑制作用先上升后下降,100μg/mL时抑制作用最为显着,极显着高于对照组(P<0.01),而80μg/mL时PCNA mRNA的表达量最低,无显着差异;48 h各组的次级毛囊外根鞘细胞的细胞活力均低于24 h。处理24 h时,随着浓度的增加,K10 mRNA的表达量也呈下降趋势,120μg/mL组表达量最低,无显着差异;处理48 h时,K10 mRNA的表达量也先下降后上升,80μg/mL组表达量最低,无显着差异;过高浓度的L-蛋氨酸(120μg/mL)对次级毛囊外根鞘细胞增殖和分化的抑制效果均有所减弱。综合以上试验结果,表明首次成功的培养出了陕北白绒山羊初、次级毛囊外根鞘细胞;VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化,且抑制次级毛囊外根鞘细胞中FGF5基因的表达;L-蛋氨酸抑制对次级毛囊外根鞘细胞的增殖和分化。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-04-01）
王蒙[9]（2016）在《Neuropilin-1过表达转基因绒山羊模型的建立及其相关次级毛囊信号通路的研究》一文中研究指出神经纤毛蛋白1(Neuropilin-1.NRP-1)是一种跨膜糖蛋白。NRP-1作为一种新型的细胞表面受体,通过介导VEGF通路来促进血管的生成。实验研究表明,NRP-1主要通过VEGFR-2途径上调VEGF表达量。在NRP-1敲除的转基因小鼠模型中发现血管的形成受到抑制。根据本实验室初级毛囊和次级毛囊转录组测序数据,发现在初级毛囊和次级毛囊中NPR-1表达差异为3.16倍。基于以上现象和理论,为了证实NRP-1在次级毛囊生长和发育中的功能,本研究探讨了建立过表达NRP-1转基因阿尔巴斯白绒山羊模型的技术路线,同时运用质谱分析、免疫共沉淀、Western Bolt、荧光定量PCR、哺乳动物双杂交系统等技术手段,进一步探究NRP-1在次级毛囊生长中相关信号通路以及其功能。1.NRP-1过表达转基因阿尔巴斯绒山羊模型的建立构建NRP-1过表达转基因载体,转染至阿尔巴斯白绒山羊胎儿成纤维细胞,通过核移植方法,生产过表达NRP-1转基因阿尔巴斯白绒山羊胚胎。结果成功构建了NRP-1过表达转基因载体,并且得到了33株阳性NRP-1过表达转基因单克隆细胞系,用于体细胞核移植的研究。通过核移植得到154枚转基因克隆胚胎,并移植到55只受体羊中。虽然未得到阳性转基因羔羊,但是上述结果对于阿尔巴斯白绒山羊转基因体系的完善及相关动物模型的建立提供了实验依据。2.NRP-1相关次级毛囊信号通路的研究由于阿尔巴斯白绒山羊生长周期较长,在建立NRP-1过表达阿尔巴斯转基因白绒山羊过程中,同步研究了NRP-1在次级毛囊中的信号通路。在次级毛乳头细胞中利用NRP-1沉淀与NRP-1相互作用的蛋白,通过SDS-PAGE电泳进行蛋白分离。经过考马斯亮蓝染色观察蛋白条带,利用蛋白质质谱分析检测的方法鉴定蛋白的结构。通过查阅文献和数据库分析,得到Prdx2和CAT是有可能与NRP-1相互作用的蛋白。通过哺乳动物双杂交系统确认NRP-1与Prdx2存在相互作用的关系。并运用荧光实时定量PCR联合蛋白免疫印迹法确认NRP-1与Prdx2 RNA与蛋白质表达量存在正相关关系。本实验在已知NRP-1对VEGF通路有影响的前提下建立了过表达转基因绒山羊模型的技术路线。初步探索了NRP-1在VEGF通路中的作用,筛选和鉴定了与NRP-1相互作用的蛋白,为与次级毛囊生长有关信号通路的作用机制研究提供了新的理论基础和实验依据。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2016-03-29）
