（1青岛大学基础医学院免疫学系山东青岛266071）（2潍坊市人民医院内分泌科山东潍坊261041）
【摘要】目的：分析探讨甲状腺球蛋白基因外显子33单核苷酸多态性（E33SNP）与Graves’病（GD）停药后复发的关系。方法：选取2015年9月—2016年12月在我院内分泌科就诊的108例GD患者的临床资料进行分析，依据ATD治疗停药后复发的不同时间进行分组：GD停药后1年内复发者38例为A组；GD停药后1～2年内复发者37例为B组；GD停药后2年内未复发者33例为C组。另以我院排除GD的健康体检者33例为对照组。所有受检对象均利用RT-PCR检测E33SNP基因型，比较各组间基因型频率、等位基因频率及停药后不同基因型GD患者甲状腺相关功能指标。结果：A组CC基因型患者构成比78.95％（30/38），显著高于B组和C组（P＜0.05），CT型患者构成比为10.53％（4/38），显著低于B组和C组；B组CC型患者构成比为56.76％（21/37），显著高于C组（P＜0.05）。各观察组CC基因型患者TRAb水平均显著高于组内其他基因型（P＜0.05）。结论：甲状腺球蛋白基因外显子33单核苷酸C/C型患者是GD停药后短期内复发的最高危人群，在抗甲状腺药物（ATD）治疗时应延长低剂量维持给药时间，降低复发率，改善患者预后水平。
【关键词】甲状腺球蛋白；单核苷酸多态性；Graves’病；复发
【中图分类号】R581.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）04-0110-02
Associationofthyro-globulingeneexon33singlenucleotidepolymorphismswithrecurrenceofGravesdiseaseafterdrugwithdrawal
LuHongwen1,HuangLingyu2,WangXuesong2,ZhangBei1*.
1.DepartmentofImmunology;BasicMedicalCollegeofQiingdaoUniversity,QingdaoShandong266071.2EndocrinologyDept,WeifangPeople'sHospital,Weifang,Shandong261041,China.
【Abstract】ObjectiveToanalyzetherelationshipbetweenthepolymorphismofexon33ofthyroglobulingeneandtherelapseofGraves'diseaseafterdrugwithdrawal.MethodsAtotalof108patientswithGraves'diseasewereenrolledinthisstudyfromSeptember2015toDecember2016.Theclinicaldatawereanalyzedretrospectively.AccordingtotherecurrenceofGravesdiseaseafterthewithdrawalofdifferentgroups,willbediscontinuedwithin1yearaftertherecurrenceofGravesdiseaseissettoAgroup,1to2yearsafterthewithdrawalofGravesdiseaserecurrencesettoBgroup,2yearsafterthewithdrawalofGravesThediseasehasnotbeenrelapsedasCgroup,andtheotherincludedinourhospitalphysicalexaminationcentertoexcludeGravesdiseaseexaminationofatotalof33casesasacontrolgroup.Allsubjectsweregenotyped.Thegenotypefrequency,thefrequencyofalleleandthethyroidfunctionofdifferentgenotypeGravespatientswerecomparedandanalyzed.ResultsTheproportionofCCgenotypeingroupAwas78.95%(30/38),whichwassignificantlyhigherthanthatingroupBandgroupC(P<0.05),andtheratioofCTtypewas10.53%(4/38)TheproportionofCCgroupwas56.76%(21/37)ingroupB,whichwassignificantlyhigherthanthatingroupC(P<0.05).ThelevelsofTRAbinCCgenotypeweresignificantlyhigherthanthoseinothergenotypes(P<0.05).ConclusionsForthyroglobulingeneexon33mononucleotideC/CpatientsarethehighestriskrelapseintheshorttermaftertheonsetofGraves'disease,andprolongedlowdosemaintenancetimeforantithyroiddrugsReducetherecurrencerate,improvetheprognosisofpatients.