杨雨江,孙丽敏,赵佳,张桂山,常青[10]（2016）在《Bax/Bcl-2基因在成年辽宁绒山羊皮肤次级毛囊表达及年周期变化规律》一文中研究指出绒山羊的皮肤毛囊具有在一个生物年内呈周期性发育的特性,已有研究表明,在绒山羊毛囊周期性发育的各时期存在细胞凋亡现象。而作为调控细胞凋亡的Bax/Bcl-2基因在绒山羊皮肤毛囊的表达是否与其各个发育时期相关,尤其是二者在毛囊发育哪个时期为优势基因,将对阐明绒山羊毛囊发育过程中细胞凋亡所发挥的生物机制具有重要意义。本研究采用免疫组化方法,检测成年辽宁绒山羊母羊皮肤中Bax和Bcl-2蛋白表达部位及表达量年周期变化情况。研究结果表明:在不同月份辽宁绒山羊成年母羊皮肤次级毛囊的毛球、内根鞘、外根鞘上,以及汗腺、皮脂腺以及表皮上均可见Bax和Bcl-2阳性表达;次级毛囊Bax表达量在5月份和9月份最高,Bcl-2表达量在5月份最高,次级毛囊Bax/Bcl-2比值在每年的4月份和7月份出现2个峰值,10月则为全年的最低点。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2016年02期）
次级毛囊论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
绒山羊绒毛是由次级毛囊产生的,具有“软黄金”的美誉,是高档纺织材料,并且次级毛囊是研究毛发再生循环机制的模型。本文拟通过研究陕北白绒山羊次级毛囊发育循环周期的分子机理,进而为提高绒山羊绒毛质量、增加绒毛产量提供理论基础,同时也为毛发再生的研究提供参考。本研究旨在精确定位次级毛囊周期循环的时间节点,筛选调控毛囊周期循环的关键基因,揭示非编码基因在毛囊周期循环调控中的作用。主要研究内容包括以下几个方面:1)通过显微测量对陕北白绒山羊全年不同月份次级毛囊长度及其毛球部宽度进行量化,揭示次级毛囊周期循环的时间节点规律;2)通过联合分析绒山羊次级毛囊发育叁个典型阶段(生长期、退行期和休止期)的mi RNA和m RNA数据,筛选出调控毛囊周期循环关键的mi RNAs和m RNA,并构建了mi RNA-m RNA调控关系网络;3)通过“全转录组学”测序技术深入分析次级毛囊从“生长期”向“退行期”转变的分子调控机制;4)利用双荧光素酶检测系统验证了mi R-144-3p与LHX2的靶向调控关系,并通过mi R-144腺病毒感染毛乳头细胞及构建LHX2-/-毛乳头细胞株进行其基因功能研究。本研究取得主要研究结果如下:1、通过对陕北白绒山羊全年皮肤样品中次级毛囊的形态显微测量,发现长度变化为1070.16μm至2267.61μm,次级毛囊毛球部宽度变化为44.05μm至108.61μm;根据次级毛囊在皮肤中的长度和毛球部宽度的变化规律,得出陕北白绒山羊次级毛囊发育周期规律为:5月份到10月份为次级毛囊生长期(9~10月份,旺盛期),11月份到次年2月份为次级毛囊退行期,次年3月份到次年4月份为次级毛囊休止期。2、通过对陕北白绒山羊生长期、退行期和休止期皮肤样品中mi RNAs和m RNAs表达变化联合分析,发现“生长期与退行期”比较有104个差异的mi RNAs和683个差异m RNAs参与mi RNA-m RNA网络调控构建,共构建5694条靶向网络调控关系;“生长期与退行期”比较有92个差异的mi RNAs和583差异m RNAs参与mi RNA-m RNA网络调控构建,共构建4185条靶向网络调控关系;“退行期与休止期”比较有57个差异的mi RNAs和125差异m RNAs参与mi RNA-m RNA网络调控构建,共构建574条靶向网络调控关系;对mi RNA靶基因进行GO功能富集,发现有48个显着富集的类别,且富集的功能类别符合生长期、退行期和休止期次级毛囊在皮肤中的生长发育特点;KEGG显着富集的通路有Focal adhesion、Protein digestion and absorption、ECM-receptor interaction、Cardiomyopathy related pathway、Regulation of actin cytoskeleton和PPAR signaling pathway等,发现皮肤下脂肪细胞亦可能是潜在调控次级毛囊周期循的关键因素;在“生长期/退行期”比较中,通过对mi RNA表达量倍数限定(1.5倍)和本底表达量限定(>50),筛选出5个候选mi RNAs,分别为mi R-1、mi R-125b、mi R-144、mi R-145和mi R-206。