【Keywords】Thyroglobulin;Singlenucleotidepolymorphism;Gravesdisease;Recurrence
GD是临床常见自身免疫性甲状腺疾病，促甲状腺激素受体抗体分泌水平异常增加所致甲状腺功能亢进是GD发病的最主要因素[1]。临床常采用ATD、手术、碘131等治疗方法，以ATD治疗为主，但停药后复发率较高。近来针对GD的研究集中在基因抗原方面[2-3]，研究显示甲状腺球蛋白（Tg）E33SNP与GD的发病密切相关，但较少涉及到Tg基因外显子多态性与GD停药后复发之间的关联性[4]。本研究对108例山东潍坊地区汉族GD患者进行临床资料回顾分析，探讨E33SNP与GD停药后复发的关系。
1.资料与方法
1.1一般资料
选择2015年9月—2016年12月期间在潍坊市人民医院内分泌科就诊的GD患者108例为研究对象，均只接受ATD治疗18个月以上。根据GD患者停药后复发时间的不同分组：将停药后1年内GD复发者设为A组（38例，男性4例，女性34例，年龄20～60岁，平均40.2±10.1岁）；将停药后1～2年GD复发者为B组（37例，男性7例，女性30例，年龄为19～58岁，平均41.3±11.5岁）；将停药后2年内GD未复发者为C组（33例，男性6例，女性27例，年龄为21～62岁，平均40.8±12.9岁）；另选择我院体检中心健康查体者排除GD共33例作为对照组（男性9例，女性24例，年龄25～60岁，平均40.5±12.3岁）。
各组一般资料对比差异无显著性（P＞0.05）。
1.2检测方法
1.2.1E33SNP基因型检测采集外周血2.0ml（EDTA抗凝），以血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，以超微量核酸蛋白定量仪检测其浓度，提取浓度A260/A280介于1.8，2.0范围，样本置于-20.0℃冷冻保存备测。利用RT-PCR技术检测样本E33SNP多态性并进行基因分型，引物由上海生工公司提供。PCR反应体系：模板1ul，上下游引物各1ul，2XHSTaqEmix10ul，20XEvaGreen1ul，加ddH2O至20ul。PCR反应条件：94.0℃5.0min，94.0℃10.0s，65.0℃30.0s，72.0℃30.0s，循环反应35次，72.0℃10.0min。反应完成后以GeneScanning软件分析处理，产物进行琼脂糖凝胶电泳回收后外送进行基因测序，根据测序峰谱图对E33SN基因型进行判断。
1.2.2观察指标比较各组受检对象基因型频率、等位基因频率以及停药后缓解期不同基因型GD患者甲状腺功能指标（TRAb、Tg、TSH、FT3、FT4，免疫化学发光法）进行分析。
1.2.3统计学分析相关数据以统计学软件SPSS19.0分析，以（x-±s）表示计量资料，经t检验；以率（％）表示计数资料，经χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
观察组内A组CC基因型患者构成比显著高于B组及C组，CT型患者构成比显著低于B组以及C组，C等位基因明显高于C组，T等位基因明显低于C组；B组CC型患者构成比显著高于C组。观察组和对照组的基因型频率、等位基因频率差异无显著性。见表1。
各观察组CC基因型患者TRAb水平均显著高于组内其他基因型。不同基因型患者FT3、FT4、TSH、Tg差异无显著性。见表2。
3.讨论
导致GD复发的因素有多种，除去遗传因素外，非遗传因素如应激、年龄、性别、吸烟、病程、甲状腺疾病家族史、碘盐的摄取等也对GD复发有重要影响，具体机制比较复杂。大多数的研究针对GD复发的非遗传性因素，较少涉及到遗传性因素对GD复发的影响[5-6]。以往研究表明GD的ATD使用需2年以上的长程治疗，疗程较短缓解率很低。疗程达到2年后也应认真评估后再考虑是否停药，否则复发的可能性大。
E33SNP是近年来Tg基因研究较多的多态性位点，有关报道中针对我国不同地区汉族人群Tg基因多态性与AITD的关系进行了分析，显示E33SNP与GD的发生具相关性[7-8]，但不同地区、不同种族的人群其E33SNP各基因型频率、等位基因频率及是否与GD发生相关具有一定的差异性。
本研究针对山东潍坊地区汉族人群不同时段复发GD患者E33SNP进行研究与分析，显示A组CC型患者构成比显著高于B组和C组，CT型患者构成比为显著低于B组和C组；B组CC型患者构成比显著高于C组。针对各观察组基因型GD患者甲状腺功能检测发现，CC基因型患者TRAb水平均显著高于组内其他基因型。提示甲状腺球蛋白E33SNPC/C型患者是GD停药后短期内复发的最高危人群，应考虑在ATD治疗时延长低剂量维持给药时间，以降低复发率，改善患者预后水平。
【参考文献】
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