3、通过对陕北白绒山羊生长期和退行期的皮肤总RNA进行全转录组测序分析,发现403个新的lnc RNA转录本和307个新的mi RNA,同时鉴定出3500个差异可编码m RNA的转录本(共3357个基因)、172个差异的lnc RNA转录本和72个差异表达mi RNAs;对lnc RNA和mi RNA共有靶基因进行通路分析,发现许多疾病相关的通路(如pathways in cancer、systemic lupus erythematosus和Transcriptional misregulation in cancer),除此之外,还发现脂肪沉积相关的代谢通路(如PPAR signaling pathway)、环境信息处理相关的通路(如ECM-receptor interaction和Notch signaling pathway)和细胞间交流相关通路(如Focal adhesion),说明次级毛囊周期循环与皮肤环境中其它类型细胞调控息息相关;4、通过组织表达谱分析,发现LHX2基因在陕北白绒山羊的皮肤、肝脏和大脑中表达较高,且LHX2在皮肤中的表达具有明显的时间特异性,在4月份其表达量显着低于10月份(p<0.01);mi R-144-3p在皮肤中的表达也具有时间特异性,在休止期的表达显着高于生长期(p<0.01)。5、成功分离培养了次级毛乳头细胞,用毛乳头细胞分子标记α-SMA、Versican和CD133进行细胞免疫荧光鉴定,均显示为阳性,将毛乳头细胞传至第8代,发现其仍具有较强的凝聚性,说明在一定代数内毛乳头细胞仍具有一定活性。6、LHX2 3’UTR具有多个mi R-144-3p调控靶位点;mi R-144腺病毒感染毛乳头细胞,可以抑制LHX2的转录后翻译活性,使其蛋白水平降低,同时显着下调BMP2、BMP4和NOG的表达量(p<0.01),并使FGF7、β-Catenin和TGFβ1的表达水平显着上调(p<0.01)。7、成功构建了LHX2-/-细胞株,在该细胞株中,FGF7、FGF10、TGFβ2和TGFβ3的表达量显着上调,且与野生型细胞株相比,其增殖能力较快,表明LHX2-/-缺失可能促使SDP细胞增殖及Mx细胞增殖。8.、对毛乳头细胞进行mi R-144-3p过表达和LHX2基因敲除处理,发现在两种处理情况下,毛乳头表达基因具有一定相似性,FGF7和β-catenin表达上调。综上所述,本研究首次对陕北白绒山羊全年不同月份的次级毛囊长度及其毛球宽度变化进行量化研究,并归纳其次级毛囊周期循环时间节点。通过转录组联合分析筛选出潜在调控次级毛囊周期循环的靶基因,并在毛乳头细胞中验证mi R-144-3p与LHX2协同作用并调控毛囊细胞的增殖,同时为进一步揭示非编码基因调控次级毛囊周期循环的分子机理奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
次级毛囊论文参考文献
[1].张婧婧,王德光,周小兵,高晔,何晓琳.VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响[J].畜牧兽医学报.2018
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